СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПРОТЕИНА С У НОВОРОЖДЕННЫХ ПОРОСЯТ С АНЕМИЕЙ Российский патент 2010 года по МПК A61K31/00 A61K31/295 

Изобретение относится к биологии и ветеринарии, а именно к гематологии.

Аналогов предлагаемого способа оптимизации активности протеина C у новорожденных поросят с анемией не существует.

В литературе имеются сведения о применении при анемии у поросят ферроглюкина (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. Под ред. В.М.Данилевского. М.: Агропромиздат, 1991. - 576 с).

В качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяются полизон - фосфорнокислая соль 2-амино-4-метилтио-(S-оксо-S-амино)-масляной кислоты, представляет собой слаборастворимый в воде порошок от белого до кремового цвета (Овчинников А. и др. Полизон - стимулятор роста // Птицеводство, 2006. - №12. - с.14-15) и крезацинпроизводным ароксиалкилкарбоновых кислот. Он представляет собой белый кристаллический порошок, хорошо растворимый в воде, со слабым специфическим запахом, сладковато-горьковатого вкуса. Он проявляет эффективное стимулирующее действие на живые организмы, повышая выживаемость человека и животных в неблагоприятных и экстремальных условиях, стимулируя или нормализуя жизненные процессы (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы. Ветеринария, 2006, №11, с.49-51).

Однако никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, полизона и крезацина, не применялся у новорожденных поросят с анемией с целью оптимизации активности протеина C.

Целью изобретения является повышение эффективности коррекции нарушений активности протеина C у новорожденных поросят с анемией.

Протеин C - синтезируемый в гепатоцитах витамин K - зависимый гликопротеин, циркулирующий в крови в виде профермента. Под действием комплекса тромбин-тромбомодулин (или активатора из змеиного яда) протеин C активируется и действует как антикоагулянт, вызывая протеолиз факторов Va и VIIIa в присутствии своего кофактора - протеина S и фосфолипидов. При тромбофилиях у новорожденных поросят, в т.ч. при анемии, нарушения в системе гемостаза могут быть обусловлены дефицитом протеина C.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для оптимизации активности протеина C новорожденным поросятам с анемией назначается ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, полизон 4 мг/кг и крезацин 4 мг/кг при включении обоих в схему выпаивания на 10 суток.

Способ позволяет оптимизировать активность протеина C у новорожденных поросят с анемией через 2 дня после окончания лечения, переводя его на уровень близкий к таковому для здоровых животных. При соблюдении рекомендаций заявляемого способа возможно поддержание в последующем активности протеина C в оптимальном состоянии, что позволит у новорожденных поросят с анемией существенно снизить риск тромботических осложнений, оздоровить стадо, увеличить привесы, снизить падеж и повысить качество и объем получаемой мясной продукции.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Для диагностики у новорожденных поросят с анемией нарушения уровня в крови протеина C проводится его оценка по следующей методике (Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики нарушений гемостаза. М., 1999. - с.118-120).

Протеин C в образцах исследуемой плазмы активируют специфическим активатором из яда щитомордника - Agkistrodon contortrix. Активированный при этом протеин C вызывает протеолиз факторов Va и VIIIa в дефицитной по протеину C плазме. Последнее приводит к удлинению времени свертывания, по которому оценивается активность протеина C в исследуемом образце. Активность протеина C, выраженную в процентах к норме, находят по предварительно построенной калибровочной кривой.

Используются реактивы: 1. Активатор протеина, лиофилизированный, разводится 3 мл дистиллированной воды. 2. Плазма, дефицитная по протеину C, лиофилизированная, разводится в 1 мл дистиллированной воды. 3. Neothromtin, лиофилизированный - аналог каолин-кефалинового реагента, содержащий взамен каолина эллаговую кислоту и фосфолипиды, разводится 3 мл дистиллированной воды.

Кроме того, требуются мединаловый буфер (pH 7,6), использующийся для разведения образцов исследуемой и стандартной плазмы, и раствор хлорида кальция (0,025 М). Для построения калибровочной кривой необходима также стандартная фирменная или контрольная нормальная плазма с известной активностью протеина C или пулированная (взятая не менее чем от 10 здоровых поросят), активность протеина C в которой принимается за 100%.

Материалом для исследования служит цитратная бедная тромбоцитами плазма.

Перед проведением анализа исследуемая плазма разводится мединаловым буфером в 10 раз.

В пробирку (или кювету коагулометра), подогретую до +37°C, вносят предварительно прогретые при той же температуре 0,1 мл разведенной (1:10) плазмы, 0,1 мл плазмы, дефицитной по протеину C, 0,1 мл активатора протеина C и 0,1 мл аналога каолин-кефалинового реагента. Смесь выдерживают на водяной бане при +37°C в течение 4 мин. Затем к смеси добавляют 0,1 мл раствора хлорида кальция, предварительно подогретого до 37°C, включают секундомер или таймер коагулометра и регистрируют время свертывания.

Результаты оцениваются по калибровочной кривой.

Построение калибровочной кривой. Приготавливают серию разведений пула контрольной плазмы или стандартной фирменной плазмы при помощи мединалового буфера (табл.).

Таблица Схема приготовления разведений плазмы для построения калибровочной кривой при определении активности протеина C № Протеин C, % Разведение Получение разведений 1 200 1:5 0,2 мл плазмы + 0,8 мл буфера 2 100 1:10 0,1 мл плазмы + 0,9 мл буфера 3 50 1:20 0,1 мл плазмы + 1,9 мл буфера 4 20 1:50 0,1 мл разведения №1+0,9 мл буфера 5 10 1:100 0,1 мл разведения №2+0,9 мл буфера

С каждым из образцов разведенной плазмы определяют время свертывания по указанной выше методике. При построении калибровочной кривой по логарифмической оси ординат откладывают время свертывания в секундах, по логарифмической оси абсцисс - активность протеина C в % в соответствии с указанными в таблице разведениями.

В норме активность протеина C составляет 70-140%. При установлении снижения активности протеина C новорожденным поросятам необходимо назначать следующий лечебный комплекс.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для оптимизации активности протеина C новорожденным поросятам с анемией назначаются ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, полизон 4 мг/кг и крезацин 4 мг/кг при включении обоих в схему выпаивания на 10 дней.

Пример 1. У новорожденного поросенка с анемией №12 при обследовании было выявлено снижение активности протеина C - 55%. Так, количество гемоглобина у него составляло 80,0 г/л, эритроцитов 4,01×10¹²/л, сидероцитов 1,1% при уровне железа в сыворотке 12,5 мкмоль/л с повышением общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 67,0 мкмоль/л.

Поросенку был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней. Больной поросенок находился под динамическим наблюдением в процессе всего лечения.

Через 2 дня после окончания лечения у поросенка улучшились показатели красной крови. Так, количество гемоглобина у него возросло до 111,0 г/л, эритроцитов - до 4,92×10¹²/л, сидероцитов до 6,8% при увеличении железа в сыворотке до 19,7 мкмоль/л и снижении общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 40,0 мкмоль/л.

Было получено увеличение уровня активности протеина C (67%), не достигнувшее нижней границы нормы и в последующем оставшееся на достигнутом уровне.

Пример 2. У новорожденного поросенка с анемией №14 при обследовании было выявлено снижение активности протеина C - 54%.

У данного поросенка отмечалось нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме, сопровождаясь изменением показателей крови. Так, количество гемоглобина у него составляло 81,0 г/л, эритроцитов 4,07×10¹²/л, сидероцитов 1,0% при уровне железа в сыворотке 12,2 мкмоль/л с повышением общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 70,1 мкмоль/л.

Животному был назначен ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, полизон 4 мг/кг и крезацин 4 мг/кг при включении обоих в схему выпаивания на 10 дней.

Через 2 дня после окончания лечения у поросенка нормализовалась красная кровь. Так, количество гемоглобина у него возросло до 120,9 г/л, эритроцитов - до 5,36×10¹²/л, сидероцитов до 8,9% при увеличении железа в сыворотке до 28,5 мкмоль/л и снижении общей железосвязывающей способности сыворотки крови до 33,2 мкмоль/л.

Была достигнута полная нормализация активности протеина C (112%), в последующем не испытавшая отрицательной динамики.

Использование предлагаемого способа оптимизации активности протеина C в ветеринарии и биологии поможет избежать многих сосудистых осложнений у новорожденных поросят с анемиией, оздоровить стадо, снизить падеж, увеличить привесы, повысить качество и объем получаемой мясной продукции и получать в последующем от этих поросят здоровое потомство.

Изобретение относится к области биологии и ветеринарии. Способ включает введение новорожденным поросятам ферроглюкина по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 суток, полизона 4 мг/кг и крезацина 4 мг/кг, включенных в схему выпаивания на 10 суток. Способ позволяет снизить риск тромботических осложнений, снизить падеж и увеличить привесы. 1 табл.

Способ повышения активности протеина С у новорожденных поросят с анемией путем применения ферроглюкина по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 сут, полизона 4 мг/кг и крезацина 4 мг/кг при включении обоих в схему выпаивания на 10 сут.