АНТИОКСИДАНТНОЕ СРЕДСТВО ИЗ НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ ЧЕРЕМШИ (ЛУКА МЕДВЕЖЬЕГО ИЛИ ЛУКА ПОБЕДНОГО) Российский патент 2015 года по МПК A61K36/8962 A61P39/06 

Изобретение относится к медицине и касается способов получения антиоксидантных препаратов из растительного сырья - лука медвежьего (Allium ursinum L.) и лука победного (Allium victoriale L.) (черемши), семейство луковые (Alliaceae Juss.) с целью расширения ассортимента растительных препаратов с антиоксидантной активностью для профилактики и комплексного лечения онкологических и сердечно-сосудистых заболеваний.

Известны антиоксидантные средства, полученные на основе растительного сырья (растений): спиртовая настойка из лука репчатого («Аллилчеп») [Регистр лекарственных средств России / Под ред. Ю.Ф. Крылова. - М.: Инфармхим, 1993. - С. 164], таблетки с порошком чеснока «Алисат» [ТУ 9164-001-51067075-07, СГР 77.99.23.3.У.8163.10.07 от 08.10.2007], густой экстракт тыквы [Агаджанян, B.C. Целенаправленный поиск индивидуальных веществ и суммарных композиций, характеризующихся антирадикальной активностью в отношении супероксидного анион-радикала: дисс… канд. фармацевт. наук. 15.00.02 / B.C. Агаджанян. - Пятигорск, 2009. - 24 с.], экстракт хризантемы [Кодониди, М.И. Химическое исследование цветков хризантемы корейской (Chrysanthemum x koreanum Makai) с целью получения фармакологически активных суммарных фитокомплексов: дисс…. канд. фармацевт. наук: специальность 15.00.02 / М.И. Кодониди. - Пятигорск: 2009. - 24 с.], извлечения из барды [Кайшев, А.Ш. Изучение биологически активных веществ отходов спиртового производства: дисс…. канд. фармацевт. наук: специальность 15.00.02 / А.Ш. Кайшев. - Пятигорск: 2011. - 23 с.], «Витапектин» [Максютина Н.П., Лесник С.А. Витапектин и композиции на его основе / Под ред. Лесник С.А., Фус С.В. - К.: Нора-Принт, 1999. - С. 52-56].

Наиболее близким прототипом являются таблетки с порошком чеснока «Алисат», используемые как средство для лечения гипертонии и атеросклероза, для профилактики инфаркта миокарда и инсульта, для повышения иммунитета. Данное средство, как выделенное из природного растительного материала, безвредное и обладающее высокой антиоксидантной активностью, наиболее близко к заявляемому средству и выбрано в качестве прототипа [Машковский, М.Д. Лекарственные средства: справочное издание, 15-е изд., перераб., испр. и доп. / Машковский М.Д. - М.: Новая волна, 2006. - С. 962].

Способ получения таблеток «Алисат» (в 1 таблетке: чеснока сушеного 0,3000 г; лактозы 0,1349 г; 2% раствора ПВП 0,0007 г; кальция стеарата 0,0022 г; кислоты стеариновой 0,0044 г [ТУ 9164-001-51067075-07]) заключается в том, что чеснок (Allium sativum L.), высушенный до остаточной влажности 2% и измельченный до частиц с размером 0,25 мм, смешивают с лактозой. Смесь увлажняют 2% водным раствором поливинилпирролидона (ПВП) до получения пластичной массы и гранулируют через гранулятор с диаметром отверстий 3 мм. Гранулы высушивают, повторно гранулируют через гранулятор с диаметром отверстий 1 мм. Гранулы опудривают смесью стеариновой кислоты и кальция стеарата и прессуют на таблеточной машине в таблетки с массой 0,44 г [Промышленная технология лекарств: учебник для вузов: в 2 т. / В.И. Чуешов [и др.]; под ред. В.И. Чуешова. - Харьков: МТК-Книга; Изд-во НФАИ, 2002. - 2 т.].

Недостатком выбранного за прототип антиоксидантного средства являются: сложность и многостадийность технологического процесса, необходимость применения большого количества оборудования (грануляторы, таблеточные машины), использование вспомогательных веществ (лактозы, раствора ПВП, стеариновой кислоты, кальция стеарата). Кроме того, дикорастущие виды черемши - лук медвежий ((Allium ursinum L.) и лук победный (Allium victoriale L.) - имеют более богатый химический состав по сравнению с культивируемым чесноком посевным (Allium sativum L.). Надземная часть черемши содержит практически весь комплекс известных веществ антиоксидантного действия как гидрофильного, так и липофильного характера (серосодержащие соединения, каротиноиды, аскорбиновую кислоту, флавоноиды, ненасыщенные жирные кислоты и т.д.) [Rabinkov, A. Miron, T. Mirelman, D. Wilchek, M. Glozman, S. Yavin, E. and Weiner, L. S-allylmercaptoglutathione: the reaction product of allicin with glutathione possesses SH-modifying and antioxidant properties / Rabinkov, A. Miron, T. Mirelman, D. Wilchek, M. Glozman, S. Yavin, E. and Weiner, L. // Biochim. Biophys. Acta - 2000. - №1499 - C. 144-153].

Вместе с тем, перечень антиоксидантов растительного происхождения ограничен. Следовательно, расширение ассортимента препаратов антиоксидантного действия является актуальной задачей.

Технической задачей предлагаемого изобретения является создание на основе высушенной надземной части свежесобранной черемши (лука медвежьего - Allium ursinum L. или лука победного- Allium victoriale L., семейство луковые - Alliceae) лекарственного средства с выраженным антиоксидантным действием.

Технический результат заключается в том, что средство на основе лука победного или лука медвежьего обладает более выраженными антиоксидантными свойствами за счет сохранения в средстве всего комплекса биологически активных веществ, также обладает повышенным сроком хранения.

Поставленная задача достигается тем, что для получения средства надземную часть черемши (лука победного или лука медвежьего), собранную вначале вегетации, очищают, промывают, высушивают при температуре 50-52°C до остаточной влажности до 8%, измельчают до 2-3 мм.

В литературе отсутствуют данные о возможности применения высушенной надземной части свежесобранной черемши, собранную вначале вегетации (лука медвежьего - Allium ursinum L. или лука победного - Allium victorale L., семейство луковые - Alliaceae) в качестве антиоксидантного средства. Высушенную надземную часть свежесобранной черемши (лука медвежьего - Allium ursinum L. или лука победного - Allium victoriale L., семейство луковые - Alliaceae) можно использовать в медицинской практике для лечения и профилактики заболеваний, сопровождающихся окислительным стрессом (онкологические, сердечно-сосудистые и др.) [Бабак, О.Я. Окислительный стресс, воспаление и эндотелиальная дисфункция - ключевые звенья патогенеза сердечно-сосудистой патологии при прогрессирующих заболеваниях почек / О.Я. Бабак, И.И. Топчий // Укр. терапевт. журн. - 2004. - №4. - С. 10-17].

Данные свойства явным образом не вытекают для специалиста из уровня техники. Таким образом, предлагаемые решения соответствуют критериям изобретения - «новизна», «изобретательский уровень», «промышленно применимо».

Применение высушенной надземной части черемши позволяет получить средство с более высокой антиоксидантной активностью.

Пример 1 конкретного выполнения способа

1000 г свежесобранной надземной части лука медвежьего, собранной вначале фазы вегетации, очищают, промывают, высушивают при температуре 50-52°C до остаточной влажности около 8%, измельчают до 2-3 мм. Выход 24%.

Пример 2 конкретного выполнения способа

1000 г свежесобранной надземной части лука победного, собранной вначале фазы вегетации, очищают, промывают, высушивают при температуре 50-52°C до остаточной влажности около 8%, измельчают до 2-3 мм. Выход 25%.

Результаты анализа химического состава заявляемого антиоксидантного средства представлены в таблицах 1, 2.

Оценку биологических свойств целевого продукта осуществляли по тестам «острая токсичность», «антиоксидантная активность».

Изучение острой токсичности проведено методом Кербера [Доклинические исследования лекарственных средств: методич. рекомендации. / Под ред. А.В. Стефанова. Киев: Авиценна, 2001, 528 с.] путем перорального однократного введения целевого продукта крысам линии Вистар массой 180-220 г в дозах 10, 100, 1000, 5000 мг/кг (количество животных в каждой серии опытов составляло 6). Установлено, что исследуемый целевой продукт имеет LD50>5000 мг/кг, что доказывает его практическую нетоксичность.

При изучении антиоксидантных свойств целевого продукта изучали: свежесобранную высушенную надземную часть лука медвежьего, свежесобранную высушенную надземную часть, таблетки «Алисат». Исследование антиоксидантной активности заявляемого средства проведено с использованием двух различных методов. При определении антиоксидантной активности (метод 1) и суммы антиоксидантов в целевом продукте (метод 2) использовали:

1. Метод аскорбатзависимого пероксидного окисления липидов, основанный на способности основных биологически активных соединений черемши снижать концентрацию малонового диальдегида (МДА) в реакционной смеси [С.Г. Благородов, А.П. Шепелев, Н.А. Дмитриевская и др. Хим.-фарм. журнал. - 1987. - №3. - С. 292-294].

2. Метод, основанный на измерении содержания водорастворимых антиоксидантов амперометрическим методом [Агаджанян, B.C. Целенаправленный поиск индивидуальных веществ и суммарных композиций, характеризующихся антирадикальной активностью в отношении супероксидного анион-радикала: дис… канд. фармацевт. наук. 15.00.02 / B.C. Агаджанян. - Пятигорск, 2009. - 24 с.].

Метод аскорбатзависимого пероксидного окисления липидов (ПОЛ) основан на способности липидов к окислению кислородом воздуха в разбавленных водных растворах остатков олеиновой кислоты в составе Твина-80 в присутствии кофакторов окисления - ионов железа (II) и аскорбиновой кислоты. Антиоксидантную активность данным методом оценивали по степени уменьшения концентрации продукта окисления - комплекса малонового диальдегида (МДА) с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) (метод in vitro) [Определение антиокислительной активности химических соединений. / Благородов С.Г., Шепелев А.П., Дмитриева Н.А. и др. // Хим.-фарм. журн., 1987. - Т. XXI, №3. - С. 292-294]. Степень снижения накопления МДА рассчитывали в процентах от контрольного опыта.

Результаты эксперимента представлены в примерах 1-3.

Пример 1

1,0 г сырья (точная навеска) лука медвежьего (образец черемши 1) анализировали по методике, приведенной выше. Результаты эксперимента, представленные в таблице 3, показали, что наибольший процент снижения концентрации малонового альдегида составил 75,0%.

Пример 2

1,0 г сырья (точная навеска) лука победного (образец черемши 2) анализировали по методике, приведенной выше. Результаты эксперимента, представленные в таблице 3, показали, что наибольший процент снижения концентрации малонового альдегида составил 74,8%.

Пример 3

1,46 г (точная навеска) измельченных таблеток Алисат (содержание порошка чеснока по 0,3 г в 1 таблетке) анализировали по методике, приведенной выше. Результаты эксперимента, представленные в таблице 3, показали, что наибольший процент снижения концентрации малонового альдегида составил 43,5%.

Исследования по измерению содержания водорастворимых антиоксидантов проводили амперометрическим методом («Методика определения содержания антиоксидантов в напитках и пищевых продуктах, биологически активных добавках, экстрактах лекарственных растений амперометрическим методом») на аминокислотном анализаторе Цвет Яуза 01-АА. Методика разработана ОАО НПО «Химавтоматика» и аттестована ФГУП «Всероссийский научно-исследовательский институт метрологической службы» в соответствии с ГОСТ Р 8.563-96, ГОСТ Р ИСО 5725-2002, свидетельство об аттестации МВИ №31-07 от 4 мая 2007 г.

Количественное определение антиоксидантов устанавливали путем измерения силы электрического тока, возникающего при окислении молекул антиоксиданта на поверхности рабочего электрода при определенном значении потенциала, который после усиления преобразуется в цифровой сигнал. Данный сигнал регистрировали в виде дифференциальных выходных кривых. Производили расчет площадей пиков дифференциальных кривых как для проб анализируемых объектов (образец черемши 1, образец черемши 2, таблеток Алисат), так и для растворов стандартного соединения (кверцетина). На основании площадей полученных пиков рассчитывали суммарную концентрацию антиоксидантов. Результаты эксперимента представлены в примерах 4-6.

Пример 4

1,0 г сырья (точная навеска) лука медвежьего с влажностью около 8% анализировали по методике, приведенной выше. Результаты эксперимента показали, что суммарная концентрация антиоксидантов в образце черемши составила 70,8±3,5 мг/г в пересчете на кверцетин.

Пример 5

1,0 г сырья (точная навеска) лука победного с влажностью около 8% анализировали по методике, приведенной выше. Результаты показали, что суммарная концентрация антиоксидантов в образце черемши составила 68,5±3,1 мг/г в пересчете на кверцетин.

Пример 6

1,46 г (точная навеска) измельченных таблеток Алисат (содержание порошка чеснока по 0,3 г в 1 таблетке) анализировали по методике, приведенной выше. Результаты показали, что суммарная концентрация антиоксидантов в образце таблеток составила 52,7±1,8 мг/г в пересчете на кверцетин.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к антиоксидантному средству (варианты). Средство, обладающее антиоксидантной активностью, характеризуется тем, что оно получено путем очистки свежесобранной надземной части лука медвежьего, собранной вначале фазы вегетации, промывки, высушивания, затем измельчения, при определенных условиях (варианты). Вышеописанное средство обладает выраженным антиоксидантным действием. 2 н. п. ф-лы, 3 табл., 6 пр.

1. Средство, обладающее антиоксидантной активностью, характеризующееся тем, что оно получено путем очистки свежесобранной надземной части лука медвежьего, собранной вначале фазы вегетации, промывки, высушивания при температуре 50-52°C до остаточной влажности около 8%, затем измельчения до 2-3 мм, при этом средство содержит аллиин 1,52%, органические сульфиды 0,64%.

2. Средство, обладающее антиоксидантной активностью, характеризующееся тем, что оно получено путем очистки свежесобранной надземной части лука победного, собранной вначале фазы вегетации, промывки, высушивания при температуре 50-52°C до остаточной влажности около 8%, затем измельчения до 2-3 мм, при этом средство содержит аллиин 1,37%, органические сульфиды 0,48%.