СПОСОБ РАННЕГО ВЫЯВЛЕНИЯ ТРОМБОПЛАСТИНООБРАЗОВАНИЯ Российский патент 2008 года по МПК G01N33/86 

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и гематологии.

Аналогов предлагаемого способа раннего выявления роста тромбопластинообразования не существует.

Известен способ оценки активности и времени образования тромбопластина (Biggs R., Douglas A.S., Macparlane R.G. The formation of thromboplastin in human blood.// J. Physiol. 1953. - vol.119, №1. - p.89-104.). Однако, никогда ранее получение по этому методу данных не проводилось в течение трех дней подряд и не обрабатывалось в последующем системным многофакторным анализом с вычислением общего тромбопластинового потенциала.

Целью изобретения является раннее выявление роста тромбопластинообразования у различных групп больных.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для выявления роста тромбопластинообразования у больных оценивается активность и время образования тромбопластина в течение трех дней подряд с обработкой данных системным многофакторным анализом и вычислением общего тромбопластинового потенциала.

Способ позволяет выявлять в ранние сроки рост тромбопластинообразования у различных категорий больных. Это позволяет своевременно назначать соответствующее лечение, поддерживая у больных на нормальном уровне тромбопластинообразование. Это позволит существенно повысить качество жизни больных с риском тромбозов, уменьшить их патологическую отягощенность, сократить число случаев временной нетрудоспособности, ускорить и повысить качество стационарного лечения, исключить в ряде случаев инвалидность, а также продлить жизнь и снизить смертность больных от инфаркта и инсульта.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Принцип метода. Активность и время образования тромбопластина из компонента пластинок, депротромбинизированной плазмы и сыворотки исследуемой крови по тромбиновому времени тест-плазмы в одноминутных интервалах. При инкубации этой смеси с кальцием в течение 3-6 мин образуется высокоактивный тромбопластин (Biggs R., Douglas A.S., Macparlane R.G. The formation of thromboplastin in human blood.// J. Physiol. 1953. - vol.119, №1. - p.89-104.).

Для определения эндогенного тромбопластина необходимы следующие инградиенты:

1) суспензия тромбоцитов;

2) депротромбинизированная плазма;

3) сыворотка;

4) хлористый кальций.

Реактивы:

1) 0,1 М раствора оксалата натрия;

2) 1/40 М раствора хлористого кальция;

3) 0,15 М суспензии сульфата бария;

4) физиологический раствор (0,9% NaCl).

В силиконированную пробирку, которая содержит 0,6 мл 0,1 М раствора оксалата натрия, набирают из вены сухой иглой 5,4 мл крови. Осторожно содержимое пробирки смешивают. Одновременно в другую пробирку берут 1-2 мл крови, из которой потом получают сыворотку.

Приготовление суспензии тромбоцитов: оксалатную кровь в силиконовой пробирке центрифугируют в течение 5-7 мин при 1500 об/мин. Плазму отсасывают силиконовой пипеткой в другую силиконированную или пластикатную пробирку. Плазму, обогащенную тромбоцитами, центрифугируют в течение 30 мин при 3000 об/мин. Тромбоциты оседают на дно пробирки. Плазму, которая практически не содержит тромбоцитов, отсасывают в отдельную пробирку, а к тромбоцитам добавляют физиологический раствор, осторожно смешивают и снова центрифугируют в течение 30 мин при 3000 об/мин. Физиологический раствор отсасывают и процедуру отмывания тромбоцитов повторяют еще раз. После двукратного промывания тромбоцитов к их осадку добавляют физиологический раствор, по объему равный 1/3 количества оксалатной плазмы, взятой для центрифугирования. Содержимое хорошо смешивают, получая рабочую суспензию тромбоцитов.

Приготовление раствора депротромбинизированной плазмы: 0,5-1 мл плазмы, не содержащей тромбоцитов, которая была собрана после центрифугирования в течение 30 минут при 3000 об/мин, депротромбинизируют суспензией барий-сульфата общепринятым способом. Депротромбинизированную плазму разбавляют физиологическим раствором в соотношении 1:4.

Приготовление раствора сыворотки: 1-2 мл венозной крови, взятой в сухую пробирку, ставят на водяную баню при 37°С на 2 часа. Сыворотку отделяют от сгустка крови путем центрифугирования и разбавляют ее физиологическим раствором в соотношении 1:8.

Методика теста: в ряд агглютинационных пробирок (7-8) на водяной бане при 37°С вносят по 0,1 мл плазмы, не содержащей тромбоцитов, которая осталась после центрифугирования в течение 30 минут при 3000 об/мин (часть этой плазмы взята для депротромбинизации). Отдельно в пустую пробирку, также на водяной бане, наливают 0,3 мл суспензии тромбоцитов, 0,3 мл раствора депротромбинизированной плазмы, 0,3 мл раствора сыворотки, 0,3 мл 1/40 м раствора хлористого кальция и включают секундомер. Через каждую минуту 0,1 мл указанной смеси и 0,1 мл 1/40 м раствора хлористого кальция одновременно вносят в одну из ряда пробирок, которая содержит плазму без тромбоцитов, и включают другой секундомер. Встряхивая пробирку, отмечают время свертывания плазмы. Ежеминутное исследование продолжают до тех пор, пока тромбиновое время плазмы не станет максимально коротким. Это протромбиновое время характеризует активность тромбопластина, а минута, на которой свернулась смесь, является временем образования тромбопластина. В норме тромбопластин образуется на 2-4 минуте, а его активность равна 12-14 секундам.

При регистрации ускорения образования и/или повышении активности тромбопластина больным назначается необходимое лечение.

Для каждой лаборатории необходимо обследование группы здоровых людей, чтобы найти средние нормативные значения с нахождением S² для последующих расчетов.

У каждого больного определяют ежедневно время образования и активность тромбопластина в течение 3-х дней с вычислением среднеарифметических значений, которые используют в последующих расчетах с вычислений S² и обработки данных системным многофакторным анализом.

Метод системного многофакторного анализа позволяет переводить многомерные количественные характеристики исследуемого процесса с несопоставимыми абсолютными значениями в сопоставимые относительные величины (Применение методов морфометрии и статистического анализа в морфологических исследованиях. Сост. М.В.Углова, Б.А.Углов, В.В. Архипов и др., Куйбышев, 1982. - 47 с). Расчет производился по формулам:

где - исследуемый параметр, - нормативный параметр, X_j - относительная разность.

где Pi - весовой коэффициент (коэффициент влияния), а - постоянный множитель (в наших исследованиях а=0,1), σ_j - среднеквадратическое отклонение значения X_j в относительных единицах.

S_j ² - дисперсия исследуемого параметра X_i, n_i - количество наблюдений при определении X_i, S₀ ² - дисперсия нормативного параметра Х₀, n₀ - количество наблюдений при определении Х₀.

где X _{Bi ОТП} - величина, интегрально характеризующая исследуемый процесс тромбопластинообразования в заданный срок (в относительных единицах).

В случае, если общий тромбопластиновый потенциал (ОТП) составляет 0,020 и ниже, тромбопластинообразование находится в норме и риска тромбоза не отмечается; при нахождении X _{Bi ОТП} в границах 0,021-0,030 отмечается начало нарастания тромбопластинообразования с появлением риска тромбоза; при увеличении X _{Bi ОТП} до 0,031 и выше имеется значительный рост тромбопластинообразования, и при этом риск тромбоза переходит в опасность тромбоза, что требует немедленных лечебных мероприятий.

Раннее выявление роста тромбопластинообразования является основой своевременного назначения эффективного лечения, направленного на снижение риска развития тромбоза, и залогом повышения качества жизни больных и ее продления.

Пример 1. Больная К., 56 лет, с массой тела 79,0 кг, индекс массы тела 29,4 кг/м², страдающая метаболическим синдромом в течение 12 лет, обследована в плановом порядке. В течение трех дней подряд у больной утром натощак бралась кровь из локтевой вены с определением времени образования 3,7 мин, 3,3 мин, 2,3 мин и активности тромбопластина 14,0 с, 12,4 с, 12,0 с с обработкой полученных данных системным многофакторным анализом. По результатам расчетов согласно приведенным формулам найдено: X_j=0,033, S_j ²=0,005, σ_j=0,0414, Pi=58,82 (для времени образования) и X_j=-0,015, S_j ²=0,020, σ_j=0,0455, Pi=50,00 (для активности тромбопластина). В качестве нормативных значений принято Х₀=3,0±0,01, (n=22), S₀ ²=0,055 (для времени образования) и Х₀=13,0±0,12, (n=22), S₀ ²=0,0088 (для активности тромбопластина). У больной по данным расчетов найдено, что общий тромбопластиновый потенциал составил Х _{Bi ОТП}=0,011, что указывало на нормальное тромбопластинообразование в организме больной. Больной было рекомендовано вести здоровый образ жизни и придерживаться индивидуально подобранной гипокалорийной диеты (1946,7 ккал). Больная осматривалась после этого каждый месяц в течение 6 месяцев. Одновременно с осмотром производилось три дня подряд определение активности и времени образования тромбопластина с обработкой данных системным многофакторным анализом, не выявившим наростания тромбопластинообразования в течение всех 6 месяцев - Х _{Bi ОТП} не поднимался выше 0,018.

Больной предложено соблюдать данные ей рекомендации в последующем.

Пример 2. Больная А., 58 лет, с массой тела 94,0 кг, индекс массы тела 32,2 кг/м, страдающая метаболическим синдромом в течение 18 лет, обследована в плановом порядке. В течение трех дней подряд у больной утром натощак бралась кровь из локтевой вены с определением времени образования 3,6 мин, 3,4 мин, 2,4 мин и активности тромбопластина 13,6 с, 13,3 с, 12,3 с с обработкой полученных данных системным многофакторным анализом. По результатам расчетов согласно приведенным формулам найдено: X_j=0,043, S_j ²=0,009, σ_j=0,0415, Pi=58,14 (для времени образования) и X_j=0,005, S_j ²=0,003, σ_j=0,0418, Pi=57,14 (для активности тромбопластина). В качестве нормативных значений принято Х₀=3,0±0,01, (n=22), S₀ ²=0,055 (для времени образования) и Х₀=13,0±0,12, (n=22), S₀ ²=0,0088 (для активности тромбопластина). У больной по данным расчетов найдено, что общий тромбопластиновый потенциал составил Х _{Bi ОТП}=0,025, что указывало на наростание тромбопластинообразования в организме больной. Больной была назначена индивидуально подобранная гипокалорийная диета (1620,6 ккал), система ежедневных индивидуально подобранных физических нагрузок и метформин 500 мг 2 раза в сутки. Больная осмотрена через месяц после начала лечения. Одновременно с осмотром произведено три дня подряд определение активности и времени образования тромбопластина с обработкой данных системным многофакторным анализом, показавшим нормализацию общего тромбопластинового потенциала Х _{Bi ОТП}. Наблюдение за больной в течение 6 месяцев при соблюдении ей данных ранее рекомендаций выявило, что тромбопластинообразование находилось в границах нормы, Х _{Bi ОТП} не превышал 0,017.

Больной предложено соблюдать данные ей рекомендации в последующем.

Пример 3. Больная С, 59 лет, с массой тела 81,0 кг, индекс массы тела 33,4 кг/м, страдает метаболическим синдромом в течение 30 лет, обследована в плановом порядке. В течение трех дней подряд у больной утром натощак бралась кровь из локтевой вены с определением времени образования 3,4 мин, 3,3 мин, 2,9 мин и активности тромбопластина 13,8 с, 13,3 с, 12,2 с с обработкой полученных данных системным многофакторным анализом. По результатам расчетов согласно приведенным формулам найдено: X_j=0,067, S_j ²=0,020, σ_j=0,0419, Pi=56,82 (для времени образования) и X_j=0,008, S_j ²=0,005, σ_j=0,0423, Pi=55,55 (для активности тромбопластина). В качестве нормативных значений принято Х₀=3,0±0,01, (n=22), S₀ ²=0,055 (для времени образования) и Х₀=13,0±0,12, (n=22), S₀ ²=0,0088 (для активности тромбопластина). У больной по данным расчетов найдено, что общий тромбопластиновый потенциал составил Х _{Bi ОТП}=0,038, что указывало на значительный рост тромбопластинообразования в организме больной. Больной была немедленно назначена индивидуально подобранная гипокалорийная диета (1513,9 ккал), система ежедневных индивидуально подобранных физических нагрузок, метформин 500 мг 2 раза в сутки и лизиноприл 10 мг 1 раз в сутки. Больная осмотрена через месяц после начала лечения. Одновременно с осмотром производилось три дня подряд определение активности и времени образования тромбопластина с обработкой данных системным многофакторным анализом, показавшим нормализацию общего тромбопластинового потенциала - Х _{Bi ОТП}. Наблюдение за больной в течение 6 месяцев при соблюдении ей данных ранее рекомендаций выявило, что тромбопластинообразование находилось в границах нормы, Х _{Bi ОТП} не превышал 0,016.

Больной предложено соблюдать данные ей рекомендации в последующем.

Использование предлагаемого способа раннего выявления роста тромбопластинообразования в кардиологии и эндокринологии поможет избежать многих осложнений у различных категорий больных, уменьшить у них число случаев временной нетрудоспособности, сократить длительность госпитализации, снизить инвалидизацию и смертность.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и гематологии. Для осуществления способа раннего выявления тромбопластинообразования у больных оценивают активность и время образования тромбопластина в течение трех дней подряд с обработкой данных системным многофакторным анализом и вычислением общего тромбопластинового потенциала. При значении Х_BiОТП=0,020 и менее тромбопластинообразование считают нормальным, при Х_BiОТП от 0,021 до 0,030 отмечают начало увеличения тромбопластинообразования, переходящее в выраженную тромбопластиногенерацию при Х_BiОТП=0,031 и выше. Использование изобретения позволяет избежать осложнений у различных категорий больных.

Способ раннего выявления роста тромбопластинообразования, отличающийся тем, что ежедневно в течение трех дней подряд определяют длительность образования и активность тромбопластина с обработкой полученных данных системным многофакторным анализом и вычислением общего тромбопластинового потенциала: при значении Х_BiОТП=0,020 и менее тромбопластинообразование считают нормальным, при Х_Вюш от 0,021 до 0,030 отмечают начало увеличения тромбопластинообразования, переходящее в выраженную тромбопластиногенерацию при Х_BiОТП=0,031 и выше.