СРЕДА ДЛЯ КОНСЕРВАЦИИ РОГОВИЦЫ ГЛАЗА Российский патент 1996 года по МПК A01N1/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для длительного сохранения жизнеспособного трансплантата для сквозной и послойной кератопластики.

Известна среда для консервации роговицы Мак-Кери-Кауфмана, содержащая среду 199, декстран, стрептомицина сульфат и пенициллин. (American journal of ophthalmology, vol. 79, N 1, 1975, с.115-120).

Недостатками известной среды являются: отек стромы за счет падения энергетического потенциала эндотелия, определяющего жизнеспособность и трансплантабельность (через 72 ч). Кроме того, антибиотики, входящие в среду, не обладают широким спектром действия на современную микрофлору, а также не имеют противогрибкового действия.

Задачей изобретения является создание многокомпонентного состава для консервации роговицы, сохраняющего жизнеспособность эндотелия и улучшающего трансплантабельность.

Техническим результатом является снижение послеоперационного отека трансплантата роговицы, улучшение адаптации донорского материала, снижение риска возникновения послеоперационных инфекций различной этиологии, сохранение высокой плотности эндотелиальных клеток в отдаленные сроки после кератопластики.

Технический результат достигается тем, что известная среда, включающая среду 199 и декстран, согласно изобретению, дополнительно содержит среду Ф-10, среду Дюльбекко-Игла, хондроитин-сульфат, гентамицина сульфат, амфотерицин Б при следующем соотношении компонентов, мас.

среда М-199 25
среда Ф-10 25
хондроитин-сульфат 2,7
декстран-40 2,0
гентамицин-сульфат 0,00014
амфотерцин Б 0,00015
среда Дюльбекко-Игла остальное
При этом среда М-199 имеет следующий состав, мг/л: Л-аланин 25; Л-аргинина хлорид 70; аспарагиновая кислота 30; Л-цистеина хлорид - 0,0987; Л-цистина двунатриевая соль; Л глютаминовая кислота 66,82; Л-глютамин 100; глютатион 0,05; глицин 50; Л гистидина хлорид одноводный 21,88; Л гидрооксипролин 10; Л-изолейцин 20; Л-лейцин 60; Л лизина хлорид 70; Л-метионин 15; Л-фенилаланин 25; Л-пролин 40; Л-серин 25; Л-треонин 30; Л-триптофан 10; Л-тирозина двунатриевая соль - 49,72; Л-валин 25; Л-аскорбиновая кислота 0,05; биотин 0,01; кальциферол 0,1; Д-кальция пантотенат 0,01; холина хлорид 0,5; фолиевая кислота - 0,01; и-инозитол 0,05; менафтона натрия бисульфат трехводный 0,019; никотиновая кислота 0,025; никотинамид 0,025; пара-амино-бензойная кислота 0,05; пиридоксальхлорид 0,025; пиридоксинхлорид 0,025; рибофлавин 0,01; тиамина хлорид 0,01; Д-Л-α-токоферола фосфата двунатриевая соль
0,01; витамина А-ацетат 0,1147; кальция хлорид двухводный 185,5; железа нитрат девятиводный 0,01; калия хлорид 400; калия дегидроортофосфат 60; магния сульфат семиводный 200; натрия хлорид 8000; натрия гидроортофосфат 47,5; аденина сульфат 10; 5-АМФ 0,2; АТФ двунатриевая соль 10; холестерол 0,2; 2-дезоксирибоза 0,5; Д-глюкоза 1000; гуанина хлорид - 0,3; гипоксантин 0,3; Д-рибоза 0,5; натрия ацетата 36,71; натриевая соль фенола красного 17; тимин 0,3; твин 80-5; урацил 0,3; ксантин 0,3.

Среда Ф-10 имеет следующим состав, мг/л:
Л -аланин 8,91; Л -аргинина хлорид 210,7; Л -аспарагин 1-водный - 15,01; Л -аспарагиновая кислота 13,31; Л -цистеина хлорид 31,53; Л -глютаминовая кислота 14,71; Л -глютамин 146,2; глицин 7,51; Л -гистидина хлорид одноводный 20,96; Л -изолейцин 2,62; Л -лейцин 13,12; Л -лизин 29,3; Л -метионин 4,48; Л -фенилаланин 4,96; Л -пролин 11,51; Л -серин 10,5; Л -треонин 3,57; Л -триптофан 0,61; Л -тирозина натриевая соль 2,25; Л -валин 3,51; биотин 0,024; Д кальция пантотенат 0,715; хлорид холина 0,698; фолиевая кислота 1,32; и-инозитол 0,541; никотинамид 0,611; пиридоксин-хлорид 0,206; рибофлавин 0,376; тиамина хлорид 1,012; витамин В12 1,36; кальция хлорид двухводный 44,1; сульфат меди пятиводный 0,0025; сульфат железа семиводный 0,8346; хлорид калия - 285; калия дегидрофосфат 83; магния сульфат семиводный 152,7; натрия хлорид 7400; натрия гидроортофосфат 156,2; цинка сульфат семиводный 0,0288; Д-глюкоза 1100; гипоксантин 4,08; липоевая кислота 0,206; натриевая соль фенола красного 12; натрия пируват 110; тимидин 0,727.

Среда Дюльбекко-Игла имеет следующим состав, мг/л:
Л -аргинин 84; Л -цистина двунатриевая соль 56,78; Л -глютамин 584; глицин 30; Л -гистидина хлорид одноводный 42; Л -изолейцин 104,8; Л -лейцин 104,8; Л -лизина хлорид 146,2; Л -метионин 30; Л -фенилаланин - 66; Л -серин 42; Л -треонин 95,2; Л -триптофан 16; Л -тирозина двунатриевая соль 89,5; Л -валин 93,6; Д кальция пантотенат 4; холина хлорид 4; фолиевая кислота 4; и-инозитол 7; никотинамид 4; пиридоксаль-хлорид 4; рибофлавин 0,4; тиамина хлорид 4; кальция хлорид двухводный 264,9; нитрат железа девятиводный 0,1; калия хлорид 400; магния сульфат семиводный 200; натрия хлорид 6400; натрия бикарбонат 3700; натрия дигидроортофосфат двухводный 141,3; Д-глюкоза 4500; натриевая соль фенола красного 15; натрия пируват 110.

За счет патофизиологически обоснованного подбора множества компонентов, составляющих среду, удалось сохранить исходную жизнедеятельность клеток эндотелия донорской роговицы, что позволило повысить эффективность результатов сквозной кератопластики.

Среду для консервации роговицы получают следующим образом: соединяют вместе две среды: 25 мл среды 199 (фирма "Флоу" (Англия) N 12-234) и 25 мл среды Ф-10 (фирма "Флоу" (Англия" N 12-414) в стерильной мерной аналитической колбе на 100 мл, в асептических условиях (стерильный бокс и ламинарный поток воздуха на рабочем столе). Вносят последовательно 0,00014 г гентамицина сульфата и 0,000;15 г амфотерцина Б. Смесь разделяют пополам, по 25 мл. Далее растворяют в первой стерильной емкости 2 г декстрана 40, а во второй 2,7 г хондроитин сульфата путем медленного насыпания сухого вещества на поверхность жидкой смеси. После насыпания всего количества составляют растворы в темноте до полного набухания и растворения (около 60-80 мин). Затем оба сливают раствора сливают в стерильную мерную аналитическую колбу и добавляют среду Дюльбекко-Игла (фирма "Флоу" (Англия" N 12-332) до метки колбы 100 мл. Производят префильтрацию среды через фильтр "Миллипор" с размером пор 0,45 мк. Затем среду разливают во флаконы (склянки Дротта) по 10 мл путем фильтрации через фильтр "Миллипор" с диаметром пор 0,22 мк. Склянки укупориваются стерильными силиконовыми пробками под жесткую обкатку.

Среду используют следующим образом. В условиях стерильного бокса выкраивают роговицу с ободком склеры, строго определенного диаметра. Изолированный корнео-склеральный комплекс помещают во флакон с консервантом с плотно закрывающейся крышкой. Консервация производят в объеме 10 мл консерванта, в условиях глубокой гипотермии (4-8^oС) в сроки до 5 сут.

Консервированная в данной среде роговицы сохраняют жизнеспособность клеток на весь срок консервации, что позволяет сохранить высокие оптически и трансплантационные свойства материала для целей сквозной и послойной кератопластики.

Использование данной среды позволило создать Глазной банк МНТК "Микрохирургия глаза".

Использование консервированной в данной среде роговицы позволило проводить планово сквозные и послойные кератопластики после предварительного тестирования донорского материала на ВИЧ и вирус гепатита Б.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для длительного сохранения жизнеспособного трансплантата для сквозной и послойной кератопластики. Задачей изобретения является создание многокомпонентного состава для консервации роговицы, сохраняющего жизнеспособность эндотелия и улучшающего трансплантабельность. Задача решается тем, что известная среда, включающая среду 199 и декстран, согласно изобретению, дополнительно содержит среду Ф-10, среду Дюльбекко-Игла, хондроитин-сульфат, гентамицина сульфат, амфотерицин Б при следующем соотношении компонентов, мас.%:
среда М-199 - 25
среда Ф-10 - 25
хондроитин-сульфат - 2,7
декстран-40 - 2,0
гентамицин-сульфат - 0,00014
амфотерицин Б - 0,00015
среда Дюльбекко-Игла - остальное

Среда для консервации роговицы глаза, включающая среду М-199 и дексатран-40, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит среду Ф-10, среду Дюльбекко-Игла, хондроитин-сульфат, гентамицин-сульфат, амфотерицин Б при следующем соотношении компонентов, мас.

Среда М-199 25
Среда Ф-10 25
Хондроитин-сульфат 2,7
Декстран-40 2
Гентамицин-сульфат 0,00014
Амфотерицин Б 0,00015
Среда Дюльбекко-Игла Остальное