СПОСОБ НОРМАЛИЗАЦИИ УРОВНЯ АЛЬФА2-АНТИПЛАЗМИНА У СВИНОМАТОК С БРОНХИТОМ Российский патент 2013 года по МПК A61K31/00 A61K35/50 A61P7/00 

Изобретение относится к биологии и ветеринарии, а именно к гематологии.

Аналогов предлагаемого способа нормализации уровня α₂-антиплазмина у свиноматок с бронхитом не существует.

В литературе имеются сведения о высокой биологической активности крезацина - производного ароксиалкилкарбоновых кислот, способного стимулировать различные системы живых организмов, повышая их выживаемость в неблагоприятных условиях (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы // Ветеринария. - 2006. - №11. - С.49-51), и гамавита - комплексного сбалансированного средства на основе плаценты, содержащего нуклеинат натрия, набор аминокислот, витаминов и солей, обладающего высоким органопротективным и анаболическим эффектом (Белоусова Р.В. Применение гамавита для повышения эффективности воспроизводства свиней // Ветеринария - 2006. - №10. - С.11-12). Однако в литературе нет указаний о влиянии этих препаратов на САЭ у свиноматок с артритом и тем более на возможность ее нормализации с помощью их сочетания.

Целью изобретения является нормализация уровня α₂-антиплазмина у свиноматок с бронхитом.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для нормализации уровня α₂-антиплазмина у свиноматок с бронхитом им назначаются крезацин 4 мг/кг в сутки, включенный в схему выпаивания утром на пять суток, и одновременно с ним гамавит 0,03 мг/кг внутримышечно один раз в день, утром, в течение пяти суток.

Применение заявленного комплекса нормализует уровень α₂-антиплазмина у свиноматок с бронхитом через 5 суток после окончания лечения, устраняя явления бронхита. Это является основой оздоровления стада свиноматок, снижения падежа и высокого качества получаемых от них поросят и мясной продукции.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Известно, что α₂-антиплазмин (α₂-АП) является наиболее важным ингибитором фибрииолиза, в присутствии которого происходит быстрое формирование необратимого, лишенного активности комплекса “плазмин-α₂-АП”. Метод оценки уровня α₂-АП основан на определении способности α₂-АП исследуемого образца плазмы инактивировать добавляемый в плазму очищенный плазмин. Содержание остаточного плазмина определяется по степени гидролиза хромогенного субстрата, специфичного по отношению к этому ферменту.

Используются реактивы: 1. Плазмин свиньи, лиофилизированный. Разводится в буфере до концентрации 0,1 СТА Е/мл. 2. Хромогенный субстрат D-Norvalylcyclohexylalanil-lysil-p-nitroanilide. Разводится в дистиллированной воде до концентрации 3 ммоль/л. 3. Раствор буфера: KH₂PO₄ (100 ммоль/л), NaCl 9 г/л, глицерин (250 г/л), pH 7,5.

Для выполнения исследования необходима также стандартная или контрольная нормальная плазма с известным содержанием α₂-АП или пулированная (взятая не менее, чем от 10 здоровых свиноматок), активность α₂-АП в которой принимается за 100%.

Применяется следующее оборудование: спектрофотометр с термостатируемой кюветой (температура реакции +37°С). Используемая длина волны 405 нм. Ширина оптического пути кюветы - 1 см.

Материалом для исследования служит нитратная бедная тромбоцитами плазма.

Предварительно все смешиваемые реагенты подогреваются до +37°С. Ход определения приводится в таблице ниже.

Таблица Схема определения уровня α₂-антиплазмина Последовательность операций Исследуемый образец Контроль (плазмин) 1. Внести в кювету или пробирку: исследуемую плазму 20 мкл (0,02 мл) - физиологический (0,15 М) раствор хлорида натрия - 20 мкл (0,02 мл) раствор плазмина 1,0 мл 1,0 мл 2. Перемешать и инкубировать при +37°С в течение 1 мин 3. Добавить хромогенный субстрат и включить секундомер 0,1 мл 0,1 мл В течение 30 сек учитывают показатели поглощения и одновременно включают секундомер. Спустя 60 и 120 сек повторно определяют показатели поглощения.

Вычисляют скорость изменения поглощения за 1 мин (Δ А/мин), которая пропорциональна активности α₂-АП. Для этого рассчитывают разницу поглощения при 405 нм между 0 и 60 секундами инкубации, а также между 60 и 120 секундами. Определяют среднюю величину из двух показателей Δ А/мин.

Каждая серия анализов требует не менее одного значения для раствора плазмина (Δ А/мин _{плазмин}) и одного референтного значения, определяемого с использованием контрольной нормальной плазмы (Δ А/мин _{контроль}) с известным значением α₂-АП. Эти значения используют для вычисления внутрилабораторного коэффициента пересчета (К_п):

Содержание α₂-АП в исследуемом образце плазмы в виде % от нормы в дальнейшем вычисляется по формуле:

α₂-АП_{образец} (% от нормы)=Кп × (Δ А/мин _{плазмин} - Δ А/мин _{образец})

В норме, уровень α₂-АП в плазме крови составляет 80-120%.

Снижение активности α₂-АП может быть определено при активации фибринолиза, его повышение сопряжено с риском тромбоза.

При диагностике у свиноматок с бронхитом повышения α₂-АП необходимо назначение лечения согласно заявленному способу.

Пример 1. У свиноматки с бронхитом №19 была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме.

При обследовании свиноматки была выявлена повышенная активность α₂-АП (147%). Животному был назначен крезацин 4 мг/кг в сутки, включенный в схему выпаивания утром на пять суток, и одновременно с ним гамавит 0,03 мг/кг внутримышечно один раз в день, утром, в течение пяти суток.

Через 5 суток после окончания лечения у свиноматки нормализовалась активности α₂-АП (128%) при устранении явлений бронхита.

Наблюдение за свиноматкой в последующем зарегистрировало стойкое сохранение нормального уровня α₂-АП в течение как минимум 3 месяцев (срок наблюдения) после окончания лечения - α₂-АП не выше 92%.

Пример 2. У свиноматки с бронхитом №24 была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме. У нее выявлено повышение активности α₂-АП (136%). Животному был назначен крезацин 4 мг/кг в сутки, включенный в схему выпаивания утром на пять суток, и одновременно с ним гамавит 0,03 мг/кг внутримышечно один раз в день, утром, в течение пяти суток.

Через 5 суток после окончания лечения у свиноматки нормализовалась активность α₂-АП (86%) при устранении явлений бронхита.

Наблюдение за свиноматкой в последующем не зарегистрировало отрицательной динамики α₂-АП (в течение 3 мес наблюдения).

Использование предлагаемого способа оптимизации активности α₂-АП в ветеринарии способно помочь избежать развития сосудистых тромбозов у свиноматок с бронхитом, что позволяет оздоровить стадо, снизить падеж и получать от этих животных мясную продукцию высокого качества.

Применение заявленного способа успешно апробировано на 126 свиноматках с бронхитом с достижением полной нормализации уровня α₂-антиплазмина во всех случаях.

Заявленное изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает применение крезацина 4 мг/кг в сутки в схеме выпаивания утром в течение пяти суток и одновременно с ним гамавита 0,03 мг/кг внутримышечно один раз в день, утром в течение пяти суток. Использование заявленного способа позволяет избежать развития сосудистых тромбозов у свиноматок с бронхитом, оздоровить стадо, снизить падеж, получать от этих животных мясную продукцию высокого качества. 1 табл., 2 пр.

Способ нормализации уровня α₂-антиплазмина у свиноматок с бронхитом, включающий применение крезацина 4 мг/кг в сутки в схеме выпаивания утром в течение пяти суток и одновременно с ним гамавита 0,03 мг/кг внутримышечно один раз в день утром, в течение пяти суток.