СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕГО И АНТИМИКРОБНОГО СРЕДСТВА Российский патент 2000 года по МПК A61K35/78 A61P17/02 

Изобретение относится к медицине и химико-фармацевтической промышленности, в частности к способам получения ранозаживляющих и антимикробных средств из растительного сырья.

Известен способ получения биологически активного препарата "Тодикамп" из грецких орехов, осуществляемый следующим образом. Орехи грецкие зеленые подвергают грубому помолу до размера частиц 1 мм. Полученную массу заливают нефтяной фракцией "Ленефр", интенсивно перемешивают первые 7 суток и выдерживают последующие 5 суток. Полученную смесь отфильтровывают с применением вакуума через нутч-фильтр и отсасывают. В суспензию, оставшуюся после первичной экстракции, добавляют нефтяную фракцию "Ленефр" и интенсивно перемешивают в течение 14 суток и выдерживают последующие 10 суток. Полученную смесь отфильтровывают с применением вакуума через нутч-фильтр и отсасывают. Экстракты, полученные на первой и второй стадиях, объединяют, оставшийся жом высушивают и через него пропускают экстракт. Препарат "Тодикамп", полученный описанным способом, представляет собой прозрачную жидкость от светло-желтого до желтоватого цвета, обладает противовоспалительным и ранозаживляющим действием, эффективно защищает иммунную систему от генотоксического воздействия противоопухолевых препаратов (1).

Известен способ получения настойки эвкалипта, применяемой в качестве противовоспалительного и антисептического средства. Способ осуществляют следующим образом. Один килограмм сухих измельченных листьев эвкалипта помещают в перколятор, заливают 90% спиртом и экстрагируют 7 час. Через каждый час из перколятора сливают 0,3 л растворителя и его снова наливают сверху в тот же перколятор. Экстракцию повторяют еще три раза, используя каждый раз по 2,1 л 90% спирта. Получают 8,2 л спиртового экстракта. Оставшееся сырье в течение 50 мин экстрагируют 2,3 л воды. Затем еще один раз в течение 30 мин. Полученный спиртовый экстракт смешивают с первой порцией водного экстракта и определяют в нем содержание спирта. К полученному раствору добавляют вторую порцию водного экстракта в таком количестве, чтобы содержание спирта в настойке было не менее 65%. Затем настойку фильтруют и получают готовый продукт (2).

Известен способ получения средства "Фитодент", обладающего противовоспалительным и ранозаживляющим действием, осуществляемый следующим образом. Смесь измельченного лекарственного сырья, состояющую из рассчитанных количеств чистотела, календулы, аира, ромашки, крапивы, софоры японской и шиповника, загружают в экстрактор и заливают 40%-ным спиртом этиловым при соотношении сырье: экстрагент 1:(8-10). Экстракцию проводят при постоянном перемешивании в течение двух недель. Полученный экстракт сливают в емкость и выдерживают на холоду при 5-10^oC в течение трех суток, затем фильтруют, выход полученного продукта доводят до 1000 л 40%-ным спиртом этиловым, после чего разливают в темные стеклянные флаконы (3).

Известен способ получения средства из листьев ореха грецкого, цветков ноготков лекарственных и корней окопника лекарственного, осуществляемый следующим образом. В аппарате Сокслета на водяной бане раздельно экстрагируют измельченные до 1 мм сухие листья ореха грецкого и сухие цветки ноготков лекарственных. Экстракцию проводят пятикратным количеством смеси 96%-ного этанола и гексана (1:10) в течение 5-6 час до полного истощения сырья. Полученные экстракты охлаждают, фильтруют и упаривают под вакуумом до полного удаления растворителей и получения целевых продуктов смолоподобной консистенции. Грубо измельченные корни окопника лекарственного предварительно замачивают в течение 5-6 ч в смеси 10%-ного раствора аммиака и 95%-ного этанола (1:1). Затем смесь переносят в экстрактор аппарата Сокслета и экстрагируют этилацетатом при соотношении сырье: экстрагент 1:5 при 80-90^oC в течение 5-6 ч до полного истощения сырья. К полученному экстракту при помешивании добавляют безводный сульфат натрия, смесь фильтруют, растворители отгоняют под вакуумом при 70-80^oC до 1/3 объема. К сгущенному экстракту добавляют свежеприготовленное льняное масло и растворители выпаривают в вакууме при 70-80^oC до их полного удаления. Полученные экстракты листьев ореха грецкого, цветков ноготков лекарственных и корней окопника лекарственного смешивают, доводят свежеприготовленным льняным маслом до необходимого объема, после чего при перемешивании и нагревании до 40-50^oC экстракты полностью растворяют в льняном масле. Полученный масляный раствор экстрактов фильтруют через нутч-фильтр и фасуют в плотно укупоренные банки темного стекла (4).

Известен способ получения средства, обладающего ранозаживляющим и антимикробным действием, осуществляемый следующим образом. Сухие листья ореха грецкого измельчают на вальцах и заливают хлороформом (1:5). Растворитель меняют через 12 ч шесть раз до полного обесцвечивания хлороформа. Обезжиренное сырье просушивают при комнатной температуре до полного удаления запаха хлороформа и заливают 70-75%-ным спиртом этиловым при соотношении сырье: экстрагент 1: (6-8). Через 24 ч производят замену экстрагента и проводят аналогично вторую экстракцию. Полученные спиртовые экстракты объединяют и под вакуумом на водяной бане отгоняют спирт. Оставшуюся водную фракцию высушивают под вакуумом до получения сухого остатка (5).

Наиболее близким к заявляемому является способ получения средства, обладающего ранозаживляющим и антимикробным действием, осуществляемый следующим образом. Сухие листья ореха грецкого заливают спиртом этиловым с ежесуточной сменой растворителя. Полноту экстракции определяют визуально до полного обесцвечивания экстрагента (6).

К недостаткам прототипа и аналогов следует отнести длительность, сложность технологических процессов получения целевых продуктов, длительность процессов, а также недостаточно высокий выход и сравнительно узкий спектр специфической активности целевых продуктов.

В основу изобретения поставлена задача создания способа получения ранозаживляющего и антимикробного средства путем подбора технологических операций в такой последовательности и взаимосязи и с такими режимами и параметрами, которые бы обеспечили упрощение технологии и сокращение времени проведения процесса, повышение выхода и расширение спектра специфической активности целевого продукта.

Поставленная задача решается тем, что в способе получения ранозаживляющего и антимикробного средства, включающего экстракцию листьев ореха грецкого спиртом этиловым методом настаивания, в соответствии с изобретением перед экстракцией сырье замачивают в 35-45%-ном спирте этиловом при соотношении 1: 1, экстракцию проводят трижды 35-45%-ным спиртом этиловым при общем соотношении сырье:экстрагент 1:5, объединенный экстракт отстаивают в течение трех суток при 6-10^oC, а затем фильтруют, причем первую экстракцию проводят при соотношении сырье:экстрагент 1:2 в течение 24-28 ч, вторую и третью экстракции - при соотношении сырье: экстрагент 1:1 в течение 6-12 ч каждую, после фильтрации полученный продукт концентрируют до получения густого или сухого экстракта, а ранозаживляющее и антимикробное средство используют в форме жидких экстрактов, густых экстрактов, сухих экстрактов, таблеток, капсул, мазей, кремов, суппозиториев, гелей.

Технический результат, получаемый в результате осуществления изобретения, заключается в упрощении технологического процесса, сокращении времени его проведения, в повышении выхода и расширении спектра специфической активности целевого продукта.

Заявляемый способ осуществляют следующим образом.

Сухие листья ореха грецкого загружают в экстрактор, заливают 35-45%-ным спиртом этиловым при соотношении сырье:спирт этиловый 1:1 и настаивают в течение 2 ч. Набухшее сырье заливают 35-45%-ным спиртом этиловым при соотношении сырье:экстрагент 1:2 и настаивают в течение 24-48 ч. Полученный экстракт сливают, оставшееся сырье заливают 35-45%-ным спиртом этиловым при соотношении сырье:экстрагент 1:1 и настаивают в течение 6-12 ч. Полученный экстракт сливают, оставшееся сырье заливают 35-45%-ным спиртом этиловым и настаивают в течение 6-12 ч. Полученный экстракт сливают, сырье отжимают, полученную жидкую фракцию объединяют с ранее полученными экстрактами, отстаивают в течение 3 суток при 6-10^oC, затем фильтруют и, при необходимости, концентрируют до густого или до сухого экстракта. Выход по сухому остатку составляет 6-10% от массы сырья.

Полученный целевой продукт можно использовать в форме настоек, густых или сухих экстрактов, таблеток, капсул, мазей, кремов, суппозиториев, гелей.

Приводим конкретные примеры осуществления изобретения.

Пример 1. В экстракторе 200 кг сухих листьев ореха грецкого замачивают в 200 л 35%-ного спирта этилового (1:1) и настаивают в течение 2 ч. Набухшее сырье заливают 400 л 35%-ного спирта этилового (1:2) и экстрагируют методом настаивания в течение 48 ч, после чего полученный спиртовый экстракт сливают в сборник. Сырье снова заливают 200 л 35%-ного спирта этилового (1:1) и настаивают в течение 12 ч. Полученный экстракт сливают в сборник. Сырье в третий раз заливают 200 л 35%-ного спирта этилового (1:1) и настаивают в течение 12 ч. Полученный экстракт сливают в сборник, а сырье отжимают. Объединенные экстракты отстаивают в течение трех суток при 6^oC, затем фильтруют. Полученную настойку разливают во флаконы и упаковывают. При получении густого или сухого экстракта отфильтрованный продукт концентрируют любым известным способом, расфасовывают в тару и упаковывают.

Выход целевого продукта по сухому остатку составляет 10% от массы сырья.

Пример 2. В экстракторе 200 кг сухих листьев ореха грецкого замачивают в 200 л 40%-ного спирта этилового (1:1) и настаивают в течение 2 ч. Набухшее сырье заливают 400 л 40%-ного спирта этилового (1:2) и экстрагируют методом настаивания в течение 30 ч, после чего полученный спиртовый экстракт сливают в сборник. Сырье снова заливают 200 л 40%-ного спирта этилового (1:1) и настаивают в течение 8 ч. Полученный экстракт сливают в сборник. Сырье в третий раз заливают 200 л 40%-ного спирта этилового (1:1) и настаивают в течение 8 ч. Полученный экстракт сливают в сборник, а сырье отжимают. Объединенные экстракты отстаивают в течение трех суток при 8^oC, затем фильтруют. Полученную настойку разливают во флаконы и упаковывают. При получении густого или сухого экстракта отфильтрованный продукт концентрируют любым известным способом, расфасовывают в тару и упаковывают.

Выход целевого продукта по сухому остатку составляет 8% от массы сырья.

Пример 3. В экстракторе 200 кг сухих листьев ореха грецкого замачивают в 200 л 45%-ного спирта этилового (1:1) и настаивают в течение 2 ч. Набухшее сырье заливают 400 л 45%-ного спирта этилового (1:2) и экстрагируют методом настаивания в течение 24 ч, после чего полученный спиртовый экстракт сливают в сборник. Сырье снова заливают 200 л 45%-ного спирта этилового (1:1) и настаивают в течение 6 ч. Полученный экстракт сливают в сборник. Сырье в третий раз заливают 200 л 45%-ного спирта этилового (1:1) и настаивают в течение 6 ч. Полученный экстракт сливают в сборник, а сырье отжимают. Объединенные экстракты отстаивают в течение трех суток при 10^oC, затем фильтруют. Полученную настойку разливают во флаконы и упаковывают. При получении густого или сухого экстракта отфильтрованный продукт концентрируют любым известным способом, расфасовывают в тару и упаковывают.

Выход целевого продукта по сухому остатку составляет 6% от массы сырья.

Взаимосвязь и последовательность технологических операций заявляемого способа, подбор режимов и параметров обеспечивают выполнение поставленной в изобретении задачи.

Стадия замачивания сухих листьев ореха грецкого в 35-45%-ном спирте этиловом перед экстракцией для набухания сырья обеспечивает интенсивность и полноту осуществления процесса экстракции биологически активных веществ. Соотношение сырья и смачивающего агента (1:1) определено экспериментально и является оптимальным для выполнения процесса набухания сырья. Использование большего количества водно-спиртового раствора для замачивания сырья является нецелесообразным, а при меньшем его количестве не достигается полнота контакта всего сырья со смачивающим агентом. Концентрация спирта (35-45%) также определена экспериментально и является обоснованной для успешного выполнения процесса набухания сырья. При меньшей концентрации спирта излишек воды приводит к увеличению периода времени, необходимого для результативного набухания гидрофобных листьев ореха грецкого. При большей концентрации спирта снижается эффективность дальнейшего процесса экстракции. Авторы предполагают, что это происходит за счет возникновения явления деструкции клеток поверхности листьев, что, возможно, приводит к преждевременному и слишком интенсивному извлечению нестойких биологически активных соединений. Это, в свою очередь, в дальнейшем приводит к снижению уровня и сужению спектра специфической активности целевого продукта. Однако действительная причина этого явления не установлена.

Применение в качестве экстрагента водного раствора спирта этилового является традиционным и наиболее "лояльным" при извлечении комплекса биологически активных веществ из растительного сырья.

Концентрация экстрагента (35-45%) определена экспериментально и обеспечивает полное и комплексное извлечение биологически активных соединений различной природы, обеспечивающих необходимый уровень и спектр специфической активности целевого продукта, его качество. Так, при концентрации экстрагента менее заявляемых значений (35%) наблюдается нарушение баланса дубильных веществ и флавоноидов: извлекается максимум дубильных веществ и минимум флавоноидов. При концентрации экстрагента больше заявляемых значений (45%) извлекается минимум дубильных веществ и максимум флавоноидов. Все это, в конечном счете, приводит к снижению уровня и сужению спектра специфической активности целевого продукта, ухудшению его качества.

Трехкратная экстракция сырья 35-45%-ным спиртом этиловым является необходимой и достаточной для достижения полного извлечения биологически активных соединений, комплекс которых обеспечивает необходимый уровень и спектр специфической активности целевого продукта. При меньшем количестве экстракций не обеспечивается полнота истощения сырья. Осуществление большего количества экстракций в заявляемом способе, в отличие от прототипа, нецелесообразно и приводит к перерасходу экстрагента.

Отстаивание объединенного экстракта в течение трех суток при температуре 6-10^oC является необходимым и достаточным условием для выпадения в осадок высокомолекулярных веществ белковой природы, присутствие которых в целевом продукте нежелательно, так как приводит к ухудшению его качества и возникновению токсических эффектов при его применении. Использование других методов извлечения высокомолекулярных веществ, например ультрафильтрации, с одной стороны, нецелесообразно, так как усложняет и удорожает проведение технологического процесса. С другой стороны, может привести к нарушению структурно-механических характеристик других биологически активных соединений.

Процесс фильтрации необходим для отделения механических примесей и получения прозрачного целевого продукта, соответствующего фармакопейным требованиям.

Процесс концентрирования осуществляют в случае необходимости получения густого или сухого экстрактов, которые используют в производстве других лекарственных форм продукта, полученного из листьев ореха грецкого по заявляемому способу.

Проведенные фармакологические исследования специфической активности жидкого экстракта листьев ореха грецкого, полученного по заявляемому способу, свидетельствуют о наличии выраженных ранозаживляющих, антимикробных, противовоспалительных, противоязвенных, антиоксидантных свойств средства.

Противовоспалительную активность жидкого экстракта грецкого ореха изучали на нескольких моделях воспаления в сравнении с ортофеном. Жидкий экстракт предварительно выпаривали, освобождая от спирта, и вводили перорально в виде водного раствора. Результаты исследований показали, что по этому виду активности жидкий экстракт проявляет эффект, равный эффекту ортофена, а на некоторых моделях превосходит его. При этом необходимо учитывать отсутствие у средства, полученного заявляемым способом, отрицательных побочных явлений в отличие от ортофена, который противопоказан при язве желудка и двенадцатиперстной кишки, при беременности, не рекомендуется лицам, страдающим желудочно-кишечными заболеваниями, поражениями печени и почек. Кроме того, при длительном применении ортофена необходимо контролировать картину крови.

Ранозаживляющую, репаративную активность жидкого экстракта листьев ореха грецкого исследовали в сравнении с эффективным противовоспалительным и ранозаживляющим средством - маслом облепихи. Результаты исследований этого вида активности показали, что средство, полученное по заявляемому способу, превосходит препарат сравнения. Так, на 21 сутки в группе животных, леченных жидким экстрактом листьев ореха грецкого, репаративная активность была выражена на 52,3%, а маслом облепихи - на 38%. При этом процесс заживления в опытных группах животных происходил значительно быстрее, чем в контрольных.

Результаты исследований антимикробной активности жидкого экстракта листьев ореха грецкого свидетельствуют, что он проявляет высокий уровень активности в отношении широкого круга тест-штаммов, в том числе грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, спорообразующей культуры (B. subtilus), культуры гриба Candida, культуры P. aeruginosa и др.

Изучение противоязвенного действия жидкого экстракта листьев ореха грецкого в сравнении с известным противоязвенным средством плантаглюцидом показало, что на различных моделях поражения он превосходит препарат сравнения. Так, на модели адреналинового отека жидкий экстракт действует в два раза активнее плантаглюцида.

При проведении первой фазы клинических исследований использовали 40%-ный спиртовый экстракт листьев ореха грецкого. Полученные результаты лечения позволили сделать следующие выводы. Жидкий экстракт листьев ореха грецкого эффективен при лечении больных хроническим гастритом, гастродуоденитом, которые протекают на фоне сохраненной и сниженной кислотообразующей функции желудка. Прием средства приводит к уменьшению клинических проявлений болевого, диспепсического синдромов, к ликвидации воспаления слизистой оболочки гастродуоденальной зоны. Жидкий экстракт листьев ореха грецкого хорошо переносится больными, не вызывает побочных реакций.

Продолжаются исследования по дальнейшему расширению спектра специфической активности средства, получаемого по заявляемому способу, использованию его в различных лекарственных формах.

Заявляемый способ
1. Замачивание 200 кг сухих листьев ореха грецкого в 200 л 35-45%-ного спирта этилового (1:1) и настаивание в течение 2 ч.

2. Экстракция набухших листьев ореха грецкого 400 л 35-45%-ного спирта этилового методом настаивания в течение 24-48 ч с последующим сливом полученного экстракта.

3. Вторая экстракция сырья 200 л 35-45%-ного спирта этилового методом настаивания в течение 6-12 ч с последующим сливом полученного экстракта.

4. Третья экстракция сырья 200 л 35-45%-ного спирта этилового методом настаивания в течение 6-12 ч с последующим сливом полученного экстракта и отжимом сырья.

5. Отстаивание объединенных экстрактов в течение 3 суток при 6-10^oC.

6. Фильтрация полученного продукта.

7. Концентрация продукта любым известным способом до получения густого экстракта или сухого экстракта.

Общее время проведения способа - 110-150 ч (4,5-6 суток).

Выход целевого продукта в пересчете на сухой остаток - 6-10% от массы сырья.

Примечание: время проведения процесса зависит также и от технологических возможностей производителя: при непрерывном технологическом процессе оно составляет 110 ч.

Таким образом, заявляемый способ получения лекарственного средства из листьев ореха грецкого по сравнению с прототипом и аналогами позволяет получить целевой продукт с большим выходом, в значительно более короткие сроки, с более высоким уровнем и широким спектром специфической активности.

Литература
1. Патент Российской Федерации N 2033803, кл. A 61 K 35/78. Опубл. БИ, 1995, N 12.

2. Авторское свидетельство СССР N 799762, кл. A 61 K 35/78. Опубл. БИ, 1981, N 4.

3. Патент Украины N 22667, кл. A 61 K 35/78, Опубл. бюл. "Промислова власнисть", 1998, N 3.

4. Авторское свидетельство СССР N 1428383, кл. A 61 K 35/78. Опубл. БИ, 1988, N 37.

5. Патент СССР N 1774871, кл. A 61 K 35/78. Опубл. БИ, 1992, N 41.

6. RU 2043764 C1 20.09.95ы

Изобретение относится к медицине и химико-фармацевтической промышленности, в частности к способам получения ранозаживляющих и антимикробных средств из растительного сырья. Листья ореха грецкого перед экстракцией замачивают в 35-45%-ном спирте этиловом (1:1). Экстракцию проводят три раза 35-45%-ным спиртом этиловым методом настаивания при общем соотношении сырье: экстрагент 1: 5. Полученные экстракты объединяют, настаивают в течение трех суток при 6-10°С, фильтруют и при необходимости концентрируют до получения густого или сухого экстракта. Изобретение позволяет упростить процесс, сократить время его проведения, повысить выход и расширить спектр специфической активности продукта. 2 з.п.ф-лы.

1. Способ получения ранозаживляющего и антимикробного средства, включающий экстракцию листьев ореха грецкого спиртом этиловым, отличающийся тем, что перед экстракцией сырье замачивают в 35 - 45%-ном спирте этиловом при соотношении 1 : 1, экстракцию проводят трижды 35 - 45%-ным спиртом этиловым методом настаивания при общем соотношении сырье : экстрагент 1 : 5, объединенный экстракт отстаивают в течение трех суток при 6 - 10^oС, а затем фильтруют. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что первую экстракцию проводят при соотношении сырье : экстрагент 1 : 3 в течение 24 - 48 ч, вторую и третью экстракции - при соотношении сырье : экстрагент 1 : 1 в течение 6 - 12 ч каждую. 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что после фильтрации полученный продукт концентрируют до получения густого или сухого экстракта.