СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ ОБЩЕЙ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА БЕЛЫХ КРЫС Российский патент 2011 года по МПК A61B5/01 

Изобретение относится к экспериментальной биологии, более конкретно к физиологической диагностике функционального состояния лабораторных животных.

Известны различные способы определения уровня общей неспецифической реактивности организма (УОНРО) у лабораторных животных. Одни из них основаны на определении соотношения форменных элементов крови [1], другие - на учете показателей деятельности сердечно-сосудистой системы [2], третьи - на анализе поведенческих особенностей и двигательной активности [3].

Используется способ определения уровня общей неспецифической реактивности у лабораторных животных, в том числе у белых крыс, по выявлению порога болевой чувствительности (ПБЧ), где высокому УОНРО соответствует низкий порог, низкому УОНРО - высокий, а среднему УОНРО - промежуточные значения ноцицептивной чувствительности [4].

Однако используемый способ при всей его объективности и информативности имеет ряд недостатков, заключающихся, во-первых, в необходимости использовать и поддерживать в сопоставимых характеристиках электрическое оборудование (трансформатор, электропол, вольтметр), а во-вторых, в необходимости постоянно контролировать влажность и чистоту электропроводящего пола. Данные недостатки устраняются при определении УОНРО заявляемым способом.

Целью данного изобретения является оценка уровня общей неспецифической реактивности у белых крыс.

Для определения необходимы: электротермометр любой конструкции с классом точности не менее 0,1 градуса и датчиком, позволяющим производить аурикулярную термометрию у крысы; специальный пластиковый пенал-контейнер, позволяющий мягко фиксировать голову и тело крысы во время термометрии; две стандартные пластиковые клетки для крыс, оборудованные термостатирующими устройствами, позволяющими контролировать и поддерживать заданную температуру пола (20°С в одной и 0°С в другой).

Поставленная цель достигается путем проведения поэтапного тестирования: у белой крысы, предварительно в течение 1 часа находящейся в клетке с постоянной температурой поверхности пола 20°С, измеряется фоновая аурикулярная температура, что занимает около 1 мин, и этот показатель обозначается как Т₀; затем животное помещается на 3 минуты в клетку с температурой поверхности пола 0°С, которая обеспечивает охлаждение опорных поверхностей нижних конечностей крысы; далее животное возвращается на 3 минуты в клетку с температурой пола 20°С, что необходимо для проявления температурной реакции на холодовое раздражение; после чего крыса вновь подвергается аурикулярной термометрии, этот показатель обозначается как T₁. Общее время проведения теста - 8 минут, причем признаков болевого раздражения при проведении опыта у животных не отмечается.

После этого производится расчет разницы между конечной и фоновой аурикулярной температурой (разница температур, РТ=T₁-Т₀), которая выражается в абсолютных величинах с точностью до десятой доли градуса.

Уровень общей неспецифической реактивности организма белых крыс определяют по величине РТ: крайне высокому УОНРО соответствуют показатели РТ ниже -0,2°С (парадоксальное снижение температуры), высокому УОНРО - РТ выше +1,5°С (выраженный подъем аурикулярной температуры); среднему УОНРО - РТ находится в пределах от +1,1°С до +1,5°С (умеренный подъем температуры), низкому УОНРО - РТ в пределах от +0,3°С до +1,0°С (незначительный подъем температуры). Значения РТ от -0,2°С до +0,2°С трактуются как неопределенные.

Пример 1. У 36 белых крыс обоего пола (1:1), живой массой 180-200 г, предварительно дифференцированных на высокий, средний и низкий УОНРО по величине порога болевой чувствительности и находящихся в течение 1 часа в клетке с температурой поверхности пола 20°С, определили индивидуальную аурикулярную температуру. Распределение базисной температуры белых крыс варьировало от 34,2 до 37,3°С, не имело выраженных типологических различий, оно было близко по своему характеру к нормальному и имело максимум вблизи 36,2°С (фигура 1).

В результате холодового воздействия с трехминутным пребыванием на поверхности пола при 0°С было выделено 4 типа реакции: слабая, умеренно выраженная, сильная, парадоксальная.

Развитие парадоксальных реакций у части животных с высоким УОНРО происходило только при наличии достаточно высокой базисной температуры (свыше 37°С), что объясняется предварительной активацией организма во время процедур, предшествующих холодовой пробе.

ПБЧ при определении УОНРО по прототипу варьировал в пределах от 17,5 до 26,4 В. Распределение всех полученных значений в выборке на 9 классов с ходом в 1 В по возрастанию и математическая обработка выборки с определением среднеквадратичного отклонения с учетом ее явного отклонения от нормального распределения позволило выделить количественные границы трех типов УОНРО в зависимости от результатов определения ПБЧ, как того требует способ прототипа: высокий (от 17,5 до 20,4 В), средний (от 20,5 до 23,4 В) и низкий (от 23,5 до 26,4 В).

Эти реакции практически полностью укладывались в подгруппы животных с соответствующим УОНРО (табл.).

Таблица Уровень общей неспецифичексой реактивности белых крыс и температурные реакции на холодовой раздражитель (М±m) УОНРО, по прототипу ПБЧ, В Базисная температура, °С РТ, °С Низкий (n=11) 23,5-26,4 35,73±0,82 0,66±0,10 Средний (n=16) 20,5-23,4 35,91±0,67 0,88±0,07 Высокий (n=9)   36,22±1,20   - обычная реакция (n=6) 17,5-20,4 35,46±2,74 1,76±1,98* - парадоксальная (n=3)   37,17±3,60* -0,70±0,45* * - достоверные различия между крайними УОНРО (Р<0,05)

Представленные данные были получены при взаимных сопоставлениях порога болевой чувствительности и РТ после проведения холодовой пробы. Прослеживалась математическая закономерность: более высокому ПБЧ (т.е. более низкому УОНРО) соответствовала стереотипная умеренная реакция, тогда как по мере снижения ПБЧ (повышения УОНРО) варианты возможного температурного градиента все более расщеплялись, так что высокому УОНРО было свойственно два варианта реагирования на холодовую пробу - значительным приростом или парадоксальной реакцией уменьшения аурикулярной температуры (фигура 2).

С учетом возможности двух видов реакций у животных с высоким УОНРО соответствие по тестам составило 7/9(77%), у животных с низким УОНРО - 10/11 (90,9%).

Пример 2. Белая крыса-самка массой 185 г. Фоновая температура - 34,9°С, после холодового раздражения - 36,7°С. Оценка результата: РТ равно +1,8°С, высокий УОНРО. Косвенные признаки высокого УОНРО - высокая общая двигательная активность и частота ориентировочных реакций. Результат определения УОНРО по способу прототипа - порог болевой чувствительности - 18,5 В. Оценка: высокий УОНРО, полное совпадение результатов заявляемого способа и прототипа.

Пример 3. Белая крыса-самец массой 200 г.Фоновая температура - 36,0°С, после холодового раздражения - 36,5°С. Оценка результата: РТ равно +0,5°С, низкий УОНРО. Косвенные признаки низкого УОНРО - сниженная общая двигательная активность и частота ориентировочных реакций. Результат определения УОНРО по способу прототипа - порог болевой чувствительности - 25,5 В. Оценка: низкий УОНРО, полное совпадение результатов заявляемого способа и прототипа.

Источники информации

1. Гаркави, Л.X. Адаптационные реакции и резистентность организма / Л.X.Гаркави, Е.Б.Квакина, М.А.Уколова. - Ростов-на-Дону, 1990. - 224 с.

2. Федоров, Б.М. Стресс и система кровообращения / Б.М.Федоров. - М.: Медицина, 1991. - 318 с.

3. Гельман, В.Я. Получение обобщенных критериев для оценки поведения крыс в условиях «открытого поля» / В.Я.Гельман, С.И.Кремневская // Физиологический журнал СССР. - 1990. - Т.76. - №4. - С.553-556.

4. Мулик, А.Б. Уровень общей неспецифической реактивности организма: разработка, оценка, практическое применение / А.Б.Мулик. - Волгоград: Изд-во ВолГУ, 2001. - 144 с.

Краткое описание чертежей

Фиг.1. Гистограмма распределения базисной температуры белых крыс. По оси абсцисс расположены выделенные классы с ходом по 0,4°С от 34,2°С до 37,4°С, по оси ординат - число выявленных случаев.

Фиг.2. Взаимозависимость распределения изменения температуры после холодовой пробы и ПБЧ белых крыс. По оси абсцисс - изменение температуры (°С), по оси ординат - ПБЧ (В). Для высокого УОНРО характерно расщепление - два типа реакции. Серым показана зона неопределенной реакции, в которую попали 3 (8,3%) наблюдения.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления уровня общей неспецифической реактивности организма (УОНРО) белых крыс. Для этого производят фоновое измерение аурикулярной температуры у животного (Т₀) спустя 1 час его пребывания в клетке на поверхности пола с температурой +20°С. Затем помещают на 3 минуты в клетку с температурой поверхности пола 0°С. После чего на 3 минуты возвращают в клетку с температурой пола 20°С. Затем измеряют аурикулярную температуру (T₁). Измеряют разницу температур (РТ) между T₁ и Т₀. Определяют УОНРО как крайне высокий при РТ<-0,2, высокий при РТ>+1,5, средний при +1,1≤РТ≤+1,5 или низкий при +0,3≤РТ≤+1,0. Способ позволяет упростить методику оценки общей неспецифической реактивности организма белых крыс при сохранении информативности и объективности. 2 ил., 1 табл.

Способ выявления уровня общей неспецифической реактивности организма (УОНРО) белых крыс, включающий общий анализ термочувствительности к холодовому раздражению, отличающийся тем, что у животного, предварительно в течение одного часа находящегося в клетке с постоянной температурой поверхности пола 20°С, измеряют фоновую аурикулярную температуру (показатель Т₀), затем помещают на 3 мин в клетку с температурой поверхности пола 0°С, после чего на 3 мин возвращают в клетку с температурой пола 20°С, и вновь подвергают аурикулярной термометрии (показатель T₁), и на основании полученной разницы между T₁ и Т₀ (РТ) определяют УОНРО как крайне высокий (РТ<-0,2), высокий (РТ>+1,5), средний (+1,1≤РТ≤+1,5) или низкий (+0,3≤РТ≤+1,0).