СРЕДСТВО "ЭНДОГЛЮКИН" ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЧЕЛ И СТИМУЛЯЦИИ РАЗВИТИЯ ПЧЕЛИНЫХ СЕМЕЙ Российский патент 1995 года по МПК A01K51/00 

Изобретение относится к лекарственным средствам для профилактики и лечения вирусных заболеваний пчел и предназначено для использования в крупных пчеловодческих хозяйствах, на пасеках с небольшим количеством пчелиных семейств, на любительских пасеках, а также на пчелоразведенческих хозяйствах.

В последние десятилетия в нашей стране создаются крупные промышленные специализированные пчеловодческие хозяйства для увеличения сборов меда и других пчелопродуктов, разведения пчел, интенсивно развивается любительское пчеловодство. Но из-за болезней пчел потери в отдельных хозяйствах достигают 20-80% Значительный вред пчеловодству наносят вирусные болезни, приводящие к массовой гибели пчел. Вирусные болезни пчел обусловлены созданием крупных промышленных пчеловодческих хозяйств, интенсивной пересылкой и перевозкой пчел, но и широким распространением паразитарных заболеваний пчел: варроатоза и аскосфероза. Клещ Варроа Якобсони является переносчиком вирусов у пчел. Другое заболевание пчел-аскосфероз сопровождается ослаблением иммунной системы их, что, в конечном виде, приводит также к распространению вирусных заболеваний.

В источниках, опубликованных в открытой печати, авторами выявлено только одно средство, рекомендованное для профилактики вирусных заболеваний пчел эндонуклеаза бактериальная.

Эндонуклеаза бактериальная, продуцируемая бактериями Serratia marcescens, является ферментом. По внешнему виду это-порошок белого или слегка желтоватого цвета, без запаха, хорошо растворимый в воде, нерастворим в органических растворителях, неустойчив в кислой среде (теряет активность).

Эндонуклеаза бактериальная обладает выраженным противовирусным действием: тормозит развитие различных РНК- и ДНК-содержащих вирусов животных путем гидролиза вирусных нуклеиновых кислот. Относится к малотоксичным соединениям, не раздражает кожу и слизистые оболочки глаз.

Эндонуклеаза бактериальная является средством, применяемым в пчеловодстве для профилактики вирусного паралича и стимуляции развития пчелиных семей. Препарат впускается в наборе, предназначенном для обработки 20-ти пчелосемей одновременно.

Эффективность эндонуклеазы в борьбе с вирусными заболеваниями пчел, однако, недостаточна из-за нестабильности ее свойств, особенно в растворах: в растворе за 2 ч происходит резкое падение активности эндонуклеазы.

Невозможность дозирования эндонуклеазы в небольших количествах, рассчитанных на обработку 2, 5, 10 пчелосемей, вызывает неудобства в ее использовании, особенно в практике любительского пчеловодства. Навеска эндонуклеазы, равная 5-15 мг (100000 ед.акт.), рассчитана на обработку 20 пчелосемей.

Задача разработки эффективных и стабильных противовирусных средств, расширяющих арсенал препаратов для профилактического и лечебного воздействия на вирусы, вызывающие заболевания пчел, по-прежнему остается острой.

Одним из путей решения этой задачи является средство для профилактики вирусных заболеваний пчел и стимуляции развития пчелиных семей, содержащее эндонуклеазу бактериальную и декстран при следующем соотношении, е.а./г:
Эндонуклеаза
бактериальная 100000-1000000 е.а.

Декстран До 1 г
За единицу эндонуклеазной активности принимается количество фермента, вызывающее увеличение оптической плотности кислоторастворимых продуктов гидролиза РНК на 1 о.е. при длине волны 260 нм за 20 мин при 37^оС.

Авторами средство названо эндоглюкином.

Средство имеет высокий профилактический и лечебный эффект против вирусных заболеваний пчел: после обработки этим средством пчелиных семей, пораженных филаментовирозом, семьи имели расплода в среднем на 34,8% больше, чем в контроле. При использовании эндонуклеазы бактериальной для обработки пчелиных семей, пораженных филаментовирозом, увеличение расплода составило лишь 5,9% по сравнению с контролем. Средство является стабильным в растворе: не теряет активность в течение суток.

Такое эффективное профилактическое и лечебное воздействие средства не является следствием влияния отдельно взятых его компонентов: эндонуклеазы и декстранов:
Декстраны группа бактериальных полисахаридов, состоящих из остатков α -D-глюкопиранозы. Декстраны, частично гидролизованные, так называемые клинические, используются для приготовления плазмозаменителей противошокового и гемодинамического действия.

Противовирусное действие декстранов не было замечено. Препарат, содержащий эндонуклеазу и декстран, обладает высоким профилактическим и лечебным воздействием и является эффективным стимулятором развития пчелиных семей.

Приведенное соотношение компонентов средства (эндонуклеазы и декстрана) является оптимальным по следующим основаниям: содержание эндонуклеазы в препарате определяется терапевтической дозой, необходимой для обработки одной пчелиной семьи, не менее 5000 е.а. (или 100000 е.а./г препарата); верхний предел содержания эндонуклеазы в средстве ограничен технологическими особенностями приготовления препарата.

Заявляемое средство получают смешиванием эндонуклеазы бактериальной и декстрана в буферном растворе при перемешивании до полного растворения компонентов. Полученный раствор дозируют во флаконы и затем подвергают лиофильной сушке, после чего флаконы герметично закрывают.

П р и м е р 1. Приготовление средства с дозировкой для обработки 1-2 пчелосемей. В качестве декстрана применяли полиглюкин, известный как кровозаменитель 7.

В мерный стакан емкостью 0,5 л наливали 100 мл дистиллированной воды, добавляли 2 мл 0,1 моль/л буфера с рН 8,0, затем вносили навеску эндонуклеазы с активностью 1,26± 0,5 млн. е.а. и навеску декстрана (полиглюкина) 5 г. Объем содержимого доводили дистиллированной водой до 200 мл, тщательно перемешивали на магнитной мешалке до полного растворения эндонуклеазы и полиглюкина. Полученный раствор дозировали во флаконы (100 фл.) и подвергали лиофильной сушке. Затем флаконы закрывали резиновыми пробками и закатывали алюминиевыми колпачками. Активность полученного в 1 флаконе составляет не менее 10000 е.а.

Препарат может храниться в течение 2 лет при 4-20^оС в защищенном от света месте. Препарат снабжают активатором эндонуклеазы, для этого к флакону с полученным средством прилагают флакон, содержащий 0,1 г магния хлористого или 0,1 г магния сернокислого.

П р и м е р 2. Приготовление средства с дозировкой для обработки 10 пчелосемей.

В мерный стакан емкостью 0,5 л наливают 100 мл дистиллированной воды, добавляют 2 мл 0,1 моль/л буфера с рН 8,0, затем вносят навеску эндонуклеазы с активностью 6,3± 0,5 млн.е.а. и навеску декстрана (полиглюкина) 5 г. Объем содержимого также доводят дистиллированной водой до 200 мл, тщательно перемешивают, например, на магнитной мешалке до полного растворения эндонуклеазы и полиглюкина. Раствор дозируют во флаконы (100 фл.) и подвергают лиофильной сушке, затем флаконы закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками. Активность средства, полученного в одном флаконе составляет не менее 50000 е.а.

Следует отметить, что при увеличении навески эндонуклеазы с активностью более 6,3± 0,5 млн.е.а. и навески полиглюкина более 5 г затруднен процесс лиофильной сушки препарата: на поверхности раствора образуется пленка, препятствующая дальнейшей сушке. За счет этого значительно удлиняется время сушки.

Каждый флакон средства сопровождается флаконом с активатором эндонуклеазы, содержащим 0,5 г магния хлористого или 0,3 г магния сернокислого.

Средство применяют в форме аэрозоля. Раствор средства желательно готовить перед обработкой пчелиных семей. Активность раствора не снижается в течение суток.

Для обработки, например, двух пчелосемей содержимое одного флакона с активностью 10000 е. а. растворяют в 100 мл дистиллированной или охлажденной прокипяченной воды и в этот раствор добавляют 0,1 г магния хлористого или 0,1 г магния сернокислого.

Для обработки, например, 10 пчелосемей содержимое одного флакона с активностью 50000 е. а. растворяют в 500 мл дистиллированной или охлажденной прокипяченной воды и в раствор добавляют 0,5 г магния хлористого или 0,3 г магния сернокислого.

Обработку пчелосемей для профилактики и лечения вирусных заболеваний, например, филаметовироза, а также для стимуляции развития пчелиных семей проводят весной или весенне-летний период при температуре воздуха не ниже 14^оС 3-5 раз с интервалом 7-10 дней. Пчелиные семьи обрабатывают опрыскиванием улочек раствором средства рано утром или поздно вечером с помощью мелкодисперсного аэрозольного распылителя, например, типа "Росинка" или краскораспылителя "Блеск". Эндоглюкин нежелательно применять осенью, так как при этом начинает резко нарастать численность пчелосемей, что в условиях осенней ограниченности взятка может привести к их гибели из-за недостатка корма.

Каждую улочку опрыскивают в течение 2-3 с в дозе 4-5 мл. Расход раствора препарата на одну пчелосемью силой 10-12 стандартных рамок составляет 40-50 мл (5000 е.а.).

Опыты по стимулирующему и противовирусному действию препарата проводили на опытной пасеке ВИЭВ "Торбеево" (табл. 1) и на пасеке совхоза им. ХХI съезда в Московской обл. (табл.2), а также на пасеке с. Морозово Новосибирской обл (табл. 3). Для опытов на пасеках в Московской области отбирали семьи, в которых обнаруживали пчел, пораженных филаментовирозом (вирусное заболевание, вызываемое нитевидным вирусом). Было сформировано три группы, одинаковые по составу (учитывали количество печатного расплода и число рамок, занимаемых пчелами). Для расширения использовали только вощину.

Первую группу обрабатывали эндоглюкином в дозе 5000 е.а. на семью четыре-восемь раз с интервалом 4-9 дней. Одновременно вторую обрабатывали эндонуклеазой бактериальной в такой же дозе, третья группа была контрольной (без обработки).

На опытной пасеке "Торбеево" семьи, обработанные эндоглюкином, к концу опыта имели расплода в среднем на 34,8% больше, чем в чистом контроле и отстроили в среднем по 8,5 сотов, тогда как семьи, обработанные эндонуклеазой бактериальной, к концу опыта имели расплода в среднем лишь на 5,9% больше, чем в чистом контроле и отстроили в среднем по 5 сотов (в чистом контроле по 4 сота).

На пасеке совхоза им. ХХI съезда семьи, обработанные эндоглюкином, к концу опыта имели расплода в среднем на 12,3% больше, чем в чистом контроле, и отстроили в среднем по 11 сотов, тогда как семьи, обработанные эндонуклеазой бактериальной, к концу опыта имели в среднем лишь на 1,9% больше, чем в чистом контроле, и отстроили в среднем по 9 сотов (столько же в чистом контроле).

Стимулирующее действие эндоглюкина на условно здоровых пчелосемьях относительно вирусных заболеваний испытывали на пасеке с.Морозово Новосибирской обл. Контрольную группу обрабатывали водой. Всего было проведено три обработки через 10 дней. Результаты испытаний приведены в табл.3.

Медопродуктивность семей учитывали по товарному и валовому меду, учитывая также мед, собранный отводками этой группы.

Таким образом, в условно здоровых пчелосемьях эндоглюкин стимулирует развитие и рост семей по отношению к контролю: количество рамок с разновозрастным расплодом на 23% количество печатного расплода в среднем на одну семью на 9% число отводков в 5 раз, валовую медопродуктивность на 96%
Эндоглюкин является малотоксичным соединением. Его ЛД_50, определенное в опытах на мышах при внутрибрюшинном введении, составляет 250 мг/кг. Образцы меда, полученные от пчел, обработанных эндоглюкином, не отличается по исследуемым биологическим свойствам от меда, полученного от интактных пчел. В экспериментах на мышах, крысах, кроликах и морских свинках не выявлено токсических, кожнораздражающих, резорбтивных и аллергезирующих свойств такого меда.

В процессе испытаний препарата на пасеках не выявлено отрицательных последствий применения эндоглюкина.

Использование: в пчеловодстве. Сущность изобретения: средство содержит эндонуклеазу бактериальную в количестве 100000 1000000 е.а. на 1 г декстрана. Средство имеет высокий профилактический и лечебный эффект против вирусных заболеваний пчел, стимулирует развитие пчелиных семей. 3 табл.

Средство для профилактики и лечения вирусных заболеваний пчел и стимуляции развития пчелиных семей, включающее эндонуклеазу бактериальную, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит декстран при следующем соотношении компонентов
Эндонуклеза бактериальная, е.а. 100000 1000000
Декстран, г До 1