КОМПОЗИЦИИ С АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ И РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2017 года по МПК A61K31/728 A61K33/38 A61P17/02 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к композиции, основанной на серебре и гиалуроновой кислоте, к фармацевтическим лекарственным средствам, включающим указанную композицию, к их использованию при лечении кожных поражений и ран и к устройствам, включающим указанную композицию.

ИЗВЕСТНЫЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Острые или хронические кожные поражения различного происхождения лечат с помощью медицинских устройств, способствующих залечиванию ран, промотированию реваскуляризации, абсорбированию экссудата и, в случае необходимости, проявляющих антибактериальное/противомикробное действие.

Обычно экссудат является результатом повышенной проницаемости капилляров в воспаленной ткани. Задача экссудата состоит в ограничении патологического процесса, в предотвращении проникновения микроорганизмов и в блокировании действия возможно опасных антигенов за счет иммунного механизма.

Напротив, при хронических поражениях экссудат вырабатывается аномальным образом, и он определяет блокирование процесса восстановления ткани путем разрушения белков внеклеточного матрикса и факторов роста, и ингибирование клеточной пролиферации. Клинически гиперэкссудация может находиться в непосредственной близости от поврежденного участка кожи и промотировать инфекционирование, в частности, бактериями видов Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecium, Staphilococcus aureus и грибками, такими как Candida albicans.

Кроме того, гиперпродуцирование экссудата приводит к необходимости непрерывной замены повязки на ранах. В таких ситуациях не следует недооценивать ни дискомфорт, который чувствует пациент, который видит как его/ее качество жизни ухудшается в результате постоянной необходимости в медицинских услугах, ни сопутствующее увеличение затрат на здоровье.

В настоящее время коммерчески доступно множество устройств, содержащих антибактериальные агенты и обладающих различными характеристиками в зависимости от предполагаемого использования. Наряду с другими, используются пены, адгезивные или нет, основанные на полиуретане и гидроколлоиде (Contreet®) или основанные на гидроволокне (Aquacel Ag); многослойные полиэтиленовые сетки (Acticoat®). Следует также упомянуть марлевые повязки, содержащие абсорбентные порошки. Перечисленные продукты характеризуются абсорбентными полимерными носителями и металлом, особенно серебром. Антибактериальные свойства серебра хорошо известны (Fraser, J. F. et al. ANZ J. Surg. 2004, 74, 139-212) и обычно связаны с окисленной формой ионов серебра. Серебро ингибирует синтез структурных белков, составляющих стенки бактерий, предотвращая их образование, и связывается с ферментными белками бактериальной ДНК, нарушая их функциональность. Однако такое связывание происходит неспецифическим образом, то есть серебро действует как на клетки бактерий, присутствующих в ране, так и на окружающие клетки кожи/дермы, что определяет токсичность серебра для раненного пациента. На деле серебро ингибирует пролиферацию кератиноцитов и фибробластов (основные компоненты дермы и эпидермиса), замедляя регенерацию раневого ложа, на которое его наносят, и таким образом является настолько вредным для полного заживления поражения, что на основании результатов некоторых in vitro тестов на культурах кератиноцитов, некоторые авторы доходят до того, что рекомендуют избегать применения устройств с нанесенным серебром. (Lam, P.K. et al. Br. J. Biomed. Sci., 2004, 61, 125-127). Кроме того, серебро является сенсибилизирующим агентом, главным образом, при нанесении на длительный период, точно так, как это обычно происходит в случае пролежней, ожогов, или медленно заживающих ран («Chronic exposure to silver или silver salts, Patty's Industrial Hygiene and Toxicolog'y, Vol. 2, G.D. Clayton, F.E. Clayton, Eds. Wiley-Interscience, New York, 3rd Ed., 1981, p. 1881-1894).

Гиалуроновая кислота (HA) представляет собой гетерополисахарид, т.е. полимер, который имеет широкий интервал молекулярных масс, что обычно коррелирует с различными биологическими свойствами.

Многочисленность биологических свойств HA хорошо известна, и главным образом, связана с ее химической природой.

Фракции с высоким ММ (порядка миллионов Дальтон) обладают очень высокой вязкостью и находят конкретное применение в области хирургии глаза и также в конкретных случаях заполнения мягких тканей как для хирургических, так и дермокосметических целей; эффект ранозаживления, напротив, настолько сильно противоречив, что некоторые авторы демонстрируют весьма позитивные эффекты в отношении клеточной пролиферации при использовании HA с высокими средними ММ (молекулярными массами), тогда как другие освещают совершенно противоположный эффект.

Фракции с промежуточной молекулярной массой (500-750 кДа) (Brun et al. Osteoarthritis Cartilage, 2003, 11, 208-16) обычно используют в качестве агентов, увеличивающих вязкость при остеоартритах и заболеваниях суставов. Так как используя их можно создавать растворы, вязкость которых очень близка к вязкости синовиальной жидкости, действительно, указанные фракции обладают механическими смазывающими свойствами. И наконец, низкомолекулярная HA (олигомерная HA, обычно подразумевают, что ее средняя ММ составляет от 1 до 10 кДа) обладает заметным ангиогенным действием; так она, в частности, промотирует реваскуляризацию тканей, на которые ее наносят, ускоряя ранозаживление. Кроме того, известно, что низкомолекулярная HA обладает способностью стимулировать подвижность клеток и активировать миграцию фибробластов, что очевидно, имеет огромную важность для процессов восстановления (West et al., Science, 1985, 228, 1324-6; Deed et al., Int. J. Cancer, 1997, 71, 251-6). По этим причинам низкомолекулярную HA используют в качестве компонента множества продуктов и устройств, обладающих ранозаживляющим действием.

Одной из целей настоящего изобретения является создание композиции для повязок на раны для их заживления, которая более эффективна и менее токсична, чем те, что доступны в настоящее время для лечения кожных поражений.

Другой целью настоящего изобретения является удовлетворение клинической необходимости в повязках с агентом с сильной антимикробной/противогрибковой активностью, при этом минимизирующими ингибирующими эффектами в отношении регенерации тканей и токсичности для подлежащих лечению тканей.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем изобретении предложена композиция, включающая гиалуроновую кислоту и серебро, где гиалуроновая кислота имеет среднечисленную молекулярную массу 130-230 кДа, и где серебро находится в коллоидной металлической форме или в микронизированной металлической форме с пористой структурой «типа губки». В настоящем изобретении также предложена фармацевтическая композиция, включающая указанную композицию и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

Раскрыто также использование указанной композиции в качестве лекарственного средства, особенно для наружного применения для лечения поверхностных и/или в виде небольших углублений кожных поражений и/или ран.

Настоящее изобретение также относится к устройству для распределения указанной композиции в форме сухого спрея, пены или гидрофильного геля, которое пригодно для нанесения на кожу.

ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1 демонстрирует оценку (Эксперимент 1) in vitro клеточной пролиферации человеческих фибробластов, культивируемых в присутствии HA, с фракциями с различной среднечисленной молекулярной массой в интервале от 5000 до 10000 Да (пример i) и до 1500000-3200000 Да (образец v).

Фиг. 2 демонстрирует эффект фракций HA с различной среднечисленной молекулярной массой, а именно 5000-10000 Да (образец i), 10000-15000 Да (образец ii) и 200000 Да (образец iii) на экспрессию фибронектина.

Фиг. 3 демонстрирует эффект фракций HA с различной среднечисленной молекулярной массой, а именно 5000-10000 Да (образец i), 10000-15000 Да (образец ii) и 200000 Да (образец iii) на экспрессию коллагена типа I.

Фиг. 4 демонстрирует эффекты в отношении пролиферации здоровых фибробластов композиций настоящего изобретения, включающих коллоидное металлическое серебро (A) и микронизированное металлическое серебро (B), в сравнении с контролем и коммерческими композициями, включающими коллоидное металлическое серебро, которые не содержат гиалуроновую кислоту (C), в концентрациях 5 и 30 мг/мл после 3 или 5 дней культивирования.

Фиг. 5 демонстрирует активность композиций A-C в отношении роста метициллиноустойчивых бактерий Staphylococcus aureus (MRSA).

ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫЙ ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В том смысле, как в описании использован, термин «среднемассовая молекулярная масса» подразумевает расчет по способу «характеристической вязкости» (Terbojevich et al., Carbohydr. Res., 1986, 363-377).

В том смысле, как в описании использован, термин «структура, подобная губке» он означает полностью пористый материал с открытой клеточной и/или закрытой клеточной структурой с площадью поверхности 5 м²/г или выше.

В одном варианте настоящее изобретение относится к композиции, включающей гиалуроновую кислоту и серебро, где гиалуроновая кислота имеет среднечисленную молекулярную массу 130-230 кДа и где серебро находится в коллоидной металлической форме или в микронизированной металлической форме с пористой, «подобной губке» структурой. Раскрытые в описании композиции промотируют заживление поражений различных типов (острые, хронические, изъязвления различной этиологии, ожоги, воспаления), исключая бактериальные и/или грибковые инфекции и промотируя заживление поврежденных тканей. Неожиданно было обнаружено, что указанные преимущества достигаются при использовании композиций, включающих гиалуроновую кислоту с точно определенной среднемассовой молекулярной массой (ММ), что, как обсуждается в описании, стимулирует пролиферацию человеческих фибробластов, с последующим отложением коллагена и фибронектина, и обеспечивает защиту против повреждений, которые серебро могло бы вызвать у указанных клеток.

Антибактериальная активность композиций, известных в данной области техники, преимущественно осуществляется за счет серебра, коммерчески доступного в форме солей (например, нитрата, сульфата, карбоната и других, доступных, например, от Sigma Aldrich), или в форме коллоидного металла, т.е. связанного с мелкими белками, которые повышают его стабильность, или в металлической форме.

Среди различных типов металлического серебра неожиданно было обнаружено, что особенно подходящим является микронизированное металлическое серебро со следующими характеристиками:

- средний размер частиц 2-18 микрон, предпочтительно 10 микрон;

- «подобная губке» (SL) микроструктура с высокой пористостью, которая существенно повышает площадь поверхности (>5 м²/г);

- высокая степень чистоты (предпочтительно >99,5%);

(здесь и далее «подобное губке микронизированное металлическое серебро»).

Указанная специфическая «подобная губке» пористая структура промотирует усиленное выделение, как немедленное, так и замедленное, ионов Ag (Ag+) в поверхность раны, что обеспечивает повышенную антимикробную и противогрибковую активность по сравнению с формами серебра, которые чаще всего используют, что продемонстрировано в представленных далее экспериментах.

Следует отметить, что «подобное губке» микронизированное металлическое серебро, содержащееся в композициях настоящего изобретения, не пачкает кожу и одежду, также после экспонирования солнечному свету, не окрашивает рану в коричневый цвет, если присутствует экссудат, и им гораздо легче манипулировать при приготовлении фармацевтических форм по способу настоящего изобретения. Микронные размеры частиц обеспечивают легкое смешивание «подобного губке» микронизированного металлического серебра с другими компонентами. Напротив, коллоидное металлическое серебро, необходимо вначале подвергнуть процессу измельчения, особенно если желательно введение в форме спрея, для того, чтобы предотвратить затруднения, связанные с образованием комков порошка.

Серебро, которое используют в композициях настоящего изобретения, может быть коллоидным или «подобным губке» микронизированным металлическим серебром, которое, как было обнаружено, обладает сопоставимой антибактериальной/ антимикробной активностью, хотя предпочтительнее «подобное губке» микронизированное металлическое серебро.

Гиалуроновая кислота (HA) представляет собой линейную цепочку гетерополисахарида, состоящую из чередующихся остатков D-глюкуроновой кислоты и N-ацетил-D-глюкозамина, со среднемассовой молекулярной массой, которая может быть в интервале 400-3×106 Да, в зависимости от источника экстракции или используемого способа получения. Гиалуроновую кислоту на практике можно получить, например, путем экстракции из петушиных гребешков (EP 138572 B1), путем ферментрации или синтетическими методами. Как уже было указано, известно, что HA играет в организме многочисленные роли, начиная от механической поддержки клеток многих тканей, таких как кожа, сухожилия, мышцы и хрящи, до увлажнения тканей и смазки суставов. Кроме того, известно, что HA, через свои мембранные рецепторы CD44, способна модулировать многие и различные процессы, относящиеся к физиологии клеток и биологии клеток, такие как клеточная пролиферация, миграция, дифференциация и ангиогенез.

Каждый из этих эффектов существенно связан с фракциями HA с различными молекулярными массами, и особенно способность восстанавливать ткани очевидна для HA фракций с низкой молекулярной массой (олигомерные HA), которая уменьшается по мере роста молекулярной массы. В нескольких тестах вместо этого было неожиданно обнаружено, что конкретные фракции HA со среднемассовой ММ в интервале 130-230 кДа, рассчитанной по методу «характеристической вязкости» (Terbojevich et al., Carbohydr. Res., 1986, 363-377), и, следовательно, обладающими ММ заметно выше, чем те, что, как уже известно, обладают способностью ранозаживления, обладают экстраординарной эффективностью в отношении пролиферации человеческих фибробластов. Кроме того, было обнаружено, что HA со среднемассовой молекулярной массой 130-230 кДа неожиданно повышают антимикробную/противогрибковую активность серебра (в коллоидной металлической форме или «подобной губке» микронизированной металлической форме), что связано с резким уменьшением его цитотоксичности. Такие HA фракции, после подходящих тестов выбирают для целевых композиций настоящего изобретения, что продемонстрировано, в описанных далее экспериментах, и как эффективность против патогенов в стандартных обработках и как уменьшение токсичности против человеческих фиброластов, следствием чего является увеличение активности ранозаживления. Следует отметить, что HA, используемые в композициях настоящего изобретения, можно получить в результате экстракции, ферментации (из стрептококков) или путем биосинтеза (из бацилл), предпочтительно из ферментационных или биосинтетических источников, и они имеют среднемассовую ММ 130-230 кДа, предпочтительно 145-210 кДа и еще более предпочтительно 160-200 кДа; последние для краткости в описании и далее будут определяться как HA с массовой ММ 160-200 кДа. Их можно закупить в различных фирмах (например, Lifecore Biomedical; QP Corp.; Seikagaku; Shiseido; Fidia farmaceutici), которые могут предоставить HA с нужными характеристиками, относящимися к ММ.

Против ожиданий было обнаружено, что фракции гиалуроновой кислоты со среднемассовой молекулярной массой, которая заметно выше, чем молекулярная масса олигомерных фракций, оказывают более сильное позитивное воздействие на пролиферацию фибробластов, нежели воздействие олигомерных фракций. В специфических тестах композиции, включающие указанные специфические фракции HA и серебро, демонстрируют усиление антибактериального/противогрибкового действия и также пониженную токсичность в отношении фибробластов по сравнению со стандартными композициями на основе только серебра.

Например, со ссылкой на Фиг. 4, третью колонку, композиция настоящего изобретения, включающая указанную специфическую фракцию HA и серебро, стимулирует рост фибробластов по сравнению с контрольным образцом, тогда как уменьшение фибробластов по сравнению с контролем наблюдается при использовании коллоидного серебра без HA, в любом количестве даже столь низком, как одна треть количества, в тесте с композицией настоящего изобретения.

Это означает, что композиции настоящего изобретения демонстрируют явное и непредсказуемое улучшение свойств по сравнению с известным уровнем техники, будучи более эффективными и менее токсичными, чем доступные в настоящее время композиции для наружного лечения описанных кожных поражений.

На основании описанных далее результатов экспериментов, было неожиданно обнаружено, что композиции настоящего изобретения, которые включают HA со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа и коллоидное или микронизированное, «подобное губке» металлическое серебро, обладают следующими удивительными свойствами:

- непредсказуемой и отличной способностью HA со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа стимулировать пролиферацию фибробластов;

- антибактериальной активностью, связанной с присутствием коллоидного серебра или микронизированного, «подобного губке» металлического серебра, которая, по меньшей мере, сопоставима с активностью обычных обработок против микроорганизмов, которые обычно находятся в инфицированных ранах;

- в частности, если используют микронизированное, «подобное губке» металлическое серебро, композиции настоящего изобретения оказываются более активными, чем стандартные обработки против МРЗС (метициллин резистентный золотистый стафилококк), с которым особенно трудно бороться;

- очень низкой или отсутствующей токсичностью в отношении кожных фибробластов;

- антибактериальной активностью, проявляемой также в присутствии таких количеств серебра, которые ниже 50% количеств, присутствующих в доступных на рынке композициях, при этом сохраняя способность HA стимулировать пролиферацию фибробластов.

По этим причинам, композиции настоящего изобретения особенно выгодны по сравнению с известными специалистам в данной области композициями, доступными в настоящее время для обработки кожных поражений и ран, например, для кожных поражений и/или ран различного происхождения (острых, хронических, изъязвлений различной этиологии, ожогов, воспалений).

Предпочтительно, если гиалуроновая кислота в композициях настоящего изобретения имеет среднечисленную молекулярную массу 145-210 кДа.

Предпочтительно, если гиалуроновая кислота в композициях настоящего изобретения имеет среднечисленную молекулярную массу 160-200 кДа и серебро находится в микронизированной металлической форме с пористой, «подобной губке» структурой.

Предпочтительно, если в композиции настоящего изобретения серебро в микронизированной металлической форме с пористой, «подобной губке» структурой имеет средний размер частиц 2-18 микрон и площадью поверхности не менее чем 5 м²/г.

Предпочтительно, если в композициях настоящего изобретения концентрация гиалуроновой кислоты составляет 0,1-2% масс/масс в расчете на всю композицию, более предпочтительно, 0,1-0,5% масс/масс в расчете на всю композицию и еще более предпочтительно, 0,2% масс/масс в расчете на всю композицию.

Предпочтительно, если в композициях настоящего изобретения концентрация серебра в коллоидной металлической форме или серебра в микронизированной металлической форме с пористой, «подобной губке» структурой в расчете на всю композицию составляет 1-3% масс/масс, более предпочтительно, 2% масс/масс в расчете на всю композицию.

Композиции настоящего изобретения могут быть в форме порошков, растворов или суспензий, которые можно распределить в различные формы, среди которых предпочтительны гидрофильные гели, пены, сухие спреи, так как они демонстрируют некоторые особенно желательные характеристики. В частности, сухие спреи и пены:

• легко наносить без конкретных операций, так как они не нуждаются ни в нарезке, ни в придании им какой-либо формы, чтобы адаптировать к конкретной ране;

• можно наносить без контакта с раной, что способствует, таким образом, уменьшению дополнительных загрязнений;

• прекрасно адаптированы к месту нанесения, то есть поверхностные, плоские или с некоторыми небольшими полостями раны выиграют от нанесения сухого спрея, который будет легко равномерно распределен. Действительно, порошок гиалуроновой кислоты, присутствующий в сухом спрее, в контакте с экссудатом немедленно образует прозрачный гель, который сохраняет полость раны влажной, до такой степени, которая промотирует ранозаживление, и в то же самое время отделяет его от окружающего пространства, предотвращая дополнительное загрязнение; в случае глубоких полых ран будет более полезно наносить вместо спрея пену, которая гомогенно и равномерно заполняет весь объем раны, промотируя тесный контакт пораженного участка как с ранозаживляющим (гиалуроновая кислота), так и с антибактериальным агентом (серебро);

• не требует обязательного покрытия перевязочным материалом, что является преимуществом, упрощающим стадию нанесения новой повязки.

Что касается формы гидрогеля, то она находит специфическое применение в случае не особенно глубоких, без полостей ран с небольшим количеством экссудата; на деле сам гидрогель создает окружение с правильным увлажнением, которое является основным для процесса заживления.

В одном варианте, в настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая композицию, включающую гиалуроновую кислоту и серебро, где гиалуроновая кислота имеет среднечисленную молекулярную массу 130-230 кДа, и где серебро находится в коллоидной металлической форме или в микронизированной металлической форме с пористой, «подобной губке» структурой, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

Предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция настоящего изобретения включала далее по меньшей мере один эксципиент, выбранный из суспендирующего агента, носителя и пропеллента.

Более предпочтительно, чтобы в указанной фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением, пропеллент был выбран из группы, состоящей из смесей изобутан/н-бутан/пропана и н-бутана.

Предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция настоящего изобретения была в форме сухого спрея, пены или гидрофильного геля, которые пригодны для кожного нанесения.

Предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция настоящего изобретения была в форме сухого спрея, который ложится как прозрачный гель на полость поражения для промотирования оптимального увлажнения при ранозаживлении.

Более предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция настоящего изобретения была в форме сухого спрея, включающего гиалуроновую кислоту со среднечисленной молекулярной массой 160-200 кДа при концентрации 0,2% масс/масс микронизированного металлического серебра с пористой, «подобной губке» структурой в концентрации 2% масс/масс и н-бутаном в качестве пропеллента.

Более предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция настоящего изобретения была в форме сухого спрея, включающего гиалуроновую кислоту со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа с концентрацией 0,2% масс/масс, коллоидное металлическое серебро с концентрацией 2% масс/масс и н-бутан в качестве пропеллента.

Предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция настоящего изобретения была в форме пены, включающей гиалуроновую кислоту со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа с концентрацией 0,2% масс/масс, серебро в металлической микронизированной форме с пористой, «подобной губке» структурой, или в коллоидной металлической форме с концентрацией 2% масс/масс, и смесь изобутан/н-бутан/пропан в качестве пропеллента.

Предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция настоящего изобретения была в форме гидрофильного геля, включающего гиалуроновую кислоту со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа с концентрацией 0,2% масс/масс, серебро в металлической микронизированной форме с пористой, «подобной губке» структурой или в коллоидной металлической форме с концентрацией 2% масс/масс, и смесь изобутан/н-бутан/пропан в качестве пропеллента.

В одном из вариантов, настоящее изобретение относится к композиции или фармацевтической композиции, как раскрыто выше, для использования в качестве лекарственного средства.

В другом варианте, настоящее изобретение относится к композиции или к фармацевтической композиции, как раскрыто выше, для использования при поверхностной обработке поверхностных и/или мелких полостных кожных поражений и/или ран.

Предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция для использования при поверхностной обработке поверхностных и/или мелких полостных кожных поражений и/или ран была в форме сухого спрея, включающего гиалуроновую кислоту со среднечисленной молекулярной массой 160-200 кДа с концентрацией 0,2% масс/масс, микронизированное металлическое серебро с пористой, «подобной губке» структурой в концентрации 2% масс/масс и н-бутан в качестве пропеллента.

Предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция для использования при поверхностной обработке поверхностных и/или мелких полостных кожных поражений и/или ран по способу настоящего изобретения была в форме сухого спрея, включающего гиалуроновую кислоту со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа с концентрацией 0,2% масс/масс, коллоидное металлическое серебро с концентрацией 2% масс/масс и н-бутан в качестве пропеллента.

Предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция для использования при поверхностной обработке поверхностных и/или мелких полостных кожных поражений и/или ран по способу настоящего изобретения была в форме пены, включающей гиалуроновую кислоту со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа с концентрацией 0,2% масс/масс, серебро в металлической микронизированной форме с пористой, «подобной губке» структурой или в коллоидной металлической форме с концентрацией 2% масс/масс, и смесью изобутан/н-бутан/пропан в качестве пропеллента.

Предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция для использования при поверхностной обработке поверхностных и/или мелких полостных кожных поражений и/или ран по способу настоящего изобретения была в форме гидрофильного геля, включающего гиалуроновую кислоту со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа с концентрацией 0,2% масс/масс, серебро в металлической микронизированной форме с пористой, «подобной губке» структурой или в коллоидной металлической форме с концентрацией 2% масс/масс, и смесь изобутан/н-бутан/пропан в качестве пропеллента.

В еще одном варианте, настоящее изобретение относится к способу обработки поверхностных и/или мелких полостных кожных поражений и/или ран, включающему наружное нанесение композиции или фармацевтической композиции, как раскрыто выше.

В одном из вариантов настоящее изобретение относится к устройству для распределения композиции, как раскрыто выше, в форме сухого спрея, пены для кожного нанесения или гидрофильного геля.

Все эксперименты, представленные в рассматриваемой заявке, осуществлены на здоровых фибробластах, выделенных из кожных образцов биопсий человека, с тем, чтобы воспроизвести насколько возможно точнее патологическую ситуацию, имеющую место при нанесении конечного продукта. Тесты клеточных культур, используют в трехмерном материале в качестве подложки, чтобы точнее имитировать раневое ложе, которое, хотя и поврежденное, включает дермические, более глубокий слой, и эпидермический, более поверхностный слой.

Далее приводятся протоколы исследований и использованные материалы.

Эксперимент 1: оценка in vitro клеточной пролиферации человеческих фибробластов культивируемых в присутствии HA с различными ММ

На основании того, что доступно на данном уровне техники, приготавливают различные образцы HA, и в частности:

i. HA со среднемассовой ММ, находящейся между 5000-10000 Да, полученной как пример 1 в EP 868437;

ii. HA со среднемассовой ММ, находящейся между 10000-15000 Да, полученной как пример 2 в EP 868437;

iii. HA со среднемассовой ММ 160000-200000 Да;

iv. HA со среднемассовой ММ 1000000 Да, полученной как пример 1 в EP 535 200;

v. HA со среднемассовой ММ 1500000-3200000 Да, Hyalubrix® (Migliore et al., Arthr. Res. Ther., 2009, 11, R183);

причем все концентрации составляют 1 мг/мл культуральной среды.

Выделение здоровых фибробластов из образцов биопсий человеческой кожи: короче, после нескольких промываний в фосфатном буферном растворе (PBS), дополненном антибиотиками, образцы биопсий освобождают от подкожной адипозной ткани и нарезают на маленькие полоски, которые подвергают ферментативному перевариванию, используя фермент диспазу, в течение 30 минут. В конце обработки кожу отделяют от расположенной ниже дермы, которую переваривают, используя трипсин в течение 10 мин; затем клетки экстрагируют центрифугированием.

Клеточная культура: клетки культивируют in vitro, высевая в DMEM культуральную среду, дополненную 20% фетальной телячьей сывороткой (FBS), 1% пенициллин/стрептомицином (P/S) и 1% глутамина.

MTT тест: в этом анализе количественно измеряют наличие сукцинат-дегидрогеназной активности в культивируемых клетках; такую активность, присутствующую только в митохондриях живых клеток, обычно используют в качестве маркера для контроля за метаболической активностью, жизнеспособностью и, соответственно, ростом культивируемых клеток. Указанный тест основан на превращении azolic красителя MTT (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5 дифенилтетразолийбромид) с желтого на голубой под действием сукцинат-дегидрогеназы. Количество голубого красителя (формазан), определенное спектрофотометрически, пропорционально присутствию сукцинат-дегидрогеназы в клеточной культуре и, следовательно, пропорционально числу жизнеспособных клеток.

Клетки инкубируют с 0,5 мг/мл MTT раствором в течение 3 час. В конце инкубирования краситель экстрагируют из клеток, используя экстракционный раствор (90% изопропанол, 10% ДМСО) и показания считывают на длине волны 540/660 нм.

Рабочая процедура: как было указано, тесты клеточной пролиферации осуществляют, используя трехмерные культуры, и строго определенно высевая клетки на нетканевый Hyaff 11 (полученный по способу примера 2 EP 618817). Это представляет собой процедуру выбора, когда намереваются имитировать in vivo пролиферацию фибробластов, и именно в дерме, состоящей из внеклеточной трехмерной матрицы, главным образом, образованной из гиалуроновой кислоты и коллагена, в которую вводят кожные фибробласты.

Фибробласты, выделенные в соответствии с указанным ранее, высевают (60000) на маленькие кусочки нетканевого материала (1x1 см), прикрепленные к соответствующим планшетам, и культивируют в течение 24 час. Затем добавляют подлежащие тестированию образцы с различными HA к культуральной среде и через 3 дня обработки проводят MTT тест для оценки клеточной пролиферации. Для контроля используют фибробласты, не обработанные HA.

Результаты: как четко видно на Фиг. 1, в противоположность тому, что раскрыто для известного уровня техники, HA фракции с низкими значениями ММ не стимулируют клеточную пролиферацию. Напротив, фракция со среднемассовым значением ММ 160-200 кДа обладает заметной пролиферирующей активностью, тогда как фракции ММ с массой более одного миллиона Да оказываются полностью неэффективными, если даже нетоксичными.

Пролиферацию и жизнеспособность фибробластов подтверждают также путем количественной оценки генной экспрессии коллагена типа I (Фиг. 3) и фибронектина (Фиг. 2), используя следующую процедуру.

Фибробласты выделяют и культивируют, как указано выше, и обрабатывают в течение 3 дней образцами i, ii, iii (остальные были исключены из-за их негативного эффекта в отношении клеточной пролиферации); в конце обработки осуществляют ПЦР в режиме реального времени для оценки генной экспрессии коллагена типа I и фибронектина: клеточную РНК экстрагируют, используя метод «Trizol», в соответствии с рекомендациями поставщика (TRIZOL реагент, LIFE Techonologies, GIBCO BRL). Короче, осуществляют клеточный лизис, добавляя 1,0 мл Trizol, и полную РНК количественно определяют, измеряя поглощение на 260 нм. Для каждого гена, подлежащего амплификации, выбирают подходящие праймеры, используя программное обеспечение Primer3 (Roche Molecular Diagnostics, Pleasanton, CA, USA). Генную экспрессию оценивают, осуществляя ПЦР в режиме реального времени, используя Rotor-ген TM5500 (Corbett Research, Sydney, Australia). Результаты суммированы на Фиг. 2 и 3: они подтверждают, что HA со среднемассовой ММ 160-200 кДа вызывает значительное повышение генной экспрессии обоих белков по сравнению с контролем, что означает, что обработанные фибробласты способны создавать внеклеточный матрикс, существенный для полного излечения ран.

Вывод: неожиданно оказалось, что HA со среднемассовой ММ в 160-200 кДа оказывает экстраординарное эффективное действие на пролиферацию кожных фибробластов. Указанные фибробласты являются жизнеспособными и метаболически активными, так как они создают внеклеточный матрикс и поэтому они способны активировать восстановление пораженных кожных тканей.

На основании вышеприведенных неожиданных результатов, антимикробный и противогрибковый эффекты представленных в описании композиций оценивают, используя в качестве контроля имеющийся на рынке продукт. В качестве микроорганизмов используют те, которые обычно присутствуют в инфицированных ранах, т.е.: E. coli, P. aeruginosa, E. faecium (устойчивые к ванкомицину), S. aureus (метициллино-устойчивые) и C. albicans.

Тестовые композиции, содержащие серебро, как в коллоидной, так и в металлической форме, приготавливают в форме порошков, которые растворяют в экспериментальной среде.

Эксперимент 2: оценка антимикробной/противогрибковой активности препаратов

Тесты осуществляют in vitro, поэтому тестовые композиции, содеращие коллоидное металлическое или микронизированное металлическое серебро, приготавливают в форме порошков, с тем, чтобы их можно было растворить или суспендировать для оценки их эффективности. Контрольная композиция (C) коммерчески доступна в форме порошка, а также в форме сухого спрея (Katoxyn®, Deverge M&M).

Композиция A

• 0,2% натрий HA ММ 160-200 кДа

• 2% коллоидное металлическое серебро

• 4% силоид 244 (эксципиент)

• белый каолин (эксципиент) q.s. до 100

Композиция B

• 0,2% натрий HA ММ 160-200 кДа

• 2% Микронизированное металлическое серебро, подобное губке (SL), 2% (MicroSilver BG™ Pharma)

• 4% силоид 244 (эксципиент)

• белый каолин (эксципиент) q.s. до 100

Тестируют в сравнении со стандартной коммерческой композицией (композиция C - Katoxyn®), состоящей из

• 4,25% коллоидное металлическое серебро

• 1,5% перекись бензоила

• 1% безводный глюконат кальция (эксципиент)

• алюмосиликат (эксципиент) q.s. до 100

Тестируемые микроорганизмы: жидкую культуру каждого из микроорганизмов приготавливают в соответствии с рекомендациями поставщика. Инкубирование длится по меньшей мере 48 ч, с тем чтобы получить богатую и жизнеспособную культуру; титры каждой из культур приблизительно определяют, используя шкалу Мак Фарланда. Для некоторых микроорганизмов приготавливают две тестируемые суспензии путем инокулирования в два 100 мл TSB образца (Трипсиновый соевый бульон (Tryptic Soy Broth; Millipore)) количества жидкой культуры, содержащего около 10³ и около 10⁶ КОЕ. Затем инокуляты обсчитывают для точного определения содержания микробов в суспензии в момент T=0.

Композиции образцов: по два образца примерно по 1 г отбирают из каждой композиции и добавляют к суспензии, содержащей 10³ и 10⁶ КОЕ, или только 10³ КОЕ. Приготовленные таким образом образцы инкубируют и выдерживают при постоянном медленном встряхивании и вертикальном вращении, с тем чтобы максимизировать тесный контакт продукта с микроорганизмами и предотвратить явление седиментации порошка. После 30 минут инкубирования отбирают аликвоты, используя которые подсчитывают содержание микробов с помощью способа фильтровальных мембран, осуществляя соответствующие разбавления образцов, содержащих 10⁶ КОЕ. Мембраны, использованные при фильтровании, переносят в TSA среду (триптоновый соевый агар - Biogenetics) и инкубируют в течение по меньшей мере 5 дней.

Подсчет содержания бактерий в тестируемой суспензии повторяют через 12 часов и 24 часа.

В следующих таблицах для каждой тестируемой композиции приводят значения количества порядков, на которое фильтр снижает число микроорганизмов, значения количества порядков, на которое фильтр снижает концентрации различных микроорганизмов после различных времен контактирования.

Таблица 1
Композиция A E. coli АТСС 8739 12 часов 24 часа 3×10³ 3 3 4×10⁵ 5 5 P. aeruginosa АТСС 15442 12 часов 24 часа 6×10³ 3 3 5×10⁵ 5 5 E. faecium АТСС 700221 12 часов 24 часа 2×10² 2 2 C. albicans АТСС 10231 12 часов 24 часа 5×10² 2 2

На основании полученных данных можно предположить, что содержание бактерий во всех инокулятах, обработанных композицией A, практически равно нулю, как после 12 часов, так и после 24 часов. Это означает, что композиция A действует как бактерицид, а не как бактериостат. Действительно, Европейская фармакопея определяет бактерицид для наружного использования, как продукт, который после 24 час в контакте с микроорганизмами снижает их содержание по меньшей мере на 2 порядка.

Таблица 2
Композиция В E. coli АТСС 8739 12 часов 24 часа 3×10³ 3 3 4×10⁵ 5 5 P. aeruginosa АТСС 15442 12 часов 24 часа 6×10³ 3 3 5×10⁵ 5 5 E. faecium АТСС 700221 12 часов 24 часа 2×10² 2 2 C. albicans АТСС 10231 12 часов 24 часа 5×10² 2 2

Композиция B обладает профилем активности идентичным профилю композиции A. Это означает, что активность микроорганизмов в этом эксперименте с использованием серебра в ассоциации с гиалуроновой кислотой является качественно/количественно идентичной как в коллоидной форме так и в микронизированной, «подобной губке» металлической форме.

Таблица 3
Композиция С E. coli АТСС 8739 12 часов 24 часа 3×10³ 3 3 4×10⁵ 5 5 P. aeruginosa АТСС 15442 12 часов 24 часа 6×10³ 3 3 5×10⁵ 5 5 E. faecium АТСС 700221 12 часов 24 часа 2×10² 2 2 C. albicans АТСС 10231 12 часов 24 часа 5×10² 2 2

Становится очевидным, что также композиция C воспроизводит результаты, полученные для композиций A и B, но полученные результаты рисуют абсолютно неожиданную картину, учитывая некоторые фундаментальные различия между различными композициями:

• В композициях A и B концентрация серебра (2%) существенно ниже (менее половины), чем концентрация в композиции C (4,25%)

• Композиция C содержит перекись бензоила (BP); как и все перекиси, BP представляет собой окисляющий агент per se, который очень часто используют в препаратах для наружного применения против акне, как раз из-за его способности уничтожать микроорганизмы за счет выделяющегося из них кислорода. Активность композиции C связана, таким образом, с серебром и содержащимся в ней BP, где BP действует, с одной стороны, как активатор окисления серебра и, с другой стороны, как источник антибактериального агента, а именно кислорода.

Вывод: все тестированные композиции можно определить в соответствии с Европейской фармакопеей как бактерицидные агенты для наружного использования. С точки зрения уменьшения содержания бактерий указанные три препарата качественно, но не количественно, эквивалентны, так как, абсолютно непредсказуемо, композиции A и B, включающие гиалуроновую кислоту со среднемассовой ММ равной 160-200 кДа, содержат менее половины количества серебра, присутствующего в композиции C.

Поэтому композиции A и B более эффективны, чем композиция C, так как они вызывают тот же самый антибактериальный/ противогрибковый эффект при концентрации серебра заметно более низкой и без помощи дополнительных активных агентов (кислорода, выделяемого из перекиси бензоила).

Эксперимент 2a: Учитывая полученные результаты, проводят дополнительный тест для оценки эффективности композиций A, B и C (определено ранее) против важного микроорганизма, а именно, метициллин-резистентного Staphylococcus aureus (MRS A). MRS A представляет собой бактерию, отвечающую за некоторые инфекции, которые особенно трудно поддаются лечению, до такой степени, что ее иногда именуют как «мультирезистентная Staphylococcus aureus». Действительно, она устойчива к β-лактамовым антибиотикам и к цефалоспоринам. MRSA инфекции особенно распространены в больницах, где пациенты с открытыми ранами или с инвазивными устройствами (например, катетерами) подвержены высокому риску заражения.

Процедура

Стерилизованные фингерпэдс загрязняют MRSA (10⁸ КОЕ в 30 мкл объема); загрязненным участкам дают высохнуть на воздухе в течение 3 минут, затем подлежащий тестированию продукт (композиция A, B или C) наносят с расстояния около 15 см в течение 5 секунд с 3 секундным интервалом, дважды. Каждая композиция контактирует с микроорганизмами в течение 30 минут, 3 час, 6 час или 15 час во влажной камере. В конце, фингерпэдс погружают на 1 минуту в нейтрализующую среду для блокирования антимикробного действия и для сбора микроорганизмов. Образец нейтрализующей среды соответствующим образом разбавляют и высевают на подходящую твердую среду. КОЕ количественно подсчитывают после 25 часов культивирования, и полученные результаты представлены на Фиг. 5. Понятно, что в соответствии с результатами эксперимента 1, активность композиции C полностью совпадает с активностью композиции A. Неожиданно оказалось, что композиция B, включающая микронизированное, «подобное губке» металлическое серебро и HA со среднемассовой ММ 200 кДа, оказывает заметно превосходящий эффект, уменьшая популяцию микробов более существенно, как через 30 минут, так и в более поздние моменты времени. Указанный аспект особенно примечателен, учитывая тот факт, что количество серебра в композиции B составляет меньше половины его количества композиции C.

Вывод: все тестированные композиции эффективны также против метицилин-резистентных Staphilococcus aureus (MRSA), но композиция B, включающая микронизированное, «подобное губке» металлическое серебро и HA со среднемассовой ММ 160-200 кДа, существенно более эффективна. Активность композиций, включающих микронизированное, «подобное губке» металлическое серебро и HA со среднемассовой ММ 160-200 кДа особенно удивительна, учитывая, что количество серебра в указанной композиции меньше половины его количества в коммерчески доступных композициях.

С учетом результатов экспериментов 2 и 2a, цитотоксический эффект композиций тестируют в отношении кожных фибробластов, для проверки того, что если эффект серебра сведен к нулю, эффект, оказываемый HA со среднемассовой ММ 160-200 кДа на пролиферацию фибробластов, продемонстрирован в эксперименте 1.

Эксперимент 3: Активность композиции настоящего изобретения в отношении пролиферации здоровых фибробластов из образцов биопсий кожи человека in vitro

Выделение и культивирование фибробластов осуществляют по способу, раскрытому в эксперименте 1. Клеточную пролиферацию оценивают, используя тест с введением меченного бромдеоксиуридина (BrdU) (Bromodeoxyuridine Kit, Bio Assay™). Короче, после инкорпорации BrdU, клетки метят анти-BrdU антителом и затем анализируют, используя соответствующее считывающее устройство.

Образцы: учитывая необычайную эффективность композиции B против MRS A, для удобства композицию B (на основе микронизированного, «подобного губке» металлического серебра и HA со среднемассовой ММ 160-200 кДа) выбирают для сравнения с композицией C (торговый продукт), приготавливая образцы в различных концентрациях (5 мг/мл; 30 мг/мл) следующим образом.

Подходящие количества каждой из композиций отвешивают, растворяют в DMEM (клеточная культуральная среда), содержащая BrdU, и выдерживают при встряхивании в течение 10 мин. Затем полученную смесь центрифугируют при 6000 об/мин в течение 3 мин. Осуществляют контактирование полученной таким образом надосадочной жидкости с культивируемыми клетками, оценивая пролиферацию фибробластов относительно пролиферации клеток в DMEM только с BrdU (контроль).

Результаты эксперимента суммированы на Фиг. 4, где в первой колонке представлены значения клеточной пролиферации после 3 дней инкубирования, и во второй - после 5 дней инкубирования.

Очевидно, что композиция B проявляет позитивный эффект в отношении пролиферации фибробластов по сравнению с контролем, независимо от содержания в ней количества активных ингредиентов. Эффект, оцениваемый против контроля, более значителен для образца 5 мг/мл и после 3 дней контактирования, но также для образца 30 мг/мл наблюдается заметный рост клеток как через 3, так и через 5 дней, всегда по сравнению с контролем.

Следует отметить со ссылкой на Фиг. 4, что в третьей колонке, рост фибробластов по отношению к контрольному образцу в тесте, в котором используют 30 мг/мл композиции B (включающей 2% масс/масс микронизированного, «подобного губке» серебра и 0,2% натрий гиалуроновой кислоты со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа). Напротив (Фиг. 4, четвертая колонка), уменьшение фибробластов по отношению к контролю наблюдают при использовании 5 мг/мл композиции C, которая содержит 4,25% коллоидного серебра, т.е. небольшое полное количество серебра (приблизительно одна треть) относительно количества, использованного в тесте с композицией B при 30 мг/мл.

И снова, HA со средней массовой ММ 160-200 кДа демонстрирует свои неожиданные свойства в отношении клеточной пролиферации также если используется в ассоциации с антибактериальным/ противогрибковым агентом. Результаты указанных экспериментов на деле демонстрируют, что гиалуроновая кислота со среднемассовой ММ в 160-200 кДа защищает фибробласты от цитотоксической активности серебра, причем не изменяя антимикробную активность микронизированного серебра или коллоидного серебра. Результаты для композиции C, напротив, демонстрируют противоположную тенденцию; уже в концентрации 5 мг/мл в течение 5 дней получены отрицательные значения пролиферации при сравнении с контролем, что указывает на то, что ингибирование пролиферации фибробластов, для образца, содержащего 30 мг/мл, уменьшение числа фибробластов наблюдается уже после 3 дней обработки, четко свидетельствуя о токсичности образца. Только образец 5 мг/мл после 3 дней обработки все еще имел количество фибробластов, идентичных контролю, но такой результат абсолютно не существенен, если сравнивать с эквивалентной композицией B, которая, в тех же самых условиях концентраций и времени обработки повышает пролиферацию фибробластов более чем на 50%.

Также с учетом экспериментальных результатов, раскрытых в описании, композиции настоящего изобретения, включающие гиалуроновую кислоту и серебро в форме сухого спрея, пены для нанесения на кожу или гидрофильного геля, пригодны для наружной обработки кожных поражений и/или ран различного происхождения (острые, хронические, изъязвления различной этиологии, ожоги, воспаления) также с экссудатом, и, кроме того, характеризующиеся высоким риском инфицирования, например, микроорганизмами, такими как Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphilococcus aureus и Enterococcus faecium и грибками, такими как Candida albicans. Используемая гиалуроновая кислота имеет среднемассовую ММ в интервале 130-230 кДа, предпочтительно в интервале 145-210 кДа и еще более предпочтительно в интервале 160-200 кДа. Его концентрация в конечной композиции может быть в интервале 0,1-2% (масс/масс), предпочтительно 0,1-0,5% масс/масс и еще более предпочтительно, если она составляет до 0,2% масс/масс. Серебро может быть в коллоидной металлической форме или в микронизированной, «подобной губке» металлической форме, причем последняя форма предпочтительна, учитывая вышеперечисленные преимущества. Концентрация серебра в конечной композиции может быть 1-3% масс/масс; причем предпочтительная концентрация составляет до 2% масс/масс. Что касается фармацевтических форм, то гидрогель особенно пригоден для поверхностных кожных поражений и/или ран; сухой спрей находит конкретное применение при плоских или с маленькими полостями кожными поражениями и/или ранами, тогда как пена для нанесения на кожу пригодна для применения на полостные кожные поражения и/или раны.

В случае сухого спрея и пены для нанесения на кожу, композиции настоящего изобретения включают пропелленты, такие как н-бутан или смеси, состоящие из н-бутана, изобутана и пропана; особенно предпочтителен н-бутан в композициях для сухого спрея, тогда как смеси н-бутана, изобутана и пропана представляют собой пропеллент, выбираемый для пены для нанесения на кожу.

Далее с целью иллюстрации приводятся композиции и способы получения выбранных фармацевтических форм, которые, однако, можно модифицировать в соответствии с компетенцией специалистов в области композиций.

Сухой спрей, включающий коллоидный металлический Ag: 100 г продукта содержат

Компоненты Количество Функция Гиалуронат натрия (натрий НА)VW160-200 кДа 0,20 Коллоидное металлическое серебро 2,0 Антибактериальный Диоксид кремния (Силоид 244) 4,0 Суспендирующий агент Белый каолин q.s.до 100 Носитель Н-бутан 1,3 Пропеллент

Микронизированную и просеянную гиалуроновую кислоту смешивают, используя прогрессивное разбавление, с предварительно микронизированным коллоидным серебром. Предварительно полученную смесь смешивают, используя прогрессивное разбавление, с диоксидом кремния. Полученную таким образом смесь в конце смешивают с белым каолином до гомогенности.

Полученный вышеописанным способом промежуточный продукт затем распределяют в цилиндры, находящиеся под давлением.

Сухой спрей, включающей микронизированный, «подобный губке» металлический Ag: 100 г продукта содержат

Компоненты Количество Функция Гиалуронат натрия (натрий НА) ММ 160-200 кДа 0,20 Микронизированное металлическое серебро (MiroSilver BG^TM Pharma) 2,0 Антибактериальный Диоксид кремния (Силоид 244) 4,0 Суспендирующий агент Белый каолин q.s.до 100 Носитель Н-бутан 1,3 Пропеллент

Микронизированную и просеянную гиалуроновую кислоту смешивают, используя прогрессивное разбавление, с подобным губке, микронизированным металлическим серебром, уже имеющим микронный размер частиц. Полученную предварительную смесь смешивают, используя прогрессивное разбавление, с диоксидом кремния. Полученную таким образом смесь в конце смешивают с белым каолином до гомогенности.

Промежуточный продукт, полученный указанным выше способом, затем распределяют в цилиндры, находящиеся под давлением.

Пена для нанесения на кожу на основе коллоидного металлического серебра: 100 г продукта содержат:

Компоненты Количество (г) Гиалуронат натрия (натрий НА) ММ 160-200 кДа 0,20 коллоидное металлическое серебро 2,0 Глицерин 6,0 Каприокапроил Макроголглицериды
(Лабразол) 10,0 Гидрированный соевый лецитин 0,3 Полисорбат 80 2,0 Бензиловый спирт 0,5 Калийсорбат 0,1 А-Токоферол ацетат 0,1 Очищенная вода q.s.до 100 Изобутан, н-бутан, пропан Смесь пропеллентов

Дисперсию ранее микронизированного коллоидного серебра в лабразоле добавляют при встряхивании к раствору, состоящему из из гиалуроната натрия и глицерина и перемешивают до гомогенности. Добавляют сорбат калия, бензиловый спирт, полисорбат 80, альфа-токоферолацетат, гидрированный соевый лецитин и встряхивают до растворения. Добавляют очищенную воду до достижения конечного объема и встряхивают до гомогенности. Полученный препарат фильтруют и распределяют в находящиеся под давлением контейнеры.

Пена для нанесения на кожу на основе микронизированного, «подобного губке» металлического серебра: 100 г продукта содержат:

Компоненты Количество (г) Гиалуронат натрия (натрий НА) ММ 160-200 кДа 0,20 Микронизированное металлическое серебро (MiroSilver BG^TM Pharma) 2,0 Глицерин 6,0 Каприокапроил Макроголглицериды
(Лабразол) 10,0 Гидрированный соевый лецитин 0,3 Полисорбат 80 2,0 Бензиловый спирт 0,5 Сорбат калия 0,1 А-Токоферолацетат 0,1 Очищенная вода q.s.до 100 Изобутан, н-бутан, пропан Смесь пропеллентов

Дисперсию микронизированного, «подобного губке» металлического серебра в лабразоле добавляют при встряхивании к раствору, состоящему из гиалуроната натрия и глицерина, и перемешивают до гомогенности. Добавляют сорбат калия, бензиловый спирт, полисорбат 80, альфа-токоферолацетат, гидрированный соевый лецитин и встряхивают до растворения. Добавляют очищенную воду до достижения конечного объема и встряхивают до гомогенности. Полученный препарат фильтруют и распределяют в находящиеся под давлением контейнеры.

Гидрофильный гель, включающий коллоидное металлическое серебро: 100 г продукта содержат:

Компоненты Количество (г) Гиалуронат натрия (натрий НА) ММ 160-200 кДа 0,20 Коллоидное металлическое серебро 2,0 Карбомер 974Р 1,5 Глицерин 10,0 Пропиленгликоль 6,675 Триэтаноламин 1,325 PEG 400 6,675 Метил-р-гидроксибензоат 0,2 Пропил-р-гидроксибензоат 0,02 Очищенная вода q.s.до 100

Метил-p-гидроксибензоат и пропил-p-гидроксибензоат растворяют в очищенной воде при 80°C. После охлаждения раствора до комнатной температуры, добавляют гиалуронат натрия и перемешивают до завершения растворения. Затем растворяют PEG 400 и добавляют карбомер 974P, продолжая встряхивать до получения гомогенной дисперсии и достижения полной гидратации последней. Затем добавляют триэтаноламин до достижения гелеобразования водной фазы. И наконец, при встряхивании добавляют глицерин, пропиленгликоль и предварительно микронизированное коллоидное серебро и перемешивают до гомогенности.

Гидрофильный гель, включающий микронизированное, «подобное губке» металлическое серебро: 100 г продукта содержат:

Компоненты Количество (г) Гиалуронат натрия (натрий НА) ММ 160-200 кДа 0,20 Микронизированное металлическое серебро (MiroSilver BG^TM Pharma) 2,0 Карбомер 974Р 1,5

Глицерин 10,0 Пропиленгликоль 6,675 Триэтаноламин 1,325 PEG 400 6,675 Метил-р-гидроксибензоат 0,2 Пропил-р-гидроксибензоат 0,2 Очищенная вода q.s.до 100

Метил-p-гидроксибензоат и пропил-p-гидроксибензоат растворяют в очищенной воде при 80°C. После охлаждения раствора до комнатной температуры, добавляют гиалуронат натрия, и перемешивают до завершения растворения. Затем растворяют PEG 400 и добавляют карбомер 974P, продолжая встряхивать до образования гомогенной дисперсии и достижения полной гидратации последней. Затем добавляют триэтаноламин до достижения гелеобразования водной фазы. И, наконец, при встряхивании добавляют глицерин, пропиленгликоль и микронизированное, «подобное губке» металлическое серебро и перемешивают до гомогенности.

Таким образом, было обнаружено, что композиция, включающая HA со среднемассовой ММ 130-230 кДа, предпочтительно 145-210 кДа и, более предпочтительно, от 160 до 200 кДа, с концентрацией серебра 2% масс/масс, способна уничтожать потенциально патогенные бактерии и может быть эффективно использована при наружном лечении для обработки кожных поражений и ран, возникающих, например, от кожных изъязвлений и/или ран различного происхождения, в форме сухого спрея или пены для нанесения на кожу, или гидрофильного геля. Серебро в композициях настоящего изобретения может быть в коллоидной металлической форме или в микронизированной, «подобной губке» металлической форме, причем последняя предпочтительнее, ввиду ее неожиданно высокой активности против MRSA инфекций.

Изобретение относится к медицине и представляет собой композицию для применения в качестве лекарственного средства при наружной обработке ран. Композиция включает 0,1-2% мас./мас. гиалуроната натрия и 1-3% мас./мас. серебра. Гиалуронат натрия имеет среднемассовую молекулярную массу 130-230 кДа. Серебро находится в микронизированной металлической форме с пористой, «подобной губке» структурой со средним размером частиц 2-18 мкм и поверхностью не менее чем 5 м²/г или в коллоидной металлической форме. Изобретение относится также к фармацевтической композиции, включающей указанную композицию и эксципиент. Технический результат - антибактериальная активность и эффективность при лечении ран, защита фибробластов от цитотоксической активности серебра. 2 н. и 14 з.п. ф-лы, 3 табл., 5 ил.

1. Композиция для применения в качестве лекарственного средства при наружной обработке поверхностных и/или маленьких полостных кожных поражений и/или ран, включающая гиалуронат натрия и серебро, где

(i) гиалуронат натрия имеет среднемассовую молекулярную массу 130-230 кДа и концентрация указанного гиалуроната натрия на всю композицию составляет 0,1-2% мас./мас.;

(ii) серебро находится в микронизированной металлической форме с пористой, «подобной губке» структурой со средним размером частиц 2-18 мкм и поверхностью не менее чем 5 м²/г или в коллоидной металлической форме и концентрация указанного серебра в микронизированной металлической форме с пористой, «подобной губке» структурой или в коллоидной металлической форме в расчете на всю композицию составляет 1-3% мас./мас.

2. Композиция для применения по п. 1, где гиалуронат натрия имеет среднемассовую молекулярную массу 145-210 кДа.

3. Композиция для применения по п. 1, где гиалуронат натрия имеет среднемассовую молекулярную массу 160-200 кДа и серебро находится в микронизированной металлической форме с пористой, «подобной губке» структурой.

4. Композиция для применения по п. 1, где гиалуронат натрия имеет среднемассовую молекулярную массу 160-200 кДа и серебро находится в коллоидной металлической форме.

5. Композиция для применения по пп. 1-4, где концентрация гиалуроната натрия в расчете на всю композицию составляет 0,1-0,5% мас./мас.

6. Композиция для применения по п. 5, где концентрация гиалуроната натрия в расчете на всю композицию составляет 0,2% мас./мас.

7. Композиция для применения по любому из пп. 1-4 или 6, где концентрация серебра в расчете на всю композицию составляет 2% мас./мас.

8. Фармацевтическая композиция для применения в качестве лекарственного средства при наружной обработке поверхностных и/или маленьких полостных кожных поражений и/или ран, включающая композицию с ее применением по любому из предшествующих пунктов, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.

9. Фармацевтическая композиция для применения по п. 8, где по меньшей мере один эксципиент выбирают из суспендирующего агента, носителя и пропеллента.

10. Фармацевтическая композиция для применения по п. 9, в которой указанный пропеллент выбирают из группы, состоящей из смесей изобутан/н-бутан/пропан и н-бутана.

11. Фармацевтическая композиция для применения по п. 8 в форме сухого спрея, пены или гидрофильного геля, которая пригодна для нанесения на кожу.

12. Фармацевтическая композиция для применения по п. 11 в форме сухого спрея, включающая гиалуронат натрия со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа с концентрацией 0,2% мас./мас., серебро в металлической микронизированной форме с пористой, «подобной губке» структурой в концентрации 2% мас./мас. и н-бутан в качестве пропеллента.

13. Фармацевтическая композиция для применения по п. 11 в форме сухого спрея, включающая гиалуронат натрия со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа в концентрации 0,2% мас./мас., серебро в коллоидной металлической форме в концентрации 2% мас./мас. и н-бутан в качестве пропеллента.

14. Фармацевтическая композиция для применения по пп. 11-13 в форме сухого спрея, который ложится как прозрачный гель на полость поражения для промотирования оптимального влажного ранозаживления.

15. Фармацевтическая композиция для применения по п. 11 в форме пены, включающая гиалуронат натрия со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа в концентрации 0,2% мас./мас., серебро в металлической микронизированной форме с пористой, «подобной губке» структурой или в коллоидной металлической форме в концентрации 2% мас./мас. и смесь изобутан/н-бутан/пропан в качестве пропеллента.

16. Фармацевтическая композиция для применения по п. 11 в форме гидрофильного геля, включающая гиалуронат натрия со среднемассовой молекулярной массой 160-200 кДа в концентрации 0,2% мас./мас., серебро в металлической микронизированной форме с пористой, «подобной губке» структурой или в коллоидной металлической форме в концентрации 2% мас./мас.