Способ прогнозирования перехода среднетяжёлого течения нумулярной микробной экземы в тяжёлое течение Российский патент 2019 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии и клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования тяжести заболевания у больных нумулярной микробной экземой.

Реактивность организма на внедрение инфекционных агентов, включая бактерии, вирусы, грибы и паразиты зависит от состояния иммунной системы [Biagini Myers J.M. Eczema in erly life: genetics, the skin barrier and lessons lesrned from birth cohort studies / J.M. Biagini Myers, G.K. Khurana Hershey // J Pediatr. - 2010. №157 (5). - P. 704-14]. Первичные иммунодефицитные состояния, а так же вторичные изменения приводят к слабому иммунному ответу на внедрение микробных агентов. Возникающая персистенция аллергенов усугубляет изначальную дисфункцию иммунной системы. Одним из клинических вариантов данного нарушения адаптационной иммунной реакции является микробная экзема [Bartlett A. Adult eczema // Nurs Stand. - 2010. №24. - P. 43-51]. Механизмы развития иммунных нарушений в организме в целом и непосредственно в коже больных нумулярной микробной экземой, метаболические нарушения, способствующие снижению активности факторов неспецифической защиты и их взаимосвязь с иммунной реактивностью на сегодняшний день изучены недостаточно [Потекаев Н.С. Экзема: ремарки к современным представлениям // Клин. дерматология и венерология. - 2009. - №1. - С. 67-73].

Нейтрофилы являются основными фагоцитирующими клетками, мигрирующими из центрального кровотока в очаги воспаления при проникновении патогенов, где преимущественно и реализуется их защитная функция [Ярилин А.А. Иммунология: Учебник / А.А. Ярилин //. - М: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 752 с.].

В последние годы для нумулярной микробной экземы характерно тяжелое течение, частое рецидивирование, резистентность к стандартным методам лечения [Скрипкин Ю.К. Кожные и венерические болезни / Ю.К. Скрипкин, А.А. Кубанова, В.Г. Акимова. - М: ГЭОТАР-медиа. 2012. - 544 с.].

Наиболее близким аналогом изобретения является способ индивидуального прогнозирования вероятности ухудшения клинического течения экземы, перехода ее в эритродермию, заключающийся в том, что проводят интегрированную оценку патогенетической значимости выявленных факторов риска. Определяют прогностический коэффициент (ПК) для таких признаков, как: пол; возраст; рабочие нефтехимического производства; сельхозрабочие; строители; водители; служащие; гиперинсоляция; неблагоприятные условия сельхозтруда (контакт с пестицидами, удобрениями; контакт с нефтепродуктами; контакт со стройматериалами; нерациональное применение лекарств; наличие очагов хронической бактериальной и/или грибковой инфекции; часто рецидивирующие ОРВИ; хронические заболевания желудочно-кишечного тракта и/или печени; хронические заболевания органов дыхания; хронические заболевания ЛОР-органов; нарушения детоксикационной функции печени; нарушения метаболической функции печени; уменьшение иммунорегуляторного индекса; уменьшение индекса стимуляции; уменьшение цитотоксического индекса; увеличение уровня циркулирующих иммунных комплексов; увеличение среднего уровня иммуноглобулинов; наличие кожного антигена в крови; увеличение уровня противотканевых аутоантител; увеличение индекса торможения миграции лейкоцитов. При отсутствии фактора его прогностический коэффициент принимают за ноль. Суммируют полученные ПК и при значении суммы ПК от 2,64 до 10,23 прогнозируют низкую вероятность ухудшения клинического течения экземы и благоприятный прогноз заболевания без перехода ограниченной формы экземы в распространенную. При значении суммы ПК от 10,24 до 30,24 - среднюю вероятность ухудшения клинического течения экземы, возможность перехода ограниченной формы заболевания в распространенную, относительно благоприятный прогноз без развития эритродермии. При значении суммы ПК от 30,25 до 50,25 и выше - высокую вероятность ухудшения клинического течения заболевания и неблагоприятный прогноз, возможность перехода экземы в эритродермию [патент RU 2508901, 2014г.]. Недостатками данного способа являются длительность и трудоемкость исследования.

Задачей изобретения стала разработка способа прогнозирования перехода средне-тяжелого течения заболевания в тяжелое течение у больных нумулярной микробной экземой.

Техническим результатом при использовании изобретения является повышение точности диагностики заболевания за счет получения критериев прогноза перехода средне-тяжелого течения нумулярной микробной экземой в тяжелое течение, упрощение исследования.

Предлагаемый способ прогнозирования перехода средне-тяжелого течения заболевания в тяжелое течение у больных нумулярной микробной экземой осуществляется следующим образом. У больного нумулярной микробной экземой до начала терапии путем прокола скарификатором кожи в очаге воспаления (1-10 мм от края очага) выполняют забор 40-60 мкл капиллярной крови в капиллярную пробирку. В полученном материале определяют фагоцитарное число (ФЧ) и окислительно-восстановительноую активность нейтрофилов в тесте спонтанного восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест спонт. ). При значениях ФЧ 5,0 и ниже, а НСТ-теста спонт. 4% и ниже в капиллярной крови из очага воспаления прогнозируют вероятность перехода средне-тяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение.

ФЧ - процент нейтрофилов с фагоцитированным материалом. Метод основан на способности нейтрофилов к поглощению различных корпускулярных агентов, которые находятся вместе с испытуемыми клетками [Новиков Д.К. Оценка иммунного статуса / Д.К. Новиков, В.И. Новикова. - Москва; Витебск, 1996. - 281с.].

Кровь (40 мкл) инкубируют с равным объемом суспензии латекса (диаметр частицы 1,49 мкм) фирмы «Биолайн» (Россия) при температуре 37°С в термостате суховоздушном ТС-80М-2 (Россия) 30 мин в лунках полистеролового круглодонного планшета, центрифугируют в центрифуге Biosan LMC-300 (Литва) и ресуспендируют в 20 мкл фосфатнобуферного раствора (ФСБР). Переносят суспензию клеток на предметные стекла, фиксируют 96° этиловым спиртом и окрашивают 0,5% раствором нейтрального красного. Учет результата проводят в бинокулярном микроскопе Микмед-1 (Россия) под иммерсией (10×100) путем просматривания 200 клеток.

НСТ-тест спонт. свидетельствует о «метаболическом взрыве», возникающем в нейтрофиле в связи с фагоцитозом. Данный тест выявляет фагоцитирующие нейтрофилы и характеризует их ферментные системы, обеспечивающие выработку биоокислителей с бактерицидным действием. НСТ-тест спонт. является информативным методом для оценки резистентности при изучении иммунного статуса. Принцип метода основан на способности нейтрофилов поглощать нитросиний тетразолий и восстанавливать его в гранулы нерастворимого диформазана синего цвета [Имельбаева Э.А. Методические указания к занятиям по иммунологии и серологии: Учебно-методическое пособие для специалистов по клинической и лабораторной диагностике / Э.А. Имельбаева, P.M. Хайруллина, Ю.А. Медведев. - Уфа, 2015. - 87 с.].

Для постановки реакции в лунки полистеролового круглодонного планшета к 40 мкл крови добавляют 40 мкл 0,1% раствора нитросинего тетразолия фирмы Sigma (НСТ-тест спонт. ). Суспензии клеток инкубируют 30 мин, центрифугируют и ресуспендируют в 20 мкл ФСБР. Переносят суспензию клеток на предметные стекла, фиксируют 96° этиловым спиртом и окрашивают 0,5% раствором нейтрального красного. Учет результата проводят в бинокулярном микроскопе Микмед-1 (Россия) под иммерсией (10×100) путем просматривания 200 клеток и определения процента положительно прореагировавших клеток на 100 фагоцитов. В каждом мазке подсчитывают количество нейтрофилов, среди которых определяют процент клеток, содержащих включения диформазана.

Авторами в научно-медицинской и патентной литературе не было обнаружено сведений об использовании определения уровня ФЧ и НСТ-теста спонт. в капиллярной крови из очага воспаления у больных нумулярной микробной экземой до начала терапии для прогнозирования возможности перехода средне-тяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «новизна».

Предлагаемым способом была проведена оценка вероятности перехода средне-тяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение у 104 больных. Ретроспективный анализ уровня ФЧ и НСТ-теста спонт. показал достоверно низкие показатели данных параметров (5,0 и 4% и ниже, соответственно) в капиллярной крови из очага воспаления у больных нумулярной микробной экземой со средне-тяжелым течением до начала лечения, которое в ходе проводимой стандартной терапии трансформировалось в тяжелое течение (таблица).

Исследованиями авторов была впервые доказана возможность прогнозирования предлагаемым способом вероятности перехода средне-тяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Изобретение иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Больной К., поступил на стационарное лечение в ГАУЗ Республиканский кожно-венерологический диспансер №1 с жалобами на высыпания на гладкой коже верхних и нижних конечностей, зуд. Возраст - 38 лет. Болен в течение 4-х лет. Обострение наблюдается в течение 2-х недель. Лечение по данному обострению дерматоза не получал. На коже верхних и нижних конечностей наблюдались множественные высыпания в виде характерных округлых бляшек от 1*1 см до 4*4 см с четкими границами, гиперемированные, умеренно инфильтрированные, с множественными серозными колодцами, пустулами и гнойными корками. До лечения ИОТМЭ составлял 19 баллов, что соответствовало средне-тяжелому течению данного дерматоза. При бактериологическом исследование с очагов высеян Staphylococcus aureus. Клинический диагноз - экзема микробная, нумулярная форма, распространенная, хроническая, обострение, средне-тяжелое течение. При поступлении до начала лечения в капиллярной крови из очага воспаления уровень ФЧ составлял 5,3 и НСТ-теста спонт. 5%. Больному было назначено стандартное лечение:

1. раствор кальция глюконат 10% - 10.0 в/м №10 ч/д;

2. раствор натрия тиосульфат 30% - 10.0 в/в кап.на натрия хлориде 0.9% - 200.0 №10 ч/д;

3. таблетки лоратадин 0.01 на ночь №20 дней;

4. капсулы доксициклин 100 мг I день 2 капс.одномоментно, II-Х день по 1 капс.*2 раза в день (в соответствии с результатами посева на чувствительность к антибиотикам);

5. капсулы ретинола ацетат 33000 ME по 2 капс, на ночь №20 дней;

6. наружно: мазь гидрокортизона 17-бутират*2 раза в день №20 дней, мазь гентамициновая 0,1%*2 раза в день №10 дней (в соответствии с результатами посева на чувствительность к антибиотикам).

В процессе лечения отмечалось обратное развитие воспалительных явлений в очагах. На 15-ый день проводимой терапии в капиллярной крови из очага воспаления ФЧ составило 8,1 и НСТ-теста спонт. - 8%. К моменту выписки из стационара (20-ый день лечения) гиперемия, инфильтрация и мокнутие разрешились, корки отпали, на месте разрешившихся очагов сохранялась поствоспалительная пигментация. Таким образом, у данного больного до лечения в капиллярной крови из очага воспаления уровень ФЧ был выше 5,0 и НСТ-теста спонт. выше 4%, течение дерматоза соответствовало средне-тяжелому, и трансформации в тяжелое течение на фоне стандартной терапии не произошло.

Пример 2. Больная Ж., поступила на стационарное лечение в ГАУЗ Республиканский кожно-венерологический диспансер №1 с жалобами на высыпания на гладкой коже верхних и нижних конечностей, зуд. Возраст - 39 лет. Считает себя больной в течение 3,5 лет. Обострение наблюдается в течение 2-х недель. Лечение по данному обострению дерматоза не получала. На коже верхних и нижних конечностей наблюдались множественные высыпания в виде характерных округлых бляшек от 1*1 см до 5*5 см с четкими границами, гиперемированные, инфильтрированные, с множественными серозными колодцами, пустулами и гнойными корками. До лечения ИОТМЭ составлял 18 баллов, что соответствовало средне-тяжелому течению данного дерматоза. При бактериологическом исследование с очагов высеян Staphylococcus aureus. Клинический диагноз - экзема микробная, нумулярная форма, распространенная, хроническая, обострение, средне-тяжелое течение. При поступлении до начала лечения ФЧ составляло 4,5 и НСТ-теста спонт. - 3,8% в капиллярной крови из очага воспаления. Больной было назначено стандартное лечение:

1. раствор кальция глюконат 10%- 10.0 в/м №10 ч/д;

2. раствор натрия тиосульфат 30% - 10.0 в/в кап.на натрия хлориде 0.9% - 200.0 №10 ч/д;

3. таблетки лоратадин 0.01 на ночь №20 дней;

4. капсулы доксициклин 100 мг I день 2 капс.одномоментно, II-Х день по 1 капс.*2 раза в день (в соответствии с результатами посева на чувствительность к антибиотикам);

5. капсулы ретинола ацетат 33000 ME по 2 капс, на ночь №20 дней;

6. наружно: мазь гидрокортизона 17-бутират*2 раза в день №20 дней, мазь гентамициновая 0,1%*2 раза в день №10 дней (в соответствии с результатами посева на чувствительность к антибиотикам).

В процессе лечения воспалительные явления в очагах продолжали сохраняться, инфильтрация усиливалась. На 15-ый день терапии ИОТМЭ составил 26 баллов, что соответствовало переходу средне-тяжелого течения заболевания в тяжелое течение. В капиллярной крови из очага воспаления уровень ФЧ составлял 4,3 и НСТ-теста спонт. 3%. К стандартному лечению дополнительно был назначен иммуномодулятор. К моменту выписки из стационара (20-ый день лечения) гиперемия, инфильтрация значительно уменьшились, мокнутие разрешилось, корки отпали, на месте разрешившихся очагов сохранялась поствоспалительная пигментация.

Таким образом, у данной больной до лечения в капиллярной крови из очага воспаления уровень ФЧ был ниже 5,0 и НСТ-теста спонт. ниже 4%, течение дерматоза соответствовало средне-тяжелому, но в ходе проводимой стандартной терапии произошла трансформация в тяжелое течение, что привело к необходимости коррекции схемы лечения.

Как видно из приведенных примеров, результаты определения уровня ФЧ и НСТ-теста спонт. в капиллярной крови из очага воспаления до лечения позволяют прогнозировать вероятность перехода средне-тяжелого течения заболевания в тяжелое течение.

Предлагаемый способ легко воспроизводим в условиях лаборатории стационара. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «промышленная применимость».

* Различия с показателями практически здоровых лиц достоверно (р<0,01)

** Различия с показателями 1 и 2 групп достоверно (р<0,01).

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии и клинической лабораторной диагностике. Способ прогнозирования перехода среднетяжелого течения в тяжелое течение заболевания у больных нумулярной микробной экземой включает определение до начала терапии в крови иммунологических показателей, при этом в качестве иммунологических показателей в капиллярной крови из очага воспаления определяют фагоцитарное число и окислительно-восстановительную активность нейтрофилов в тесте спонтанного восстановления нитросинего тетразолия и при их значениях соответственно 5,0 и ниже, 4% и ниже прогнозируют вероятность перехода среднетяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение. 1 табл., 2 пр.

Способ прогнозирования перехода среднетяжелого течения в тяжелое течение заболевания у больных нумулярной микробной экземой, включающий определение до начала терапии в крови иммунологических показателей, отличающийся тем, что в качестве иммунологических показателей в капиллярной крови из очага воспаления определяют фагоцитарное число и окислительно-восстановительную активность нейтрофилов в тесте спонтанного восстановления нитросинего тетразолия и при их значениях соответственно 5,0 и ниже, 4% и ниже прогнозируют вероятность перехода среднетяжелого течения нумулярной микробной экземы в тяжелое течение.