СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ЯИЧНИКОВ У ЛОСИХ Российский патент 2000 года по МПК A61D19/00 G01N33/48 

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к способам диагностики функционального состояния яичников у самок диких жвачных животных, например лосих.

Широко известен кольпоцитологический метод клинико-диагностической оценки функционального состояния яичников у самок млекопитающих путем изучения цитологической картины влагалищных мазков. По характеру картины влагалищного мазка можно судить о фазах полового цикла у самок животных (менструального цикла у женщин), уточнить время прохождения овуляции или поставить диагноз возможного нарушения воспроизводительной функции.

Известен способ [Арсеньева М.Г. Кольпоцитологические исследования в диагностике и терапии эндокринных гинекологических заболеваний. - М.: Медицина, 1977, - 365 с.] выявления клеточного состава влагалищных мазков с целью диагностики функционального состояния яичников (наличия зрелых фолликулов в яичнике в предовуляторном периоде или желтого тела в яичнике в ходе прохождения беременности), включающий взятие свободно отделяющейся от стенки пробы (мазка) из верхнебокового свода влагалища на уровне portio vaginalis, нанесение пробы тонким слоем на предметное стекло, подсушивание на воздухе, фиксацию материала, окрашивание, определение и подсчет разных типов клеток поверхностного эпителия и по цитологической картине суждение о состоянии яичников.

Вышеприведенный способ не может быть применен для диких животных с сезонным типом размножения, например для лосих.

Особенностью репродуктивной системы этих животных является удлиненное влагалище - до 16-20 см и более [Биология и использование лося. Обзорные исследования/ред. Орлов Г.М. - М.: Наука, 1986, - 161 с.]. Следовательно, для взятия пробы поверхностного эпителия с боковых стенок краниального отдела влагалища на уровне шейки матки можно теоретически использовать удлиненные палочки, что опасно для подвижных животных, поэтому пластмассовые пипетки для искусственного осеменения крупного рогатого скота являются наиболее приемлемыми. Кроме того, изменения клеточного состава влагалищной стенки являются реакцией структур влагалища на воздействие гормонов яичников, в частности эстрогенов. По аналогии с коровами циклические изменения, отражающие овариальную функцию яичников во влагалище, наиболее отчетливо выступают в поверхностном эпителии краниального отдела влагалища. Эпителий подвергается изменениям, проявляющимся различиями в толщине эпителиального пласта (изменении количества клеточных слоев) и, особенно в форме и характере покровных клеток [Василенко Т.Ф., Борисенков М.Ф. Изменения клеточного состава влагалища коров в течение полового цикла. Усвоение питательных веществ у жвачных животных Труды Коми филиала АН СССР. - Сыктывкар, 1987, N 85, - с. 98 - 106].

Задачей настоящего изобретения является разработка способа диагностики, который позволяет доступно в условиях заповедников или ферм диагностировать функциональное состояние яичников у самок диких жвачных животных и судить о прохождении фолликулиновой фазы полового цикла.

В этом состоит технический результат, находящийся в причинно-следственной связи с существенными признаками.

Технический результат достигается тем, что пробу на анализ клеточного состава берут путем снятия клеточной массы поверхностного эпителия со стенок краниального отдела влагалища поверхностью пипетки для искусственного осеменения с обработанным шероховатым концом, при этом пипетку вводят через вагинальное зеркало для телок с подсветкой под визуальным контролем, причем длина шероховатости рабочего конца пипетки составляет пять-семь сантиметров; для диагностирования животных определяют процентное содержание поверхностных клеток и "голых" ядер и их "тканей": при максимальном содержании поверхностных клеток - 100% и "голых" ядер и их "теней" не более 6,3% диагностируют наличие фолликулярной фазы полового цикла у лосих.

Существенные признаки изобретения: способ диагностики функционального состояния яичников, включающий взятие мазка из верхнебокового свода влагалища на уровне portio vaginalis, нанесение пробы тонким слоем на предметное стекло, фиксацию клеточного материала, окраску, определение и подсчет разных типов клеток и суждение о взаимозависимых от функционального состояния яичника фазах репродуктивного цикла, отличается тем, что диагностику состояния яичников проводят у животных с сезонным размножением - например лосих, пробу на анализ клеточного состава берут путем снятия клеточной массы поверхностного эпителия со стенок краниального отдела влагалища поверхностью пипетки для искусственного осеменения с обработанным шероховатым концом, при этом пипетку вводят через вагинальное зеркало для телок с подсветкой под визуальным контролем, причем длина шероховатости рабочего конца пипетки составляет пять-семь сантиметров.

Для диагностирования животных определяют процентное содержание поверхностных клеток и "голых" ядер и их "теней": при максимальном содержании поверхностных клеток - 100% и "голых" ядер и их "теней" не более 6,3% диагностируют наличие фолликулярной фазы полового цикла у лосих.

Способ осуществляется следующим образом.

Поскольку лосихи являются дикими животными, то забор мазков необходимо проводить в специально оборудованном узком стойле, длина которого соответствует длине животного. После запуска лосихи в стойло сзади животного задвигаются две перегородки: одна на уровне 40 см от пола и другая, шириной 30 см, устанавливается выше первой на уровне 30 - 40 см. Данный зазор между перегородками является рабочим: через него во влагалище лосихи вставляется влагалищное зеркало с подсветкой, с помощью которого под визуальным контролем проводится забор материала из краниальной части влагалища.

Длина влагалища лосих на 9 - 20 см короче длины влагалища у коров, поэтому для забора мазков используют влагалищное зеркало для искусственного осеменения телок.

Забор мазков у лосих проводят из наиболее удаленной от вульвы части влагалища с использованием пипетки, применяемой для искусственного осеменения, концом шероховатой поверхности. Поверхность конца пипетки должна быть негладкой, с мелкими неровностями и бороздками. Шероховатость на конце пипетки может делаться путем перемещения пипетки (пяти-семи см от конца) по абразивному камню.

Выполненные таким образом бороздки и углубления на поверхности пипетки захватывают свободно лежащие на стенках влагалища клетки эпителия.

Для забора мазков нельзя использовать ватный тампон, который, впитывая цервико-вагинальную жидкость, намокает и легко соскальзывает с конца пипетки. Практически нельзя использовать длинные палочки, поскольку во время забора животные могут делать резкие движения и возникает опасность травмирования их влагалища или шейки матки.

Материал, взятый с боковых стенок краниального отдела влагалища лосих, шероховатым концом пипетки наносят на край предметного стекла и затем его равномерно распределяют по стеклу. Полученные таким образом мазки фиксируют в 70% спирте в течение 10 минут. Затем окрашивают по Романовского-Гимза. Согласно ранее принятой нами классификации [Василенко Т.Ф., Борисенков М.Ф. Изменения клеточного состава влагалища коров в течение полового цикла. Усвоение питательных веществ у жвачных животных. Труды Коми филиала АН СССР. - Сыктывкар, 1987, N 85, - с. 98 - 106] под микроскопом определяют типы клеток поверхностного эпителия, наличие ядер без цитоплазмы и их "теней", отмечают появление лейкоцитов и с помощью клавишного счетчика проводят подсчет 200 клеток в разных участках центральной части предметного стекла. Для каждого типа клеток определяли процентное отношение их к общему количеству. При обследовании одного животного делается забор двух-трех мазков.

Для характеристики той или иной стадии репродуктивного цикла, взаимосвязанной с функциональным состоянием яичников, исследовали две группы лосих.

Первую группу клинически здоровых лосих обследовали на 7-ой - 99-ый дни послеродового периода. Влагалищные мазки у животных были взяты по вышеописанной технологии и исследованы на содержание отдельных типов клеток с целью выявления особенностей клеточного состава влагалищного содержимого и определения особенностей прохождения послеродового периода у самок жвачных животных с сезонным типом размножения, т.е. отел - май-июнь, гон - конец сентября-октябрь. Максимальный уровень легко отторгаемых поверхностных эпителиальных клеток до 98 - 100% на 200 обсчитанных клеток отмечали на мазках у лосих на 51-ый и 58-ой день послеродового периода. Ближе к гону - 99-ый день после родов, содержание поверхностных клеток уменьшается до 90% и одновременно увеличивается количество промежуточных клеток в среднем до 10% (табл. 1).

Появление "голых" ядер и их "теней" на мазках у обследованных животных наблюдали в течение всего послеродового периода: от 35 - 49% на 7-ой - 17-ый дни после родов до 42,1 - 58,8% на 51-ый и 58-ой дни. Их количество снижается примерно в 1,5 - 2,5 раза ближе к гону (99-ый день послеродового периода) и составляет 24%. Такой "цитологический" тип влагалищных мазков с обрывками цитоплазмы и отдельно лежащими "голыми" ядрами характерен для беременных коров с низким содержанием эстрогенов в крови [Кошевий В.П. Оценка состояния плода во время беременности у коров. Оцiнка стану плодов пiд час вагiтностi у корiв. - Вiсн. сiльскогоспод. науки, 1987, N 10, - с. 62 - 63]. Можно предположить, что для лосих после родов свойственен очень низкий уровень эстрогенной активности, которая обусловлена сезонным торможением роста фолликулов в яичнике.

Исследования клеточного состава содержимого мазков у трех лактирующих лосих (табл. 1, животные 3, 4 и 5), проявивших признаки возбуждения и заметно снизивших суточный удой на 51-ый, 58-ой и 99-ый день после родов, показали, что содержание собственно поверхностных эпителиальных клеток с четким ядром и "голых" ядер и их "теней" было сходно с динамикой этих индексов на мазках, взятых у лосих в ранний послеродовой период на 7-ой и 17-ый дни (табл. 1, животные 1 и 2). Из этого, по-видимому, следует, что мы наблюдали у этих животных феномен неполноценной половой охоты, не связанной с соответственной перестройкой в репродуктивных органах лосих, что и подтверждается недостаточной зрелостью поверхностных клеток стенки краниального отдела влагалища и преждевременным отторжением собственно поверхностных оформленных клеток с четким ядром в пределах от 13,7 до 22,5% от общего содержания клеток и увеличением числа ядер без цитоплазмы до 24 - 58,8%.

Вторая группа клинически здоровых лосих была обследована в период гона. Для синхронизации половой охоты этим животным в октябре двукратно с периодом в 10 дней был введен подкожно препарат эстрофан (простагландин F_2α ). Через месяц после введения препарата обе лосихи проявили признаки нахождения в половой охоте: проявление беспокойства, отказ от корма, появление обнимательного рефлекса. Затем мы наблюдали выделение цервико-вагинального секрета из влагалища. После забора мазков животные были отпущены в загон, где они гуляли с быком. Исследования клеточного состава мазков у этих животных выявили, что степень созревания влагалищного эпителия (количество поверхностных клеток) на мазках у лосих этой группы была максимальной и составила 100% (табл. 2). В период гона на мазках у лосих отмечали заметное уменьшение количества "голых" ядер и их "теней" - до 2,4 - 6,3%. Аналогичные величины, характеризующие содержание "голых" ядер и их "теней" отмечали при обследовании влагалищных мазков, взятых у коров в послеродовом периоде во время прохождения половой охоты (табл. 3).

Таким образом, для диагностирования лосих в состоянии половой охоты исследуют клеточный состав влагалищных мазков и по содержанию "голых" ядер и их "теней" не более 6,3% судят о прохождении фолликулиновой фазы полового цикла (наличии фолликула на яичнике).

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для диагностики функционального состояния яичников у лосих. Способ диагностики функционального состояния яичников у лосих включает взятие маза из верхнебокового свода влагалища на уровне portio vaginalis, нанесение пробы тонким слоем на предметное стекло, фиксацию клеточного материала, окраску, определение и подсчет разных типов клеток и суждение о взаимозависимых от функционального состояния яичника фазах репродуктивного цикла, при этом пробу на анализ клеточного состава берут путем снятия клеточной массы поверхностью пипетки для искусственного осеменения с обработанным шероховатым концом, длина которого 5-7 см, при этом пипетку вводят через вагинальное зеркало для телок с подсветкой под визуальным контролем. В мазке определяют процентное содержание поверхностных клеток и "голых" ядер и их "теней". При максимальном содержании поверхностных клеток - 100% и "голых" ядер и их "теней" не более 6,3% диагностируют наличие фолликулярной фазы полового цикла у лосих. Способ позволяет доступно в условиях заповедников или ферм диагностировать функциональное состояние яичников у самок лосей. 3 табл.

Способ диагностики функционального состояния яичников, включающий взятие мазка из верхнебокового свода влагалища на уровне portio vaginalis, нанесение пробы тонким слоем на предметное стекло, фиксацию клеточного материала, окраску, определение и подсчет разных типов клеток и суждение о взаимозависимых от функционального состояния яичника фазах репродуктивного цикла, отличающийся тем, что диагностику состояния яичников проводят у животных с сезонным размножением - например лосих, пробу на анализ клеточного состава берут путем снятия клеточной массы поверхностного эпителия со стенок краниального отдела влагалища поверхностью пипетки для искусственного осеменения с обработанным шероховатым концом, при этом пипетку вводят через вагинальное зеркало для телок с подсветкой под визуальным контролем, причем длина шероховатости рабочего конца пипетки составляет 5 - 7 см, для диагностирования животных определяют процентное содержание поверхностных клеток и "голых" ядер и их "теней": при максимальном содержании поверхностных клеток - 100%, и "голых" ядер и их "теней" не более 6,3% диагностируют наличие фолликулярной фазы полового цикла у лосих.