МНОЖЕСТВЕННАЯ ЭМУЛЬСИЯ Российский патент 2017 года по МПК A61K8/06 A61K8/19 A61K8/37 A61K8/89 A61Q19/00 A61K31/7052 A61K33/00 A61K31/215 A61P29/00 

Изобретение относится к множественной эмульсии в соответствии с ограничительной частью формулы изобретения по п. 1, применению множественной эмульсии для приготовления лекарственных препаратов, медицинских продуктов или косметических средств в соответствии с п. 17, а также лекарственному средству, содержащему множественную эмульсию в соответствии с п. 19 или 21.

Множественные "вода - в масле - в воде" эмульсии (W/O/W-эмульсия) представляют собой сложную систему, в которой выявляется внешняя водная фаза и диспергированная в ней эмульсия вода-в-масле, таким образом, что имеется и эмульсия вода-в-масле и эмульсия масло-в-воде.

На основании связанных с этим свойств множественные эмульсии являются подходящими для применения в фармацевтических или косметических активных веществах, где во внутренней водной фазе могут быть заключены особенно чувствительные активные вещества. Таким образом, с одной стороны, активные вещества могут быть защищены от внешнего влияния и разрушения, а с другой стороны, могут высвобождаться с задержкой.

В современном уровне техники описаны различные множественные эмульсии. Основная проблема таких множественных эмульсий, однако, заключается в том, что они зачастую являются нестабильными из-за того, что на границе раздела между водной фазой и масляной фазой с течением времени обнаруживается сильно измененная вязкость, разделение или инверсия фаз, или потеря множественности.

На стабильность множественной эмульсии влияют множественные параметры. Шмидт с соавторами (Т. Schmidts, D. Dobler, P. Schlupp, С.Nissing, Н. Garn, F. Runkel, international Journal of Pharmaceutics 398 (2010) 107-113) описал, например, влияние состава внутренней водной фазы, растворенной в масляной фазе, на стабильность множественной эмульсии. При этом показано, что выбор эмулятора имеет большое влияние на стабильность, а также природа электролитов проявляет отчетливый эффект. При изменении состава множественной эмульсии чаще всего не оценивают, каким образом это повлияет на такие свойства множественной эмульсии, как стабильность, вязкость, величина капель и т.д. На этом основании множественные эмульсии, чьи компоненты и состав предусмотрены для определенного применения, воспроизводят по всем правилам без изменения или замены компонентов для другого. Это особенно имеет значение тогда, когда затронуты основные компоненты, такие как эмульгаторы, электролиты и главные составные компоненты разных фаз

Для множественных эмульсий для нанесения чувствительных активных веществ особенно значима стабильность композиции. Активное вещество может быть эффективно защищено от вредного внешнего влияния только тогда, когда оно заключено в самой внутренней фазе, и это положение фазы не может быть изменено при разделении фаз или инвертировании фаз.

Помимо стабильности фаз эмульсии, которая представляет основную предпосылку защиты инкапсулированных во внутренней водной фазе W₂ активных веществ, имеют значение другие свойства, такие, как, например, диффузионные свойства. Таким образом, инкапсулированное активное вещество может, например, дегенерировать даже тогда, когда оно не выходит само из внутренней фазы, но „вредное вещество" снаружи проникает в эту фазу.

При местном нанесении некоторые активные вещества могут быть повреждены естественными компонентами кожи. Это справедливо, например, для веществ, которые могут быть разрушены путем энзиматического переваривания с помощью ферментов, наодящихся на коже. К ним относятся, в особенности, пептиды и соединения на основе нуклеиновых кислот, такие как поли- и олигонуклеотиды, которые можно преждевременно разрушить с помощью повсеместных нуклеаз или пептидаз. В последние годы получило значение применение таких соединений для лечения заболеваний. Антисмысловые олигонуклеотиды, а также рибозимы, RNAi, siRNA и, в особенности, ДНКзимы, можно применить, например, в целях построения утерянных беллков, трансляция мРНК которых была подавлена. Под ДНКзимами здесь понимают одноцепочечные молекулы ДНК, которые проявляют энзиматическую активность и, в противоположность рибозимам, не обнаруживаются в природе. Проблемой является то, что указанные нуклеотидные активные вещества чаще всего очень чувствительны к условиям окружающей среды, и они не могут достичь своего места действия без помощи соответствующих переносчиков, без которых они деградируют.

В данной области техники на настоящий момент не известно никаких множественных W/O/W-эмульсий, которые проявляют достаточную временную стабильность, поскольку невозможно обеспечить стабильной эффективной защиты такого рода чувствительному активному веществу.

Кроме того, для существующих на данный момент W/O/W-эмульсий проблемой является то, что они не подходят для приготовления в крупных масшатбах. Часто сложно даже добиться защиты W/O/W-эмульсии от поражения микробами. Поэтому они очень ограничено пригодны для применения вышеуказаных активных веществ, если вообще пригодны.

Задачей изобретения поэтому является преодоление этих и дальнейших недостатков области техники, и приготовление по инструкции множественной эмульсии для нанесения активных веществ. Множественные эмульсии должны в особенности демонстрировать высокую стабильность, эффективную защиту активных веществ от внешних влияний, и одновременно должна присутствовать защита эмульсии от поражения микроорганизмами. Помимо этого множественная эмульсия должна просто и дешево изготавливаться в крупных масштабах.

Основные характеристики настоящего изобретения приведены в основных частях пунктов формулы изобретения 1, 17, 19 и 21. Варианты осуществления изобретения являются предметом соответствующих дополнительных пунктов формулы изобретения.

В множественной эмульсии для нанесения, по меньшей мере, фармацевтических или косметических активных веществ, содержащей внешнюю водную фазу W₁, масляную фазу О, диспергированную во внешней водной фазе W₁, а также внутреннюю водную фазу W₂, диспергированную в масляной фазе О, где во внутренней водной фазе W₂ по меньшей мере один электролит выбран из группы галогенидов и сульфатов щелочных и щелочноземельных металлов, а также предусмотрено по меньшей мере одно гидрофильное активное вещество, по настоящему изобретению предусматривается, что:

- внешняя водная фаза W₁ содержит гидрофильный эмульгатор, представляющий собой полимер этиленоксида и пропиленоксида, а масляная фаза О образована триацилглицеридами, и липофильный эмульгатор выбран из группы силиконов.

Множественная эмульсия по настоящему изобретению на осовании своего специфического состава обладает особенно высокой стабильностью. Это является действительным и для стабильности при приготовлении в крупных масштабах, а также применительно к долгосрочной стабильности.

Дальнейшим преимуществом является простой состав множественных эмульсий по настоящему изобретению, что делает несложным и дешевым приготовление из небольшого количества различных компонентов. К тому же все составные части эмульсий по настоящему изоберетению обладают, если таковая имеется, низкой способностью к раздражению, и заслуживают доверия в сфере применения на коже. Кроме этого все компоненты без проблем имеются в наличии с очень высоким качеством очистки.

Помимо этого в силу своего особенного состава множественные эмульсии по настоящему изобретению проявляют особенно высокую защиту внутренней водной фазы W₂, в которой заключены чувствительные активные вещества.

В результате специфической комбинации предусмотренных по настоящему изобретению компонентов, в особенности в силу комбинации предусмотренных эмульгаторов вместе с масляной фазой из триацилглицеридов, может быть изготовлена множественная W/O/W-эмульсия, которая проявляет более высокую сравнительную толерантность против различных дополнительных добавок. Это создает свободу действий для желательных в некоторых случаях модификаций и/или тонких настроек. Особенно большим преимуществом в этом отношении является то, что можно добавлять различные консерванты для защиты от поражения микроорганизмами без вреда для стабильности множественной эмульсии.

В одном важном воплощении настоящее изобретения гидрофильный эмульгатор представляет собой полоксамер. Полоксамер является блокполимером, состоящим из этиленоксида и пропиленоксида. Особенно предпочтительно, если в качестве эмульгатора добавляют полоксамер 407.

В другом важном воплощении настоящего изобретения предусмотрено, что липофильным эмульгатором является линейный диметикон с полиэфирными и полиэтеновыми группами. Особенно предпочтительным является диметикон с полиэтеновыми группами, такими как полиэтиленгликолевые (PEG) и/или полипропиленгликолевые группы (PPG), а также алкилгруппами, а также линейный диметикон. Особенно хорошие результаты были достигнуты тогда, когда липофильным эмульгатором являлся цетил PEG/PPG-10/1 диметикон (Handelsname: Degussa ABIL® 90 ЕМ). При добавлении указанного диметикона в качестве липофильного эмульгатора можно хорошо регулировать размер капель первичной W/O эмульсии, и значительно улучшить стабильность эмульсии. С другой стороны с помощью добавления указанного диметикона в качестве липофильного эмульгатора можно хорошо регулировать размер капель множественной W/O/W эмульсии и стабильность эмульсии. Кроме того, размер капель таких эмульсий не имеет влияния на долгосрочную стабильность. Также можно достичь большой устойчивости против нужных добавок.

Дальнейшее может быть преимуществом, когда предусмотренные по настоящему изобретению триацилглицериды представляют собой сложный эфир насыщенных жирных кислот, предпочтительно сложный эфир насыщенных жирных кислот со средней длиной цепи. Предпочтительными являются сложные эфиры жирных кислот с 4-20 углеродными атомами, и прежде всего, сложные эфиры жирных кислот с 6-14 углеродными атомами.

Особенно стабильными могут быть W/O/W-эмульсии с триглицеридами, содержащими следующие смеси цепочек с разными размерами:

1) смесь с разными длинами цепей (газовая хроматография):

С-фракционное распределение по молекулярному весу С10 20,0-50,0%

С-фракционное распределение по молекулярному весу С12 <=3,0%

С-фракционное распределение по молекулярному весу С14 <=1,0%

С-фракционное распределение по молекулярному весу С6 <=2,0%

С-фракционное распределение по молекулярному весу С8 50,0-80,0%

2) смесь с разными длинами цепей (газовая хроматография):

Капроновая кислота С6 <=2,0% 0,1%

Каприловая кислота С8 50,0-80,0% 55,7%

Каприновая кислота С10 20,0-50,0% 43,3%

Лауриновая кислота С 12 <=3,0% 0,6%

Миристиновая кислота С14 <=1,0% 0,0%

В одном предпочтительном воплощении настоящего изобретения электролит представляет собой NaCl, MgSO₄ или смесь NaCl и MgSO₄.

В другом воплощении настоящего изобретения гидрофильным активным веществом является MgSO₄. MgSO₄, предпочтительно, оказывает влияние на внешний вид кожи. Множественная эмульсия по настоящему изобретению с этим активным веществом подходит, например, для поддержания ухода за кожей и лечения нейродермита.

Помимо этого в другом важном воплощении предусмотрено, что гидрофильным активным веществом является олигонуклеотид. В роли такого олигонуклеотида может, например, выступать ДНКзим, в особенности 10-23 ДНКзим, содержащий каталитический домен с последовательностью SEQ ID No. 149 ggctagctacaacga. Каталитический домен справа и слева фланкирован доменами для связи с субстратом. Они могут, предпочтительно, подходить к последовательности мРНК какого-либо фактора, который является участником пути трансдукции сигнала хронического воспалительного заболевания. Возможно, например, но не исчерпывающе, что правый и левый домены для связывания с субстратом могут связываться с мРНК, которая кодирует следующие факторы: Src-киназу, Тес-киназу, RIk, Itk, RIBP (Rlk/itk-связывающий белок), PLCg (фосфолипаза Cy1), МАР-киназу, ERK, JNK, P38, МКК, Rac2, GADD45, SOCS, CIS, JAK, NF-AT взаимодействующий белок.

ДНКзим, который применяют, предпочтительно, в качестве активного вещества в множественных эмульсиях по настоящему изобретению, охватывает общую последовательность SEQ ID. NO 150: nnnnnnnnnggctagctacaacgannnnnnnnn. В этом случае правый и левый домены для связывания с субстратом, в предпочтительном примере воплощения, составляют, по меньшей мере, девять оснований в длину. Само собой разумеется, что могут существовать более короткие или более длинные последовательности.

Особенно предпочтительными являются домены для связывания с субстратом, которые связывают мРНК белков GATA-3 и T-bet. Ингибирования трансляции этих белков приводит к подавлению ответа Т2-клеток и таким образом к подавлению воспалительного заболевания.

Особенно предпочтительно, чтобы гидрофильное активное вещество являлось олигонуклеотидом с последовательностью в соответствии с последовательностями SEQ ID No: 1 - SEQ ID No: 148, или в соответствии с указанной выше SEQ ID No: 150. Допустимо, само собой разумеется, одновременное прменение большего количества указанных олигонуклеотидов. Каталитические домены ДНКзима обозначены маленькими буквами, домены для связывания с субстратом обозначены большими буквами. Последовательности SEQ ID No. 1 - SEQ ID No. 71 связывают мРНК GATA-3. Последовательности SEQ ID No. 72 - SEQ ID No. 148 связывают мРНК Т-bet.

Особенно предпочтительно, когда в качестве гидрофильного активного вещества применяют олигонуклеотид с последовательностью SEQ ID No: 40, SEQ ID No: 139 или SEQ ID No: 140.

Для того, чтобы обеспечить защиту эмульсии от поражения микрооргнизмами, множественная эмульсия может содержать один или более чем один консервант. Предпочтительными консервантами являются сорбат калия, сорбат калия с лимонной кислотой, сорбиновая кислота, бензойная кислота, многоатомные спирты, предпочтительно такие, как пентиленгликоль, бутиленгликоль и/или пропилпарабен, такой как феноксиэтанол. Наличие консерванта, предпочтительно, предусмотрено во внешней водной фазе W₁, и/или во внутренней водной фазе W₂, предпочтительно, в соотношении от 0 до 20 мас.% относительно воды.

В важном воплощении, кроме того, указано, что размер капель диспергированной масляной фазы от 1 Mm до 100 pm, предпочтительно от 5 pm до 60 pm, и особенно предпочтительно от 10 pm до 30 pm.

В зависимости от применения может быть предпочтительно, когда масляная фаза содержит насыщенный углеводород. Предпочтительным насыщенным углеводородом является парафин, в особенности густой парафин.

В особенности предпочтительно, когда эмульсии содержат гидрофильный эмульгатор во внешней водной фазе, в соотношении от 0,1 до 5 мас.%, предпочтительно от 0,3 до 3 мас.%, особенно предпочтительно от 0,5 до 1,5 мас.%, и наиболее предпочтительно в соотношении 0,8 мас.%.

Кроме того, стабильность множественных эмульсий особенно высока, когда липофильный эмульгатор, относящийся к W/O-первичной эмульсии, состоящей из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, находится в соотношении от 0,1 до 6 мас.%, предпочтительно от 0,5 до 4 мас.%, особенно предпочтительно от 1 до 3 мас.%, и в особенности предпочтительно в соотношении от 3 мас.%.

Относительно триглицеридов есть преимущество, когда триглицериды, относящиеся к W/O-первичной эмульсии, состоящей из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, содержатся в соотношении от 5 до 30 мас.%, предпочтительно от 0 до 25 мас.%, особенно предпочтительно от 15 до 20 мас.%, и наиболее предпочтительно в соотношении от 17 мас.%.

В предпочтительном воплощении, относящемся к W/O первичной эмульсии, состоящей из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, электролит содержится в соотношении от 0,1 до 3 мас.%, особенно предпочтительно от 0,3 до 1,5 мас.%, и наиболее предпочтительно в соотношении от 0,7 мас.%. В этом случае можно удобно оказать влияние на определение количества электролитов в зависимости от количества активных веществ.

Гидрофильное активное вещество находится в многочисленной эмульсии отноительно общей массы в соотношении от 0,01 до 10 мас.%, особенно предпочтительно от 0,1 до 5, и наиболее предпочтительно в соотношении от 0,4 мас.%.

В этом смысле предпочтительной является множественная эмульсия по настоящему изобретению, где:

- гидрофильный эмульгатор во внутренней водной фазе содержится в соотношении от 0,1 до 5 мас.%, и

- липофильный эмульгатор содержится в W/O-первичной эмульсии, состоящей из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, в соотношении от 0,1 до 6 мас.%, и

- триглицериды содержатся в W/O-первичной эмульсии в соотношении от 5 до 30 мас.%, и

- электролит содержится в W/O-первичной эмульсии, состоящей из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, в соотношении от 0,1 до 3 мас.%, и

- гидрофильное активное вещество, содержащееся по отношению к общей массе множественной эмульсии, в соотношении от 0,01 до 10 мас.%, и

- во внешней водной фазе W₁, и/или внутренней водной фазе W₂ содержится консервант в соотношении от 0 до 20 мас.%.

При этом, прежде всего высокая стабильность и эффективная защита активных веществ достигается в тех множественных эмульсиях по настоящему изобретению, в которых в первичной эмульсии содержатся

3 мас.% липофильного эмульгатора, в особенности Abil ЕМ 90;

17 мас.% масла, в особенности триглицеридов со средней длиной цепи;

0,7 мас.% электролита, в о обенности MgSO₄⋅7Н₂О;

Довести до 100 мас.% водой,

где множественная эмульсия содержит

80 мас.% W/O эмульсии;

0,8 мас.% гидрофильного эмульгатора, в особенности полоксамера

Довести до 100 мас.% водой,

и где готовая множественная W/O/W-эмульсия содержит 0,4 мас.% гидрофильного активного вещества, в особенности натриевой соли указанного выше ДНКзима.

Кроме этого настоящее изобретение относится к применению множественных эмульсий по настоящему изобретению для приготовления лекарственных средств, медицинской продукции или косметических продуктов. При этом особенно предпочтительо, когда множественную эмульсию применяют в качестве переносчика активных веществ. При этом их можно продавать в качестве фармацевтического или косметического активного вещества. Таким образом, можно изготовить такие лекарственные средства, которые подходят, являются высокочувствительными и высокоспецифическими активными веществами, например, для местного применения или выпускаются в какой-либо другой пригодной форме. Разработанные таким образом лекарственные средства особенно хорошо подходят для лечения заболеваний, которые объясняются нарушением функции очень специфических молекулярно-биологических факторов, например GATA-3 или других, указанных выше, факторов.

Далее относится настоящее изобретение к лекарственному средству, содержащему множественную эмульсию по настоящему изобретению для местного нанесения активных веществ, где особенно предпочительным является, чтобы множественная эмульсия представляла собой носитель активных веществ. В предпочтительном воплощении ее готовят как лекарственное средство для лечения воспалительного заболевания.

Другие характеристики, подробности и преимущества настоящего изобретения вытекают из формулировки формулы изобретения, а также последующего описания примеров воплощения и рисунков.

Здесь продемонстрированы следующие рисунки и последовательности:

SEQ ID NO: 1 до SEQ ID NO: 148 представляют собой примеры воплощений 10-23 ДНКзима, связывающегося с GATA-3 или T-bet;

SEQ ID NO: 149 представляет собой каталитический домен 10-23 ДНКзима;

SEQ ID NO: 150 представляет собой ДНКзим, содержащий каталитический домен 10-23 ДНКзима;

На фиг. 1 показаны данные измерений проверки функции защиты эмульсии по настоящему изобретению.

На фиг. 2 изображена внутренняя структура множественных сравниваемых эмульсий.

На фиг. 3 показана внутренняя структура множественной эмульсии из основного рецепта WOW_1 (состав примера воплощения по п.2).

Примеры воплощений:

В следующих представленных примерах воплощений, если не указано другое, применяли следующие ингредиенты:

1) Общие способы изготовления

Описанные ниже эмульсии изготавливались с помощью следующих общих способов приготовления:

Сначала готовили три фазы А, В и С. Для изготовления фазы А смешивали предусмотренные для внутренней водной фазы W₂ эмульсии компоненты, а именно, например, дистиллированную воду, сульфат магния гептагидрат, ДНКзим, сорбат калия и лимонную кислоту в количествах, указанных в нижеследующем перечне. Для приготовления фазы В смешивали предусмотренные для масляной фазы О эмульсии компоненты, а именно, например, триглицериды со средней длиной цепи и Abil ® ЕМ 90 в количествах, указанных в нижеследующем перечне. Для приготовления фазы С смешивали предусмотренные для внешней водной фазы С компоненты, а именно, например, дистиллированную воду, сорбат калия, лимонную кислоту и полоксамер 407 в количествах, указанных в нижеследующем перечне.

После этого фазу А и фазу В нагревали до, приблизительно, 60-70°С. Наконец, фазу А добавляли в фазу В и гомогенизировали приблизительно 3 мин. (Гомогенизатор: приблизительно 11500 об/мин), где создавали W/O-первичную эмульсию. W/O-первичную эмульсию охлаждали с помощью перемешивания при комнатной температуре (мешалка: приблизительно 500 об/мин), и наконец соединяли с фазой С. После добавления фазы С перемешивали настолько долго (мешалка: приблизительно 1200 об/мин) и/или гомогенизировали, пока не появлялась равномерная эмульсия (Длительность приблизительно 10 мин).

При помощи указанного способа приготовления изготавливали, например, множественные эмульсии, в которых:

- гидрофильный эмульгатор содержится в водной фазе W₁ в соотношении от 0,1 до 5 мас.%, и

- липофильный эмульгатор содержится в W/O-первичной эмульсии, состоящей из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, в соотношении от 0, 1 до 6 мас.%, и

- триглицерид содержится в W/O-первичной эмульсии в соотношении от 5 до 30 мас.%, и

- электролит содержится в W/O-первичной эмульсии, состоящей из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, в соотношении от 0,1 до 3 мас.%, и

- гидрофильное активное вещество содержится относительно общей массы множественной эмульсии, в соотношении от 0,01 до 10 мас.%, и

- в внешней водной фазе W₁ и/или внутренней водной фазе W₂ предусмотерно содержание консерванта в соотношении от 0 до 20 мас.%.

В особенности с помощью рецептов способов изготовления готовят:

рассчитанные относительно первичной эмульсии W/O:

3 мас.% липофильного эмульгатора, в особенности Abil ЕМ 90;

17 мас.% масла, в особенности триглицерида со средней длиной цепи;

0,7 мас.% электролита, в особенности MgSO₄ ⋅7H₂O;

Добавляют воду до 100 мас.%, где содержатся рассчитанные в отношении множественной эмульсии

80 мас.% W/O эмульсии;

0,8 мас.% гидрофильного эмульгатора, в особенности полоксамера;

и до 100 мас.% воды,

и где готовая множественная W/O/W-эмульсия содержит 0,4 мас.% гидрофильного активного вещества, в особенности натриевой соли указанного в пункте 4) примера воплощения ДНКзима.

В качестве примера указано приготовление следующих множественных эмульсий:

WOW_A1 (рассчитано на 100 г):

WOW_A2 (рассчитано на 12000 г):

В представленном воплощении настоящего изобретения электролитом и гидрофильным активным веществом является MgSO₄. В качестве липофильного эмульгатора применяли диметикон, а именно Abil ЕМ 90. Масло составляли триацилглицерид, а именно триглицерид с цепью средней длины. Гидрофильным эмульгатором являлся полимер этиленоксида и пропиленоксида, а именно полоксамер 407.

Базовый состав WOW_1 готовили согласно указанному выше общему способу изготовления.

Размер капель диспергированной масляной фазы множественной эмульсии WOW_1 составляет 30 мкм, вязкость -1,2 Па⋅с.

Измерения долговременной стабильности проводили в помещении в течение, например, 9 месяцев, в этом помещении эмульсия оставалась стабильной. Она не проявила никакого значительного изменения размера капель и вязкости.

3) Влияние состава на стабильность

3.1) Влияние липофильных эмульгаторов на стабильность W/O/W-эмульсии

Для исследования влияния липофильных эмульгаторов готовили множественную эмульсию WOW_1 по примеру воплощения 1), куда вместе с Abil 90 ЕМ добавляли моноолеат сорбитана в качестве еще одного липофильного эмульгатора первичной эмульсии.

Изменение липофильного эмульгатора приводило к дестабилизации W/O/W-эмульсии.

3.2) Дальнейшие модификации

Как показывают результаты исследований, только для эмульсий М1-М7 были показаны хорошие результаты. Для них было продемонстировано, что эмульсия по настоящему изобретению обладает высокой устойчивостью против различных добавок.

4) Защитное действие множественных эмульсий.

Для проверки защитного действия множественной эмульсии были преобразованы различные препараты, содержащие ДНКзим в качестве примера чувствительного активного вещества на основе нуклеотидов, и раствор нуклеаз.

Результаты исследования представлены в виде диаграммы на фиг. 1.

Проведение эксперимента:

20 мг соответствующих препаратов смешивали с 1 мл раствора ДНКазы I (присутствующие на коже ДНКазы). Через 1 мин смесь слегка встряхивали в течение 10 мин в термомиксере при температуре 99°С для того, чтобы остановить активность ДНКазы. Для вскрытия эмульсии смесь инкубировали в ультразвуковой мойке при 50°С в течение 10 мин. Смесь фильтровали через шприцевый фильтр 0,45 мм, и измеряли количество интактного активного вещества с помощью ВЭЖХ.

Все препараты содержали 0,4% ДНКзимов (натриевых солей). Препараты Rez. 1, 2 (столбцы 2 и 3) содержали ДНКзим во внутренней водной фазе W₂. У препарата Rez. 3 для сравнения ДНКзим добавляли во внутреннюю водную фазу W₂ (столбец 4) и во внешнюю водную фазу W₁, (столбец 5). В столбце 1 показаны результаты исследования с простым водным раствором ДНКзимов, а в столбце 6 показаны результаты исследования с субмикронной эмульсией.

В качестве ДНКзима применяли ДНКзим, который содержал одну из нижеуказанных последовательностей:

SEQ ID. NO 150: nnnnnnnnnggctagctacaacgannnnnnnnn. В ней правый и левый домены для связывания с субстратом в предпочтительном воплощении настоящего изобретения составляют по меньшей мере девять оснований.

Наиболее предпочтительно, чтобы в качестве гидрофильного активного вещества применяли олигонуклеотид с последовательностью SEQ ID No: 40, SEQ ID No: 139 или SEQ ID No: 140.

Помимо этого исследуемые препараты Rez. 1-3, а также субмикроэмульсии обладают следующим составом (WO=состав W/O-первичной эмульсии; WOW: состав множественной эмульсии):

На представленной на фиг. 1 диаграмме ясно видно, что множественные эмульсии, содержащие ДНКзим во внутренней водной фазе W₂, в зависимости от состава защищают от разрушения ДНКазами до 70% олигонуклеотидов (Столбцы 2-4). Если бы ДНКзим вступил в контакт с ДНКазами в виде водного раствора, это привело бы к 100% разрушению (столбец 1).

На основании результата, что защита присутствует, когда ДНКзим находится во внутренней водной фазе W₂ множественной эмульсии (включение активных веществ), ДНКзим внедряли во внешнюю водную фазу W₁, но это привело к 100% уничтожению, как и в случае субмикроэмульсии (сравните Столбец 5 и Столбец 6).

Включение может быть достигнуто только тогда, когда эмульсию, как описано в общей методике эксперимента, готовят двухстадийным способом, в этом случае на первом этапе готовили W/O-первичную эмульсию из компонентов масляной фазы вместе с относящимся к составу эмульгатором и водным раствором ДНКзима (W₂). В полученную таким образом W/O-первичную эмульсию на втором этапе при необходимости добавляли имеющиеся в наличии другие вспомогательные вещества и вторую (без ДНКзима) внешнюю водную фазу W₁, при этом формируется вода - в масле - в воде эмульсия.

5) Испытания по равномерному увеличению фасовки.

Для оценки способности равномерного увеличения эмульсии по настоящему изобретению, были представлены различные варианты базовой множественной эмульсии WOW 1 в различных масштабах:

Таким образом, указанные эмульсии исследовали на предмет их долгосрочной стабильности, и было установлено, что у тех эмульсий, в основе которых лежит базовый рецепт WOW_1, не наблюдается спада стабильности в течение всего эксперимента до 6 месяцев. Исследованные множественные эмульсии на основании базового рецепта все вместе проявляют очень хорошую долгосрочную стабильность.

В соответствии с рецептом для сравнения 1 не производят вообще никакой стабильной множественной эмульсии; рецепт для сравнения 2 проявляет стабильность только в течение нескольких недель.

6) Добавление различных консервантов в базовый рецепт эмульсии по настоящему изобретению

6.1) Влияние на стабильность эмульсии:

Для оценки стабильности эмульсии по настоящему изобретению при добавлении различных консервантов смешивали основной рецепт WOW_1, описанный в пункте 2), с различными консервантами. Здесь приведены соответствующие консерванты готовые для приготовления эмульсий в обоих водных фазах W₁ и W₂. При этом исследовали размер капель, вязкость и разделение фаз.

Следующие добавки применяли в качестве консервантов (с помощью нижеследующих приведенных процентных величин их описывали в виде мас.% на количество воды): сорбат калия, лимонная кислота, бутиленгликоль, бензойная кислота, пропиленовая кислота, сорбиновая кислота и глицерин, а именно:

- 0,14% сорбат калия в сочетании с 0,07% лимонной кислотой;

- 0,2% сорбат калия в сочетании с 0,1% лимонной кислотой;

- 10% бутиленгликоль;

- 11% бутиленгликоль в сочетании с 3% глицерином;

- 0,05% бензойная кислота;

- 20% пропиленгликоль;

- 0,1% сорбиновая кислота в сочетании с 3% глицерином; а также

- 0,12% сорбиновая кислота в сочетании с 3% глицерином.

Как показывает исследование, можно применять различные консерванты и смеси консервантов без отрицательного влияния на стабильность множественной эмульсии. Это показывает, что эмульсия по настоящему изобретению с помощью различных консервантов или смесей консервантов может защищать от поражения микроорганизмами без отрицательного влияния на стабильность эмульсии.

Базовый рецепт WOW_1 с различными консервантами:

6.2) Микробиологические испытания

Для оценки действия консервантов следует провести микробиологические испытания, например, представленных в пункте 7.1) множественных эмульсий В, С, Н и I. при испытаниях применяли стандартный способ, который проводили согласно Европейской Фармакопеи (Eur. Ph.; Pharmacopoea Europaea). При этом для всех эмульсий получили очень хорошие результаты. Также это показывает, что множественные эмульсии по настоящему изобретению с помощью добавления консервантов могут эффективно защищать от поражения микроорганизмами.

7) Внутренняя структура множественной эмульсии по настоящему изобретению.

На фиг. 2 и 3 представлены фото когерентной антистоксовой спектроскопии комбинационного рассеяния (англ. Coherent anti-Stokes Raman scattering, CARS). Детектировали симметричные СН2 валентные колебания при 2845 см^-1 таким образом, что было отображено распределение липидов, отражающее соответствующий образец.

С одной стороны, исследовали описанный в пункте 2) пример воплощения базового рецепта WOW_1, и с другой стороны, множественную эмульсию другого рода, которая, в отличие от эмульсии по настоящему изобретению, содержала сорбитан моноолеат в качестве внутреннего липофильного эмульгатора и стеарат-20 в качестве внешнего гидрофильного эмульгатора, а также масляную фазу из парафина и лецитина.

На основе снимков CARS очевидно, что полученная на основании базового рецепта WOW_1 множественная эмульсия проявляет существенно более гомогенную внутреннюю структуру с множественными мелкими распределенными внутренними водными каплями (фиг. 3) относительно сравниваемой эмульсии с сорбитаном моноолеатом в качестве внутреннего эмульгатора и стеаратом-20 в качестве внешнего эмульгатора, парафином и лецитином в качестве масляной фазы (фиг. 2). Эта улучшенная внутренняя структура базового рецепта, лежащая в основе множественных эмульсий по настоящему изобретению, производит впечатление отвечающей за чрезвычайную стабильность и защиту эмульсий по настоящему изобретению. Этот эффект в значительной степени вызван липофильным эмульгатором цетил PEG/PPG-10/1 диметиконом. Кроме того, предпочтительная гомогенная структура производит впечатление отвечающей за то, что с помощью эмульсии по настоящему изобретению во внутреннюю водную фазу W₂ можно внедрить большие количества активных веществ, в особенности большие количества ДНКзимов.

8) Степень обнаружения ДНКзимов

На основании состава базового рецепта WOW_1, описанного в пункте 2 примера воплощения, можно приготовить в качестве примера два следующих примера воплощений V1 и V2 эмульсий по настоящему изобретению. При исследовании количества ДНКзимов в приготовленных эмульсиях с помощью ВЭЖХ пришли к следующим результатам.

Состав исследуемой эмульсии V1.

Состав базового рецепта WOW_01, а также дополнительно

- во внутренней водной фазе W₂: 0,4% ДНКзимов (натриевой соли), сорбат калия*/лимонная кислота** в качестве консерванта, и

- во внешней водной фазе W₁ сорбат калия*/лимонная кислота** в качестве консерванта.

* количество сорбата калия: 14 мас.% в перерасчете на количество воды

** количество лимонной кислоты: 0,07 мас.% в перерасчете на количество воды

Может быть установлена степень обнаружения активного вещества (ДНКзима) (количество активного вещества измеряют путем ВЭЖХ) на 96,67+/-2,89%.

Состав исследуемой эмульсии V2.

Состав базового рецепта WOW_01, а также дополнительно

- во внутренней водной фазе W₂: 0,4% ДНКзима (натриевая соль), сорбат калия*/ лимонная кислота**/глицерин*** в качестве консерванта, и

- во внешней водной фазе W₁ собат калия*/лимонная кислота**/глицерин*** в качестве консерванта.

* количество сорбата калия: 14 мас.% в пересчете на количество воды

** количество лимонной кислоты: 0,07 мас.% в пересчете на количество воды

*** количество глицерина: 3 мас.% в пересчете на количество воды

Степень обнаружения для активного вещества (ДНКзима) может быть установлена (количество активного вещества измеряют с помощью ВЭЖХ) на 102,00+/-6,10%.

Изобретение не ограничивается описанными воплощениями и может быть разносторонне изменено.

Таким образом, в зависимости от цели применения, например, возможно, чтобы множественные эмульсии по настоящему изобретению содержали дополнительные ингредиенты, предусмотренные для улучшения свойств по увлажнению кожи, консистенции, вязкости и/или проникновения активных веществ.

Сюда относятся - в том случае, если они не запланированы как активные вещества - например, влагоудерживающие материалы, увлажнители и минеральные материалы, такие как глицерин, мочевина, аллантоин, инозитол, сахар, аминокислоты, лактат натрия, водорастворимые соли магния, натрия или калия, которые содержатся, преимущественно, в соотношении 0,1-8 мас.% и особенно предпочтительно в соотношении 3 мас.% в перерасчете на множественную эмульсию, витамины, такие как, например, ретинол, тиамин, аскорбиновая кислота, кальциферол, рибофлавин, токоферол, кобаламин пантотеновая кислота, биотин, пиридоксин, нацин и/или фолиевая кислота, содержащиеся, предпочтительно, в соотношении 0,01-5 мас.% в пересчете на множественную эмульсию, увлажняющие натуральные масла, такие как вечерней примулы и/или масло авокадо, а также парафиновое масло для включения само по себе или в смеси с триглицеридами со средней длиной цепи, загустителем, таким как карбомер, производные целлюлозы, ксантан, полимеры и/или полиэтиленгликоль.

Материалы для улучшения проникновения предпочтительно содержатся в масляной фазе. К ним относятся: лецитин, который предпочтительно содержится в соотношении 0,1-3 мас.% в расчете на множественную эмульсию, и/или сложные эфиры жирных кислот и олеиновой кислоты, предпочтительно децилолеат или олеилолеат, при этом предпочтительно соотношение 0,1-5 мас.% в перерасчете на множественную эмульсию, один или более чем один одно или многовалентный спирт, в особенности пропиленгликоль, содержащийся, предпочтительно, в соотношении 0,1-20% в перерасчете на множественную эмульсию.

Множественная эмульсия вместе с предусмотренным по настоящему изобретению активным веществом может содержать дополнительные активные вещества. Они могут не обязательно все находиться во внутренней водой фазе W₂, а могут также содержаться в масляной фазе О или внешней водной фазе W₁. Таким образом, кроме предусмотренного настоящим изобретением гидрофильного активного вещества могут содержаться другие липофильные активные вещества и/или дополнительные гидрофильные активные вещества.

Все без исключения пункты, описание и исходящие из расчетов отличительные черты и преимущества, включая конструктивные частности, пространственные расположения и этапы обработки, могут рассматриваться как различные комбинации по настоящему изобретению.

Изобретение относится к фармацевтической и косметической промышленности и представляет собой множественную эмульсию для нанесения по меньшей мере одного фармацевтического или косметического активного вещества, которая включает внешнюю водную фазу W₁, масляную фазу О, диспергированную во внешней водной фазе, и диспергированную в масляной фазе О внутреннюю водную фазу W₂, где во внутренней водной фазе W₂ содержится по меньшей мере один электролит, выбранный из группы галогенидов и сульфатов щелочных и щелочноземельных металлов, и по меньшей мере одно гидрофильное активное вещество, где множественная эмульсия отличается тем, что внешняя водная фаза W₁ содержит гидрофильный эмульгатор, представляющий собой полимер этиленоксида и пропиленоксида, масляная фаза О образована триацилглицеридами и содержит липофильный эмульгатор из группы диметиконов, и гидрофильное активное вещество представляет собой олигонуклеотид, имеющий последовательность согласно SEQ ID No: 1 - SEQ ID No: 148 или SEQ ID No: 150. Изобретение обеспечивает высокую стабильность, эффективную защиту активных веществ от внешних влияний и защиту от поражений микроорганизмами. 4 н. и 16 з.п. ф-лы, 1 табл., 3 ил.

1. Множественная эмульсия для нанесения по меньшей мере одного фармацевтического или косметического активного вещества, которая включает внешнюю водную фазу W₁, масляную фазу О, диспергированную во внешней водной фазе, и диспергированную в масляной фазе О внутреннюю водную фазу W₂, где во внутренней водной фазе W₂ содержится по меньшей мере один электролит, выбранный из группы галогенидов и сульфатов щелочных и щелочноземельных металлов, и по меньшей мере одно гидрофильное активное вещество, где множественная эмульсия отличается тем, что:

- внешняя водная фаза W₁ содержит гидрофильный эмульгатор, представляющий собой полимер этиленоксида и пропиленоксида,

- масляная фаза О образована триацилглицеридами и содержит липофильный эмульгатор из группы диметиконов, и

- гидрофильное активное вещество представляет собой олигонуклеотид, имеющий последовательность согласно SEQ ID No: 1 - SEQ ID No: 148 или SEQ ID No: 150.

2. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что гидрофильный эмульгатор представляет собой полоксамер.

3. Множественная эмульсия по любому из пп. 1 или 2, отличающаяся тем, что липофильный эмульгатор представляет собой линейный диметикон с полиэфирными и алкильными группами.

4. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что триацилглицериды представляют собой сложные эфиры насыщенных жирных кислот.

5. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что электролит представляет собой NaCl, MgSO₄ или смесь NaCl и MgSO₄.

6. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что гидрофильное активное вещество представляет собой MgSO₄.

7. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что она содержит один или более чем один консервант.

8. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что размер капель диспергированной масляной фазы составляет от 1 мкм до 100 мкм.

9. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что в масляной фазе содержится насыщенный углеводород.

10. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что гидрофильный эмульгатор содержится во внешней водной фазе W₁ в количестве от 0,1 до 5 мас.%.

11. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что липофильный эмульгатор в перерасчете на первичную эмульсию W/O, состоящую из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, содержится в количестве от 0,1 до 6 мас.%.

12. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что триглицериды в перерасчете на первичную эмульсию W/О, состоящую из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, содержатся в количестве от 5 до 30 мас.%.

13. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что электролит в перерасчете на первичную эмульсию W/О, состоящую из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, содержится в количестве от 0,1 до 3 мас.%.

14. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что гидрофильное активное вещество в перерасчете на общую массу множественной эмульсии содержится в количестве от 0,01 до 10 мас.%.

15. Множественная эмульсия по п. 1, отличающаяся тем, что

- гидрофильный эмульгатор во внешней водной фазе W₁ содержится в количестве от 0,1 до 5 мас.%, и

- липофильный эмульгатор в перерасчете на первичную эмульсию W/O, состоящую из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, содержится в количестве от 0,1 до 6 мас.%, и

- триглицериды в перерасчете на первичную эмульсию W/О содержатся в количестве от 5 до 30 мас.%, и

- электролит в перерасчете на первичную эмульсию W/О, состоящую из масляной фазы О и внутренней водной фазы W₂, содержится в количестве от 0,1 до 3 мас.%, и

- гидрофильное активное вещество в перерасчете на общую массу множественной эмульсии W₂ содержится в количестве от 0,01 до 10 мас.%, и

- во внешней водной фазе W₁ и/или внутренней водной фазе W₂ содержится консервант в количестве от 0 до 20 мас.%.

16. Применение множественной эмульсии по любому из пп. 1-15 для изготовления лекарственного средства, медицинского продукта или косметического средства.

17. Применение по п. 16, отличающееся тем, что множественную эмульсию применяют в качестве носителя активных веществ.

18. Лекарственное средство, содержащее множественную эмульсию по любому из пп. 1-15 для местного нанесения, или для нанесения активного вещества на слизистую оболочку, или для внутриперитонеального введения активного вещества.

19. Лекарственное средство по п. 18, отличающееся тем, что множественная эмульсия является носителем активного вещества.

20. Лекарственное средство, содержащее множественную эмульсию по любому из пп. 1-15, для лечения воспалительного заболевания.