Изобретение относится к медицине, к способам анализа биологических материалов, и может быть использовано для диагностики нарушения репродуктивной функции у мужчин в урологии, андрологии, дерматовенерологии, репродуктивной медицине и хирургии, онкологии, для мониторинга генетических последствий природных и антропогенных воздействий, в ветеринарии и животноводстве.
Традиционно для оценки состояния репродуктивной функции в частности сперматогенеза известно использование 4-х подходов.
Первым традиционным подходом, давно применяющимся в медицине, является семиологический анализ эякулята, при котором практически характеризуют концентрацию, двигательную активность и морфологию сперматозоидов, наличие лейкоцитов, иных соматических клеток (см. например SU 1330567, 15.07.1987). Недостатком способа является невозможность при выполнении семиологического анализа эякулята получить информацию о физиологичности или нарушении прохождения половых клеток через все последовательные стадии сперматогенеза в целом.
Вторым традиционным подходом оценки разных этапов сперматогенеза является гистологический анализ препаратов срезов биоптата яичка с определением характеристики цикла сперматогенного эпителия, по расчету индекса половых клеток относительно числа клеток Сертоли (см. например RU 2199117, 20.02.2003). Анализ проводят после изъятия фрагмента яичка (биопсия) и его фиксации путем обезвоживания кусочка биоптата яичка по спиртам восходящей концентрации и ксилолу, заливки в парафин, приготовления срезов и их окрашивания с последующим микрокопированием гистологических препаратов биоптата яичка. Недостатком способа является: травма яичка при хирургическом получении биоптата, развитие аутоиммунного процесса в яичке и нарушение сперматогенеза и плодовитости; время приготовления гистопрепаратов биоптата яичка составляет 3-5 дней; результаты анализа сперматогенеза получают на локальном участке яичка (биоптате), и их нельзя экстраполировать на все яичко в целом или на оба яичка, поскольку в них часто протекают локальные процессы. Кроме того, проведение биопсии яичка допускается только для пациентов с азооспермей или олигозооспермией тяжелой степени (ВОЗ, 1982, 1999). Такие пациенты составляют не более 30% от числа мужчин, обращающихся к специалистам по поводу нарушения сперматогенеза и бесплодия. То есть около 70% мужчин не имеют возможности получения квалифицированной информации о причинах и степени нарушения сперматогенеза до его конечного этапа - до сперматозоидов.
Третий подход оценки разных этапов сперматогенеза является цитологический способ анализа половых клеток эякулята на всех последовательных стадиях их развития с определением числа дегенерирующих гамет (см. например RU 2328736, 10.07.2008).
Анализ проводят после взятия пробы половых и соматических клеток из осадка центрифугированного эякулята, обработанных в течение часа раствором 0,55-0,56% хлористого калия при температуре 37,0-37,1°С; их последующей фиксацией в смеси метанолового спирта и ледяной уксусной кислоты с добавлением 0,1-0,2 мл хлороформа. Препарат высушивают и окрашивают красителем Гимза с последующим микроскопированием. Недостатком способа является трудоемкость метода, качество приготовления препаратов и интерпретации результатов анализа зависят от квалификации лаборанта, малое количество препаратов, которое может проанализировать лаборант в течение трудового дня, использование сильно действующего яда (метиловый спирт), при просушивании препарата над пламенем газовой или спиртовой горелки легко клетки сжечь, что скажется на результатах анализа.
Четвертый подход - иммунохимический, связанный с выявлением антигенов сперматозоидов и антиспермальных антител, ассоциированных с бесплодием. Существует несколько антигенов (АГ) сперматозоидов, антитела к которым обладают агглютинирующей и иммобилизирующей сперматозоиды активностью. Все они являются сильными иммуногенами, способными вызывать образование антиспермальных антител (АСАТ), ассоциированных с клиническим бесплодием, снижающих фертильность у экспериментальных животных или влияющих на процесс оплодотворения in vitro. Предполагают, что иммунологическое бесплодие возможно связано с комбинированным воздействием различных антител к множеству антигенов спермы. Определение и изучение частных АГ спермы служит целям понимания повреждения функций сперматозоидов и механизмов оплодотворения, а также направлению разработки доступных коммерческих тест-систем для детекции антиген-специфических АСАТ.
Способ, принятый нами за прототип, характеризуется получением целевого антигена ядерных компонентов репродуктивных тканей из тканей семенников молодых самцов белых крыс, выделяя ядра пахитенных сперматоцитов, а из осадка пахитенных ядер проводят экстракцию антигена. Для выделения целевого антигена суспензию пахитенных ядер ресуспендируют, лизируют, гидролизируют хроматин, очищают от грубого дебриса центрифугированием, а супернатант подвергается ультрацентрифугированию в ступенчатом градиенте сахарозы для очистки синаптонемных комплексов, которые используют в качестве целевого антигена, который ковалентно связывают с поверхностью лунок микропланшета, затем в серию лунок вносят исследуемые пробы биологической жидкости, представляющей собой сыворотку крови больного, и после проведения твердофазного иммуноферментного анализа по спектрофотометрическим показателям определяют оптическую плотность исследуемых образцов (Гомберг М.А. Мужское бесплодие как результат нарушения гематотестикулярного барьера при ХИ / Гомберг М.А., Анискова И.Н., Дадашев С.Я. // Новости дерматологии и венерологии южного Кавказа. - 2007. - №1(4). - С.6-10).
Недостатком данного способа, прежде всего, является отсутствие точных количественных критериев отнесения пациентов к группе имеющих нарушения репродуктивной функции. Кроме того, примененный метод позволяет диагностировать нарушения репродуктивной функции у ограниченного числа лиц, а именно у пациентов с урогенитальной хламидийной инфекцией в анамнезе.
Технической задачей предложенного способа нарушений репродуктивной функции у мужчин является дальнейшее развитие методики, заключающееся в выработке точных количественных критериев отнесения пациентов к группе имеющих нарушения, что позволяет разработать на базе способа полную автоматизированную систему оценки, вне зависимости от квалификации лаборанта; расширить количество диагностируемых заболеваний / состояний.
Решение поставленной задачи базируется на принципиально новом подходе к способу диагностики нарушений репродуктивной функции-проведении тИФА и реализуется за счет получения специфического ядерного антигена из семенников молодых самцов белых крыс.
Подробное описание изобретения.
1. Получение ядерного антигена.
Целевой антиген получают, подвергая ферментативному гидролизу пахитенные ядра сперматоцитов из семенников молодых самцов белых крыс. Ядерный антиген сперматоцитов грызунов приготавливают следующим образом: выделяют ядра пахитенных сперматоцитов из семенников молодых самцов белых крыс массой 50-70 г согласно общепринятой методике (см. в частности Горач Г.Г., Сафронов В.В., Коломиец О.Л., Богданов Ю.Ф. Биохимический и ультраструктурный анализы синаптонемного комплекса в сперматоцитах млекопитающих. Цитология. - 1985. - T.XXVII. - №12. - С.1347-1352), из осадка пахитенных ядер проводят экстракцию антигена, ресуспендируют в 10 мл 0,1 мМ MgCl2 в 0,01 М Трис HCl (рН - 7.4); затем добавляют 90 мл раствора, содержащего 5 мМ ЭДТА и 0,01 М Трис-HCl (рН 8,5) и инкубируют 5-10 мин при комнатной температуре, далее добавляют ДНК-азу II (ДНК II, 200-300 ед Kunitz в 1 мг, Serva) из расчета 85 ед на 1 мл суспензии и инкубируют 60 мин при комнатной температуре, периодически встряхивают; затем пробы центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин при 4°С; по 15 мл супернатанта наносят на ступенчатый градиент сахарозы 1,5/1,8/2,0 М в 0,01 М растворе Трис-HCl (рН 7.4) и центрифугируют при 80000 об/мин в течение 90 мин в роторе SW-27.1; синаптонемные комплексы концентрируются на границах слоев 1,5/1,8 и 1,8/2,0 М. Выделенный вышеописанным образом целевой антиген представляет собой определенный и постоянный набор белков синаптонемного комплекса, которые способны в опыте связывать специфичные антитела, при этом антиген постоянного биохимического состава может быть получен многократно. Кроме того, появляется возможность единовременного обследования большого количества проб (до 40 анализов), а также получение больших количеств готового антигена и его длительное хранение (до 1 года) в замороженном состоянии.
2. Нанесение антигена на поверхность лунок микропланшета.
Полученный вышеописанным способом целевой антиген ковалентно связывают с поверхностью лунок микропланшета согласно общепринятым методам (Нго Т.Т., Ленхофф Г. (ред.) Иммуноферментный анализ. Пер. англ. М.: "Мир", 1988, с.172-192). Для связывания с поверхностью лунок целевой антиген разводят 1% раствором бикарбоната аммония до конечной концентрации белка 10 нг/мл. Далее оставшиеся сайты связывания забивают 1% раствором бычьего сывороточного альбумина. В качестве связывающего (сшивающего) бифункционального агента используют 0,25% раствор глутарового альдегида. После завершения реакции связывания микропланшет промывают и высушивают при 37°С в течение 3-х часов. Процедуру твердофазного иммунноферментного анализа проводят в традиционном варианте (Нго Т.Т., Ленхофф Г. (ред.) Иммуноферментный анализ. Пер. англ. М.: "Мир", 1988, с.193-209). В качестве исследуемой биологической жидкости может быть использована сыворотка крови. Сыворотку крови получают стандартным методом для чего, например, проводят забор периферической крови из вены, с последующим получением плазмы крови и удалением фибриногена путем либо естественного свертывания плазмы либо осаждением фибриногена ионами кальция.
Для проведения тИФА были использованы вторичные меченные пероксидазой антитела против IgG мыши (НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи АМН) и обычный продажный набор с заменой микропланшетов на подготовленные, как указано выше с проведением тИФА согласно инструкции. В качестве примера использован набор фирмы «ВекторБест» - «Набор реагентов для иммуноферментного выявления антител класса IgG к Treponema pallidum.
Проведение иммуноферментного анализа
Во все лунки микропланшета внести по 90 мкл раствора для разведения сывороток (PC). В 2 лунки планшета внести по 10 мкл положительного контрольного образца (К+), в 2 лунки - по 10 мкл отрицательного контрольного образца (К-), в 1 лунку - 10 мкл КК (контроль конъюгата), в остальные лунки - по 10 мкл цельных испытуемых сывороток, перемешать пипетированием. Микропланшет заклеить пленкой и инкубировать 30 мин при 37°С. За 5-10 мин до окончания инкубации приготовить раствор конъюгата в рабочем разведении. В качестве отрицательного контрольного образца (К-) использовали стандартные сыворотки крови фертильных пациентов.
По окончании инкубации содержимое лунок собрать в сосуд с дезинфицирующим раствором, промыть лунки микропланшета 5 раз промывочным раствором. В каждую лунку внести по 100 мкл раствора конъюгата (антивидовые антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена) в рабочем разведении. Микропланшет заклеить пленкой и инкубировать 30 мин при 37°С. По окончании инкубации промыть лунки 5 раз промывочным раствором. Приготовить раствор тетраметилбензидин (ТМБ) в рабочем разведении. Затем внести в каждую лунку по 100 мкл раствора ТМБ в рабочем разведении. Микропланшет поместить на 30 мин в защищенное от света место при (18-25)°С. Остановить реакцию добавлением в лунки по 100 мкл стоп-реагента и немедленно измерить оптическую плотность (ОП).
Регистрация и оценка результатов
Результаты тИФА регистрировали стандартным методом с помощью спектрофотометра ("DOMBI PLATE", Россия), измеряя оптическую плотность (ОП) в двухволновом режиме: основной фильтр - 450 нм, референс-фильтр - в диапазоне 620-650 нм. Выведение спектрофотометра на нулевой уровень («бланк») осуществляется по воздуху.
Исследуемую сыворотку расценивают как положительную, если соответствующее ей значение ОП равно или превышает величину ОПкрит, которая в результате проведенных исследований была определена как 0,37.
Лабораторные исследования были проведены на базе лаборатории цитогенетики института общей генетики им. Н.И.Вавилова РАН (Москва) и в Краснодарском краевом центре планирования семьи и репродукции (Краснодар). Данная работа проведена на 56 сыворотках крови инфертильных и фертильных мужчин. Показатели фертильности мужчин предварительно были оценены с помощью: анамнестических данных, семиологического анализа, цитологического (количественный кариологический анализ состава незрелых половых клеток эякулята) анализа и иммунохимического определения поверхностных антиспермальных антител (АСАТ) как в сыворотке крови, так и спермоплазме.
Статистическая обработка полученных результатов проводилась программой STATISTICA v.6 (StatSoft, Inc. 2001). Определение аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей в высоком титре в образцах крови инфертильных пациентов позволил выявить достоверное повышенное значение ОП при выявлении АСАТ в спермоплазме или АСАТ в сыворотке крови (68% и 71,43%, соответственно, различия достоверны р=0,0004). Определение аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей в высоком титре в образцах крови инфертильных и фертильных мужчин позволило выявить, что достоверное повышение ОП связано с возрастанием количества неидентифицированных половых клеток, что подтверждалось высокой статистически значимой корреляцией (r=0,8601 при р=0,019). Определена высокая статистически значимая корреляция стадий прелептотены-зиготены с аутоантителами к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей (r=1,00 при р=0,005). Выявленные нарушения нашли свое отражение на функциональном и морфологическом состояниях зрелых сперматозоидов.
Примеры реализации заявленного способа.
Пример 1. Больной Абрамов, 31 год. Брак - 2; детей нет; жалобы при обращении - бесплодие 6 лет, внутриматочная инсеминация - 5 попыток.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз
Семиологический анализ: объем эякулята 2.5 мл, цвет - сероватый, срок разжижения 40 минут; рН - 7.2, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 203×106, общее количество сперматозоидов 507,5×106, активно подвижных (а+b) - 70%, живые сперматозоиды - 77%, нормальные сперматозоиды - 77%, патологические формы - 23%, клетки сперматогенеза - 1, лейкоциты - 1×106. Заключение: полизооспермия
Количественный кариологический анализ состава незрелых половых клеток эякулята (ККА НПК): Индекс НПК - 20%; В прелептотене-зиготене 0%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 91%; Неразошедшиеся сперматиды 33%; Неидентифиц. половые клетки - 9%; Клетки эпителия - 2%; Лейкоциты - 8%. Заключение: нарушение механизма расхождения хромосом по дочерним клеткам в процессе деления половых клеток, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - не обнаружено, в спермоплазме - обнаружено. Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,39.
Пример 2. Больной Хрускин, 31 год. Брак - 1; детей нет; жалобы при обращении - бесплодие 4,5 года, внутриматочная инсеминация - 4 попытки.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз - 2 раза.
Семиологический анализ: объем эякулята 3.0 мл, цвет - серовато-беловатый, срок разжижения 45 минут; рН - 7.3, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 5×106, общее количество сперматозоидов 15×106, активно подвижных (а+b) - 44%, живые сперматозоиды - 97%, нормальные сперматозоиды - 40%, патологические формы - 60%, клетки сперматогенеза - 1,6, лейкоциты - 0,2×106. Заключение: олигоIIастенозооспермия
ККА НПК: Индекс НПК - 18%; В прелептотене-зиготене 0%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 95%; Неразошедшиеся сперматиды 23%; Неидентифиц. половые клетки 5%; Клетки эпителия - 1%; Лейкоциты - 19%. Заключение: нарушение механизма расхождения хромосом по дочерним клеткам в процессе деления половых клеток, десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,6.
Пример 3. Больной Евко, 36 лет. Брак - 1; дети - нет; жалобы при обращении - бесплодие 9 лет, попытки: экстакорпаральное оплодотворение - 4 попытки, внутриматочная инсеминация - 6 попыток.
Перенесенные урогенитальные инфекции: генитальный герпес, уреаплазмоз.
Семиологический анализ: объем эякулята 3.0 мл, цвет - серовато-беловатый, срок разжижения 30 минут; рН - 7.5, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята - 69×106, общее количество сперматозоидов - 207×106, активно подвижных (а+b) - 65%, живые сперматозоиды - 83%, нормальные сперматозоиды - 78%, патологические формы - 22%, клетки сперматогенеза - 6, лейкоциты - 2,5×106. Заключение: лейкоцитоспермия.
ККА НПК: Индекс НПК - 14%; В прелептотене-зиготене 7,5%; В пахитене 0%; Сперматоциты II+ сперматиды - 81,5%; Неразошедшиеся сперматиды - 23,5%; Неидентифиц. половые клетки - 11%; Клетки эпителия - 5%; Лейкоциты - 21%. Заключение: нарушение механизма расхождения хромосом по дочерним клеткам в процессе деления половых клеток, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,57.
Пример 4. Больной Ищенко, 46 лет. Брак - 2; дети - 1 от 1-го брака; жалобы при обращении - бесплодие 8 лет, попытки: экстакорпаральное оплодотворение - 1 попытка, внутриматочная инсеминация - 8 попыток.
Перенесенные урогенитальные инфекции: генитальный герпес.
Семиологический анализ: объем эякулята 3.2 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 20 минут; рН - 7.4, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 62×106, общее количество сперматозоидов 198,4×106, активно подвижных (а+b) - 81%, живые сперматозоиды - 94%, нормальные сперматозоиды - 83%, патологические формы - 17%, клетки сперматогенеза - 2, лейкоциты - 3,2×106. Заключение: лейкоцитоспермия.
ККА НПК: Индекс НПК - 14%; В прелептотене-зиготене 0%; В пахитене 0%; Сперматоциты II+ сперматиды - 97%; Неразошедшиеся сперматиды - 34%; Неидентифиц. половые клетки - 3%; Клетки эпителия - 14%; Лейкоциты - 23%. Заключение: нарушение механизма расхождения хромосом по дочерним клеткам в процессе деления половых клеток, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,48.
Пример 5. Больной Маруласов, 34 года. Брак - 1; дети - нет; жалобы при обращении - бесплодие 9 лет.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз - 4 раза, трихомониаз.
Семиологический анализ: объем эякулята 2.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 20 минут; рН - 7.2, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 32×106, общее количество сперматозоидов 64×106, активно подвижных (а+b) - 59%, живые сперматозоиды - 70%, нормальные сперматозоиды - 82%, патологические формы - 18%, клетки сперматогенеза - 2,4, лейкоциты - 16×106. Заключение: лейкоцитоспермия.
ККА НПК: Индекс НПК - 5,6%; В прелептотене-зиготене - 1,8%; В пахитене - 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 98,2%; Неразошедшиеся сперматиды - 5,5%; Неидентифиц. половые клетки - 0%; Клетки эпителия - 17%; Лейкоциты - 31,5%. Заключение: частичный блок сперматогенеза в профазе мейоза, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,48.
Пример 6. Больной Шугай, 46 лет. Брак - 2; дети - 1 от 1-го брака; жалобы при обращении - бесплодие 4 года.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз - 4 раза, гонорея, трихомониаз
Семиологический анализ: объем эякулята 2.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 45 минут; рН - 7.5, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 18×106, общее количество сперматозоидов 36×106, активно подвижных (а+b) - 29%, живые сперматозоиды - 40%, нормальные сперматозоиды - 75%, патологические формы - 25%, клетки сперматогенеза - 2,4, лейкоциты - 3,5×106. Заключение: олигоастенозооспермия, некроспермия, лейкоцитоспермия.
ККА НПК: Индекс НПК - 19%; В прелептотене-зиготене - 5%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 91%; Неразошедшиеся сперматиды - 10%; Неидентифиц. половые клетки - 9%; Клетки эпителия - 12%; Лейкоциты - 32%. Заключение: частичный блок сперматогенеза в профазе мейоза, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,62.
Пример 7. Больной Савенко, 29 лет. Брак - 2; дети - 1 от 1-го брака; жалобы при обращении - бесплодие 3 года, внутриматочная инсеминация - 4 попытки.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз - 1 раз, гонорея, трихомониаз.
Семиологический анализ: объем эякулята 2.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 20 минут; рН - 7.2, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 12×106, общее количество сперматозоидов 24×106, активно подвижных (а+b) - 69%, живые сперматозоиды - 88%, нормальные сперматозоиды - 66%, патологические формы - 34%, клетки сперматогенеза - 0,5, лейкоциты - 0,8×106. Заключение: олигозооспермия
ККА НПК: Индекс НПК - 4,3%; В прелептотене-зиготене - 3%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 89%; Неразошедшиеся сперматиды - 7,3%; Неидентифиц, половые клетки - 8%; Клетки эпителия - 17%; Лейкоциты - 38%. Заключение: частичный блок сперматогенеза в профазе мейоза, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - не обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,68.
Фертильные мужчины и пациенты, у которых бесплодный брак по женскому фактору (контроль).
Пример 8. Больной Баринов, 30 лет. Брак - 1; дети - нет; жалобы при обращении - бесплодие 7 лет, попытка.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз.
Семиологический анализ: объем эякулята 4.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 50 минут; рН - 7.4, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 106×106, общее количество сперматозоидов 424×106, активно подвижных (а+b) - 53%, живые сперматозоиды - 58%, нормальные сперматозоиды - 83%, патологические формы - 17%, клетки сперматогенеза - 1,0, лейкоциты - 0,4×106. Заключение: нормозооспермия
ККА НПК: Индекс НПК - 2,9%; В прелептотене-зиготене - 1,9%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 90,2%; Неразошедшиеся сперматиды - 6,45%; Неидентифиц. половые клетки - 7,76%; Клетки эпителия - 28%; Лейкоциты - 13,4%. Заключение: без патологии, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - не обнаружено, в спермоплазме - обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,13.
Пример 9. Больной Савчук, 26 лет. Брак - 1; дети - нет; жалобы при обращении - бесплодие 0,5 года.
Перенесенные урогенитальные инфекции: урогенитальный хламидиоз, микоплазмоз
Семиологический анализ: объем эякулята 3.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 40 минут; рН - 7.2, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 45×106, общее количество сперматозоидов 135×106, активно подвижных (а+b) - 65%, живые сперматозоиды - 58%, нормальные сперматозоиды - 88%, патологические формы - 12%, клетки сперматогенеза - 0,6, лейкоциты - 0,9×106. Заключение: нормозооспермия
ККА НПК: Индекс НПК - 2,7%; В прелептотене-зиготене - 0%; В пахитене 0%; Сперматоциты II+ сперматиды - 93%; Неразошедшиеся сперматиды - 2,6%; Неидентифиц. половые клетки - 7%; Клетки эпителия - 11%; Лейкоциты - 9,5%. Заключение: без патологии, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - не обнаружено, в спермоплазме - не обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,13.
Пример 10. Больной Рыбалко, 26 лет. Брак - 1; дети - 1 от 1-го брака; жалобы при обращении - бесплодие 5 лет.
Перенесенные урогенитальные инфекции: уреаплазмоз.
Семиологический анализ: объем эякулята 2.0 мл, цвет - серовато-белый, срок разжижения 45 минут; рН - 7.3, количество сперматозоидов в 1 мл эякулята 42×106, общее количество сперматозоидов 84×106, активно подвижных (а+b) - 58%, живые сперматозоиды - 82%, нормальные сперматозоиды - 61%, патологические формы - 39%, клетки сперматогенеза - 0,56, лейкоциты - 0,2×106. Заключение: нормозооспермия
ККА НПК: Индекс НПК - 6%; В прелептотене-зиготене - 0%; В пахитене 0%; Сперматоциты II + сперматиды - 67%; Неразошедшиеся сперматиды - 17%; Неидентифиц. половые клетки - 33%; Клетки эпителия - 4%; Лейкоциты - 9%. Заключение: без патологии, усиление десквамации герминативного эпителия.
Наличие антиспермальных антител (АСАТ): в сыворотке крови - не обнаружено, в спермоплазме - не обнаружено.
Результаты лабораторных исследований с помощью заявленного способа - оптическая плотность аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей - 0,25.
Таким образом, предлагаемый способ диагностики нарушений репродуктивной функции у мужчин, заключающийся в определения аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей, демонстрирует высокую степень соответствия с данными цитологической и семиологической диагностики. Данный способ для определения аутоантител к ядерным компонентам мужских репродуктивных тканей в сыворотке крови выявляет нарушения сперматогенеза, проявляющиеся в профазе I мейоза и диагностики нарушения репродуктивной функции у мужчин, позволяет получать сравнимые между собой количественные показатели и не требует оперативного вмешательства.
Использование способа определения аутоантител против мейотических ядерных антигенов позволяет дать объективную оценку состоянию сперматогенеза, прост в исполнении и полностью автоматизирован, что позволяет проводить большое количество однотипных исследований; обеспечивает повышение точности и эффективности диагностики; требует низких трудозатрат; не зависит от человеческого фактора (квалификации лаборанта). Неинвазивность способа исключает травму яичка и риск развития аутоиммунных осложнений.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ РЕПРОДУКТИВНЫХ НАРУШЕНИЙ | 2012 |
|
RU2495431C1 |
Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики нарушения репродуктивной функции у мужчин. Для этого исследуют сыворотку крови пациента путем проведения иммуноферментного анализа, определяя концентрации антител, специфических к компонентам мужских репродуктивных тканей. При этом в качестве компонентов мужских репродуктивных тканей используют ядерный антиген пахитенных сперматоцитов грызунов. При значении концентрации антител, выраженной в единицах оптической плотности, равной или превышающей 0,37, диагностируют наличие нарушения репродуктивной функции у мужчин. Изобретение позволяет получить точную оценку наличия нарушения репродуктивной функции у мужчин за счет разработанного точного количественного критерия диагностики.
Способ диагностики нарушения репродуктивной функции у мужчин, включающий исследование биологической жидкости путем проведения иммуноферментного анализа, определения концентрации антител, специфических к компонентам мужских репродуктивных тканей, выраженной в единицах оптической плотности (ОП), при котором в качестве биологической жидкости исследуют сыворотку крови пациента, в качестве компонентов мужских репродуктивных тканей используют ядерный антиген пахитенных сперматоцитов грызунов и при значении ОП, равной или превышающей 0,37, диагностируют наличие нарушения репродуктивной функции у мужчин.
| ГОМБЕРГ М.А | |||
| Мужское бесплодие как результат нарушения гематотестикулярного барьера при хламидийной инфекции | |||
| Новости дерматологии и венерологии южного Кавказа, 2007, №1(4), с.6-10 | |||
| СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МУЖСКОГО БЕСПЛОДИЯ | 2003 |
|
RU2247371C2 |
| СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МУЖСКОГО БЕСПЛОДИЯ | 2008 |
|
RU2362167C1 |
| СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ БЕСПЛОДИЯ У МУЖЧИН | 2008 |
|
RU2371720C1 |
| АНИСКОВА И.Н | |||
| Влияние урогенитальной хламидийной инфекции на показатели | |||
