ВЕЩЕСТВО, ПОНИЖАЮЩЕЕ УРОВЕНЬ ХОЛЕСТЕРИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 1997 года по МПК C07J9/00 A61K31/575 A21D2/16 

Изобретение относится к веществу, которое понижает уровни холестерина, и к способу его получения.

Высокий уровень холестерина в сыворотке крови может быть понижен изменением метаболизма липидов в кишечнике. В этом случае задача может быть затруднена абсорбцией триглицеридов, холестерина или желчных кислот. В ряде исследований отмечалось, что некоторые растительные стеролы, такие как β-ситостерол (24-этил-5-холестен-3 b-ол) и его закрепленная форма b-ситостанол (24-этил-5a-холестан-3 b-ол), снижают уровни холестерина в сыворотке крови путем снижения абсорбции пищевого холестерина из кишечника [1-25] Использование растительных стеролов может считаться безопасным, поскольку растительные стеролы являются природными составными частями растительных жиров и масел. Сами растительные стеролы не абсорбируются из кишечника или они абсорбируются в очень низкой концентрации. Снижение сферы действия коронарного заболевания ясно ассоциируется со снижением холестерина в сыворотке крови, в частности LDL холестерина. Высокое значение содержания холестерина в сыворотке крови является наиболее значительным прямым доказательством наличия риска коронарного заболевания.

Степень абсорбции холестерина зависит от наследственности, апопротеинового Е-фенотипа. Апопротеин E является протеином, который относится к липопротеинам сыворотки крови и принимает участие в переносе холестерина в системе [26] Для аллелей, связанных с синтезом апопротеина E, то есть липопротеина, который влияет на абсорбцию, известны три вида, е2, е3 и е4, которые объединяются в случайные пары. Аллели способны образовать всего шесть различных комбинаций. Чем выше сумма подиндексов, тем лучше абсорбционная способность холестерина и тем выше уровень холестерина, в частности вредного LDL холестерина, в сыворотке крови [27] е4 аллель наиболее представлен среди наследственных факторов финна (Finns), поэтому его соотношение почти двойное по сравнению со многими европейскими популяциями [28] Финны действительно исключительно чувствительны к пищевым недостаткам и к жирной и с высоким содержанием холестерина пище [29]
Уровни холестерина в сыворотке крови могут быть снижены путем диетического питания при уделении внимания качеству и виду потребляемых жиров и количеству потребляемого холестерина. В практике, однако, этот путь не всегда приводит к удовлетворительному результату. Другие методы, пригодные для всех, для достижения понижения уровня холестерина в сыворотке крови должны быть рассмотрены в сравнении с настоящими методами. Повышение содержания волокон в пище является методом с ограниченным действием. Понижающее холестерин действие растворимых волокон в пище основано на связывании и удалении желчных кислот. Так как абсорбция холестерина является основным показателем регулирования уровня холестерина в сыворотке крови, является логичным стремиться к развитию методов, по которым абсорбция холестерина может быть предотвращена или уменьшена.

Pollak показал, что поглощенный растительный стерол снижал уровень холестерина в сыворотке крови у мужчин [1] То же наблюдалось ранее у экспериментальных животных [2,3] В ряде исследований отмечалось, что большие дозы растительных стеролов понижают уровни холестерина в сыворотке крови, в лучших случаях, на 10-20% [4,5] В этих экспериментах были использованы большие количества, до 24 г/в день, b-ситостерола в кристаллической форме [6] В некоторых экспериментах уровень холестерина в сыворотке крови значительно понижался даже при меньших дозах [7] хотя небольшое количество ситостерола, вводимое в виде эфиров жирной кислоты, не кажется очень эффективным для понижения уровня сывороточного холестерина [8] Препараты ситостерола имеют, в основном, хорошую переносимость при длительном применении [9]
Природные растительные стеролы имеют структурное сходство с холестерином. Различие между молекулой холестерина и молекулой растительного стерола прежде всего найдено в структуре боковой цепи основного скелета. Обычная пища содержит 100-300 мг в день растительных стеролов. Большинство растительных стеролов в пище это b-ситостерол и приблизительно одна треть это кампестерол. Небольшие количества насыщенных ситостанолов также присутствуют в продуктах. Обычно концентрации кампестерола в сыворотке крови частично отражают степень абсорбции холестерина [10-12] Изменение количеств растительных стеролов в пище влияет на уровень сывороточного холестерина, но эта область еще недостаточно изучена. Растительные стеролы плохо абсорбируются из кишечника. Растительные стеролы, которые ограничено абсорбируются в системе (менее, чем 10% стеролов) [30-32] выделяются с желчью и через нее со стулом. В настоящее время легко измерить уровни стерола из образцов пищи, сыворотки или стула методами газовой хроматографии. Уровни в сыворотке частью зависят от количеств растительных стеролов из пищи и частью от эффективности абсорбции стеролов. Обычно уровни растительного стерола остаются ниже 1/300 уровня сывороточного холестерина, так как часть абсорбированного растительного стерола выделяется из системы с желчью.

Даже большие дозы поглощенных растительных стеролов не проявляются в уровне сывороточного растительного стерола. Значения остаются на нормальном уровне, так как у человека способность к абсорбции растительного стерола быстро насыщается. Уровень растительного стерола в сыворотке крови поднимается до опасного в небольших случаях редких заболеваний, таких как цереброчувствительный ксантоматоз и ситостеролемия [33-35] в сравнении с которыми коронарная болезнь является обычной. Проявление этих заболеваний составляет несколько случаев на один миллион. Ни одного случая таких заболеваний не отмечалось в Финляндии. Высокие значения растительного стерола иногда отмечаются у пациентов, страдающих некоторыми болезнями печени [36]
Исследования метаболизма холестерина показало, что ситостерол ингибирует абсорбцию как эндогенного, так и пищевого холестерина из кишечника [13,14] Как результат этого, уменьшается выделение нейтральных стероидов в стуле, что приводит к недостатку холестерина в печени и, через это, к пониженному уровню сывороточного холестерина. С другой стороны, ситостерол не действует на абсорбцию желчных кислот [13]
На основе экспериментов на животных кажется, что действие ситостерола основано на его способности помещать пищевой холестерин в мицеллу желчной кислоты [15-17] Похожие результаты были получены также для человека [37] Различные растительные стеролы показали действие различными путями на абсорбцию холестерина [19,38] Предшествующие исследования, проведенные на экспериментальных животных, создали впечатление, что ситостанол является наиболее эффективным ингибитором абсорбции холестерина [38] и сам при этом почти не абсорбируется. Далее исследование без контроля шести субъектов показало, что свободный ситостанол (1,5 г в день) понижает сывороточный холестерин (главным образом LDL холестерин) в течение четырех недель на 15% В течение интервала в две недели значения холестерина вернулись к первоначальным уровням [20] Большинство препаратов растительных стеролов содержат ряд различных растительных стеролов. Действие смеси растительных стеролов на абсорбцию холестерина меняется, так же как и их собственная абсорбция [21-23]
Последующие исследования, главным образом, сосредоточились на изучении того, как влияет на эффективность понижения уровней сывороточного холестерина форма (кристаллическая, суспензия, гранула), в которой вводят растительные стеролы. Кристаллические растительные стеролы не обладают значительной степенью растворимости в фазе мицелл в питающем канале и поэтому не могут эффективно ингибировать абсорбцию холестерина. Только масла и жиры определяют степень растворимости свободных стеролов. Только в растворенной форме могут стеролы ингибировать абсорбцию холестерина. Согласно Хайнманну и соавторам [24] ситостанол ингибировал в эксперименте абсорбцию холестерина на 82% тогда как ситостерол соответственно ингибировал абсорбцию на 50%
В некоторых исследованиях использовались эфиры жирных кислот ситостерола, такие как ситостерол ацетат или олеат или стигмастерол олеат, растворенные в жирах. В экспериментах на крысах "масло" этого вида, имеющее концентрацию стерола вплоть до 8% уменьшает абсорбцию холестерина на 20-40% [22] При высокохолестериновой диете (500 мг/день) ситостерол олеат (2 г/день), растворенный в жире, понижает абсорбцию холестерина у испытуемых субъектов в среднем на 33% [25] В том же исследовании смешанный с пищей ситостерол в более низкой дозе (1 г/день) понижал абсорбцию холестерина на 42%
Патент Германии (Deutsches Patentamt, Offenlengungsschrift 2035069, январь 28, 1971) касается добавления эфиров жирных кислот стерола в масло для готовки еды с целью снижения уровней сывороточного холестерина у человека. В данном патенте предлагается для этерефикации свободных стеролов использовать способ, ни в коем случае не отвечающий требованиям приготовления высококачественной пищи. Согласно патенту этерефикацию проводят между свободным стеролом и ангидридом жирной кислоты при воздействии хлорной кислоты в качестве катализатора. Используемый катализатор и реагент не могут быть приемлемы в процессе приготовления пищевого продукта. Кроме того, данный патент относится к эфирам жирных кислот только природных растительных стеролов.

Много реагентов, которые не могут быть приемлемы как продукт питания или для производства продуктов, предназначенных как добавка к продуктам питания, были использованы при получении эфиров жирных кислот стеролов. Обычно использование, например, хлора [39] брома [40] тионилхлорида [41] или ангидридных производных жирных кислот. Среди запатентованных способов, только способ Baltes/Deutsches Patentamt, Offenlengungsschrift 2248921, апрель 11, 1974 для этерификации стеролов, присутствующих в масле и жирах, методом химической переэтерификации соответствует критерию приготовления пищевого продукта. В указанном патенте свободный стерол и избыток эфира жирной кислоты добавляют к смеси масли или жира, после чего вся жирная смесь переэтерифицируется широко известным методом переэтерификации.

Предложение согласно настоящему изобретению относится к использованию стерола совершенно иного вида для понижения уровня холестерина в сыворотке крови. Оно включает эфиры жирных кислот 5a-насыщенных стеролов, особенно эфиры жирных кислот ситостанола (ситостанол 24-этил-5a-холестан-3b-ол), которые понижают уровень холестерина в сыворотке крови с особенной эффективностью. Указанные эфиры могут быть получены или использованы как таковые, или они могут быть добавлены к продуктам питания, особенно к жирной части пищи. Смесь эфира жирной кислоты цистосанола получают путем отверждения торговой смеси ситостерола (ситостерол 25-этил-5-холестен-3b-ол). b-ситостанол может быть получен ранее известной методикой отверждения холестерина путем отверждения b-ситостерола с использованием Pd/C катализатора в органическом растворителе [43] Смесь была одобрена FDA (Cytellin, Eli, Lilly). В реакции степень отверждения достигает 99% Катализатор, используемый при конверсии, удаляется с помощью мембранного фильтра, и полученный ситостанол кристаллизируют, промывают и сушат. Согласно изобретению b-ситостаноловую смесь, которая содержит приблизительно 6% кампестанола, этерефицируют различными смесями эфиров жирных кислот широко известными методами преэтерификации [44-46] В реакции может быть использован метиловый эфир смеси жирных кислот любого растительного масла. Одним примером служит смесь рапсового масла и метиловый эфир, но приемлемыми являются жирные кислоты, содержащие около 2-22 атомов углерода. Способ согласно изобретению для получения эфиров жирных кислот станола выгодно отличается от ранее запатентованных способов тем, что никакие другие вещества, кроме свободного станола, эфир жирной кислоты или смесь эфира жирной кислоты и катализатор используются в реакции переэтерификации. Используемым катализатором может быть любой известный катализатор переэтерификации, такой как Na-этилат.

Необходимо также отметить, что в способе, применяемом в нашем изобретении, в противоположность способу Baltes упоминаемому выше, жир сам не переэтерифицируется. В этом случае жировая часть при приготовлении на жиру или какая-либо другая пища будет сохранять свои натуральные свойства. Необходимо было отметить далее, что переэтерифицируемая смесь может быть добавлена непосредственно в жиросодержащие продукты или использована в виде таковых. Так как станолсодержащая часть смеси не абсорбируется, энергетическое содержание смеси эфира жирной кислоты и станола составляет только 20-40% от энергетического содержания условного масли или жира, зависящего от состава жирной кислоты. Таким образом смеси с успехом могут быть использованы также как вещества, понижающие энергетический состав пищи.

Действие эфиров жирных кислот b-ситостанола на абсорбцию холестерина и уровни сывороточного холестерина не было ранее исследовано. В исследовании, на котором базируется данная заявка, изучается, как концентрации растительного стерола в сыворотке зависят от ситостанола, b-ситостанол 94% и кампестанол 6% твердой формы ситостанола, растворенного в рапсовом масле, как в а) свободном, так и в б) форме эфира жирной кислоты. Схема исследований показана на диаграмме 1, приведенной в конце описания. Первой стадией для всех групп было введение рапсового масла (50 г/д), для контрольной группы введение рапсового масла продолжалось в течение всего испытания, а для других групп назначалось соединение по изобретению, добавленное к рапсовому маслу.

Табл. 1 показывает, что повышение концентрации b-ситостанола в пище понижает концентрации как b-ситостерола, так и кампестерола в сыворотке крови, но не дает ясного изменения концентрации сывороточного b-ситостанола. Данные также показывают, что поглощение ситостанола в растворимой форме, например в виде эфиров жирных кислот, уменьшает абсорбцию растительных стеролов более эффективно, чем свободный b-ситостанол, введенный в той же дозе. Что касается эфиров жирных кислот b-ситостанолов, то дополнительно наблюдалось четкое влияние дозы. Это доказывает, что b-ситостанол также ингибирует абсорбцию b-ситостерола и кампестерола, что может быть видно по понижению их концентраций.

Соответственно, были также определенные изменения, вызываемые добавлениями станола, концентрации общего и LDL сывороточного холестерина и абсорбции холестерина. Контрольная группа потребляла обычное рапсовое масло без добавок станола. Табл. 2 показывает, что абсорбция холестерина значительно понижалась от смеси эфира жирной кислоты b-ситостанола (27,4%), даже если потребление станола было относительно низким, 895 мг/день. Абсорбция холестерина контрольной группой не изменялась. Действие смеси свободного b-ситостанола и эфира жирной кислоты b -ситостанола на концентрацию холестерина в сыворотке крови по сравнению с контрольной группой показано в табл.3. Смесь эфира жирной кислоты b-ситостерола понижает как общий холестерин, так и холестерин более эффективно, чем b-ситостерол. Смесь эфира жирной кислоты b-ситостанола, растворенная в рапсовом масле (3,2 г b-ситостанола/день), понижает общий холестерин на более 9,5% и LDL холестерин более 11,6% по сравнению с одним рапсовым маслом. Соответственно соотношение HDL/LDL холестерина выросло значительно, от 0,32 до 0,52.

Проведенные исследования ясно показывают, что при добавлении эфиров жирной кислоты b-цистотанола к, например, пищевым жирам, может быть достигнуто значительное преимущество как в отношении естественной питательности, так и в отношении лечения гиперхолестеринэмии, так как 1) смесь снижает уровни холестерина в сыворотке крови, 2) смесь не увеличивает концентрации растительного стерола в сыворотке крови, 3) смесь может применяться ежедневного как заменитель жира при приготовлении обычной пищи даже в больших дозах (0,2-20 г/день), причем потребление энергии жира уменьшается.

Липидные изменения, вызванные эфирами жирных кислот b-станола, отмеченные при исследованиях, очень внимательно рассмотрены с точки зрения влияния на здоровье. Важность результатов подчеркивается возможностью использования соединения непосредственно при приготовлении пищи как часть обычной готовки и при обычном питании. Результаты исследований показывают, что в течение диеты с введением станола уровень его в сыворотке не повышается и что уровни других растительных стеролов в сыворотке снижаются. Таким образом, указанная смесь эфира b-станола безопасна также для таких немногочисленных индивидуумов, которые легко абсорбируют все стеролы и которые имеют нарушения в выделении стеролов. Далее ежедневная замена жира уменьшает личный энергетический запас, так как эффективное соединение стенола не абсорбировалось, то есть оно действует как непроизводящая энергию часть жира. Отсутствуют доказательства того, что указанная смесь эфира b-станола тормозит абсорбцию липид-растворимых витаминов или уровни витаминов в сыворотке крови.

Применение смеси эфира жирной кислоты ситостанола как части различных жиров или масел в жиросодержащих продуктах обширно, так как физические свойства смеси могут быть легко модифицированы изменением состава жирных кислот смеси. В добавление к этому, состав жирной кислоты для смеси эфира жирной кислоты b-станола может быть подобран таким, чтобы он содержал большие количества моноенов или полиенов, благодаря чему ее воздействие на понижение уровней холестерина в сыворотке крови изменяется.

Поскольку смесь эфира жирной кислоты b-ситостанол готовится с использованием необработанных продуктов, относящихся к обычной пище, и процессы получения, главным образом, применяются в пищевой промышленности, не существует препятствий для производства и использования соединения.

Пример 1. Смесь эфира b-ситостанола была получена по следующей схеме. 6 кг b-ситостанола, который был высушен в течение ночи при 60^oC, этерифицируют 8,6 кг смеси метилового эфира рапсового масла. Переэтерефикацию осуществляют следующим путем.

Смесь b-ситостанола и метилового эфира жирной кислоты рапсового масла нагревают в реакционном сосуде при 90-120^oC в вакууме при 5-15 мм Hg. Высушивание продолжают в течение часа, добавляют 12 г этилата Na и реакцию продолжают еще около 2 ч. Катализатор разрушают добавлением к смеси воды. После разделения фаз молярную фазу сушат в вакууме.

В реакции достигается 98% конверсии. Полученная эфирная смесь может быть использована в качестве добавки к жирам.

Вместо смеси эфиров жирной кислоты рапсового масла можно использовать в реакции метиловый эфир или смесь метиловых эфиров жирных кислот любого растительного масла, которые содержат около 2-22 атомов углерода.

Пример 2. Перед паровой отгонкой рапсового масла к нему добавляют смесь эфира b-ситостана, полученного по примеру 1, в количестве 3, 6 и 13 мас. Был приготовлен майонез, содержащий указанные жировые смеси в количестве 65%
Состав майонеза следующий,
Жировая смесь 65,0
Загуститель 2,0
Соль 1,0
Сахар 3,0
Уксус (10 мас.) 3,0
Горчица 2,0
Вода 24,0
Всего 100,0
Майонез был приготовлен гомогенизацией по известному способу с использованием гомогенизатора Koruma.

При приготовлении майонеза не было никаких сложностей, а его свойства, определенные по вкусовым ощущениям, не отличаются от свойств обычного майонеза.

Пример 3. Перед паровой отгонкой рапсового масла к нему добавляют смесь эфира b-ситостанола, полученного по примеру 1, в количестве 3 и 6 мас.

Рапсовое масло, к которому была добавлена эфирная смесь, остается прозрачным при комнатной температуре и никакого постоянного помутнения не наблюдалось, когда оно хранилось при пониженной температуре.

Пример 4. В продуктах по примерам 2 и 3 могут быть также использованы в качестве масла другие масла, такие как подсолнечное, соевое, оливковое или кукурузное.

Пример 5. Смесь эфира b-ситостанола, полученная по примеру 1, была добавлена в количестве 10 и 20 мас. к жировой части обычного мягкого маргарина (состав, частично отвержденное соевое масло 35, масло кокосового ореха 5, рапсовое масло 60) перед паровой отгонкой жировой смеси.

ТК (температура каплепадения) и значение ЯМР смесей были проанализированы (см. табл.4):
1) сама смесь,
2) смесь + 10% эфирной смеси,
3) смесь + 20% эфирной смеси.

Маргарин, который содержит 80% жира, был получен широко известным способом. Физические и вкусовые свойства маргарина соответствуют свойствам обычных маргаринов.

Схема испытания по исследованию введения приведена в конце описания (диаграмма 1).

Источники информации
1. Pollak, O.J. Reduction of blood cholesterol in man. Circulation, 7, 702-706, 1953.

2. Peterson, D.W. Effect, of soybean sterols in the diet on plasma and liver cholesterol in chicks, Pric. Soc. Exp. Biol. Med. 78, 143-147, 1951.

3. Pollak, O.J. Succesful prevention of experimental hyper-10 cholesterolemia and cholesterol atheroscleroses in the rabbit, Circulation, 7, 696-701, 1953.

4. Farquhar, J.W. and Sokolow, M. Response of serum lipids and lipoproteins of man to beta-sitosterol and safflower 15 oil A long term study. Circulation, 17, 890, 1956.

5. Grundy, S. M. Ahrens, E. H. Jr. and Davignon, J. The interaction of cholesterol absorption and cholesterol synthesis in man, J. Lipid Res. 10, 304, 1969.

6. Oster, P. Schlierf.G. Heuck, C. C. Greten, H. Gundert-Remy, U. Haase, W. Klose, G. Nothelfer, A. Raetzer, H. Schellenberg, B. und Schmidt-Gayk, H. Sitosterin bei familiare.n Hyperlipoproteinamie Typ II. Eine 25 randomisierte gekreuzte Doppelblindstudie, Dtsch. Med. Wschr. 101, 1308-1311, 1976.

7. Grundy, S.M. Dietary and drug regulation of cholesterol metabolism in man, pp. 127-159 in " Lipid Pharmacology, Vol II", Eds: Paoletti, R and Glueck, C.J. Academic Press, New York, 1976.

8. Lees, A.M. Mok, H.Y.I. McCluskey, M.A. Grundy, S.M. Plant sterols as cholesterol lowering agents: clinical 35 trials in patients with hypercholesterolemia and studies of sterol balance, Atherosclerosis, 28, 325-338, 1977.

9. Schwartzkopf, W. and Jantke, H.-J. Dosiswirksarnkei-fc von Beta-sitosterin bei Hypercholesterinemien der Typen II A und II B, Munch. Med. Wschr. 120, 1575, 1969.

10. Tilvis, R.S. Miettinen, T.A. Serum plant sterols and their relation to cholesterol absorption. Am. J. Clin. Nutr. 43, 92-97, 1986.

11. Miettinen, T.A. Tilvis, R.S. Kesaniemi, Y.A. Serum plant sterols and cholesterol precursors reflect cholesterol absorption and synthesis in volunteers of a randomly selected male population, Am. J. Epidem. 131, (1), 20-31, 1990.

12. Farkkila, M. A. Tilvis, R.S. Miettinen, T.A. Regulation of plasma plant sterols levels in patients with gut resections, Scand. J. Clin. Lab. Invest. 48, 715-722, 1988.

13. Grundy, S.M. Mok, H.Y.I. Effects of low dose phyto-sterols on cholesterol absorption in man, pp. 112-118 in "Lipoprotein metabolism". Ed. Greten, H. Berlin, Heidelberg, New York: Springer-Verlag, 1976.

14. Kudchodkar, B.J. Horlick, L. Sodhi, H.S. Effects of plant sterols on cholesterol metabolism in man, Atherosclerosis, 23, 239, 1976.

15. lkeda, l. Tanaka, K. Sugano, M. Vahouny, G.V. Gallo l. L. Inhibition of cholesterol absorption in rats by plant sterols, J. Lipid Res. 29, 1573-1582, 1988.

16. Ikeda, l. Tanaka, K. Sugano, M. Vahouny, G.V. Gallo,
l. L. Discrimination between cholesterol and sitosterol for absorption in rats, J. Lipid Res. 29, 1583-1592, 1988.

17. Ikeda, l. Tanabe, Y. and Sugano, M. Effects of sitosterol and sitostanol on micellar solubility of cholesterol, J. Nutr. Sci. Vitaminol. 35, 361-369, 1989.

18. Ikeda, l. Sugano, M. Comparison of absorption and metabolism of beta-sitosterol and beta-sitostanol in rats, Atherosclerosis, 30, 227, 1978.

19. Sugano, M. Marioka, H. and Ikeda, l. A comparison of hypocholesterolemic activity of бета -sitosterol and бета -sitostanol in rats. J, Nutr. 107, 2011-2019, 1977.

20. Heinemann, T. Leiss, O. von Bergman, K. Effects of low-dose sitostanol on serum cholesterol in patients with hypercholesterolemia, Atherosclerosis, 61, 219-223, 1986.

21. Lees, R.S. Lees, A.M. Effects of sitosterol therapy on plasma lipids and lipoprotein concentrations, pp. 119-124 in "Lipoprotein metabolism". Ed: Greten, H. Berlin, Heidelberg, New York: Springer- Verlag, 1976.

22. Mattson, F. H. Volpenhein, R.A. and Erickson, B.A. Effect of plant sterol esters on the absorption of dietary cholesterol, J. Nutr. 107, 1139-1146, 1977.

23. Heinemann, T. Pietruck, B. Kullak-Ublick, G. von Bergman, K. Comparison of sitosterol and sitostanol on inhibition of intestinal cholesterol absorpiton. Agents Actions (Suppi), 26, 117-122, 1988.

24. Heinemann, T. Kullak-Ublick, G.-K. Pietruck, B. von Bergmann, K. Mechanisms of action of plant sterols on inhibition of cholesterol absorption, Eur. J. Clin. Pharmacol. 40 Suppi. l, S50-S63, 1991.

25. Mattson, F. H. Grundy, S.M. Grouse, J.R. Optimizing the effect of plant sterols on cholesterol absorption in man. Am. J. Clin. Nutr. 35, 697-700, 1982.

26. Kesaniemi, Y.A. Ehnholm, C. Miettinen, T.A. Intestinal cholesterol absorption efficiency in man is related to apoprotein E phenotype, J. Clin. Invest. 80, 578-581, 1987.

27. Kesaniemi, Y. A. Miettinen, T.A. Metabolic epidemiology of plasma cholesterol, Ann. Clin. Res. 20, 26-31, 1988.

28. Ehnholm, C. et al. Apolipoprotein polymorphism in the Finnish population: gene frequencies and relation to lipoprotein concentrations, J. Lipid. Res. 27, 227-235, 1986.

29. Miettinen, T.A. Gylling, H. Vanhanen, H. Serum cholesterol response to dietary cholesterol and apoprotein E phenotype, Lancet, 2, 1261, 1988.

30. Gould, G. Absorbability of beta-sitosterol, Trans. N. Y. Acad. Sci. 2, 129, 1955.

31. Gould, R.G. Jones, R.J. LeRoy, G.W. Wissler, R.W. Taylor, C.B. Absorbability of бета -sitosterol in humans, Metabolism, 18, 652-662, 1969.

32. Salen, G. Ahrens, E.J. Grundy, S.M. Metabolism of бета -sitosterol in man, J. Clin. Invest. 49, 952-67, 1970.

33. Salen, G. Kwiterowich, P.O. Jr, Shefer, S. Tint, G.S. Horak, l. Shore, V. Dayal, B. Horak, E. Increased plasma cholestanol and 5 альфа - saturated plant sterol derivatives in subjects with sitosterolemia and xanthomatosis, J. Lipid Res. 26, 203-209, 1985.

34. Salen, G. Shore, V. Tint, G.S. Forte, T. Shefer, S. Horak, l. Horak, E. Dayal, B. Nguyen, L. Batta, A.K. Lindgren, F.T. and Kwiterowich, P.O. Jr. Increased sitosterol absorption, decreased removal and expanded body 5 pools compensate for reduced cholesterol synthesis in sitosterolemia with xanthomatosis. J. Lipid Res. 30, 1319-1330, 1989.

35. Miettinen, T.A. Phytosterolemia, xanthomatosis and premature atherosclerosis desease: a case with high plant sterol absorption, impaired sterol elimination and low cholesterol synthesis, Eur. J. Clin. Invest. 10, 27-35, 1980.

36. Nikkila, K. Miettinen, T.A. Serum cholesterol precursors, cholestanol and plant sterols in PBC, Scand. J. Gastroenteri. 23, 967- 972, 1988.

37. Miettinen, T. A. Siurala, M. Bile salts, sterols, asterol esters, glycerides and fatty acids in micellar and oil phases of intestinal contents during fat digestion in man, Z. Klin. Chem. Biochem. 9, 47-52, 1971.

38. Hassan, A.S. Rampone, A.J. Intestinal absorption and lymphatic transport of cholesterol and бета -sitostanol in the rat, J. Lipid Res. 20, 646-653, 1979.

39. Kuksis, A. Beveridge, J.M.R. J. Org. Chem, 25:1209, 1960.

40. Saroja, M. Kaimal, T.N.B. A convienent method of esterification of fatty acids. Preparation of alkyl esters, sterol esters, wax esters and trialcyiglycerols, Synthetic communications, 16, 1423-1430, 1986.

41. Prabhudesai, A.V. A simple method for the preparation of cholesteryl esters, Lipids, 12, 242-244, 1977.

42. Lentz, B. R. Barenholz, Y. Thompson, T.E. A simple method for the syntesis of cholesterol esters in high yield. Chemistry and Physics of Lipids, 15, 216-221, 1975.

43. Augustine, R.L. and Reardon Jr.E.J. The palladium catalyzed hydrogenation of cholesterol. Organic preparations and procedures 1(2), 107-109, 1969.

44. Sreenivasan, B. Interesterification of fats, J. Am. Oil Chemists' Soc. 55, 796-805, 1978.

45. Lo, Y. C. and Handel, A.P. Physical and chemical properties of randomly interesterified blends of soybean oil and tallow for use as margarine oils, J. Am. Oil Chemists' Soc. 60, 815-818, 1983.

46. Chobanov, D. Chobanova, R. Alterations in glyceride composition during interesterification of mixtures of sunflower oil with lard and tallow, J. Am. Oil Chemists' Soc. 54, 47-50 1977.

Изобретение относится к веществу, которое понижает уровни холестерина в сыворотке крови и которое является сложным эфиром β-ситостанола и жирной кислоты или смесью эфира жирной кислоты, и к способу его получения. Вещество может быть использовано как таковое или добавленное к пище. 2 с. и 7 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Вещество, включающее сложный эфир β-ситостанола и С₂ - С_2 2 жирных кислот или смесь сложных эфиров β-ситостанола и жирных кислот С₂ С_2 2, полученное с помощью этерификации β-ситостанола сложным эфиром С₂ С_2 2 жирной кислоты или смесью сложных эфиров С₂ С_2 2 жирных кислот в присутствии катализатора переэтерификации при температуре и вакууме, достаточных для получения прозрачного раствора, где свободный β-ситостанол полностью растворен в вышеуказанном сложном эфире жирных кислот или в смеси указанных сложных эфиров жирных кислот, понижающее уровень холестерина в сыворотке крови. 2. Вещество по п.1, отличающееся тем, что этерификацию проводят при температуре от 90 до 100^oС в вакууме при 5 15 мм рт.ст. 3. Вещество по пп.1 и 2, отличающееся тем, что представляет собой жирорастворимую форму, полученную этерификацией свободного β-ситостанола сложным эфиром жирных кислот или смесью сложных эфиров жирных кислот. 4. Вещество по пп.1 3, отличающееся тем, что его добавляют при производстве жира или других пищевых продуктов. 5. Вещество по пп.1 3, отличающееся тем, что его используют в качестве основного жирового компонента или заменителя жира. 6. Вещество по п.5, отличающееся тем, что его используют в качестве добавки в растительные масла, маргарины, сливочное масло, майонез, приправы к салату, жиры или в тесто для рассыпчатости. 7. Вещество по пп.1 3, отличающееся тем, что оно может быть использовано как часть диеты. 8. Способ получения вещества по п.1, отличающийся тем, что свободный β-ситостанол этерифицируют сложным эфиром жирных кислот или смесью сложных эфиров жирных кислот в присутствии катализатора переэтерификации при температуре и вакууме, достаточных для получения прозрачного раствора, где свободный β-ситостанол полностью растворен в сложном эфире жирных кислот или в смеси сложных эфиров жирных кислот. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что реакцию проводят при температуре приблизительно 90 120^oС и под вакуумом приблизительно 5 12 мм Hg.