Способ прогнозирования угрозы невынашивания беременности ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции путем определения в крови плацентарного фактора роста Российский патент 2018 года по МПК G01N33/50 

Область применения: изобретение относится к области медицины, а именно к проблеме создания новых способов прогнозирования прерывания и невынашивания беременности ранних сроков инфекционного генеза, в том числе при цитомегаловирусной инфекции.

Уровень техники

Высокий процент гестационных потерь (20-25%) и широкое распространение цитомегаловирусной (ЦМВ) инфекции среди женщин репродуктивного возраста (75-90%) [7, 8] указывают на медико-социальную значимость данной проблемы.

Важно и то, что ЦМВ обладает высокой тератогенной значимостью - второе место после вируса краснухи, что способствует нарушению морфогенеза плаценты и эмбриональных структур, пролонгирующих прерывание и невынашивание беременности ранних сроков [3, 8].

Вышеизложенные данные определяют необходимость разработки прогностических критериев угрозы прерывания при данной патологии у женщин, что позволит снизить число репродуктивных потерь за счет формирования групп риска и комплекса лечебно-профилактических мероприятий.

На сегодняшний день диагностике и прогнозированию невынашивания беременности инфекционного генеза посвящено немало работ. Известны способы прогнозирования невынашивания беременности ранних сроков инфекционного генеза путем определения в сыворотке крови растворимой формы рецептора sFlt-1 [2], содержания в слизи цервикального канала интерлейкина-12 [4] и уровня MIP-1α [5].

Вышеперечисленные факторы как изолированно, так и в сочетании друг с другом могут свидетельствовать о нарушении процессов имплантации и сопутствующей ему гибели и отторжении эмбриона на ранних этапах беременности. В связи с этим, наибольшую диагностическую ценность имеют способы, позволяющие проводить раннюю диагностику и прогнозирование угрожающих состояний беременности инфекционного генеза.

Аналогами данного изобретения являются приведенные выше способы прогнозирования невынашивания беременности инфекционного генеза [2, 4, 5], основными недостатками которых являются трудоемкость и неспецифичность.

Наиболее близким по техническому решению является способ прогнозирования неразвивающейся беременности, путем определения в сыворотке крови содержания плацентарного фактора роста (PlGF) [12]. При снижении его в 2,7 и более раза относительно нормы прогнозируют неразвивающуюся беременность.

Несмотря на достоинства данного метода, недостатком являются то, что при оценке угрожающего течения беременности учитывается один из клинических вариантов проявлений невынашивания - гибель эмбриона с его задержкой в полости матки, тогда как наши исследования раскрывают конкретные этиопатогенетические взаимосвязи между содержанием PlGF в сыворотке крови ЦМВ-серопозитивных беременных, уровнем активности инфекции на первом триместре и риском угрозы прерывания. Данный способ принят за прототип.

Недостатки прототипа устраняются в заявляемом способе.

Задача изобретения - повышение точности способа прогнозирования угрозы невынашивания беременности ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции для своевременного лечения и выработки оптимальной тактики ведения беременности с целью снижения перинатальной заболеваемости и смертности.

Поставленная задача решается тем, что у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией на первом триместре беременности проводят определение в сыворотке крови уровня антител IgM и содержания PlGF и при уровне антител IgM к ЦМВ 2,0 ЕД/мл и более и показателях PlGF 53,70 пг/мл и менее прогнозируют прерывание беременности.

Технический результат состоит в том, что данный способ обладает высокой точностью, чувствительностью и специфичностью.

Плацентарный фактор роста (PlGF) относят к проангиогенным факторам, регулирующим морфогенез плаценты и васкуляризацию ее ворсин, что обеспечивает процессы инвазии трофобласта и формирование маточно-плацентарного кровообращения [11]. Его секреция гигантскими клетками трофобласта, как показывают исследования, является сигналом, инициирующим и координирующим васкуляризацию в decidua и плаценте во время раннего эмбриогенеза [9]. Неадекватное формирование и дисфункция сосудов плаценты приводят к развитию недостаточности первой волны инвазии трофобласта и обусловленную этим редукцию маточно-плацентарного кровообращения, гипоплазию плаценты и задержку внутриутробного развития эмбриона [6, 13]. Эти данные согласуются с результатами исследования A. Khaliq и соавт. [10], которые считают, что локализация в большом количестве мРНК и протеина PlGF в синцитиокапиллярной мембране ворсин плаценты указывает на то, что PlGF может выступать как паракринный медиатор формирования кровеносных сосудов плаценты в процессе ангиогенеза.

Вместе с тем, в литературе отсутствуют данные, доказывающие вовлеченность PlGF в патогенез ранних выкидышей при цитомегаловирусной инфекции.

Таким образом, PlGF следует рассматривать как важную регуляторную составляющую при цитомегаловирусной инфекции, определяющую события, которые характеризуют прерывание и невынашивание беременности ранних сроков.

Изучение содержания PlGF в сыворотке крови позволит оценить характер процессов имплантации при цитомегаловирусной инфекции.

Вышеизложенное явилось основанием к исследованию показателей PlGF, определяемого в сыворотке крови женщин при цитомегаловирусной инфекции на первом триместре беременности, для прогноза угрозы невынашивания. Наши исследования позволили установить количественные показатели PlGF в сыворотке крови, которые являются определяющими для отбора женщин высокой группы риска по невынашиванию беременности ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции.

Способ осуществляют следующим образом:

У беременных с выявленной цитомегаловирусной инфекцией на первом триместре исследуют сыворотку крови, полученную из цельной крови, взятой из локтевой вены утром натощак в количестве 5 мл. Определение уровня антител IgM к ЦМВ и показателей PlGF проводят методом иммуноферментного анализа с использованием стандартных тест-систем ЦMB-IgM-ИФА-БЕСТ (Россия) и Quantikine PlGF Human (США). Учет реакции проводят на иммуноферментном анализаторе Stat Fax-2100 (США) согласно протоколам для постановки иммуноферментного анализа от фирмы-производителя в сыворотке крови.

При уровне антител IgM к ЦМВ 2,0 ЕД/мл и более и показателях PlGF 53,70 пг/мл и менее прогнозируют прерывание беременности ранних сроков, что позволяет акушеру-гинекологу своевременно назначить адекватную терапию.

Достоверность способа была подтверждена нашими исследованиями. По заявляемому способу обследовано 45 беременных на первом триместре беременности, из них - 20 были ЦМВ-серопозитивными (1 группа) и 25 - ЦМВ-серонегативными (2 группа). В 1 группе диагностирована реактивация цитомегаловирусной инфекции, о чем свидетельствовал высокий уровень антител IgM к ЦМВ 2,0±0,16 ЕД/мл (оптическая плотность контрольного образца - 0,210 ЕД/мл). Показатели PlGF по сравнению со 2 группой (69,00±1,28 пг/мл) уменьшались до 53,70±1,61 пг/мл (р=0,000). Все женщины 1 группы имели клинические признаки угрозы прерывания беременности, которая, несмотря на проводимую сохраняющую терапию, закончилась самопроизвольным выкидышем.

Таким образом, учитывая достоверность различий, показатель PlGF в сыворотке крови женщин при цитомегаловирусной инфекции на первом триместре беременности 53,70 пг/мл и менее, определяемый до начала терапии, является прогностическим маркером угрозы прерывания беременности.

Статистический анализ исходных данных осуществлялся с использованием лицензионных пакетов прикладных программ Microsoft Exel 2007, Statistica 6.0.

Точность метода определения PlGF составляет 88,2%, чувствительность - 83,3%, специфичность - 90,9,7%. Предсказательная ценность положительного теста составляет 95,2%, предсказательная значимость отрицательного теста - 71,4%.

Преимущество заявляемого метода состоит в том, что у беременных с цитомегаловирусной инфекцией на основании высокочувствительных современных лабораторных маркеров инфекционно-воспалительного процесса производится прогнозирование угрозы невынашивания, с целью своевременного назначения адекватной терапии. В клинической практике это позволит снизить угрозу перинатальных потерь за счет своевременного выявления беременных группы риска и начала адекватных лечебных мероприятий.

Данный способ неинвазивен, обладает быстротой исполнения с использованием стандартных тест-систем, что позволяет широко использовать его в практическом здравоохранении.

Пример 1. Беременная А., 24 г., находилась на стационарном лечении в АОПБ ДНЦ ФПД. Повторнобеременная. Диагноз: Беременность 8-9 недель. Угрожающий аборт. Хроническая цитомегаловирусная инфекция - стадия обострения.

При обследовании была проведена ПЦР диагностика содержимого цервикального канала, выявлено ДНК ЦМВ, при иммуноферментном исследовании сыворотки крови - типоспецифические антитела к ЦМВ классов М и G. Уровень антител IgM к ЦМВ - 2,2 ЕД/мл. Диагностирована реактивация цитомегаловирусной инфекции.

Определен PlGF, показатели соответствовали 53,2 пг/мл. Заключение: прогнозируется угроза прерывания беременности с неблагоприятным исходом.

Беременной назначен курс сохраняющей терапии, который результатов не дал. Боли внизу живота усилились, появились кровянистые выделения из половых путей. На сроке 9 недель произошло прерывание беременности, что подтвердило правильность прогноза.

Пример 2. Беременная С., 25 л., находилась на стационарном лечении в АОПБ ДНЦ ФПД. Повторнобеременная. Диагноз: Беременность 9-10 недель. Отягощенный акушерско-гинекологический анамнез. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, латентное течение.

При обследовании была проведена ПЦР диагностика. ДНК ЦМВ не выявлено. При иммуноферментном исследовании сыворотки крови определялись типоспецифические антитела к ЦМВ класса G. Диагностировано латентное течение хронической цитомегаловирусной инфекции.

Определен PlGF, показатели составили 71,3 пг/мл. Заключение: физиологическое течение беременности.

У данной пациентки беременность пролонгировалась и завершилась родами в срок 38-39 недель. Данный клинический пример подтверждает возможность прогнозирования физиологического течения беременности

Источники информации

1. Подходы к диагностике цитомегаловирусной инфекции в акушерстве и неонатологии / М.Л. Алексеева, А.Н. Екимов, В.Е. Екимова [и др.] // Проблемы репродукции. - 2010. - №5. - С. 52-56.

2. Дубровина C.O., Маклюк A.M. Способ прогнозирования невынашивания беременности ранних сроков инфекционного генеза / Патент РФ №2444734, 10.03.2010.

3. Кулаков В.И., Гуртовой Б.Л., Орджоникидзе Н.В., Тютюнник B.Л. Цитомегаловирусная инфекция в акушерстве. В помощь практическому врачу. – М.: ГАОЭТАР-МЕД. - 2001. - 32 с.

4. Левкович М.А. Способ прогнозирования невынашивания беременности при урогенитальной инфекции / Патент РФ №2341799, 20.12.2008.

5. Левкович М.А., Линде В.А., Палиева Н.В., Андреева В.О., Нефедова Д.Д. Способ прогнозирования невынашивания беременности в ранние сроки / Патент РФ №2501017, 10.12.2013.

6. Милованов А.П., Фокин Е.И., Рогова Е.В. Основные патогенетические механизмы хронической плацентарной недостаточности. Архив патологии. - 1995. - Т. 57, №4. - С. 11-15.

7. Раздинский В.Е., Запертова Е.Ю., Миск В.В. Генетические и иммунологические аспекты привычного невынашивания беременности // Акушерство и гинекология. - 2005. - С. 6., Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности // Иммунологические аспекты невынашивания беременности. - М., 2007. - С.70-71.

8. Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности // Иммунологические аспекты невынашивания беременности. М., 2007. - C. 70-71.

9. Purification and characterization of a naturally occurring vascular endothelial growth factor-placenta growth factor heterodimer / DiSalvo J, Bayne ML, Conn G [et al.] // J Biol Chem 1995; 270: 7717-7723.

10. Automated evaluation of angiogenic effects mediated by VEGF and PLGF homo-and heterodimers / Kurz H, Wilting J, Sandau K [et al.] // Microvasc Res 1998; 55(1): 92-102.

11. Decidual vascularization and the expression of angiogenic growth factors and proteases in first trimester spontaneous abortions / Plaisier M, Dennert I, Rost E [et al.] // Hum. Reprod. 2009 Jan; 24(1): 185-97.

12. Plasma Placenta Growth Factor Levels in Midtrimester Pregnancies / Tjoa ML, van Vugt JM, Mulders MA [et al.] // Obstet Gynecol. 2001; 98(4): 600-607.

13. Plasma Tumor Necrosis Factor-a Solube Receptor p55 (sTNF p55) Concentration in Eclamptic, Preeclamptic and Normotensive Pregnant Women / Wiliams MA, Mahomed K, Farrand A [et al.] // 11th World Congress of the International Society for the Study of Hypertension in Pregnancy (ISSHP). 572.

Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования угрозы невынашивания беременности ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции. Способ заключается в том, что у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией на первом триместре беременности проводят определение в сыворотке крови уровня антител IgM и содержания PlGF. При уровне антител IgM к ЦМВ 2,0 ЕД/мл и более и показателях PlGF 53,70 пг/мл и менее прогнозируют прерывание беременности. Использование заявленного изобретения позволяет повысить точность прогнозирования угрозы невынашивания беременности ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции для назначения своевременных лечебных мероприятий. 2 пр.

Способ прогнозирования угрозы невынашивания беременности ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции путем исследования сыворотки крови иммуноферментным методом, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень антител IgM к ЦМВ и показатели P1GF, и при уровне антител IgM к ЦМВ 2,0 ЕД/мл и более и показателях P1GF 53,70 пг/мл и менее прогнозируют прерывание беременности.