СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ ЯИЧНИКОВ Российский патент 1996 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогинекологии и может быть использовано в клинической практике врачами для диагностики злокачественных опухолей яичников.

Известны способы диагностики злокачественных опухолей яичников в виде ручной пальпации, эхографии придатков и цитологического исследования пунктата из дугласова пространства (1).

Каждый из этих методов имеет свои недостатки: при ручной пальпации ранние стадии злокачественных опухолей неопределимы; при эхографии придатков первичные злокачественные опухоли яичников с инфильтративным ростом не верифицируются. Процент ошибок в диагностике рака яичников составляет 10 - 37,0 (2, 3).

Ультразвуковая диагностика опухолей и опухолевидных процессов яичников позволяет визуализировать на экране форму, величину опухолей, внутренние структуры в них, которые могут быть интерпретированы по-разному. Точность метода составляет 82,7 Ошибки зависят от степени ожирения брюшной стенки, спаечного процесса, наполненности мочевого пузыря, опытности врача и солидизации структуры опухоли (3).

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ диагностики злокачественных опухолей яичников, включающий забор перитонеальной жидкости из дугласова кармана и исследование клеточного состава в ней. Цитологическая характеристика выпотов в малом тазу позволяет определить характер опухоли или опухолевидных процессов до операции с точностью до 72,0 (2, 4). Однако даже при правильном заборе материала из дугласова пространства могут иметь место ложно-отрицательные заключения цитологов, так как спайки и сращения с петлями кишечника придатков матки могут препятствовать оседанию опухолевых клеток на дно малого таза. Пункция опухолей способствует обсеменению брюшины. При "закрытых" рамках в опухолях 1^а,б-стадиях опухолевые клетки в перитонеальной жидкости также отсутствуют. Кроме того, могут быть и ложно-положительные заключения при скудости материала в мазках или дегенерации клеток (неправильный забор, хранение). Ложно-положительные результаты исследований аспиратов из дугласова пространства при раках яичников составили 18,2 ложно-отрицательные 19,2 /5/.

Целью предлагаемого способа является повышение точности диагностики и чувствительности способа.

Цель достигается тем, что осуществляют забор перитонеальной жидкости и определяют в ней концентрацию иммуноглобулина А и при ее значении 8,59 ± 1,77 мг определяют злокачественный характер опухоли.

Сопоставительный анализ с прототипом показывает, что предлагаемый способ отличается от известного тем, что в перитонеальной жидкости определяют иммуноглобулин А и при концентрации его 8,59 ± 1,77 мг определяют злокачественный характер опухоли.

Определение иммуноглобулина А в перитонеальной жидкости позволяет повысить точность диагностики злокачественных опухолей яичников до 91,2 и повысить чувствительность метода до 95,0
Способ осуществляют следующим образом.

Производят дезинфекцию вульвы, влагалища и шейки матки. Шейку захватывают пулевыми щипцами, выполняют анестезию слизистой заднего свода влагалища 0,5-ным раствором новокаина (2 3 мл) без прокола брюшины. Тонкой иглой длиной 22 см, диаметром 1,5 мм делают пункцию заднего дугласова пространства и шприцем или чаще свободным током в пробирку набирают его содержимое. Для получения жидкости необходимо сделать несколько колебательных движений иглой вверх-вниз, взад-вперед и практически всегда удается получить 5 6 капель жидкости, которые составляют 0,5 мл. Эта жидкость переносится в полиэтиленовую пробирку с крышечкой, маркируется и замораживается в морозильной камере при -20^oC, затем направляется в иммунологическую лабораторию.

Исследование секреторных иммуноглобулинов А в жидкости из дугласова пространства производят методом лазерной нефелометрии. Измерения проводили на лазерном нефелометре "Behring Hasen Nephelometan" (ФРГ) с гелий-неоновым лазером (длина волны 632,8 нм). В работе использовали лиофизированные моноспецифические антисыворотки против секреторного IgA (Центральный НИИ вакцин и сывороток им. И. И.Мечникова). Для постановки метода готовили раствор следующего состава: 3,5 -ный раствор полиэтиленгликоля (ПЭГ) с мол.м. 6000 (Serva) на изотоническом растворе (NaCl) с добавлением Твин-20 из расчета 2,5 мл/л.

Моноспецифическую антисыворотку (АС) против S IgA к моменту определения обрабатывали следующим образом. Содержимое ампулы с сухой АС растворяли в 3,5 -ном растворе ПЭГ до титра в РИД 1:10 и осталяли при +4^oC на 16 20 ч. Далее АС центрифугировали при 16000 об./мин, +4^oC в течение 45 мин. Супернатант тщательно отделяли от осадка. Непосредственно перед работой АС пропускали через фильтры с величиной НОР 0,45 мкм ("Соle-Parmen" США).

Обработка АС подобным образом позволяет удалить из нее иммунные комплексы и агрегированные белковые частицы, не затронув при этом количества моноспецифических АТ и их способности реагировать с исследуемым антигеном.

Образцы перед использованием центрифугировали при 16000 об./мин и +4^oС в течение 45 мин. Супернатант отсасывали и использовали в реакции. Для постановки реакции смешивали 20 мл образца, 40 мкл АС и 160 мкл 3,5-ного раствора ПЭГ. Реакция проходила при комнатной температуре в течение 60 мин. По окончании инкубации проводили измерения на лазерном нефелометре. Показания стандартов использовали для построения калибровочной кривой, по которой определяли концентрацию S IgA в опытных образцах. И при концентрации иммуноглобулина А 8,59 ± 1,77 мг определяют злокачественный характер опухоли яичников.

Пример 1. Больная С. 44 лет (1990 г.) поступила с диагнозом доброкачественная опухоль яичника. Пальпаторные данные нечеткие. По УЗС в малом тазу спаечный процесс, по результатам цитограммы клетки мезотелия с дегенеративными изменениями. При определении иммуноглобулина А обнаружено его содержание в пределах 9,02 мг (количество иммуноглобулина А в контрольной группе у здоровой женщины составило 4,04 мг). У больной предположен злокачественный характер опухоли яичника. При операции обнаружены двухсторонние серозные цистаденокарциномы яичников, диагноз подтвержден гистологически.

Пример 2. Больная С. 26 лет (1990 г.) поступила в клинику с диагнозом рак яичников по УЗС и цитограмме. При исследовании IgA в перитонеальной жидкости содержание его составило 3,65 мг При операции обнаружена доброкачественная дермоидная опухоль яичника.

Пример 3. Больная О. 37 лет (1991 г.) поступила в клинику с диагнозом доброкачественная опухоль левого яичника. По УЗС опухоль с четкими контурами без внутренних структур, 62 х 80 мм. По цитограмме из дугласа клетки мезотелия без атипии. Уровень IgA в жидкости из дугласа был равен 8,06 мг Высказано предположение о наличии у больной "закрытого" рака в опухоли, т.е. I ст. что и было подтверждено в ходе операции.

Всего исследованы иммуноглобулины А в перитонеальной жидкости малого таза у 27 больных: при злокачественных опухолях яичников у 15, в контроле IgA определены у 12 женщин (табл. 1).

Изучение секреторных иммуноглобулинов произведено с целью оценки местного иммунитета в перитонеальной жидкости у больных опухолями яичников в сравнении с контрольной группой для дифференциальной диагностики. Исследования проведены слепым методом.

В табл. 2 приведены данные достоверности содержания IgA в исследуемых группах.

Результаты исследований обнадеживают, так как при злокачественных опухолях уровень IgA выше в два раза и средние показатели достигают 8,59 ± 1,77 мг а в контрольной группе они составили 4,04 ± 1,31 мг Из этих данных видно напряжение гуморального иммунитета в перитонеальной жидкости малого таза, что и проявляется повышенным содержанием Ig класса А при злокачественных опухолях яичников. Различия показателей содержания IgA достоверны по 3 критериям: U(R), λ, t.

Предлагаемый способ обеспечивает более высокую чувствительность для выявления злокачественных опухолей яичников.

В случаях, когда данные клинического, ультразвукового и лабораторного исследований больных не давали основания для окончательного диагноза, использование определения местного иммунитета в жидкости дугласова пространства дает адекватную информацию о сущности патологического процесса, даже при I стадии рака, полностью подтвержденную последующим оперативным вмешательством и морфологическим исследованием опухолей; способ позволяет дифференцировать опухолевую патологию от неопухолевой.

Источники информации
1. Нечаева И.Д. Опухоли яичников. Л. 1987, с. 215.

2. Винокуров В.Л. и Юркова Л.Е. Новые подходы к диагностике злокачественных опухолей яичников. Опухоли яичников. Иркутск: 1990, с. 96-103.

3. Демидов В.Н. Ультразвуковая диагностика в гинекологии. М. М. 1990, с. 252.

4. Г.П.Лоскутова, Н.М.Айнбиндер, В.А.Липова, Б.И.Вишневский. Современные подходы к ранней диагностике опухолей яичников. Современные подходы к диагностике и лечению опухолей яичников. Л. 1981, с. 16-22.

5. Кулинич С. И. Опыт комплексного обследования женщин в амбулаторных условиях с подозрением на опухоль яичников. Опухоли яичников. Иркутск, 1990, с. 118-123.

Использование: в медицине, а именно в онкогинекологии. Сущность изобретения: осуществляют забор перитонеальной жидкости и определяют в ней концентрацию иммуноглобулина А и при ее значении 8,59 ± 1,77 мг % определяют злокачественный характер опухоли. Точность способа составляет 91,2 %, чувствительность 95 %. 2 табл.

Способ диагностики злокачественных опухолей яичников, включающий забор перитонеальной жидкости и ее исследование, отличающийся тем, что в перитонеальной жидкости определяют иммуноглобулин А, и при его концентрации 8,59±1,77 мг% определяют злокачественный характер опухоли яичников.