В данной заявке преимущество приоритета заявлено в отношении предварительных заявок США с серийными №№61/009971, поданной 4 января 2008 г.; 61/194294, поданной 26 сентября 2008 г., и 61/201146, поданной 5 декабря 2008 г., и одновременно рассматриваемой заявки под номером 35280-714.602 в реестре патентных поверенных, поданной при этом, каждая из которых тем самым включена во всей своей полноте посредством ссылки.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ ИЗОБРЕТЕНИЮ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Активность клеток можно регулировать внешними сигналами, которые стимулируют или ингибируют внутриклеточные события. Процесс, посредством которого стимулирующие или ингибирующие сигналы передаются в клетку и внутри клетки с целью вызвать внутриклеточный ответ, называется сигнальной трансдукцией. В течение последних десятилетий были выявлены каскады событий, происходящих при сигнальной трансдукции, и обнаружено, что они играют центральную роль в множестве биологических ответов. Обнаружено, что нарушения в различных компонентах путей сигнальной трансдукции вызывают большое число заболеваний, включая многочисленные формы рака, воспалительные расстройства, метаболические расстройства, сосудистые и нервные болезни (Gaestel et al. Current Medicinal Chemistry (2007) 14: 2214-2234).
Киназы представляют собой класс важных сигнальных молекул. Киназы в целом можно подразделить на протеинкиназы и липидкиназы, и некоторые киназы проявляют двойную специфичность. Протеинкиназы представляют собой ферменты, которые фосфорилируют другие белки и/или самих себя (то есть, аутофосфорилирование). Протеинкиназы в целом можно подразделить на три основные группы на основании использования ими субстрата: тирозинкиназы, которые преимущественно фосфорилируют субстраты по остаткам тирозина (например, erb2, рецептор PDGF (фактор роста из тромбоцитов), рецептор EGF (эпидермальный фактор роста), рецептор VEGF (фактор роста эндотелия сосудов), src, abl), серин/треонинкиназы, которые предпочтительно фосфорилируют субстраты по остаткам серина и/или треонина (например, mTorC1 (комплекс 1 мишени рапамицина у млекопитающих), mTorC2, ATM (мутированный ген атаксии-телангиэктазии), ATR (видоизмененной атаксии-телангиэктазии и родственного Rad3), DNA-PK (активируемая ДНК протеинкиназа), Akt (протеинкиназа В)) и киназ с двойной специфичностью, которые фосфорилируют субстраты по остаткам тирозина, серина и/или треонина.
Липидкиназы представляют собой ферменты, которые катализируют фосфорилирование липидов. Эти ферменты и полученные в результате фосфорилированные липиды и происходящие из липидов биологически активные органические молекулы играют роль во многих разнообразных физиологических процессах, включая клеточную пролиферацию, миграцию, адгезию и дифференцировку. Некоторые липидкиназы являются связанными с мембранами и катализируют фосфорилирование липидов, содержащихся в клеточных мембранах или связанных с клеточными мембранами. Примеры таких ферментов включают фосфоинозитид-киназы (такие как PI3 (фосфатидилинозит-3)-киназы, PI4-киназы), диацилглицеролкиназы и сфингозинкиназы.
Сигнальный путь с участием фосфоинозитид-3-киназ (PI3K) представляет собой одну из систем, которые в наибольшей степени подвержены мутациям при различных видах рака у человека. Также передача сигнала через PI3K является ключевым фактором при многих других заболеваниях у человека. Процесс передачи сигнала через PI3K вовлечен во многие болезненные состояния, включая аллергический контактный дерматит, ревматоидный артрит, остеоартрит, воспалительные заболевания кишечника, хроническое обструктивное расстройство легких, псориаз, рассеянный склероз, астму, расстройства, связанные с осложнениями диабета и воспалительными осложнениями сердечно-сосудистой системы, такие как острый коронарный синдром.
PI3K являются членами уникального и консервативного семейства внутриклеточных липидкиназ, которые фосфорилируют группу 3'-ОН фосфатидилинозитов или фосфоинозитидов. Р13K-семейство содержит 15 киназ с различными субстратными специфичностями, картинами экспрессии и способами регуляции (Katso et al., 2001). PI3K класса I (р110α, р110β, р110δ и р110γ) обычно активируются тирозинкиназами или G-белок-связанными рецепторами с получением PIP3 (фосфатидилинозит-трифосфат), который вовлекает расположенные ниже "по течению" эффекторы, такие как эффекторы в пути Akt/PDK1 (Akt/фосфоинозитид-зависимая киназа-1), mTOR, киназы Тес-семейства и ГТФазы Rho-семейства. PI3-киназы классов II и III играют ключевую роль во внутриклеточном прохождении сигнала посредством синтеза PI(3)P (фосфатидилинозит-3-фосфата) и PI(3,4)P2 (фосфатидилинозит-3,4-бифосфата). PIKK (фосфатидилинозитолкиназы) представляют собой протеинкиназы, которые регулируют клеточный рост (mTORC1) или контролируют целостность генома (ATM, ATR, DNA-PK и hSmg-1).
Изоформа дельта (δ) PI3K класса I вовлечена, в частности, в ряд заболеваний и биологических процессов. PI3Kδ экспрессируется главным образом в гематопоэтических клетках, включая лейкоциты, такие как Т-клетки, дендритные клетки, нейтрофилы, тучные клетки, В-клетки и макрофаги. PI3Kδ вовлечена как неотъемлемая часть в такие функции иммунной системы млекопитающих, как функция Т-клеток, активация В-клеток, активация тучных клеток, функция дендритных клеток и активность нейтрофилов. Вследствие своей неотъемлемой роли в функционировании иммунной системы, PI3Kδ также вовлечена в ряд заболеваний, связанных с нежелательным иммунным ответом, таких как аллергические реакции, воспалительные заболевания, опосредованный воспалением ангиогенез, ревматоидный артрит, аутоиммунные заболевания, такие как обыкновенная волчанка, астма, эмфизема и другие респираторные заболевания. Другая PI3K класса I, вовлеченная в функционирование иммунной системы, включает PI3Kγ, которая играет роль в передаче сигнала лейкоцитов и вовлечена в воспаление, ревматоидный артрит и аутоиммунные заболевания, такие как обыкновенная волчанка.
Медиаторы, расположенные ниже "по течению" в PI3K-пути сигнальной трансдукции, включают Akt и мишень рапамицина у млекопитающих (mTOR). Akt содержит плекстрин-гомологичный (РН) домен, который связывается с PIP3, что вызывает активацию Akt-киназы. Akt фосфорилирует многие субстраты и является центральным расположенным ниже "по течению" эффектором PI3K для получения разнообразных клеточных ответов. Одна из важных функций Akt заключается в увеличении активности mTOR посредством фосфорилирования TSC (комплекс туберозного склероза) 2 и других механизмов. mTOR является серин-треонинкиназой, родственной липидкиназам PI3K-семейства. mTOR вовлечен в широкий диапазон биологических процессов, включая клеточный рост, клеточную пролиферацию, подвижность и выживание клеток. Сообщалось о дизрегуляции mTOR-пути при различных типах рака. mTOR представляет собой многофункциональную киназу, которая интегрирует сигналы ростовых факторов и питательных веществ для регуляции трансляции белков, потребления питательных веществ, аутофагии и митохондриальной функции.
По существу, киназы, в частности PI3K, являются важнейшими мишенями для разработки лекарственных средств. Сохраняется необходимость в ингибиторах PI3K, подходящих для разработки лекарственных средств. Настоящее изобретение направлено на удовлетворение такой потребности и обеспечивает соответствующие преимущества, в том числе путем предложения новых классов ингибиторов киназ.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В первом аспекте изобретения предложены соединения формулы I или их фармацевтически приемлемые соли, где
представляет собой CR3 или N; 
представляет собой CR5 или N; 
представляет собой CR6 или N; 
представляет собой N или CR7; 
представляет собой CR8, CHR8 или N, где не более чем два соседних атома в кольце, выбранные из 
, 
, 
, 
и 
, представляют собой гетероатомы. Wd представляет собой гетероциклоалкил, арил или гетероарил. В представляет собой алкил, амино, гетероалкил, циклоалкил, гетероциклоалкил или группировку формулы II,
где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил, и q равен целому числу 0, 1, 2, 3 или 4. X отсутствует или представляет собой -(CH(R9))z-, и в каждом случае z независимо равен целому числу 1, 2, 3 или 4. Y отсутствует, представляет собой -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -N(R9)-, -C(=O)-(CHR9)z-, -C(=O)-, -N(R9)-C(=O)- или -N(R9)-C(=O)NH-, -N(R9)C(R9)2- или -C(=O)-(CHR9)z-; где, когда 
представляет собой N, не более чем один из X или Y отсутствует. R1 представляет собой водород, алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарил ал кил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро, фосфат, мочевину или карбонат. R2 представляет собой алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро, фосфат, мочевину или карбонат. R3 представляет собой водород, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро. R5, R6, R7 и R8 независимо представляют собой водород, C1-C4алкил, C2-C5алкенил, C2-C5алкинил, C3-C5циклоалкил, гетероциклоалкил, C1-C4гетероалкил, C1-C4алкокси, C1-C4амидо, амино, ацил, C1-C4ацилокси, C1-C4сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро. В каждом случае R9 независимо представляет собой водород, C1-C10алкил, C3-C7циклоалкил или C2-C10гетероалкил.
В другом аспекте изобретения предложены соединения формулы IX или их фармацевтически приемлемые соли, где
и 
независимо представляют собой CR5, S, N или NR4, и 
независимо представляет собой CR7, S, N или NR4, где не более чем два соседних атома в кольце представляют собой азот или серу, и где представляет собой S, один из 
и 
представляет собой N или NR4. 
представляет собой CR8, N или NR8. В представляет собой алкил, амино, гетероалкил, циклоалкил, гетероциклоалкил или группировку формулы II:
где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил, и q равен целому числу 0, 1, 2, 3 или 4. Wd отсутствует или представляет собой гетероциклоалкильную, арильную или гетероарильную группировку. X отсутствует или представляет собой -(CH(R9))z-, и в каждом случае z независимо равен целому числу 1, 2, 3 или 4. Y отсутствует, представляет собой -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -N(R9)-, -C(=O)-(CHR9)z-, -C(=O)-, -N(R9)-C(=O)- или -N(R9)-C(=O)NH-, -N(R9)C(R9)2- или -C(=O)-(CHR9)z-. R1 представляет собой водород, алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро, фосфат, мочевину или карбонат. R2 представляет собой алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро, фосфат, мочевину или карбонат. R3 представляет собой водород, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро. R4 представляет собой водород, ацил, C1-C4алкил, С2-C5алкенил, C2-C5алкинил, C3-C5циклоалкил или C1-C4гетероалкил; R5, R7 и R8 независимо представляют собой водород, C1-C4алкил, C2-C5алкенил, C2-C5алкинил, C3-C5циклоалкил, C1-C4гетероалкил, ацил, C1-C4алкокси, C1-C4амидо, амино, C1-C4ацилокси, C1-C4сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро. В каждом случае R9 независимо представляет собой водород, C1-C10алкил, C3-C7циклоалкил или C2-C10гетероалкил.
В некоторых воплощениях соединение формулы I имеет структуру формулы IV:
В некоторых воплощениях соединение формулы IV представляет собой соединение формулы V или VI:
или 
В некоторых воплощениях соединение формулы VI имеет структуру формулы VI-A:
В некоторых воплощениях соединения формулы VI-A R11 представляет собой амино. В некоторых воплощениях соединения формулы VI-A R12 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, гетероарил, арил, гетероциклоалкил, циано, амино, карбоновую кислоту или амидо. В некоторых воплощениях соединения формулы VI-A R12 представляет собой моноциклический гетероарил или бициклический гетероарил.
В некоторых воплощениях соединения формулы VI это соединение имеет структуру формулы VI-C:
В некоторых из воплощений формулы VI соединение имеет структуру формулы VI-D:
В другом аспекте изобретения предложены соединение или его фармацевтически приемлемые соли, имеющие структуру формулы VI, где: В представляет собой алкил, амино, гетероалкил или группировку формулы II; где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил, и q равен целому числу 0, 1, 2, 3 или 4; X отсутствует или представляет собой -(CH(R9))z-, и z независимо равен целому числу 1, 2, 3 или 4; Y отсутствует, представляет собой -N(R9)- или -N(R9)-CH(R9)-; Wd представляет собой:
или 
R1 представляет собой водород, алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро, фосфат, мочевину или карбонат; R2 представляет собой алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро или фосфат;
R3 представляет собой водород, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро, арил или гетероарил; в каждом случае R9 независимо представляет собой водород, C1-C10алкил, C3-C7циклоалкил, гетероциклоалкил или C2-C10гетероалкил; и R12 представляет собой H, алкил, алкинил, алкенил, галогено, арил, гетероарил, гетероциклоалкил, циклоалкил, циано, амино, карбоновую кислоту, алкоксикарбонил или амидо.
В некоторых воплощениях соединение формулы VI имеет структуру формулы 6-А:
В некоторых воплощениях соединение формулы VI имеет структуру формулы 6-С1:
В некоторых воплощениях соединение формулы VI имеет структуру формулы 6-С2:
В некоторых воплощениях соединение формулы VI имеет структуру формулы 6-D:
В некоторых воплощениях соединение формулы I имеет структуру формулы VII:
В некоторых воплощениях соединение формулы I имеет структуру формулы VIII:
где X отсутствует, a Y представляет собой -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -N(R9)-, -C(=O)-(CHR9)z-, -C(=O)-, -N(R9)(C=O)- или -N(R9)(C=O)NH-; или X представляет собой -(CH(R9))z-, a Y отсутствует; или X представляет собой -(CH(R9))z-, a Y представляет собой -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -N(R9)-, -C(=O)-(CHR9)z-, -C(=O)-, -N(R9)-C(=O)-, или -N(R9)-C(=O)NH-, -N(R9)C(R9)2-, или -C(=O)-(CHR9)z. В каждом случае z независимо равен целому числу 1, 2, 3 или 4. Wd представляет собой бициклический арил или бициклический гетероарил.
В некоторых воплощениях соединения формулы IX это соединение имеет структуру, которая является членом группы, состоящей из: (1) представляет собой NR4, 
представляет собой CR5, 
представляет собой CR7, и 
представляет собой CR8; (2) представляет собой NR4, 
представляет собой CR5, 
представляет собой CR7, и 
представляет собой CHR8; (3) представляет собой NR4, 
представляет собой CR5, 
представляет собой CR7, и 
представляет собой N; (4) представляет собой NR4, 
представляет собой CR5, 
представляет собой CR7, и 
представляет собой NR8; (5) представляет собой NR4, 
представляет собой N, 
представляет собой CR7, и 
представляет собой CR8; (6) представляет собой NR4, 
представляет собой N, 
представляет собой CR7, и 
представляет собой CHR8; (7) представляет собой NR4, представляет собой N, 
представляет собой CR7, и представляет собой N; (8) представляет собой NR4, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой NR8; (9) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой CR8; (10) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой CHR8; (11) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой N; (12) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой NR8; (13) представляет собой S, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой CR8; (14) представляет собой S, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой CHR8; (15) представляет собой S, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой N; (16) представляет собой S, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой NR8; (17) представляет собой N, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой CR8; (18) представляет собой N, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой CHR8; (19) представляет собой N, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой N; (20) представляет собой N, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой NR8; (21) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой S, и представляет собой CR8; (22) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой S, и представляет собой CHR8; (23) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой S, и представляет собой N; (24) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой S, и представляет собой NR8; (25) представляет собой S, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой CR8; (26) представляет собой S, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой CHR8; (27) представляет собой S, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой N; (28) представляет собой S, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой NR8; (29) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой NR4, и представляет собой CR8; (30) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой NR4, и представляет собой CHR8; (31) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой NR4, и представляет собой N; (32) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой NR4, и представляет собой NR8; (33) представляет собой CR5, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой CHR8; (34) представляет собой CR5, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой CR8; (35) представляет собой CR5, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой N; и (36) представляет собой CR5, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой NR8.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы IX представляет собой соединение формулы X:
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы IX представляет собой соединение, где R4 представляет собой C1-C4алкил или C3-C5циклоалкил. В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы IX представляет собой соединение, где R4 представляет собой метил или этил.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы IX представляет собой соединение формулы XI:
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы IX представляет собой соединение формулы XII:
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы VIII представляет собой соединение формулы XIII или XIV:
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VI-A, VI-C, VI-D, 6-А, 6-С1, 6-С2, 6-D, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII или XIV представляет собой соединение, где B является членом группы, состоящей из группировки формулы II, где Wc представляет собой арил, включая, но не ограничиваясь этим, замещенный фенил, гетероарил, включая, но не ограничиваясь этим, моноциклический гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил, гетероциклоалкил, алкил, включая, но не ограничиваясь этим, группировку, имеющую формулу -(CH2)2-NRaRa, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил, или -NRaRa соединены вместе с образованием циклической группировки.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VI-A, VI-C, VI-D, 6-А, 6-С1, 6-С2, 6-D, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII или XIV представляет собой соединение, где R1 представляет собой Н, -F, -Cl, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -OCH3, нитро или фосфат.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VI-A, VI-C, VI-D, 6-А, 6-С1, 6-С2, 6-D, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII или XIV представляет собой соединение, где R2 представляет собой алкил, галогено, гидрокси, циано, нитро или фосфат, и q равен 1 или 2.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VI-A, VI-C, VI-D, 6-А, 6-С1, 6-С2, 6-D, VII или VIII представляет собой соединение, где R3 представляет собой -H, галогено, включая, но не ограничиваясь этим, -Cl или -F, алкил, включая, но не ограничиваясь этим, -CH3 или -CH2CH3, алкокси, циклоалкил или -CF3.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы IX или X представляет собой соединение, где R4 выбран из -H, метила, этила, н-пропила, изопропила, циклопропила, циклобутила и циклопентила.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VI-A, VI-C, VI-D, VII, VIII, IX, XI, XII, XIII или XIV представляет собой соединение, где R5 представляет собой Н, -CN, -NH2, C1-C4алкил, C1-C4алкокси, -CF3, NO2, -CH3, -CH2CH3, -ОСН3, -OCH2CH3 или галогено, который включает, но не ограничивается этим, -Cl или -F.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VI-A, VI-C, VI-D, VII или VIII представляет собой соединение, где R6 представляет собой Н, -CN, -NH2, C1-C4алкил, C1-C4алкокси, -CF3, NO2, -CH3 или галогено.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VI-A, VI-C, VI-D, VII, VIII, IX или X представляет собой соединение, где R7 представляет собой Н, -CN, -NH2, C1-C4алкил, C1-C4алкокси, -CF3, NO2, -CH3, -CH2CH3, -OCH3, -OCH2CH3 или галогено.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VI-A, VI-C, VI-D, VII, IX или XII представляет собой соединение, где R8 представляет собой Н, -CN, -NH2, C1-C4алкил, C1-C4алкокси, -CF3, NO2, -CH3, -CH2CH3, -OCH3, -OCH2CH3 или галогено.
В некоторых из воплощений соединения формулы I, IV, VI или VII R5, R6, R7 и R8 представляют собой водород.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VI-A, VI-C, VI-D, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII или XIV представляет собой соединение, где X представляет собой -CH2-, -СН(CH2CH3)- или -CH(CH3)-, включая, но не ограничиваясь этим, случай, где -CH(CH2CH3)- или -CH(CH3)- находится в (S)- или (R)-стереохимической конфигурации. В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII или XIV представляет собой соединение, где Y отсутствует, представляет собой -O-, -NH(R9)- или -S(=O)2-. В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII или XIV представляет собой соединение, где R9 представляет собой метил или водород. В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII или XIV представляет собой соединение, где X-Y представляет собой -CH2N(CH3), -CH2-N(CH2CH3), -CH(CH3)NH-, -CH(CH2CH3)-NH-, -N(H)CH2-, -N(CH2CH3)CH2- или -N(CH3)CH2-, включая, но не ограничиваясь этим, -CH(CH3)NH- или -CH(CH2CH3)-NH, имеющими (S)- или (R)-стереохимическую конфигурацию.
В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII или XIV представляет собой соединение, где Wd представляет собой пиразолопиримидин, включая, но не ограничиваясь этим, 4-амино-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил или 7-амино-2-метил-2Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-3-ил, пурин включая, но не ограничиваясь этим, 6-амино-9Н-пурин-9-ил или 6-метиленил-9Н-пурин-6-ил. В некоторых воплощениях изобретения соединение формулы I, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII или XIV представляет собой соединение, где пиразолопиримидин имеет формулу III:
где R11 представляет собой H, алкил, галогено, амино, амидо, гидрокси или алкокси, и R12 представляет собой H, алкил, алкинил, алкенил, галогено, арил, гетероарил, включая, но не ограничиваясь этим, моноциклический или бициклический гетероарил, гетероциклоалкил, циклоалкил, циано, амино, карбоновую кислоту, алкоксикарбонил или амидо.
В другом аспекте изобретения предложен способ ингибирования фосфатидилинозитол-3-киназы (PI3-киназы), включающий: приведение PI3-киназы в контакт с эффективным количеством одного или более соединений, изложенных в данной заявке. Например, стадия приведения в контакт включает применение одного или более соединений формулы I, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII и/или XIV. В некоторых воплощениях стадия приведения в контакт включает приведение в контакт с клеткой, которая содержит указанную PI3-киназу. В некоторых воплощениях данного способа ингибирование происходит у субъекта, страдающего от расстройства, включающего неправильную работу PI3-киназы одного или более типов. Некоторые типичные заболевания, вовлекающие неправильную работу PI3-киназ, выбраны из группы, состоящей из аутоиммунных заболеваний, ревматоидного артрита, респираторного заболевания и различных типов рака. Если желательно, соединение, используемое в данном способе, имеет структуру формулы 6-А, где R11 представляет собой амино, и R12 представляет собой замещенный фенил.
В некоторых воплощениях данного способа ингибирование происходит у субъекта, страдающего от ревматоидного артрита или респираторного заболевания, и где соединение имеет структуру формулы 6-А, и где R11 представляет собой амино, и R12 представляет собой бициклический гетероарил.
В некоторых воплощениях способ включает введение субъекту второго терапевтического агента.
В еще одном другом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания, при котором проявляется нежелательный иммунный ответ. Способ включает стадию введения субъекту, нуждающемуся в этом, одного или более соединений, изложенных в данной заявке, включая соединения формулы I, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII и/или XIV, в количестве, которое эффективно для улучшения указанного нежелательного иммунного ответа. В некоторых воплощениях одно или более соединений ингибируют независимую от Т-клеток активацию В-клеток, о чем свидетельствует уменьшение в продукции анти-ТМР(тринитрофенил) IgG3 по меньшей мере примерно в пять раз при введении тестируемому животному в количестве менее чем примерно 30 мг/кг порциями 2 раза в сутки (BID).
В некоторых воплощениях заболевание, которое лечат, ассоциировано с опуханием сустава или с болью в суставе у субъекта. Данный способ может быть эффективен в улучшении одного или более симптомов ревматоидного артрита, о чем свидетельствует уменьшение среднего диаметра сустава по меньшей мере примерно на 10% через 17 суток и/или уменьшение диаметра голеностопного сустава по меньшей мере на 5-10% или более после лечения в течение от нескольких суток до нескольких недель, в том числе, например, уменьшение диаметра голеностопного сустава по меньшей мере на 5% через 7 суток лечения. В другом воплощении нежелательный иммунный ответ подтвержден усиленной продукцией антител против коллагена II типа, и применение одного или более соединений по изобретению уменьшает уровень антител против коллагена II типа в сыворотке крови с ED50 менее чем примерно 10 мг/кг.
В другом аспекте изобретения предложена композиция, содержащая фармацевтически приемлемый эксципиент и одно или более соединений формулы I, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII и/или XIV. В некоторых из воплощений изобретения композиция находится в жидкой, твердой, полутвердой форме, форме геля или аэрозольной форме.
ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ
Все публикации, патенты и заявки на патент, упомянутые в данной заявке, включены в данную заявку посредством ссылки в той же степени, как если бы было конкретно и в индивидуальном порядке указано, что каждая отдельная публикация, патент или заявка на патент включены посредством ссылки.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
В прилагаемой формуле изобретения подробно изложены новые признаки изобретения. Более полное понимание признаков и преимуществ настоящего изобретения будет достигнуто посредством ссылки на следующее далее подробное описание, в котором излагаются иллюстративные воплощения, где используются принципы изобретения, и в сопровождающих графических материалах которого:
на ФИГ. 1 изображен типичный протокол измерения независимой от Т-клеток продукции TNP-специфических антител in vivo (BDA1 - брахидактилия типа А1; ELISA - фермент-связанный иммуносорбентный анализ);
на ФИГ. 2 изображено кратное уменьшение величины TNP-специфического IgG3-ответа на антигены (Ag), обусловленного соединениями 7 и 53 формулы IV, по сравнению с растворителем в качестве контроля при введении перорально (п/о);
на ФИГ. 3 изображен дозозависимый эффект перорального введения два раза в сутки соединения 53 формулы IV на уменьшение увеличения диаметра голеностопного сустава (Ank) во времени в модели развивающегося индуцированного коллагеном артрита у крыс. Также представлены результаты для контрольных крыс без артрита, контрольных крыс с артритом, которым вводили растворитель в качестве отрицательного контроля, и контрольных крыс с артритом, которым два раза в сутки вводили метотрексат (МТХ) (IK-1 - индуцированный коллагеном 1);
на ФИГ. 4 изображен дозозависимый эффект соединений 7 и 53 формулы IV на улучшение гистопатологической картины голеностопного сустава при введении в модели развивающегося индуцированного коллагеном артрита у крыс. Также представлены результаты для контрольных крыс с артритом, которым вводили растворитель в качестве отрицательного контроля или метотрексат;
на ФИГ. 5 изображен дозозависимый эффект соединений 7 и 53 формулы IV на улучшение гистопатологической картины коленного сустава при введении в модели развивающегося индуцированного коллагеном артрита у крыс. Также представлены результаты для контрольных крыс с артритом, которым вводили растворитель в качестве отрицательного контроля или метотрексат в качестве положительного контроля;
на ФИГ. 6 изображен дозозависимый эффект соединений 7 и 53 формулы IV на уменьшение уровня антител против коллагена II типа in vivo при введении в модели развивающегося индуцированного коллагеном артрита у крыс. Также представлены результаты для крыс с артритом, которым вводили растворитель в качестве отрицательного контроля или метотрексат (МТХ);
на ФИГ. 7 изображен дозозависимый эффект соединения 7 формулы IV на улучшение гистопатологической картины голеностопного сустава при введении в модели развивающегося индуцированного коллагеном артрита у крыс. Также представлены результаты для контрольных крыс с артритом, которым вводили растворитель, и крыс с артритом, которым вводили метотрексат;
на ФИГ. 8 изображен дозозависимый эффект соединения 53 формулы IV, вводимого один раз в сутки, на гистопатологию голеностопного сустава в модели индуцированного коллагеном установленного артрита у крыс. Также представлены результаты для контрольных крыс с артритом, которым вводили растворитель, и крыс с артритом, которым вводили энбрел;
на ФИГ. 9 изображен дозозависимый эффект соединения 53 формулы IV, вводимого два раза в сутки, на гистопатологию голеностопного сустава в модели индуцированного коллагеном установленного артрита у крыс. Также представлены результаты для контрольных крыс с артритом, которым вводили растворитель, и крыс с артритом, которым вводили энбрел;
на ФИГ. 10 изображен дозозависимый эффект соединения 53 формулы IV на увеличение среднего объема лапы в модели индуцированного адъювантом артрита;
на ФИГ. 11 изображен эффект во времени соединения 53 формулы IV на среднюю массу крыс в модели индуцированного адъювантом артрита у крыс.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Несмотря на то, что в данной заявке показаны и изложены предпочтительные воплощения настоящего изобретения, специалистам в данной области техники будет очевидно, что такие воплощения приведены только в качестве примера. У специалистов в данной области техники сразу же появятся идеи многочисленных вариаций, изменений и замещений без отклонения от изобретения. Следует понимать, что при практическом применении изобретения могут быть использованы различные альтернативы воплощениям изобретения, изложенным в данной заявке. Подразумевается, что прилагаемая формула определяет объем изобретения и что тем самым охватываются способы и структуры, попадающие в пределы объема этой формулы, и их эквиваленты.
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данной заявке, имеют те же самые значения, как они обычно понимаются специалистом в области техники, к которой принадлежит это изобретение. Все патенты и публикации, упоминаемые в данной заявке, включены посредством ссылки.
Как употребляется в описании и формуле изобретения, форма единственного числа включает ссылки на множественное число, если контекст явно не обуславливает иное.
Как он использован в данной заявке, "агент" или "биологически активный агент" относится к биологическому, фармацевтическому или химическому соединению или другой группировке. Неограничивающие примеры включают простую или сложную органическую или неорганическую молекулу, пептид, белок, олигонуклеотид, антитело, производное антитела, фрагмент антитела, производное витаминов, углевод, токсин или химиотерапевтическое соединение. Могут быть синтезированы различные соединения, например, небольшие молекулы и олигомеры (например, олигопептиды и олигонуклеотиды) и синтетические органические соединения на основе различных коровых структур. Дополнительно, соединения для скрининга могут быть получены из различных природных источников, таких как например экстракты из растений или животных и тому подобное. Специалист в данной области техники может легко распознать, что нет ограничения в отношении структурной природы агентов по настоящему изобретению.
Термин "агонист", как он использован в данной заявке, относится к соединению, обладающему способностью инициировать или усиливать биологическую функцию белка-мишени, будь то посредством ингибирования активности или экспрессии белка-мишени. Соответственно, термин "агонист" определен в контексте биологической роли полипептида-мишени. Несмотря на то, что предпочтительные агонисты, приведенные в данной заявке, специфично взаимодействуют с (например, связываются с) мишенью, соединения, которые инициируют или усиливают биологическую активность полипептида-мишени посредством взаимодействия с другими членами пути сигнальной трансдукции, одним из членов которого является данный полипептид-мишень, также конкретно включены в рамки этого определения.
Термины "антагонист" и "ингибитор" используются взаимозаменяемо, и они относятся к соединению, обладающему способностью ингибировать биологическую функцию белка-мишени, будь то посредством ингибирования активности или экспрессии белка-мишени. Соответственно, термины "антагонист" и "ингибиторы" определены в контексте биологической роли белка-мишени. Несмотря на то, что предпочтительные антагонисты, приведенные в данной заявке, специфично взаимодействуют с (например, связываются с) мишенью, соединения, которые ингибируют биологическую активность белка- мишени посредством взаимодействия с другими членами пути сигнальной трансдукции, одним из членов которого является данный белок-мишень, также конкретно включены в рамки этого определения. Предпочтительная биологическая активность, ингибируемая антагонистом, связана с развитием, ростом или распространением опухоли или нежелательным иммунным ответом, который проявляется в виде аутоиммунного заболевания.
"Противораковый агент", "противоопухолевый агент" или "химиотерапевтический агент" относится к любому агенту, полезному в лечении неопластического состояния. Один из классов противораковых агентов содержит химиотерапевтические агенты. "Химиотерапия" означает введение одного или более химиотерапевтических лекарственных средств и/или других агентов пациенту, страдающему раком, различными способами, включая внутривенный, пероральный, внутримышечный, внутрибрюшинный (в/б), внутрипузырный, подкожный (п/к), трансдермальный, трансбуккальный или ингаляционный или в форме суппозитория.
Термин "клеточная пролиферация" относится к явлению, благодаря которому количество клеток изменяется в результате деления. Этот термин также охватывает клеточный рост, в результате которого морфология клеток изменяется (например, они увеличиваются в размере), что согласуется с пролиферативным сигналом.
Термин "совместное введение", "вводимый в комбинации с" и их грамматические эквиваленты, как они использованы в данной заявке, охватывают введение двух или более агентов животному с тем, чтобы оба агента и/или их метаболиты присутствовали в животном в одно и то же время. Совместное введение включает одновременное введение в раздельных композициях, введение в разное время в раздельных композициях или введение в композиции, в которой присутствуют оба агента.
Термин "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" относится к такому количеству соединения, изложенного в данной заявке, которое достаточно для получения эффекта предполагаемого применения, включая, но не ограничиваясь этим, лечение заболеваний, которые описаны ниже. Терапевтически эффективное количество может варьировать в зависимости от предполагаемого применения (in vitro или in vivo) или субъекта и болезненного состояния, которое лечат, например, массы и возраста субъекта, тяжести болезненного состояния, способа введения и тому подобного, которое легко может быть определено специалистом обычной квалификации в данной области техники. Термин также применяется к дозе, которая будет индуцировать конкретный ответ в клетках-мишенях, например уменьшение адгезии тромбоцитов и/или миграции клеток. Конкретная доза будет варьировать в зависимости от конкретного выбранного соединения, режима введения, которому необходимо следовать, того, вводят ли ее в комбинации с другими соединениями, хронометрирования введения, ткани, в которую ее вводят, и физической системы доставки, в которой она вносится.
Как они используются в данной заявке, термины "лечение" или "процесс лечения" либо "облегчение" или "уменьшение интенсивности" используются в данной заявке взаимозаменяемо. Эти термины относятся к подходу для получения полезных или желаемых результатов, включая, но не ограничиваясь этим, терапевтическую пользу и/или профилактическую пользу. Под терапевтической пользой понимают устранение или уменьшение интенсивности основного расстройства, которое лечат. Также терапевтической пользы достигают путем устранения или уменьшения интенсивности одного или более физиологических симптомов, связанных с основным расстройством, таким образом, что у пациента наблюдают улучшение, несмотря на то, что пациент все еще может быть поражен основным расстройством. Для профилактической пользы композиции могут быть введены пациенту, имеющему риск развития конкретного заболевания, или пациенту с подтвержденным одним или более чем одним физиологическим симптомом заболевания, возможно, даже если диагноз этого заболевания возможно не поставлен.
"Терапевтический эффект", как этот термин использован в данной заявке, охватывает терапевтическую пользу и/или профилактическую пользу, как описано выше. Профилактический эффект включает задержку или устранение возникновения заболевания или состояния, задержку или устранение приступа симптомов заболевания или состояния, замедление, прекращение или обращение развития заболевания или состояния или любую их комбинацию.
Термин "фармацевтически приемлемая соль" относится к солям, происходящим из ряда органических и неорганических противоионов, хорошо известных в данной области техники. Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты могут быть образованы с неорганическими кислотами и органическими кислотами. Неорганические кислоты, из которых могут происходить соли, включают, например, соляную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и тому подобное. Органические кислоты, из которых могут происходить соли, включают, например, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, гликолевую кислоту, пировиноградную кислоту, щавелевую кислоту, малеиновую кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, коричную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, салициловую кислоту и тому подобное. Фармацевтически приемлемые соли присоединения основания могут быть образованы с неорганическими и органическими основаниями. Неорганические основания, из которых могут происходить соли, включают, например, основания натрия, калия, лития, аммония, кальция, магния, железа, цинка, меди, марганца, алюминия и тому подобного. Органические основания, из которых могут происходить соли, включают, например, первичные, вторичные и третичные амины, замещенные амины, в том числе существующие в природе замещенные амины, циклические амины, основные ионообменные смолы и тому подобное, конкретно такие, как изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, триэтиламин, трипропиламин и этаноламин. В некоторых воплощениях фармацевтически приемлемая соль присоединения основания выбрана из солей аммония, калия, натрия, кальция и магния.
"Фармацевтически приемлемый носитель" или "фармацевтически приемлемый эксципиент" включает любые и все растворители, диспергирующие среды, вещества для покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и замедляющие всасывание агенты и тому подобное. Использование таких сред и агентов для фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники. За исключением случаев, когда любая традиционная среда или агент будут несовместимы с активным ингредиентом, их применение в терапевтических композициях по изобретению предполагается. Дополнительные активные ингредиенты также могут быть включены в композиции.
"Сигнальная трансдукция" представляет собой процесс, при котором стимулирующие или ингибирующие сигналы передаются в клетку и внутри клетки с целью вызвать внутриклеточный ответ. Модулятор пути сигнальной трансдукции относится к соединению, которое модулирует активность одного или более клеточных белков, картированных в одном и том же конкретном пути сигнальной трансдукции. Модулятор может увеличивать (агонист) или подавлять (антагонист) активность сигнальной молекулы.
Термин "селективное ингибирование" или "селективно ингибирует", как применяемый к биологически активному агенту, относится к способности агента селективно уменьшать активность мишени по передаче сигнала по сравнению с активностью не-мишени по передаче сигнала, путем прямого или опосредованного взаимодействия с мишенью.
Термин "B-ALL", который в данной заявке используется, относится к В-клеточному острому лимфобластному лейкозу.
"Субъект" относится к животному, такому как млекопитающее, например человеку. Способы, изложенные в данной заявке, могут быть полезны как для терапии человека, так и для применений в ветеринарии. В некоторых воплощениях пациентом является млекопитающее, а в некоторых воплощениях пациентом является человек.
"Лучевая терапия" означает воздействие на пациента с использованием общепринятых методов и композиций, известных практикующему врачу, радиоактивными излучателями, таким как излучающие альфа-частицы радионуклиды (например, радионуклиды актиния и тория), радиоактивные излучатели с низкой линейной передачей энергии (LET) (то есть бета-излучатели), излучатели конверсионных электронов (например, стронций-89 и самарий-153-EDTMP (самарий-153-этилендиаминтетраметиленфосфонат)), или излучению высоких энергий, включая, без ограничения, рентгеновские лучи, гамма-лучи и нейтроны.
"Пролекарство" предназначено для указания соединения, которое может быть превращено в физиологических условиях или в результате сольволиза в биологически активное соединение, описанное в данной заявке. Таким образом, термин "пролекарство" относится к предшественнику биологически активного соединения, которое является фармацевтически приемлемым. Пролекарство может быть неактивным при введении его субъекту, но может превращаться in vivo в активное соединение, например, в результате гидролиза. Соединение, являющееся пролекарством, зачастую дает преимущества в растворимости, тканевой совместимости или замедленном высвобождении в организме млекопитающего (см., например, Bundgard, Н., Design of Prodrugs (1985), pp. 7-9, 21-24 (Elsevier, Amsterdam)). Обсуждение пролекарств приведено в Higuchi, Т., et al., "Pro-drugs as Novel Delivery Systems", A.C.S. Symposium Series, Vol. 14 и в Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987; и то, и другое полностью включено в данную заявку посредством ссылки. Также предполагается, что термин "пролекарство" включает в себя любые ковалентно связанные носители, из которых высвобождается активное соединение in vivo, когда такое пролекарство вводят субъекту-млекопитающему. Пролекарства активного соединения, как описано в данной заявке, могут быть получены посредством модификации функциональных групп, присутствующих в активном соединении, таким образом, чтобы эти модифицированные соединения расщеплялись или в результате стандартного манипулирования, или in vivo с получением исходного активного соединения. Пролекарства включают соединения, где группа гидрокси, амино или меркапто связана с любой группой, которая, когда это пролекарство активного соединения вводят субъекту-млекопитающему, отщепляется с образованием свободной группы гидрокси, свободной группы амино или свободной группы меркапто, соответственно. Примеры пролекарств включают, но не ограничиваются этим, ацетатные, формиатные и бензоатные производные спирта или ацетамида, формамидные и бензамидные производные функциональной группы амина в активном соединении и тому подобное.
Термин "in vivo" относится к событию, которое происходит в организме субъекта.
Термин "in vitro" относится к событию, которое происходит вне организма субъекта. Например, анализ in vitro охватывает любой анализ, проводимый вне субъекта. Анализы in vitro охватывают анализы с использованием клеток, в которых применяют живые или мертвые клетки. Анализы in vitro также охватывают бесклеточный анализ, в котором никаких интактных клеток не используют.
Также, если не указано иное, подразумевается, что структуры, описанные в данной заявке, включают соединения, отличающиеся только наличием одного или более чем одного обогащенного изотопом атома. Например, соединения, имеющие представленные структуры, за исключением замены водорода на дейтерий или тритий, либо замены углерода на 13C- или 14С-обогащенный углерод, включены в объем этого изобретения.
Соединения по настоящему изобретению также могут содержать изотопы атомов для одного или более атомов, входящих в состав таких соединений в неестественных пропорциях. Например, соединения могут быть радиоактивно помечены с помощью радиоактивных изотопов, таких как, например, тритий (3Н), йод-125 (125I) или углерод-14 (14С). Все изотопные варианты соединений по настоящему изобретению, как радиоактивные, так и нерадиоактивные, попадают в объем настоящего изобретения.
В том случае, когда в данной заявке используются диапазоны для описания физических свойств, таких как молекулярная масса, или химических свойств, таких как химические формулы, подразумевается, что включены все комбинации и подкомбинации диапазонов и конкретные соответствующие им воплощения. Термин "примерно", когда он относится к количеству или диапазону числовых значений, означает, что упоминаемые количество или диапазон числовых значений представляют собой приближение в пределах разброса экспериментальных данных (или в пределах статистической погрешности эксперимента), и поэтому количество или диапазон числовых значений может варьировать, например, 1%-15% от установленного количества или диапазона числовых значений. Термин "содержащий" (и родственные термины, такие как "содержат" или "содержит" либо "имеющий" или "включающий") включает эти воплощения, например, воплощение любой композиции объекта, композиции, способа или процесса или тому подобного, которые "состоят из" или "по существу состоят из" описанных признаков.
Следующие далее сокращения и термины имеют указанные значения повсюду в данной заявке:
PI3-K - фосфоинозитид-3-киназа; PI - фосфатидилинозит; PDK - фосфоинозитид-зависимая киназа; DNA-PK - зависимая от дезоксирибонуклеиновой кислоты протеинкиназа; PTEN - делеция фосфатазы и гомолога тензина на хромосоме десять; PIKK - киназа, подобная фосфоинозитидкиназе; СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита; ВИЧ - вирус иммунодефицита человека; Mel - метилиодид; POCl3 - оксихлорид фосфора; KCNS - изотиоцианат калия; ТСХ - тонкослойная хроматография; МеОН - метанол; и CHCl3 - хлороформ.
Сокращения, используемые в данной заявке, имеют свое традиционное значение в области химии и биологии.
"Алкил" относится к радикалу с прямой или разветвленной углеводородной цепью, состоящему исключительно из атомов углерода и водорода, не содержащему никакого ненасыщения, имеющему от одного до десяти атомов углерода (например, C1-C10алкил). Во всех случаях, когда он появляется в данной заявке, диапазон числовых значений, такой как "1-10", относится к каждому целому числу в заданном диапазоне; например, "1-10 атомов углерода" означает, что алкильная группа может состоять из 1 атома углерода, 2 атомов углерода, 3 атомов углерода и т.д., вплоть до и включая 10 атомов углерода, хотя настоящее определение также охватывает вариант термина "алкил", когда никакой диапазон числовых значений не обозначен. В некоторых воплощениях им является C1-C4алкильная группа. Типичные алкильные группы включают, но никоим образом не ограничиваются этим, метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, emop-бутил, изобутил, третичный бутил, пентил, изопентил, неопентил, гексил, септил, октил, нонил, децил и тому подобное. Алкил присоединяется к остатку молекулы через одинарную связь, например, метил (Me), этил (Et), н-пропил, 1-метилэтил (изопропил), н-бутил, н-пентил, 1,1-диметилэтил (трет-бутил), 3-мети л гексил, 2-метилгексил и тому подобное. Если в данном описании конкретно не указано иное, то алкильная группа возможно замещена одним или более чем одним заместителем, которые независимо представляют собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, трифторметил, трифторметокси, нитро, триметилсиланил, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2), N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарил ал кил.
"Алкиларил" относится к -(алкил)арильному радикалу, где арил и алкил такие, как они раскрыты в данной заявке, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для арила и алкила, соответственно.
"Алкилгетарил" относится к -(алкил)гетарильному радикалу, где гетарил и алкил такие, как они описаны в данном изобретении, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для арила и алкила, соответственно.
"Алкилгетероциклоалкил" относится к -(алкил)гетероциклильному радикалу, где алкил и гетероциклоалкил такие, как они в данной заявке описаны, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для гетероциклоалкила и алкила, соответственно.
"Алкеновая" группировка относится к группе, состоящей по меньшей мере из двух атомов углерода и по меньшей мере одной углерод-углеродной двойной связи, а "алкиновая" группировка относится к группе, состоящей по меньшей мере из двух атомов углерода и по меньшей мере одной углерод-углеродной тройной связи. Алкильная группировка, независимо от того, является она насыщенной или ненасыщенной, может представлять собой разветвленную, прямую цепь или быть циклической.
"Алкенил" относится к радикалу-группе с прямой или разветвленной углеводородной цепью, состоящему исключительно из атомов углерода и водорода, содержащему по меньшей мере одну двойную связь и имеющему от двух до десяти атомов углерода (то есть C2-C10алкенил). Во всех случаях, когда он появляется в данной заявке, диапазон числовых значений, такой как "2-10" относится к каждому целому числу в заданном диапазоне; например, "2-10 атомов углерода" означает, что алкенильная группа может состоять из 2 атомов углерода, 3 атомов углерода и т.д., вплоть до и включая 10 атомов углерода. В некоторых воплощениях алкенил содержит от двух до восьми атомов углерода. В других воплощениях алкенил содержит от двух до пяти атомов углерода (например, C2-C5алкенил). Алкенил присоединен к остатку молекулы через одинарную связь, например, этенил (то есть, винил), проп-1-енил (то есть, аллил), бут-1-енил, пент-1-енил, пента-1,4-диенил и тому подобное. Если в данном описании конкретно не указано иное, то алкенильная группа возможно замещена одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, трифторметил, трифторметокси, нитро, триметилсиланил, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2) N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
"Алкенил-циклоалкил" относится к -(алкенил)циклоалкильному радикалу, где алкенил и циклоалкил такие, как они описаны в данном изобретении, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для алкенила и циклоалкила, соответственно.
"Алкинил" относится к радикалу-группе с прямой или разветвленной углеводородной цепью, состоящему исключительно из атомов углерода и водорода, содержащему по меньшей мере одну тройную связь, имеющему от двух до десяти атомов углерода (то есть C2-C10алкинил). Во всех случаях, когда он появляется в данной заявке, диапазон числовых значений, такой как "2-10" относится к каждому целому числу в заданном диапазоне; например, "2-10 атомов углерода" означает, что алкинильная группа может состоять из 2 атомов углерода, 3 атомов углерода и т.д., вплоть до и включая 10 атомов углерода. В некоторых воплощениях алкинил содержит от двух до восьми атомов углерода. В других воплощениях алкинил имеет от двух до пяти атомов углерода (например, C2-C5алкинил). Алкинил присоединен к остатку молекулы через одинарную связь, например, этинил, пропинил, бутинил, пентинил, гексинил и тому подобное. Если в данном описании конкретно не указано иное, то алкинильная группа возможно замещена одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, трифторметил, трифторметокси, нитро, триметилсиланил, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2, N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
"Алкинил-циклоалкил" относится к -(алкинил)циклоалкильному радикалу, где алкинил и циклоалкил такие, как они описаны в данной заявке, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для алкинила и циклоалкила, соответственно.
"Карбоксальдегид" относится к радикалу -(С=O)Н.
"Карбоксил" относится к радикалу -(С=O)ОН.
"Циано" относится к радикалу -CN.
"Циклоалкил" относится к моноциклическому или полициклическому радикалу, который содержит только углерод и водород и может быть насыщенным или частично ненасыщенным. Циклоалкильные группы включают группы, имеющие 3-10 кольцевых атомов (то есть C3-C10циклоалкил). Во всех случаях, когда он появляется в данной заявке, диапазон числовых значений, такой как "3-10" относится к каждому целому числу в заданном диапазоне; например, "3-10 атомов углерода" означает, что циклоалкильная группа может состоять из 3 атомов углерода и т.д., вплоть до и включая 10 атомов углерода. В некоторых воплощениях им является C3-C8циклоалкильный радикал. В некоторых воплощениях им является C3-C6циклоалкильный радикал. Иллюстративные примеры циклоалкильных групп включают, но не ограничиваются этим, следующие группировки: циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклопентенил, циклогексил, циклогексенил, циклосептил, циклооктил, циклононил, циклодецил, норборнил и тому подобное. Если в данном описании конкретно не указано иное, то циклоалкильная группа возможно замещена одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, трифторметил, трифторметокси, нитро, триметилсиланил, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2, N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
"Циклоалкил-алкенил" относится к -(циклоалкил)алкенильному радикалу, где циклоалкил и гетероциклоалкил такие, как они описаны в данной заявке, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для гетероциклоалкила и циклоалкила, соответственно.
"Циклоалкил-гетероциклоалкил" относится к -(циклоалкил)-гетероциклильному радикалу, где циклоалкил и гетероциклоалкил такие, как они описаны в данной заявке, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для гетероциклоалкила и циклоалкила, соответственно.
"Циклоалкил-гетероарил" относится к -(циклоалкил)гетероарильному радикалу, где циклоалкил и гетероциклоалкил такие, как они описаны в данной заявке, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для гетероциклоалкила и циклоалкила, соответственно.
Термин "алкокси" относится к группе -O-алкил, включающей 1-8 атомов углерода в прямой, разветвленной, циклической конфигурации и их комбинации, присоединенные к исходной структуре через атом кислорода. Примеры включают метокси, этокси, пропокси, изопропокси, циклопропилокси, циклогексилокси и тому подобное. "Низший алкокси" относится к алкоксигруппам, содержащим от одного до шести атомов углерода. В некоторых воплощениях C1-C4алкил представляет собой алкильную группу, которая охватывает алкилы как с прямой, так и с разветвленной цепью из 1-4 атомов углерода.
Термин "замещенный алкокси" относится к группе алкокси, где алкильная составляющая замещена (то есть, -O-(замещенный алкил)). Если в данном описании конкретно не указано иное, то алкильная группировка алкоксигруппы возможно замещена одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, трифторметил, трифторметокси, нитро, триметилсиланил, -ORa, SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2, N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
Термин "алкоксикарбонил" относится к группе формулы (алкокси)(С=O)-, присоединенной через углерод карбонила, при этом группа алкокси имеет указанное количество атомов углерода. Так, C1-C6алкоксикарбонильная группа представляет собой алкоксигруппу, имеющую 1-6 атомов углерода, присоединенных через свой кислород к карбонильному линкеру. "Низший алкоксикарбонил" относится к алкоксикарбонильной группе, где алкоксигруппа представляет собой низшую алкоксигруппу. В некоторых воплощениях C1-C4алкокси представляет собой алкоксигруппу, которая охватывает алкоксигруппы как с прямой, так и разветвленной цепью из 1-4 атомов углерода.
Термин "замещенный алкоксикарбонил" относится к группе (замещенный алкил)-O-C(О)-, где данная группа присоединена к исходной структуре через карбонильную функциональную группу. Если в данном описании конкретно не указано иное, алкильная группировка алкоксикарбонильной группы возможно замещена одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, трифторметил, трифторметокси, нитро, триметилсиланил, -ORa, SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2, N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
"Ацил" относится к группам (алкил)-C(О)-, (арил)-C(О)-, (гетероарил)-C(О)-, (гетероалкил)-C(О)- и (гетероциклоалкил)-С(О)-, где данная группа присоединена к исходной структуре через карбонильную функциональную группу. В некоторых воплощениях им является C1-C10ацильный радикал, что обозначает общее количество атомов в цепи или в кольце алкильной, арильной, гетероарильной или гетероциклоалкильной части ацилоксигруппы плюс карбонильный углерод ацила, то есть три остальных атома в кольце или цепи плюс карбонил. Если радикал R представляет собой гетероарил или гетероциклоалкил, то гетероатомы в кольце или атомы в цепи вносят вклад в общее количество атомов в цепи или в кольце. Если в данном описании конкретно не указано иное, то "R" ацилоксигруппы возможно замещен одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, трифторметил, трифторметокси, нитро, триметилсиланил, -ORa, SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2, N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
"Ацилокси" относится к радикалу R(C=O)O-, где "R" представляет собой алкил, арил, гетероарил, гетероалкил или гетероциклоалкил, такие, как они описаны в данной заявке. В некоторых воплощениях им является радикал C1-C4ацилокси, что обозначает общее количество атомов в цепи или в кольце алкильной, арильной, гетероарильной или гетероциклоалкильной части ацилоксигруппы плюс углерод карбонильной группы ацила, то есть три остальных атома в кольце или цепи плюс карбонил. Если радикал R представляет собой гетероарил или гетероциклоалкил, то гетероатомы в кольце или атомы в цепи вносят вклад в общее количество атомов в цепи или в кольце. Если в данном описании конкретно не указано иное, то "R" ацилоксигруппы возможно замещен одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, трифторметил, трифторметокси, нитро, триметилсиланил, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2, N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
"Амино" или "амин" относится к радикалу-группе -N(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил, если в данном описании конкретно не указано иное. Если группа -N(Ra)2 имеет два Ra, не являющиеся водородом, то они могут быть объединены с атомом азота с образованием 4-, 5-, 6- или 7-членного кольца. Например, подразумевается, что -N(Ra)2 включает, но не ограничивается этим, 1-пирролидинил и 4-морфолинил. Если в данном описании конкретно не указано иное, то аминогруппа возможно замещена одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, трифторметил, трифторметокси, нитро, триметилсиланил, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2, N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил, и каждая из этих группировок возможно может быть замещена, как определено в данной заявке.
Термин "замещенный амино" также относится к N-оксидам каждой из групп -NHRd и NRdRd, которые описаны выше. N-оксиды могут быть получены путем обработки соответствующей аминогруппы, например, перекисью водорода или м-хлорпероксибензойной кислотой. Специалисту в данной области известны условия реакции для проведения N-окисления.
"Амид" или "амидо" относится к химической группировке, имеющей формулу -C(O)N(R)2 или -NHC(O)R, где R выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, циклоалкила, арила, гетероарила (связанного через кольцевой углерод) и гетероалициклического радикала (связанного через кольцевой углерод), причем каждая группировка сама возможно может быть замещена. В некоторых воплощениях им является радикал C1-C4амидо или амидный радикал, причем в общее количество атомов углерода в этом радикале включен атом углерода карбонила амида. R2 в -N(R)2 амида возможно может быть взят вместе с азотом, к которому он присоединен, с образованием 4-, 5-, 6- или 7-членного кольца. Если в данном описании конкретно не указано иное, то группа амидо возможно независимо замещена одним или более чем одним из заместителей, которые приведены в данной заявке для алкила, циклоалкила, арила, гетероарила или гетероциклоалкила. Амид может представлять собой молекулу аминокислоты или пептида, присоединенную к соединению формулы (I), в результате чего образуется пролекарство. Любая амин-, гидрокси- или карбоксил-содержащая боковая цепь в соединениях, изложенных в данной заявке, может быть амидирована. Методики и конкретные группы для получения таких амидов известны специалистам в данной области техники и могут быть легко обнаружены в справочных материалах, таких как книга Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3-е изд., John Wiley & Sons, New York, N.Y., 1999, которая включена в данной заявке во всей своей полноте посредством ссылки.
Термин "ароматический" или "арил" относится к ароматическому радикалу, содержащему от шести до десяти кольцевых атомов (например, С6-C10ароматический радикал или C6-C10арил), который имеет по меньшей мере одно кольцо, содержащее коньюгированную систему пи-электоронов, которая является карбоциклической (например, фенил, флуоренил и нафтил). Бивалентные радикалы, образованные из замещенных производных бензола и имеющие свободные валентности на кольцевых атомах, называются замещенными фениленовыми радикалами. Бивалентные радикалы, образованные из одновалентных полициклических углеводородных радикалов, названия которых оканчиваются на "-ил", в результате удаления одного атома водорода от атома углерода со свободной валентностью, называют, добавляя "-иден" к названию соответствующего одновалентного радикала, например, нафтильная группа с двумя точками присоединения называется нафтилиденом. Во всех случаях, когда он появляется в данной заявке, диапазон числовых значений, такой как "6-10" относится к каждому целому числу в заданном диапазоне; например, "6-10 кольцевых атомов" означает, что арильная группа может состоять из 6 кольцевых атомов, 7 кольцевых атомов и т.д., вплоть до и включая 10 кольцевых атомов. Термин включает моноциклические или полициклические, образованные из конденсированных колец (то есть, колец, которые имеют общие смежные пары кольцевых атомов), группы. Если в данном описании конкретно не указано иное, то арильная группировка возможно замещена одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, трифторметил, трифторметокси, нитро, триметилсиланил, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2, N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
"Аралкил" или "арилалкил" относится к (арил)алкильному радикалу, где арил и алкил такие, как они изложены в данной заявке, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для арила и алкила, соответственно.
"Сложноэфирный" относится к химическому радикалу формулы -COOR, где R выбран из группы, состоящей из алкила, циклоалкила, арила, гетероарила (связанного через кольцевой углерод) и гетероалициклического радикала (связанного через кольцевой углерод). Любая амин-, гидрокси- или карбоксил-содержащая боковая цепь в соединениях, изложенных в данной заявке, может быть этерифицирована. Методики и конкретные группы для получения таких эфиров известны специалистам в данной области техники и могут быть легко обнаружены в справочных материалах, таких как книга Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3-е изд., John Wiley & Sons, New York, N.Y., 1999, которая включена в данное описание во всей своей полноте посредством ссылки. Если в данном описании конкретно не указано иное, то сложноэфирная группа возможно замещена одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, трифторметил, трифторметокси, нитро, триметилсиланил, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -OC(O)N(Ra)2, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)C(O)N(Ra)2, N(Ra)C(NRa)N(Ra)2, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
"Фторалкил" относится к алкильному радикалу, как он определен выше, который замещен одним или более радикалами фторо, как определено выше, например, трифторметилу, дифторметилу, 2,2,2-трифторэтилу, 1-фторметил-2-фторэтилу и тому подобному. Алкильная часть фторалкильного радикала возможно может быть замещена, как описано выше для алкильной группы.
"Галогено", "галогенид" или, альтернативно, "галоген" означает фторо, хлоро, бромо или иодо. Термины "галогеноалкил", "галогеноалкенил", "галогеноалкинил" и "галогеноалкокси" включают структуры алкила, алкенила, алкинила и алкокси, замещенные одной или более чем одной группой галогено или их комбинациями. Например, термины "фторалкил" и "фторалкокси" включают группы галогеноалкил и галогеноалкокси, соответственно, в которых галогено представляет собой фтор.
"Гетероалкил", "гетероалкенил" и "гетероалкинил" включают возможно замещенные алкильные, алкенильные и алкинильные радикалы, которые имеют один или более скелетных атомов в цепи, выбранных из атома, не являющегося углеродом, например, кислорода, азота, серы, фосфора или их комбинаций. Может быть приведен диапазон числовых значений, например C1-C4гетероалкил, относящийся к длине цепи в целом, длина которой в этом примере составляет 4 атома. Например, радикал -CH2OCH2CH3 обозначается как "С4"гетероалкил, который содержит гетероатомный центр при поатомном описании длины цепи. Присоединение к остатку молекулы может быть осуществлено либо через гетероатом, либо углерод в гетероалкильной цепи. Гетероалкильная группа может быть замещена одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, нитро, оксо, тиоксо, триметилсиланил, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
"Гетероалкиларил" относится к -(гетероалкил)арильному радикалу, где гетероалкил и арил такие, как они описаны в данной заявке, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для гетероалкила и арила, соответственно.
"Гетероалкилгетероарил" относится к -(гетероалкил)гетероарильному радикалу, где гетероалкил и гетероарил такие, как они описаны в данной заявке, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для гетероалкила и гетероарила, соответственно.
"Гетероалкилгетероциклоалкил" относится к -(гетероалкил)гетероцикло-алкильному радикалу, где гетероалкил и гетероарил такие, как они описаны в данной заявке, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для гетероалкила и гетероциклоалкила, соответственно.
"Гетероалкилциклоалкил" относится к -(гетероалкил)циклоалкильному радикалу, где гетероалкил и циклоалкил такие, как они описаны в данном изобретении, и которые возможно замещены одним или более чем одним из заместителей, описанных в качестве подходящих заместителей для гетероалкила и циклоалкила, соответственно.
"Гетероарил" или, альтернативно, "гетероароматический" относится к 5-18-членному ароматическому радикалу (например, С5-С13гетероарилу), который включает один или более кольцевых гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы, и который может быть моноциклической, бициклической, трициклической или тетрациклической кольцевой системой. Во всех случаях, когда он появляется в данной заявке, диапазон числовых значений, такой как "5-18", относится к каждому целому числу в заданном диапазоне; например, "5-18 кольцевых атомов" означает, что гетероарильная группа может состоять из 5 кольцевых атомов, 6 кольцевых атомов и т.д., вплоть до и включая 18 кольцевых атомов. Бивалентные радикалы, образованные из одновалентных гетероарильных радикалов, названия которых оканчиваются на "-ил", в результате удаления одного атома водорода от атома со свободной валентностью, называют, добавляя "-идеи" к названию соответствующего одновалентного радикала, например, пиридильная группа с двумя точками присоединения представляет собой пиридилиден. N-содержащая "гетероароматическая" или "гетероарильная" группировка относится к ароматической группе, в которой по меньшей мере одним из скелетных атомов кольца является атом азота. Полициклическая гетероарильная группа может быть конденсированной или неконденсированной. Гетероатом(ы) в гетероарильном радикале возможно окислен(ы). Один или более атомов азота, если они присутствуют, возможно кватернизированы. Гетероарил присоединен к остатку молекулы через любой атом кольца(ец). Примеры гетероарилов включают, но не ограничиваются этим, азепинил, акридинил, бензимидазолил, бензиндолил, 1,3-бензодиоксолил, бензофуранил, бензооксазолил, бензо[b]тиазолил, бензотиадиазолил, бензо[b][1,4]диоксепинил, бензо[b][1,4]оксазинил, 1,4-бензодиоксанил, бензонафтофуранил, бензоксазолил, бензодиоксолил, бензодиоксинил, бензоксазолил, бензопиранил, бензопиранонил, бензофуранил, бензофуранонил, бензофуразанил, бензотиазолил, бензотиенил (бензотиофенил), бензотиено[3,2-d]пиримидинил, бензотриазолил, бензо[4,6]имидазо[1,2-а]пиридинил, карбазолил, циннолинил, циклопента[d]пиримидинил, 6,7-дигидро-5Н-циклопента[4,5]тиено[2,3-d]пиримидинил, 5,6-дигидробензо[h]хиназолинил, 5,6-дигидробензо[h]циннолинил, 6,7-дигидро-5Н-бензо[6,7]циклогепта[1,2-с]пиридазинил, дибензофуранил, дибензотиофенил, фуранил, фуразанил, фуранонил, фуро[3,2-с]пиридинил, 5,6,7,8,9,10-гексагидроцикло-окта[d]пиримидинил, 5,6,7,8,9,10-гексагидроциклоокта[d]пиридазинил, 5,6,7,8,9,10-гексагидроциклоокта[d]пиридинил, изотиазолил, имидазолил, индазолил, индолил, индазолил, изоиндолил, индолинил, изоиндолинил, изохинолил, индолизинил, изоксазолил, 5,8-метано-5,6,7,8-тетрагидрохиназолинил, нафтиридинил, 1,6-нафтиридинонил, оксадиазолил, 2-оксоазепинил, оксазолил, оксиранил, 5,6,6а,7,8,9,10,10а-октагидробензо[h]хиназолинил, 1-фенил-1H-пирролил, феназинил, фенотиазинил, феноксазинил, фталазинил, птеридинил, пуринил, пиранил, пирролил, пиразолил, пиразоло[3,4-d]пиримидинил, пиридинил, пиридо[3,2-d]пиримидинил, пиридо[3,4-d]пиримидинил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, пирролил, хиназолинил, хиноксалинил, хинолинил, изохинолинил, тетрагидрохинолинил, 5,6,7,8-тетрагидрохиназолинил, 5,6,7,8-тетрагидробензо[4,5]тиено[2,3-d]пиримидинил, 6,7,8,9-тетрагидро-5Н-циклогепта[4,5]тиено[2,3-d]пиримидинил, 5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,5-с]пиридазинил, тиазолил, тиадиазолил, тиапиранил, триазолил, тетразолил, триазинил, тиено[2,3-d]пиримидинил, тиено[3,2-d]пиримидинил, тиено[2,3-с]пиридинил и тиофенил (то есть тиенил). Если в данном описании конкретно не указано иное, гетероарильная группировка возможно замещена одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, нитро, оксо, тиоксо, триметилсиланил, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)N(Ra)2) -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
Замещенный гетероарил также включает кольцевые системы, замещенные одним или более заместителями на основе оксида (-O-), как например, пиридинил-N-оксиды.
"Гетероарилалкил" относится к группировке, имеющей арильную группировку, как она описана в данном изобретении, соединенную с алкиленовой группировкой, как она описана в данном изобретении, при этом такое присоединение к остатку молекулы осуществляется через алкиленовую группу.
"Гетероциклоалкил" относится к стабильному 3-18-членному неароматическому кольцевому радикалу, содержащему от двух до двенадцати атомов углерода и от одного до шести гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы. Во всех случаях, когда он появляется в данной заявке, диапазон числовых значений, такой как "3-18" относится к каждому целому числу в заданном диапазоне; например, "3-18 кольцевых атомов" означает, что гетероциклоалкильная группа может состоять из 3 кольцевых атомов, 4 кольцевых атомов и т.д., вплоть до и включая 18 кольцевых атомов. В некоторых воплощениях им является C5-C10гетероциклоалкил. В некоторых воплощениях им является C4-C10гетероциклоалкил. В некоторых воплощениях им является C3-C10гетероциклоалкил. Если в данном описании конкретно не указано иное, гетероциклоалкильный радикал представляет собой моноциклическую, бициклическую, трициклическую или тетрациклическую кольцевую систему, которая может включать конденсированные или соединенные мостиковой связью кольцевые системы. Гетероатомы в гетероциклоалкильном радикале возможно могут быть окислены. Один или более атомов азота, если они присутствуют, возможно кватернизированы. Гетероциклоалкильный радикал является частично или полностью насыщенным. Гетероциклоалкил может быть присоединен к остатку молекулы через любой атом кольца(ец). Примеры таких гетероциклоалкильных радикалов включают, но не ограничиваются этим, диоксоланил, тиенил[1,3]дитианил, декагидроизохинолил, имидазолинил, имидазолидинил, изотиазолидинил, изоксазолидинил, морфолинил, октагидроиндолил, октагидроизоиндолил, 2-оксопиперазинил, 2-оксопиперидинил, 2-оксопирролидинил, оксазолидинил, пиперидинил, пиперазинил, 4-пиперидонил, пирролидинил, пиразолидинил, хинуклидинил, тиазолидинил, тетрагидрофурил, тритианил, тетрагидропиранил, тиоморфолинил, тиаморфолинил, 1-оксо-тиоморфолинил и 1,1-диоксо-тиоморфолинил. Если в данном описании конкретно не указано иное, то гетероциклоалкильная группировка возможно замещена одним или более заместителями, независимо представляющими собой: алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, гидрокси, галогено, циано, нитро, оксо, тиоксо, триметилсиланил, -ORa, -SRa, -OC(O)-Ra, -N(Ra)2, -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)N(Ra)2, -N(Ra)C(O)ORa, -N(Ra)C(O)Ra, -N(Ra)S(O)tRa (где t равен 1 или 2), -S(O)tORa (где t равен 1 или 2), -S(O)tN(Ra)2 (где t равен 1 или 2) или PO3(Ra)2, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероарил или гетероарилалкил.
"Гетероциклоалкил" также включает бициклические кольцевые системы, где одно неароматическое кольцо, состоящее обычно из 3-7 кольцевых атомов, содержит по меньшей мере 2 атома углерода в дополнение к 1-3 гетероатомам, независимо выбранным из кислорода, серы и азота, а также комбинации, содержащие по меньшей мере один из вышеупомянутых гетероатомов; а другое кольцо, состоящее обычно из 3-7 кольцевых атомов, возможно содержит 1-3 гетероатома, независимо выбранных из кислорода, серы и азота, и не является ароматическим.
"Изомеры" представляют собой разные соединения, имеющие одну и ту же молекулярную формулу. "Стереоизомеры" представляют собой изомеры, которые отличаются только расположением этих атомов в пространстве. "Энантиомеры" представляют собой пару стереоизомеров, которые являются неналагающимися зеркальными отражениями друг друга. Смесь 1:1 пары энантиомеров представляет собой "рацемическую" смесь. Для обозначения рацемической смеси, где целесообразно, используется термин "(±)". "Диастереоизомерами" называют стереоизомеры, имеющие по меньшей мере два асимметрических атома, но которые не являются зеркальными отражениями друг друга. Абсолютная стереохимия определяется по R-S-системе Кана-Ингольда-Прелога. В том случае, когда соединение представляет собой чистый энантиомер, стереохимия для каждого хирального атома углерода может быть определена или как R, или как S. Разделенные соединения, абсолютная конфигурация которых неизвестна, могут быть обозначены как (+) или (-) в зависимости от направления (право- или левовращающие), в котором они вращают плоско-поляризованный свет на длине волны D-линии натрия. Некоторые из соединений, изложенных в данной заявке, содержат один или более асимметрических центров и поэтому могут быть источником энантиомеров, диастереомеров и других стереоизомерных форм, которые можно определить в терминах абсолютной стереохимии как (R)- или (S)-. Подразумевается, что предложенные в изобретении химические структуры, фармацевтические композиции и способы включают все такие возможные изомеры, включая рацемические смеси, оптически чистые формы и промежуточные смеси. Оптически активные (R)- и (S)-изомеры могут быть получены с использованием хиральных синтонов или хиральных реагентов или разделены с использованием традиционных методик. Если соединения, изложенные в данной заявке, содержат олефиновые двойные связи или другие центры геометрической асимметрии и если не указано иное, то подразумевается, что соединения включают как E, так и Z геометрические изомеры.
"Группировка " относится к конкретному сегменту или функциональной группе молекулы. Под химическими группировками часто понимают химические структуры, встроенные в молекулу или присоединенные к ней.
"Нитро" относится к радикалу -NO2.
"Окса" относится к радикалу -O-.
"Оксо" относится к радикалу =O.
"Таутомеры" представляют собой различающиеся по структуре изомеры, которые взаимопревращаются в результате таутомеризации. "Таутомеризация" представляет собой форму изомеризации и включает прототропную таутомеризацию или таутомеризацию с переносом протона, которая считается подгруппой химии кислотно-основных взаимодействий. Подразумевается, что "прототропная таутомеризация" или "таутомеризация с переносом протона" включает миграцию протона, которая сопровождается изменениями в кратности связи, часто с взаимопревращением одинарной связи и смежной двойной связи. Если существует возможность таутомеризации (например, в растворе), то может быть достигнуто химическое равновесие таутомеров. Примером таутомеризации является кето-енольная таутомеризация. Специфическим примером кето-енольной таутомеризации является взаимопревращение таутомеров пентан-2,4-диона и 4-гидроксипент-3-ен-2-она. Другим примером таутомеризации является фенол-кето-таутомеризация. Специфическим примером фенол-кето-таутомеризации является взаимопревращение таутомеров пиридин-4-ола и пиридин-4(1Н)-она.
Соединения по настоящему изобретению также могут содержать изотопы атомов для одного или более атомов, входящих в состав таких соединений, в неестественных пропорциях. Например, соединения могут быть радиоактивно помечены с помощью радиоактивных изотопов, таких как, например, тритий (3Н), йод-125 (125I) или углерод-14 (14С). Все изотопные варианты соединений по настоящему изобретению, независимо от того, являются они радиоактивными или нет, попадают в объем настоящего изобретения.
"Уходящая(ий) группа или атом" представляет собой любую группу или любой атом, которые в условиях реакции будут отщепляться от исходного вещества, способствуя таким образом прохождению реакции по конкретному сайту. Подходящими примерами таких групп, если не указано иное, являются атомы галогена, группы мезилокси, п-нитробензолсульфонилокси и тозилокси.
Термин "защитная группа" имеет значение, с которым его традиционно ассоциируют в органическом синтезе, то есть это группа, которая избирательно блокирует один или более реакционноспособных сайтов в многофункциональном соединении, таким образом, что химическая реакция может протекать избирательно по другому незащищенному реакционноспособному сайту, и таким образом, что данная группа может быть легко удалена после завершения избирательной реакции. Описан ряд защитных групп, например, в Т.Н. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, третье издание, John Wiley & Sons, New York (1999). Например, защищенной по гидроксигруппе формой является такая, где по меньшей мере одна из групп гидрокси, присутствующих в соединении, защищена гидрокси-защитной группой. Подобным образом могут быть защищены амины и другие реакционноспособные группы.
"Сольват" относится к соединению (например, соединению, выбранному из соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли) в физической ассоциации с одной или более молекулами фармацевтически приемлемого растворителя. Очевидно, что "соединение формулы I" охватывает соединение формулы I и сольваты этого соединения, а также их смеси.
"Замещенный" означает, что упоминаемая группа может быть замещена одной или более чем одной дополнительной группой(ами), по отдельности и независимо выбранной из ацила, алкила, алкиларила, циклоалкила, аралкила, арила, углевода, карбоната, гетероарила, гетероциклоалкила, гидрокси, алкокси, арилокси, меркапто, алкилтио, арилтио, циано, галогено, карбонила, сложного эфира, тиокарбонила, изоцианато, тиоцианато, изотиоцианато, нитро, оксо, пергалогеноалкила, перфторалкила, фосфата, силила, сульфинила, сульфонила, сульфонамидила, сульфоксила, сульфоната, мочевины и амино, включая моно- и ди-замещенные аминогруппы и их защищенные производные. Ди-замещенные аминогруппы охватывают такие группы, которые образуют кольцо вместе с азотом аминогруппы, такие как, например, морфолино. Сами заместители могут быть замещены, например, циклоалкильный заместитель может иметь галогенид, замещенный по одному или более чем одному атому углерода в кольце, и тому подобное. Защитные группы, которые могут образовывать защищенные производные вышеупомянутых заместителей, известны специалистам в данной области техники и могут быть найдены в таких ссылках, как Greene и Wuts, указанных выше.
"Сульфанил" относится к группам: -S-(возможно замещенный алкил), -S-(возможно замещенный арил), -S-(возможно замещенный гетероарил) и -S-(возможно замещенный гетероциклоалкил).
"Сульфинил" относится к группам: -S(O)-H, -S(O)-(возможно замещенный алкил), -S(O)-(возможно замещенный амино), -S(O)-(возможно замещенный арил), -S(O)-(возможно замещенный гетероарил) и -S(O)-(возможно замещенный гетероциклоалкил).
"Сульфонил" относится к группам: -S(O2)-H, -S(O2)-(возможно замещенный алкил), -S(O2)-(возможно замещенный амино), -S(O2)-(возможно замещенный арил), -S(O2)-(возможно замещенный гетероарил) и -S(O2)-(возможно замещенный гетероциклоалкил).
"Сульфонамидил" или "сульфонамидо" относится к радикалу -S(=O)2-NRR, где каждый R независимо выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, циклоалкила, арила, гетероарила (связанного через кольцевой углерод) и гетероалициклического радикала (связанного через кольцевой углерод). Группы R в -NRR радикала -S(=O)2-NRR могут быть взяты вместе с азотом, к которому они присоединены, с образованием 4-, 5-, 6- или 7-членного кольца. В некоторых воплощениях им является C1-C10сульфонамидо, где каждый R в сульфонамидо содержит суммарно 1 углерод, 2 углерода, 3 углерода или 4 углерода. Группа сульфонамидо возможно замещена одним или более чем одним из заместителей, описанных для алкила, циклоалкила, арила, гетероарила, соответственно.
"Сульфоксил" относится к радикалу -S(=O)2OH.
"Сульфонат" относится к радикалу -S(=O)2-OR, где R выбран из группы, состоящей из алкила, циклоалкила, арила, гетероарила (связанного через кольцевой углерод) и гетероалициклического радикала (связанного через кольцевой углерод). Сульфонатная группа возможно замещена по R одним или более чем одним из заместителей, описанных для алкила, циклоалкила, арила, гетероарила, соответственно.
Если замещающие группы определены посредством своих традиционных химических формул, написанных слева направо, то они в равной степени охватывают химически идентичные заместители, которые получались бы в результате написания структуры справо налево, например, -CH2O- есть эквивалент -OCH2-.
Соединения по настоящему изобретению также включают кристаллические и аморфные формы таких соединений, в том числе, например, полиморфы, псевдополиморфы, сольваты, гидраты, несольватированные полиморфы (включая ангидраты), конформационные полиморфы и аморфные формы соединений, а также их смеси. "Кристаллическая форма", "полиморф" и "новая форма" могут использоваться в данной заявке взаимозаменяемо, и подразумевается, что они включают все кристаллические и аморфные формы соединения, в том числе, например, полиморфы, псевдополиморфы, сольваты, гидраты, несольватированные полиморфы (включая ангидраты), конформационные полиморфы и аморфные формы, а также их смеси, если не упомянута конкретная кристаллическая или аморфная форма.
Химические структуры включают, но не ограничиваются этим, соединения формулы I, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII и XIV и все их фармацевтически приемлемые формы. Фармацевтически приемлемые формы соединений, приведенных в данной заявке, включают фармацевтически приемлемые соли, хелаты, нековалентные комплексы, пролекарства и их смеси. В некоторых воплощениях соединения, изложенные в данной заявке, находятся в форме фармацевтически приемлемых солей. Таким образом, термины "химическая структура" и "химические структуры" также охватывают фармацевтически приемлемые соли, хелаты, нековалентные комплексы, пролекарства и смеси.
К тому же, если соединение формулы I, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII или XIV получают в виде соли присоединения кислоты, свободное основание может быть получено путем подщелачивания раствора соли кислоты. И наоборот, если продукт представляет собой свободное основание, то соль присоединения, в частности фармацевтически приемлемая соль присоединения, может быть получена путем растворения свободного основания в подходящем органическом растворителе и обработки данного раствора кислотой в соответствии с традиционными методиками получения солей присоединения кислоты из основных соединений. Специалисты в данной области техники распознают различные методологии синтеза, которые могут быть использованы для получения нетоксичных фармацевтически приемлемых солей присоединения.
В одном аспекте настоящего изобретения предложено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль:
где представляет собой CR3 или N; представляет собой CR5 или N; 
представляет собой CR6 или N; представляет собой N или CR7; 
представляет собой CR8, CHR8 или N,
где не более чем два соседних атома в кольце, выбранные из , , 
, и , представляют собой гетероатомы;
Wd представляет собой гетероциклоалкил, арил или гетероарил;
В представляет собой алкил, амино, гетероалкил, циклоалкил, гетероциклоалкил или группировку формулы II:
где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил, и q равен целому числу 0, 1, 2, 3 или 4;
X отсутствует или представляет собой -(CH(R9))z, и в каждом случае z независимо равен целому числу 1, 2, 3 или 4;
Y отсутствует, представляет собой -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -N(R9)-, -C(=O)-(CHR9)z-, -C(=O)-, -N(R9)-C(=O)- или -N(R9)-C(=O)NH-, -N(R9)C(R9)2- или -C(=O)-(CHR9)z-;
R1 представляет собой водород, алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро, фосфат, мочевину или карбонат;
R2 представляет собой алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро, фосфат, мочевину или карбонат;
R3 представляет собой водород, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро, арил или гетероарил;
R5, R6, R7 и R8 независимо представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро; и
в каждом случае R9 независимо представляет собой водород, C1-C10алкил, C3-C7циклоалкил, гетероциклоалкил или C2-C10гетероалкил.
В некоторых воплощениях представляет собой CR3. В некоторых воплощениях представляет собой N. В некоторых воплощениях представляет собой CR5. В некоторых воплощениях представляет собой N. В некоторых воплощениях представляет собой CR6. В некоторых воплощениях представляет собой N. В некоторых воплощениях представляет собой CR7. В некоторых воплощениях представляет собой N. В некоторых воплощениях представляет собой CR8. В некоторых воплощениях представляет собой CHR8. В некоторых воплощениях представляет собой N. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой CR6, и представляет собой CR7. В некоторых воплощениях представляет собой N, представляет собой CR6, и представляет собой CR7. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой CR7. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой CR6, и представляет собой N. В некоторых воплощениях и представляют собой N, и представляет собой CR7. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, a и представляют собой N. В некоторых воплощениях представляет собой CR8. В некоторых воплощениях представляет собой CHR8. В некоторых воплощениях представляет собой N. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой CR6, представляет собой CR7, и представляет собой CR8. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой CR6, представляет собой CR7, и представляет собой CHR8. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой CR6, представляет собой CR7, и представляет собой N. В некоторых воплощениях представляет собой N, представляет собой CR6, представляет собой CR7, и представляет собой CR8. В некоторых воплощениях представляет собой N, представляет собой CR6, представляет собой CR7, и представляет собой CHR8. В некоторых воплощениях представляет собой N, представляет собой CR6, представляет собой CR7, и представляет собой N. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой CR8. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой CHR8. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой N. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой CR6, представляет собой N, и представляет собой CR8. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой CR6, представляет собой N, и представляет собой CHR8. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, представляет собой CR6, представляет собой N, и представляет собой N. В некоторых воплощениях и представляют собой N, представляет собой CR7, и представляет собой CR8. В некоторых воплощениях и представляют собой N, представляет собой CR7, и представляет собой CHR8. В некоторых воплощениях и представляют собой N, представляет собой CR7, и представляет собой N. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, и представляют собой N, и представляет собой CR8. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, и представляют собой N, и представляет собой CHR8. В некоторых воплощениях представляет собой CR5, и представляют собой N, и представляет собой N.
В некоторых воплощениях B представляет собой незамещенный или замещенный алкил, включая, но не ограничиваясь этим, -(CH2)2-NRaRa, где каждый Ra независимо представляет собой водород, алкил, фторалкил, карбоциклил, карбоциклилалкил, арил, аралкил, гетероциклоалкил, гетероциклоалкилалкил, гетероарил или гетероарилалкил, или NRaRa соединены вместе с образованием циклической группировки, которая включает, но не ограничивается этим, пиперидинил, пиперазинил и морфолинил. В некоторых воплощениях B представляет собой незамещенный или замещенный амино. В некоторых воплощениях B представляет собой незамещенный или замещенный гетероалкил.
В некоторых воплощениях B представляет собой группировку формулы II, где Wc представляет собой член, выбранный из группы, состоящей из незамещенного или замещенного арила, замещенного фенила, незамещенного или замещенного гетероарила, включая, но не ограничиваясь этим, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, пиримидин-4-ил, пиримидин-2-ил, пиримидин-5-ил или пиразин-2-ил, незамещенного или замещенного моноциклического гетероарила, незамещенного или замещенного бициклического гетероарила, гетероарила, содержащего два гетероатома в качестве кольцевых атомов, незамещенного или замещенного гетероарила, содержащего кольцевой атом азота, гетероарила, содержащего два кольцевых атома азота, гетероарила, содержащего азот и серу в качестве кольцевых атомов, незамещенного или замещенного гетероциклоалкила, включая, но не ограничиваясь этим, морфолинил, тетрагидропиранил, пиперазинил и пиперидинил, незамещенного или замещенного циклоалкила, включая, но не ограничиваясь этим, циклопентил и циклогексил.
В некоторых воплощениях B представляет собой одну из следующих группировок:
В некоторых воплощениях B замещен одним или более чем одним из алкила, гетероалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, алкокси, амидо, амино, ацила, ацилокси, алкоксикарбонила, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро, при этом каждый алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси или сульфонамидо сам может быть замещен.
В некоторых воплощениях R1 представляет собой член, выбранный из группы, состоящей из водорода, незамещенного или замещенного алкила, незамещенного или замещенного гетероалкила, незамещенного или замещенного алкенила, незамещенного или замещенного алкинила, незамещенного или замещенного циклоалкила или незамещенного или замещенного гетероциклоалкила. В некоторых воплощениях R1 представляет собой незамещенный или замещенный арил, незамещенный или замещенный арилалкил, незамещенный или замещенный гетероарил или незамещенный или замещенный гетероарилалкил. В некоторых воплощениях R1 представляет собой незамещенный или замещенный алкокси, незамещенный или замещенный амидо, незамещенный или замещенный амино. В некоторых воплощениях R1 представляет собой незамещенный или замещенный ацил, незамещенный или замещенный ацилокси, незамещенный или замещенный алкоксикарбонил или незамещенный или замещенный сульфонамидо. В некоторых воплощениях R1 представляет собой галогено, который включает -Cl, -F, -I и -Br. В некоторых воплощениях R1 выбран из группы, состоящей из циано, гидрокси, нитро, незамещенного или замещенного фосфата, незамещенной или замещенной мочевины и карбоната.
В некоторых воплощениях, когда R1 представляет собой алкил, R1 представляет собой метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, втор-бутил, пентил, гексил или гептил.
В некоторых воплощениях, когда R1 представляет собой алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо или гидрокси, R1 замещен фосфатом, или незамещенной мочевиной, или замещенной мочевиной, или карбоновой кислотой или карбонатом.
В некоторых воплощениях, когда R1 представляет собой алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо, R1 замещен одним или более чем одним из алкила, гетероалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, арилалкила, гетероарила, гетероарилалкила, алкокси, амидо, амино, ацила, ацилокси, алкоксикарбонила, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро, при этом каждый алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо сам может быть замещен.
В некоторых воплощениях R2 представляет собой член, выбранный из группы, состоящей из незамещенного или замещенного алкила, незамещенного или замещенного гетероалкила, незамещенного или замещенного алкенила, незамещенного или замещенного алкинила, незамещенного или замещенного циклоалкила и незамещенного или замещенного гетероциклоалкила. В некоторых воплощениях R2 представляет собой незамещенный или замещенный арил, незамещенный или замещенный арилалкил, незамещенный или замещенный гетероарил или незамещенный или замещенный гетероарилалкил. В некоторых воплощениях R2 представляет собой незамещенный или замещенный алкокси, незамещенный или замещенный амидо, незамещенный или замещенный амино. В некоторых воплощениях R2 представляет собой незамещенный или замещенный ацил, незамещенный или замещенный ацилокси, незамещенный или замещенный алкоксикарбонил или незамещенный или замещенный сульфонамидо. В некоторых воплощениях R2 представляет собой галогено, который представляет собой -I, -F, -Cl или -Br. В некоторых воплощениях R2 выбран из группы, состоящей из циано, гидрокси, нитро, карбоновой кислоты и карбоната. В некоторых воплощениях R2 представляет собой незамещенный или замещенный фосфат. В некоторых воплощениях R2 представляет собой незамещенную или замещенную мочевину. В некоторых воплощениях, когда R2 представляет собой алкил, R2 представляет собой метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, втор-бутил, пентил, гексил или гептил.
В некоторых воплощениях, когда R2 представляет собой алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо или гидрокси, он замещен фосфатом, замещен мочевиной или замещен карбонатом.
В некоторых воплощениях, когда R2 представляет собой алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо, он замещен одним или более чем одним из алкила, гетероалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, алкокси, амидо, амино, ацила, ацилокси, алкоксикарбонила, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро, при этом каждый алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо сам может быть замещен.
В некоторых воплощениях q равен целому числу 0. В некоторых воплощениях q равен целому числу 1. В некоторых воплощениях q равен целому числу 2. В некоторых воплощениях q равен целому числу 3. В некоторых воплощениях q равен целому числу 4.
В некоторых воплощениях R3 представляет собой член, выбранный из группы, состоящей из водорода, незамещенного или замещенного алкила, незамещенного или замещенного алкенила и незамещенного или замещенного алкинила. В некоторых воплощениях R3 представляет собой незамещенный или замещенный арил, незамещенный или замещенный гетероарил, незамещенный или замещенный циклоалкил или незамещенный или замещенный гетероциклоалкил. В некоторых воплощениях R3 представляет собой незамещенный или замещенный алкокси, незамещенный или замещенный амидо, незамещенный или замещенный амино. В некоторых воплощениях R3 представляет собой незамещенный или замещенный ацил, незамещенный или замещенный ацилокси, незамещенный или замещенный алкоксикарбонил или незамещенный или замещенный сульфонамидо. В некоторых воплощениях R3 представляет собой галогено, который представляет собой -I, -F, -Cl или -Br.
В некоторых воплощениях R3 выбран из группы, состоящей из циано, гидрокси и нитро. В некоторых воплощениях, когда R3 представляет собой алкил, R3 представляет собой метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, втор-бутил, пентил, гексил или гептил. В некоторых воплощениях R3 представляет собой -CF3.
В некоторых воплощениях, когда R3 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, арил, гетероарил, циклоалкил, гетероциклоалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо, он замещен одним или более чем одним из алкила, гетероалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, алкокси, амидо, амино, ацила, ацилокси, алкоксикарбонила, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро, причем каждый алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо сам может быть замещен.
В некоторых воплощениях R5 представляет собой водород, незамещенный или замещенный алкил (включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4алкил). В некоторых воплощениях R5 представляет собой незамещенный или замещенный алкенил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C2-C5алкенил. В некоторых воплощениях R5 представляет собой незамещенный или замещенный алкинил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C2-C5алкинил. В некоторых воплощениях R5 представляет собой незамещенный или замещенный циклоалкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный С3-C5циклоалкил. В некоторых воплощениях R5 представляет собой незамещенный или замещенный гетероциклоалкил. В некоторых воплощениях R5 представляет собой незамещенный или замещенный гетероалкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4гетероалкил. В некоторых воплощениях R5 представляет собой незамещенный или замещенный алкокси, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4алкокси. В некоторых воплощениях R5 представляет собой незамещенный или замещенный амидо, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4амидо. В некоторых воплощениях R5 представляет собой незамещенный или замещенный амино. В некоторых воплощениях R5 представляет собой незамещенный или замещенный ацил, незамещенный или замещенный ацилокси, незамещенный или замещенный C1-C4ацилокси, незамещенный или замещенный алкоксикарбонил, незамещенный или замещенный сульфонамидо или незамещенный или замещенный C1-C4сульфонамидо. В некоторых воплощениях R5 представляет собой галогено, который представляет собой -I, -F, -Cl или -Br. В некоторых воплощениях R5 выбран из группы, состоящей из циано, гидрокси и нитро. В некоторых других воплощениях R5 представляет собой -CH3, -CH2CH3, н-пропил, изопропил, -OCH3, -OCH2CH3 или -CF3.
В некоторых воплощениях, когда R5 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероалкил, ацил, алкокси, амидо, амино, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо, R5 возможно замещен одним или более чем одним из алкила, гетероалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, алкокси, амидо, амино, ацила, ацилокси, алкоксикарбонила, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро, причем каждый алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо сам может быть замещен.
В некоторых воплощениях R6 представляет собой водород, незамещенный или замещенный алкил (включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4алкил). В некоторых воплощениях R6 представляет собой незамещенный или замещенный алкенил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C2-C5алкенил. В некоторых воплощениях R6 представляет собой незамещенный или замещенный алкинил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C2-C5алкинил. В некоторых воплощениях R6 представляет собой незамещенный или замещенный циклоалкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C3-C5циклоалкил. В некоторых воплощениях R6 представляет собой незамещенный или замещенный гетероциклоалкил. В некоторых воплощениях R6 представляет собой незамещенный или замещенный гетероалкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4гетероалкил. В некоторых воплощениях R6 представляет собой незамещенный или замещенный алкокси, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4алкокси. В некоторых воплощениях R6 представляет собой незамещенный или замещенный амидо, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4амидо. В некоторых воплощениях R6 представляет собой незамещенный или замещенный амино. В некоторых воплощениях R6 представляет собой незамещенный или замещенный ацил, незамещенный или замещенный ацилокси, незамещенный или замещенный С1-С4ацилокси, незамещенный или замещенный алкоксикарбонил, незамещенный или замещенный сульфонамидо или незамещенный или замещенный C1-C4сульфонамидо. В некоторых воплощениях R6 представляет собой галогено, который представляет собой -I, -F, -Cl или -Br. В некоторых воплощениях R6 выбран из группы, состоящей из циано, гидрокси и нитро. В некоторых других воплощениях R6 представляет собой -CH3, -CH2CH3, н-пропил, изопропил, -OCH3, -OCH2CH3 или -CF3.
В некоторых воплощениях, когда R6 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероалкил, ацил, алкокси, амидо, амино, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо, R6 возможно замещен одним или более чем одним из алкила, гетероалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, алкокси, амидо, амино, ацила, ацилокси, алкоксикарбонила, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро, причем каждый алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо сам может быть замещен.
В некоторых воплощениях R7 представляет собой водород, незамещенный или замещенный алкил (включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4алкил). В некоторых воплощениях R7 представляет собой незамещенный или замещенный алкенил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C2-C5алкенил. В некоторых воплощениях R7 представляет собой незамещенный или замещенный алкинил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный С2-C5алкинил. В некоторых воплощениях R7 представляет собой незамещенный или замещенный циклоалкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный С3-С5циклоалкил. В некоторых воплощениях R7 представляет собой незамещенный или замещенный гетероциклоалкил. В некоторых воплощениях R7 представляет собой незамещенный или замещенный гетероалкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4 гетероалкил. В некоторых воплощениях R7 представляет собой незамещенный или замещенный алкокси, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4алкокси. В некоторых воплощениях R7 представляет собой незамещенный или замещенный амидо, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4амидо. В некоторых воплощениях R7 представляет собой незамещенный или замещенный амино. В некоторых воплощениях R7 представляет собой незамещенный или замещенный ацил, незамещенный или замещенный ацилокси, незамещенный или замещенный C1-C4ацилокси, незамещенный или замещенный алкоксикарбонил, незамещенный или замещенный сульфонамидо или незамещенный или замещенный С1-С4сульфонамидо. В некоторых воплощениях R7 представляет собой галогено, который представляет собой -I, -F, -Cl или -Br. В некоторых воплощениях R7 выбран из группы, состоящей из циано, гидрокси и нитро. В некоторых других воплощениях R7 представляет собой -CH3, -CH2CH3, н-пропил, изопропил, -OCH3, -OCH2CH3 или -CF3.
В некоторых воплощениях, когда R7 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероалкил, ацил, алкокси, амидо, амино, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо, R7 возможно замещен одним или более чем одним из алкила, гетероалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, алкокси, амидо, амино, ацила, ацилокси, алкоксикарбонила, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро, причем каждый алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо сам может быть замещен.
В некоторых воплощениях R8 представляет собой водород, незамещенный или замещенный алкил (включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4алкил). В некоторых воплощениях R8 представляет собой незамещенный или замещенный алкенил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C2-C5алкенил. В некоторых воплощениях R8 представляет собой незамещенный или замещенный алкинил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C2-C5алкинил. В некоторых воплощениях R8 представляет собой незамещенный или замещенный циклоалкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C3-C5циклоалкил. В некоторых воплощениях R8 представляет собой незамещенный или замещенный гетероциклоалкил. В некоторых воплощениях R8 представляет собой незамещенный или замещенный гетероалкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4гетероалкил. В некоторых воплощениях R8 представляет собой незамещенный или замещенный алкокси, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4алкокси. В некоторых воплощениях R8 представляет собой незамещенный или замещенный амидо, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C4амидо. В некоторых воплощениях R8 представляет собой незамещенный или замещенный амино. В некоторых воплощениях R8 представляет собой незамещенный или замещенный ацил, незамещенный или замещенный ацилокси, незамещенный или замещенный C1-C4ацилокси, незамещенный или замещенный алкоксикарбонил, незамещенный или замещенный сульфонамидо или незамещенный или замещенный C1-C4сульфонамидо. В некоторых воплощениях R8 представляет собой галогено, который представляет собой -I, -F, -Cl или -Br. В некоторых воплощениях R8 выбран из группы, состоящей из циано, гидрокси и нитро. В некоторых других воплощениях R8 представляет собой -CH3, -CH2CH3, н-пропил, изопропил, -OCH3, -OCH2CH3 или -CF3.
В некоторых воплощениях, когда R8 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероалкил, ацил, алкокси, амидо, амино, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо, R8 возможно замещен одним или более чем одним из алкила, гетероалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, алкокси, амидо, амино, ацила, ацилокси, алкоксикарбонила, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро, причем каждый алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо сам может быть замещен.
В некоторых воплощениях R5, R6, R7 и R8 представляют собой Н.
В некоторых воплощениях X отсутствует. В некоторых воплощениях X представляет собой -(CH(R9))z, и z независимо равен целому числу 1, 2, 3 или 4.
В некоторых воплощениях R9 представляет собой незамещенный или замещенный алкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C1-C10алкил. В некоторых воплощениях R9 представляет собой незамещенный или замещенный циклоалкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C3-C7циклоалкил. В некоторых воплощениях R9 представляет собой метил или водород. В некоторых воплощениях R9 представляет собой незамещенный или замещенный гетероциклоалкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C2-C10гетероалкил. В некоторых воплощениях R9 представляет собой незамещенный или замещенный гетероалкил, включая, но не ограничиваясь этим, незамещенный или замещенный C2-C10гетероалкил.
Когда R9 представляет собой любое из приведенного выше, в некоторых воплощениях X представляет собой -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -СН(CH3)- или -CH(CH2CH3)-. В некоторых воплощениях, когда X представляет собой -CH(CH3)-, -СН(CH3)- находится в (S)- или (R)-стереохимической конфигурации.
В некоторых воплощениях соединения формулы I Y отсутствует. В некоторых воплощениях Y представляет собой -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -С(=O)-, -N(R9)(C=O)-, -N(R9)(C=O)NH-, -N(R9)C(R9)2- (такие как например -N(R9)CH2-, конкретно -N(CH3)CH2-, N(CH(CH3)2)CH2- или N(CH2CH3)CH2-), -N(R9)-, -N(CH3)-, -N(CH2CH3)- или -N(CH(CH3)2)-. В некоторых воплощениях Y представляет собой -C(=O)-(CHR9)z-, и z независимо равен целому числу 1, 2, 3 или 4.
В некоторых воплощениях X-Y представляет собой -CH2-, -CH2-N(CH3), -CH(CH3)-NH-, (S) -CH(CH3)-NH- или (R) -CH(CH3)-NH-. В некоторых воплощениях X-Y представляет собой -N(CH3)-CH2-, N(CH2CH3)CH2-, -N(CH(CH3)2)CH2- или -NHCH2-.
В некоторых воплощениях Wd представляет собой член, выбранный из группы, состоящей из незамещенного или замещенного гетероциклоалкила, незамещенного или замещенного арила и незамещенного или замещенного гетероарила. В некоторых воплощениях Wd представляет собой незамещенный или замещенный моноциклический гетероарил или незамещенный или замещенный бициклический гетероарил. В некоторых воплощениях Wd представляет собой бициклический гетероарил, имеющий по меньшей мере один гетероатом, например, бициклический гетероарил, имеющий по меньшей мере один кольцевой атом азота. В некоторых воплощениях Wd представляет собой бициклический гетероарил, имеющий по меньшей мере два гетероатома, например, бициклический гетероарил, имеющий по меньшей мере два кольцевых атома азота. В некоторых воплощениях Wd представляет собой бициклический гетероарил, имеющий два гетероатома в кольце, которое присоединено к XY. В некоторых воплощениях Wd представляет собой бициклический гетероарил, имеющий два кольцевых атома азота в кольце, к которому присоединен XY. В некоторых воплощениях Wd представляет собой бициклический гетероарил, имеющий четыре гетероатома, например, бициклический гетероарил, имеющий четыре кольцевых атома азота. В некоторых воплощениях Wd представляет собой незамещенный или замещенный 4-амино-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил, незамещенный или замещенный 7-амино-2-метил-2Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-3-ил, незамещенный или замещенный 6-метиленил-9Н-пурин-6-ил или незамещенный или замещенный 6-амино-9Н-пурин-9-ил.
В некоторых воплощениях Wd представляет собой одно из следующего:
где Ra представляет собой водород, галогено, фосфат, мочевину, карбонат, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероалкил или гетероциклоалкил;
R11 представляет собой H, алкил, галогено, амино, амидо, гидрокси или алкокси, и
R12 представляет собой H, алкил, циано, алкинил, алкенил, галогено, арил, гетероарил, гетероциклоалкил, циклоалкил, амино, карбоновую кислоту, алкоксикарбонил или амидо.
В некоторых воплощениях Wd представляет собой:
В некоторых воплощениях Wd представляет собой:
В некоторых воплощениях Wd представляет собой:
В некоторых воплощениях Wd представляет собой:
В некоторых воплощениях Wd Ra представляет собой член, выбранный из группы, состоящей из водорода, галогено, фосфата, мочевины, карбоната, незамещенного или замещенного алкила, незамещенного или замещенного алкенила, незамещенного или замещенного алкинила, незамещенного или замещенного циклоалкила, незамещенного или замещенного гетероалкила и незамещенного или замещенного гетероциклоалкила.
В некоторых воплощениях Wd, когда Ra представляет собой алкил, алкинил, циклоалкил, гетероалкил или гетероциклоалкил, он замещен фосфатом, мочевиной или карбонатом.
В некоторых воплощениях R11 является членом группы, состоящей из водорода, незамещенного или замещенного алкила и галогено, который включает -I, -F, -Cl или -Br. В некоторых воплощениях R11 представляет собой незамещенный или замещенный амино, незамещенный или замещенный амидо, гидрокси или незамещенный или замещенный алкокси. В некоторых воплощениях R11 представляет собой фосфат, незамещенную или замещенную мочевину или карбонат.
В некоторых воплощениях, когда R11 представляет собой алкил, амино, амидо, гидрокси или алкокси, он замещен фосфатом, мочевиной или карбонатом.
В некоторых воплощениях -X-Y-Wd представляет собой одну из следующих группировок:
В некоторых воплощениях R12 является членом группы, состоящей из водорода, циано, галогено, незамещенного или замещенного алкила и незамещенного или замещенного алкинила, незамещенного или замещенного алкенила. В некоторых воплощениях R12 представляет собой незамещенный или замещенный арил. В некоторых воплощениях R12 представляет собой незамещенный или замещенный гетероарил, который включает, но не ограничивается этим, гетероарил, имеющий 5-членное кольцо, гетероарил, имеющий шестичленное кольцо, гетероарил по меньшей мере с одним кольцевым атомом азота, гетероарил с двумя кольцевыми атомами азота, моноциклический гетероарил и бициклический гетероарил. В некоторых воплощениях R12 представляет собой незамещенный или замещенный гетероциклоалкил, который включает, но не ограничивается этим, гетероциклоалкил с одним кольцевым атомом азота, гетероциклоалкил с одним кольцевым атомом кислорода, R12 представляет собой гетероциклоалкил с одним кольцевым атомом серы, 5-членный гетероциклоалкил, 6-членный гетероциклоалкил, насыщенный гетероциклоалкил, ненасыщенный гетероциклоалкил, гетероциклоалкил, имеющий ненасыщенную группировку, присоединенную к гетероциклоалкильному кольцу, гетероциклоалкил, замещенный оксо, и гетероциклоалкил, замещенный двумя оксо. В некоторых воплощениях R12 представляет собой незамещенный или замещенный циклоалкил, включая, но не ограничиваясь этим, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклоалкил, замещенный одним оксо, циклоалкил, имеющий ненасыщенную группировку, присоединенную к циклоалкильному кольцу. В некоторых воплощениях R12 представляет собой незамещенный или замещенный амидо, карбоновую кислоту, незамещенный или замещенный ацилокси или незамещенный или замещенный алкоксикарбонил.
В некоторых воплощениях, когда R12 представляет собой алкил, алкинил, алкенил, арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил, он замещен фосфатом. В некоторых воплощениях, когда R12 представляет собой алкил, алкинил, алкенил, арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил, он замещен мочевиной. В некоторых воплощениях, когда R12 представляет собой алкил, алкинил, алкенил, арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил, он замещен карбонатом.
В некоторых воплощениях, когда R12 представляет собой алкил, алкинил, алкенил, арил, гетероарил, гетероциклоалкил, циклоалкил, алкоксикарбонил, амидо или ацилокси, он замещен одним или более чем одним из алкила, гетероалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, алкокси, амидо, амино, ацила, ацилокси, алкоксикарбонила, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро, причем каждый алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил или сульфонамидо сам может быть замещен.
В некоторых воплощениях R12 в Wd представляет собой одну из следующих группировок:
В некоторых воплощениях Wd представляет собой пиразолопиримидин формулы III:
где R11 представляет собой H, алкил, галогено, амино, амидо, гидрокси или алкокси, и R12 представляет собой H, алкил, алкинил, алкенил, галогено, арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил. В некоторых воплощениях R11 представляет собой амино, и R12 представляет собой H, алкил, алкинил, алкенил, галогено, арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил. В некоторых воплощениях R11 представляет собой амино, и R12 представляет собой алкил, галогено, арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил. В некоторых воплощениях R11 представляет собой амино, и R12 представляет собой моноциклический гетероарил. В некоторых воплощениях R11 представляет собой амино, и R12 представляет собой бициклический гетероарил. В некоторых воплощениях R11 представляет собой амино, и R12 представляет собой циано, амино, карбоновую кислоту, ацилокси, алкоксикарбонил или амидо.
В некоторых воплощениях соединение формулы I представляет собой соединение, которое имеет структуру, выбранную из группы, состоящей из соединений формулы 1-А, 1-В, 2-А, 2-В, IV, V, V-A, VI, VI-A, VI-B, VI-C, 6-С1, 6-С2, VI-D и 6-D:
В другом воплощении соединение формулы I представляет собой соединение, которое имеет структуру, выбранную из группы, состоящей из соединений формулы VII, 7-А, VIII, VIII-A и 8-А:
Любые из описанных элементов и их заместителей для соединений формулы I могут быть использованы в любой комбинации.
В одном аспекте, относящемся к соединениям формулы I, IV, V, VI, VII или VIII, R3 представляет собой Н, CH3, CF3, Cl, F, арил или гетероарил; В представляет собой алкил или группировку формулы II
где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил; R1 представляет собой Н, -F, -Cl, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -OCH3, нитро или фосфат; R2 представляет собой галогено, гидрокси, циано, нитро или фосфат; q равен целому числу 0, 1, 2, 3 или 4; R5, R6, R7 и R8 представляют собой H; X отсутствует или представляет собой (CH2)z; z равен 1; Y отсутствует, представляет собой -N(R9)- или -N(R9)CH(R9)-; R9 представляет собой водород, C2-C10алкил, C3-C7циклоалкил или C2-C10гетероалкил; и Wd представляет собой пиразолопиримидин или пурин.
В другом аспекте, относящемся к соединениям формулы I, IV, V, VI, VII или VIII, R3 представляет собой H, CH3, CF3, Cl или F; B представляет собой алкил или группировку формулы II, которая представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил; R1 представляет собой H, -F, -Cl, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -OCH3, нитро или фосфат; R2 представляет собой галогено, гидрокси, циано, нитро или фосфат; q равен 0, 1 или 2; R5, R6, R7 и R8 представляют собой H; X отсутствует или представляет собой (CH2)z; z равен 1; Y отсутствует, представляет собой -N(R9)- или -N(R9)CH(R9)-; R9 представляет собой водород, метил или этил; Wd представляет собой: 
или 
R11 представляет собой амино; и R12 представляет собой Н, алкил, алкинил, алкенил, галогено, арил, гетероарил, гетероциклоалкил, циклоалкил, циано, амино, карбоновую кислоту, алкоксикарбонил или амидо.
В другом аспекте, относящемся к соединениям формулы I, IV, V, VI, VII или VIII, R3 представляет собой H, CH3, CF3, Cl или F; В представляет собой алкил или группировку формулы II, которая представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил; R1 представляет собой H, -F, -Cl, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -OCH3, нитро или фосфат; R2 представляет собой галогено, гидрокси, циано, нитро или фосфат; q равен 0, 1 или 2; R5, R6, R7 и R8 представляют собой H; X представляет собой (CH2)z; z равен 1; Y отсутствует, и Wd представляет собой: 
R11 представляет собой амино; и R12 представляет собой H, алкил, алкинил, алкенил, галогено, арил, гетероарил, гетероциклоалкил, циклоалкил, циано, амино, карбоновую кислоту, алкоксикарбонил или амидо.
В другом аспекте, относящемся к соединениям формулы I, IV, V, VI, VII или VIII, R3 представляет собой H, CH3, CF3, Cl или F; В представляет собой алкил или группировку формулы II, которая представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил; R1 представляет собой H, -F, -Cl, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -OCH3, нитро или фосфат; R2 представляет собой галогено, гидрокси, циано, нитро или фосфат; q равен 0, 1 или 2; R5, R6, R7 и R8 представляют собой H; X представляет собой (CH2)z; z равен 1; Y представляет собой -N(R9)-; R9 представляет собой водород, метил или этил; и Wd представляет собой 
В другом аспекте, относящемся к соединениям формулы I, IV, V, VI, VII или VIII, R3 представляет собой H, CH3, CF3, Cl или F; В представляет собой алкил или группировку формулы II, которая представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил; R1 представляет собой Н, -F, -Cl, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -OCH3, нитро или фосфат; R2 представляет собой галогено, гидрокси, циано, нитро или фосфат; q равен 0, 1 или 2; R5, R6, R7 и R8 представляют собой Н; X отсутствует; Y представляет собой -N(R9)CH(R9)-; R9 представляет собой водород, метил или этил; и Wd представляет собой 
Кроме того, согласно изобретению предложено соединение формулы IX или его фармацевтически приемлемая соль,
где и независимо представляют собой CR5, S, N или NR4, и независимо представляет собой CR7, S, N или NR4, где не более чем два соседних атома в кольце представляют собой азот или серу, и где представляет собой S, один из и представляет собой N или NR4;
представляет собой CR8, N или NR8;
В представляет собой алкил, амино, гетероалкил, циклоалкил, гетероциклоалкил или группировку формулы II:
где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил, и
q равен целому числу 0, 1, 2, 3 или 4;
Wd отсутствует или представляет собой гетероциклоалкильную, арильную или гетероарильную группировку;
X отсутствует или представляет собой -(CH(R9))z-, и в каждом случае z независимо равен целому числу 1, 2, 3 или 4;
Y отсутствует, представляет собой -O-, -S-, -S(=O)-, -S(=O)2-, -N(R9)-, -C(=O)-(CHR9)z-, -C(=O)-, -N(R9)-C(=O)- или -N(R9)-C(=O)NH-, -N(R9)C(R9)2- или -C(=O)-(CHR9)z-;
R1 представляет собой водород, алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро, фосфат, мочевину или карбонат;
R2 представляет собой алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, арилалкил, гетероарил, гетероарилалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси, нитро, фосфат, мочевину или карбонат;
R4 представляет собой водород, ацил, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил или C1-C4гетероалкил;
R5, R7 и R8 независимо представляют собой водород, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероалкил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси, алкоксикарбонил, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро;
в каждом случае R9 независимо представляет собой водород, C1-10алкил, С3-C7циклоалкил, гетероциклоалкил или C2-C10гетероалкил.
Заместители, описанные для соединения формулы I, равнозначно применимы к соединениям формулы IX, за исключением 
, , и , которые определены следующим далее образом.
В некоторых воплощениях представляет собой CR5, S, N или NR4.
В некоторых воплощениях представляет собой CR5, S, N или NR4.
В некоторых воплощениях представляет собой CR7, S, N или NR4.
В некоторых воплощениях представляет собой CR8, N или NR8.
В некоторых воплощениях соединение формулы IX имеет структуру, которая является членом группы, состоящей из: (1) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой CR7, и представляет собой CR8; (2) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой CR7, и представляет собой CHR8; (3) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой CR7, и представляет собой N; (4) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой CR7, и представляет собой NR8; (5) представляет собой NR4, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой NR4, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой CHR8; (7) представляет собой NR4, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой N; (8) представляет собой NR4, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой NR8; (9) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой CR8; (10) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой CHR8; (11) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой N; (12) представляет собой NR4, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой NR8; (13) представляет собой S, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой CR8; (14) представляет собой S, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой CHR8; (15) представляет собой S, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой N; (16) представляет собой S, представляет собой CR5, представляет собой N, и представляет собой NR8; (17) представляет собой N, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой CR8; (18) представляет собой N, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой CHR8; (19) представляет собой N, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой N; (20) представляет собой N, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой NR8; (21) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой S, и представляет собой CR8; (22) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой S, и представляет собой CHR8; (23) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой S, и представляет собой N; (24) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой S, и представляет собой NR8; (25) представляет собой S, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой CR8; (26) представляет собой S, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой CHR8; (27) представляет собой S, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой N; (28) представляет собой S, представляет собой N, представляет собой CR7, и представляет собой NR8; (29) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой NR4, и представляет собой CR8; (30) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой NR4, и представляет собой CHR8; (31) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой NR4, и представляет собой N; (32) представляет собой CR5, представляет собой N, представляет собой NR4, и представляет собой NR8; (33) представляет собой CR5, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой CHR8; (34) представляет собой CR5, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой CR8; (35) представляет собой CR5, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой N; и (36) представляет собой CR5, представляет собой CR5, представляет собой S, и представляет собой NR8.
В некоторых воплощениях R4 является членом группы, состоящей из водорода, незамещенного или замещенного ацила, незамещенного или замещенного алкила, который включает, но не ограничивается этим, незамещенный или замещенный C1-C4алкил, незамещенного или замещенного алкенила, который включает, но не ограничивается этим, C2-C5алкенил, незамещенного или замещенного алкинила, который включает, но не ограничивается этим, C2-C5алкинил, незамещенного или замещенного циклоалкила, который включает, но не ограничивается этим, C3-C5циклоалкил, незамещенного или замещенного гетероциклоалкила и незамещенного или замещенного гетероалкила, который включает, но не ограничивается этим, незамещенный или замещенный C1-C4гетероалкил.
В некоторых воплощениях, когда R4 представляет собой ацил, алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил или гетероалкил, он замещен одним или более чем одним из алкила, гетероалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила, гетероарила, алкокси, амидо, амино, ацила, ацилокси, сульфонамидо, галогено, циано, гидрокси или нитро, причем каждый алкил, гетероалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, гетероциклоалкил, арил, гетероарил, алкокси, амидо, амино, ацил, ацилокси или сульфонамидо сам может быть замещен.
В некоторых воплощениях соединение формулы IX представляет собой соединение, которое имеет структуру, выбранную из группы, состоящей из соединений формулы X, XI, XII, XIII и XIV:
Любые из описанных элементов и их заместителей для соединений формулы IX могут быть использованы в любой комбинации.
В одном аспекте, относящемся к соединениям формулы IX, X, XI, XII, XIII или XIV, B представляет собой алкил или группировку формулы II:
где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил; R1 представляет собой Н, -F, -Cl, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -ОСН3, нитро или фосфат; R2 представляет собой галогено, гидрокси, циано, нитро или фосфат; q равен целому числу 0, 1, 2, 3 или 4; R4, R5, R7 и R8 представляют собой H или метил; X отсутствует или представляет собой (CH2)z; z равен 1; Y отсутствует, представляет собой -N(R9)- или -N(R9)CH(R9)-; R9 представляет собой водород, C1-C10алкил, C3-C7циклоалкил или C2-C10гетероалкил; и Wd представляет собой пиразолопиримидин или пурин.
В другом аспекте, относящемся к соединениям формулы IX, X, XI, XII, XIII или XIV, В представляет собой алкил или группировку формулы II, где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил; R1 представляет собой Н, -F, -Cl, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -OCH3, нитро или фосфат; R2 представляет собой галогено, гидрокси, циано, нитро или фосфат; q равен целому числу 0, 1, 2, 3 или 4; R4, R5 и R7 представляют собой Н или метил; R8 представляет собой H; X отсутствует или представляет собой (CH2)z; z равен 1; Y отсутствует или представляет собой -N(R9)-; R9 представляет собой водород, метил или этил; Wd представляет собой: 
или 
R11 представляет собой амино; и R12 представляет собой H, алкил, алкинил, алкенил, галогено, арил, гетероарил, гетероциклоалкил, циклоалкил, циано, амино, карбоновую кислоту, алкоксикарбонил или амидо.
В другом аспекте, относящемся к соединениям формулы IX, X, XI, XII, XIII или XIV, B представляет собой группировку формулы II, где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил; R1 представляет собой Н, -F, -Cl, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -OCH3 или нитро; R2 представляет собой галогено, гидрокси, циано или нитро; q равен 0, 1 или 2; R4, R5 и R7 представляют собой H или метил; R8 представляет собой H; X представляет собой (CH2)z; z равен 1; Y отсутствует, и Wd представляет собой: 
R11 представляет собой амино; и R12 представляет собой H, алкил, алкинил, алкенил, галогено, арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил.
В другом аспекте, относящемся к соединениям формулы IX, X, XI, XII, XIII или XIV, В представляет собой алкил или группировку формулы II, где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил, R1 представляет собой H, -F, -Cl, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -OCH3, нитро или фосфат; R2 представляет собой галогено, гидрокси, циано, нитро или фосфат; q равен 0, 1 или 2; R4, R5 и R7 представляют собой H или метил; R8 представляет собой H; X представляет собой (CH2)z; z равен 1; Y отсутствует, и Wd представляет собой: 
R11 представляет собой амино; и R12 представляет собой H, алкил, алкинил, алкенил, галогено, арил, гетероарил, гетероциклоалкил, циклоалкил, циано, амино, карбоновую кислоту, алкоксикарбонил или амидо.
В другом аспекте, относящемся к соединениям формулы IX, X, XI, XII, XIII или XIV, В представляет собой алкил или группировку формулы II, где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил; R1 представляет собой Н, -F, -Cl-, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -OCH3, нитро или фосфат; R2 представляет собой галогено, гидрокси, циано, нитро или фосфат; q равен 0, 1 или 2; R4, R5 и R7 представляют собой Н или метил; R8 представляет собой H; X представляет собой (CH2)z; z равен 1; X представляет собой (CH2)z; z равен 1; Y представляет собой -N(R9)-; R9 представляет собой водород, метил или этил; и Wd представляет собой 
В другом аспекте, относящемся к соединениям формулы IX, X, XI, XII, XIII или XIV, В представляет собой алкил или группировку формулы II, где Wc представляет собой арил, гетероарил, гетероциклоалкил или циклоалкил, R1 представляет собой Н, -F, -Cl-, -CN, -CH3, изопропил, -CF3, -OCH3, нитро или фосфат; R2 представляет собой галогено, гидрокси, циано, нитро или фосфат; q равен 0, 1 или 2; R4, R5 и R7 представляют собой Н или метил; R8 представляет собой Н; X отсутствует; Y представляет собой -N(R9)CH(R9)-; R9 представляет собой водород, метил или этил; Wd представляет собой: 
Приведены иллюстративные воплощения соединений формулы 1-А и формулы 1-В, где R3 выбран из любого из Н, Cl, F или метила; любой выбран из СН, N, C-CN или С-OCH3; любой выбран из СН, N, C-CF3 или С-CH3; любой выбран из СН, N или C-CF3; любой R8 выбран из Н, Me или Cl; любой B описан как в Таблице 1; и любой R12 описан как в Таблице 2. Соединения формулы 1-А и формулы 1-В могут содержать любые заместители, определенные для R3, , , , R8, B и R12. Описанные конкретные воплощения никоим образом не ограничивают изобретение, а являются описательными примерами соединений по изобретению. Некоторые дополнительные типичные соединения формул 1-А и 1-В проиллюстрированы в Таблице 5.
Приведены иллюстративные воплощения соединений формулы 2-А и формулы 2-В, где R3 выбран из любого из Н, Cl, F или метила; любой выбран из СН, N, C-CN или С-OCH3; любой выбран из СН, N, C-CF3 или С-CH3; любой выбран из СН, N или C-CF3; любой R8 выбран из Н, Me или Cl; любой B описан как в Таблице 1; любой R12 определен как в Таблице 2, и любой X-Y-Wd описан как в Таблице 3. Соединения формулы 2-А и формулы 2-В могут содержать любые заместители, определенные для R3, , , , R8, В, R12 и X-Y-Wd. Описанные конкретные воплощения никоим образом не ограничивают изобретение, а являются описательными примерами соединений по изобретению. Некоторые дополнительные типичные соединения формул 2-А и 2-В проиллюстрированы в Таблице 5.
Приведены иллюстративные воплощения соединений формулы 6-А, где R3 выбран из любого из Н, Cl, F или метила; любой B описан как в Таблице 1; и любой R12 описан как в Таблице 2. Соединения формулы 6-А могут содержать любые заместители, определенные для R3, B и R12. Описанные конкретные воплощения никоим образом не ограничивают изобретение, а являются описательными примерами соединений по изобретению. Некоторые дополнительные типичные соединения формулы 6-А проиллюстрированы в Таблице 5.
Приведены иллюстративные воплощения соединений формулы 6-С1, где R3 выбран из любого из Н, Cl, F или метила; любой B описан как в Таблице 1; любой R9 выбран из -H, -CH3 или -CH2CH3; и любой R12 описан как в Таблице 2. Соединения формулы 6-С1 могут содержать любые заместители, определенные для R3, В, R9 и R12. Описанные конкретные воплощения никоим образом не ограничивают изобретение, а являются описательными примерами соединений по изобретению. Некоторые дополнительные типичные соединения формулы 6-С1 проиллюстрированы в Таблице 5.
Приведены иллюстративные воплощения соединений формулы 6-С2, где R3 выбран из любого из Н, Cl, F или метила; любой B описан как в Таблице 1; и любой R9 выбран из -H, -CH3 или -CH2CH3. Соединения формулы 6-С2 могут содержать любые заместители, определенные для R3, B и R9. Описанные конкретные воплощения никоим образом не ограничивают изобретение, а являются описательными примерами соединений по изобретению. Некоторые дополнительные типичные соединения формулы 6-С2 проиллюстрированы в Таблице 5.
Приведены иллюстративные воплощения соединений формулы 6-D, где R3 выбран из любого из Н, Cl, F или метила; любой B описан как в Таблице 1; и любой R9 выбран из -H, -CH3 или -CH2CH3. Соединения формулы 6-D могут содержать любые заместители, определенные для R3, B и R9. Описанные конкретные воплощения никоим образом не ограничивают изобретение, а являются описательными примерами соединений по изобретению. Некоторые дополнительные типичные соединения формулы 6-D проиллюстрированы в Таблице 5.
Приведены иллюстративные воплощения формулы VIII, где R3 выбран из любого из Н, Cl, F или метила; любой выбран из СН, N, C-CN или С-ОСН3; любой выбран из СН, N, C-CF3 или С-CH3; любой выбран из СН, N или C-CF3; любой B описан как в Таблице 1; любой R12 описан как в Таблице 2, и любой X-Y-Wd описан как в Таблице 3. Соединения формулы VIII могут содержать любые заместители, определенные для R3, , , , B, R12 и X-Y-Wd. Описанные конкретные воплощения никоим образом не ограничивают изобретение, а являются описательными примерами соединений по изобретению. Некоторые дополнительные типичные соединения формулы VIII проиллюстрированы в Таблице 5.
Кроме того, предложены соединения подструктурных формул 9A-9BD, принадлежащих общей структурной формуле IX, где R4 выбран из -H, метила, этила, н-пропила, изопропила, циклопропила, циклобутила и циклопентила; любой R5 выбран из Н, Cl, F, метила или трифторметила; любой R7 выбран из Н, Cl, F, метила, трифторметила, циано, гидроксила, этила, изопропила и циклопропила; любой R8 выбран из Н, метила или изопропила; любой B описан как в Таблице 1; любой X-Y-Wd описан как в Таблице 3, и любой R12 описан как в Таблице 2. Соединения формул 9A-9BD могут содержать любые заместители, определенные для R4, R5, R7 R8 B, X-Y-Wd и R12. Описанные конкретные воплощения никоим образом не ограничивают изобретение, а являются описательными примерами соединений по изобретению. Некоторые дополнительные типичные соединения формул от 9-А до 9-BD проиллюстрированы в Таблице 5.
Другие иллюстративные примеры соединений включают, но не ограничиваются этим, следующие далее:
Химические структуры, изложенные в данной заявке, могут быть синтезированы в соответствии с одной или более иллюстративными схемами в данной заявке и/или методиками, хорошо известными в данной области техники.
Если не указано иначе, реакции, изложенные в данной заявке, протекают при атмосферном давлении, в общем случае в диапазоне температур от -10°C до 200°C. Более того, за исключением случаев, когда указано иное, подразумевается, что продолжительность реакций и условия указаны приблизительно, например, они протекают при примерно атмосферном давлении в диапазоне температур от примерно -10°C до примерно 110°C в течение периода времени от примерно 1 до примерно 24 часов; продолжительность реакций, оставляемых на ночь, в среднем составляет период времени примерно 16 часов.
Термины "растворитель", "органический растворитель" или "инертный растворитель" каждый означают растворитель, инертный в условиях описываемой при этом реакции, включая, например, бензол, толуол, ацетонитрил, тетрагидрофуран ("THF"), диметилформамид ("DMF"), хлороформ, метиленхлорид (или дихлорметан (DCM)), диэтиловый эфир, метанол, N-метилпирролидон ("NMP"), пиридин и тому подобное. Если не указано иначе, растворители, используемые в реакциях, изложенных в данной заявке, являются инертными органическими растворителями. Если не указано иначе, на каждый грамм лимитирующего реагента, эквивалентный объем составляет один см3 (сс) (или мл) растворителя.
При желании, выделение и очистка химических структур и промежуточных соединений, изложенных в данной заявке, могут быть осуществлены с использованием любой подходящей методики разделения или очистки, такой как, например, фильтрация, экстракция, кристаллизация, колоночная хроматография, тонкослойная хроматография или толстослойная хроматография или комбинация этих методик. Конкретные иллюстрации подходящих методик разделения и выделения могут быть получены посредством ссылки на приведенные ниже примеры. Тем не менее, также могут быть использованы другие эквивалентные методики разделения или выделения.
При желании, (R)- и (S)-изомеры соединений по настоящему изобретению, если они присутствуют, могут быть разделены способами, известными специалистам в данной области техники, например, посредством образования диастереоизомерных солей или комплексов, которые могут быть разделены, например, кристаллизацией; посредством образования диастереоизомерных производных, которые могут быть разделены, например, кристаллизацией, газо-жидкостной или жидкостной хроматографией; посредством избирательного взаимодействия одного энантиомера с энантиомер-специфичным реагентом, например ферментативного окисления или восстановления, с последующим разделением модифицированных и немодифицированных энантиомеров; или посредством газо-жидкостной или жидкостной хроматографии в хиральном окружении, например на хиральной подложке, такой как диоксид кремния со связанным хиральным лигандом, или в присутствии хирального растворителя. Альтернативно, конкретный энантиомер может быть синтезирован в результате асимметрического синтеза с использованием оптически активных реагентов, субстратов, катализаторов или растворителей или в результате превращения одного энантиомера в другой путем асимметрической трансформации.
Соединения, изложенные в данной заявке, возможно могут быть приведены в контакт с фармацевтически приемлемой кислотой с образованием соответствующих солей присоединения кислоты.
Большинство возможно замещенных исходных соединений и других реагентов имеются в продаже, например у Aldrich Chemical Company (Milwaukee, WI), или могут быть легко получены специалистами в данной области техники с использованием обычно применяемой методологии синтеза.
В общем случае соединения по изобретению могут быть синтезированы с использованием соответствующей комбинации общих хорошо известных способов синтеза. Методики, полезные при синтезе этих химических структур, как легко понятны, так и доступны специалистам в релевантной области техники с учетом настоящего описания.
Соединения по изобретению могут быть синтезированы с использованием соответствующей комбинации известных в данной области техники способов синтеза. Приведенное ниже обсуждение приведено для иллюстрации некоторых разнообразных способов, доступных для использования в получении соединений по изобретению, и не предназначено для ограничения объема реакций или последовательностей реакций, которые могут быть использованы в получении соединений по настоящему изобретению.
Реакционная схема 1:
Согласно Схеме 1, стадии 1, кетон 101 превращают в соответствующий алкен, используя, например, малононитрил и пиперидин в уксусной кислоте. Продукт, соединение формулы 102, выделяют. Согласно Схеме 1, стадии 2, соединение формулы 102 подвергают циклизации до пиридина, используя, например, аммиак в метаноле. Продукт, соединение формулы 103, выделяют. Согласно Схеме 1, стадии 3, соединение формулы 103 подвергают гидролизу до получения соответствующей карбоновой кислоты. Продукт, соединение формулы 104, выделяют. Согласно Схеме 1, стадии 4, соединение формулы 104 превращают в амид, используя, например, стандартный реагент амидного сочетания, такой как EDCI (1-[3-(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимид). Продукт, соединение формулы 105, выделяют. Согласно Схеме 1, стадии 5, соединение формулы 105 превращают в соответствующий амид, используя, например, хлорацетилхлорид. Продукт, соединение формулы 106, выделяют. Согласно Схеме 1, стадии 6, соединение формулы 106 превращают в соединение формулы 107, используя, например, уксусную кислоту. Продукт, соединение формулы 107, выделяют. Согласно Схеме 1, стадии 7, соединение формулы 107 подвергают замещению по атому хлора при взаимодействии с нуклеофилом и основанием, такими как пиразолопиримидин 108 и карбонат калия. Продукт, соединение формулы 109, выделяют. Согласно Схеме 1, стадии 8, соединение формулы 109 подвергают реакции сочетания с арил- или гетероарил-бороновой кислотой или производным бороновой кислоты, таким как, например, боролан, используя, например, условия катализируемой палладием реакции сочетания. Продукт, соединение формулы 110, выделяют.
Реакционная схема 2:
Согласно Схеме 2, стадии 1, соединение формулы 108 превращают в соединение формулы 202, например, посредством алкилирования соединения формулы 201. Продукт, соединение формулы 202, выделяют. Согласно Схеме 2, стадии 2, соединение формулы 202 превращают в соединение формулы 203, например, посредством омыления. Продукт, соединение формулы 203, выделяют. Согласно Схеме 2, стадии 3, соединение формулы 203 подвергают циклизации до хиназолина формулы 205, например, посредством взаимодействия в герметично закрытой пробирке с соединением формулы 204 и дегидратирующим агентом, таким как PCl5. Продукт, соединение формулы 205, выделяют.
Реакционная схема 3:
Согласно Схеме 3 соединение формулы 109 превращают в соединение формулы 302, например, посредством реакции сочетания Сонагашира с соединением формулы 301. Продукт, соединение формулы 302, выделяют.
Реакционная схема 4:
Согласно Схеме 4, стадии 1, соединение формулы 401 превращают в соединение формулы 403, например, посредством двустадийного процесса сочетания Хека с соединением формулы 402 с последующей катализируемой кислотой циклизацией в метаноле. Продукт, соединение формулы 403, выделяют. Согласно Схеме 4, стадии 2, соединение формулы 403 превращают в соединение формулы 404, например, посредством взаимодействия с подходящим образом замещенным анилином. Продукт, соединение формулы 404, выделяют. Согласно Схеме 4, стадии 3, соединение формулы 404 превращают в соединение формулы 405, например, посредством восстановления с использованием алюмогидрида лития. Продукт, соединение формулы 405, выделяют. Согласно Схеме 4, стадии 4, соединение формулы 405 превращают в соединение формулы 406, например, путем взаимодействия с тионилхлоридом. Продукт, соединение формулы 406, выделяют. Согласно Схеме 4, стадии 5, соединение формулы 406 превращают в соединение формулы 407, например, путем алкилирования с пиразолопиримидином, используя основание, такое как карбонат калия. Продукт, соединение формулы 407, выделяют. Согласно Схеме 4, стадии 6, соединение формулы 407 превращают в соединение формулы 408, например, посредством реакции Сузуки. Продукт, соединение формулы 408, выделяют.
Реакционная схема 5:
Согласно Схеме 5, стадии 1, соединение формулы 501 превращают в соединение формулы 502, например, с использованием реагента, подходящего для введения хлорангидрида кислоты, например, оксалилхлорида. Продукт, соединение формулы 502, возможно выделяют. Согласно Схеме 5, стадии 2, соединение формулы 502 превращают в соединение формулы 503, например, путем взаимодействия, например, с ариламином. Продукт, соединение формулы 503, выделяют. Согласно Схеме 5, стадии 3, соединение формулы 503 превращают в соединение формулы 504, например, посредством сочетания Стилле, используя соответствующий винил-станнан. Продукт, соединение формулы 504, выделяют. Согласно Схеме 5, стадии 4, соединение формулы 504 превращают в третичный амид, соединение формулы 505, путем взаимодействия с хлорэтилацетатом и основанием гидридом натрия. Соединение формулы 505 выделяют. Согласно Схеме 5, стадии 5, соединение формулы 505 окисляют до альдегида, используя, например, тетраоксид осмия и периодинат натрия. Продукт, соединение формулы 506, выделяют. Согласно Схеме 5, стадии 6, соединение формулы 506 превращают в соединение формулы 404, например, посредством альдольной реакции в этаноле в присутствии основания, такого как карбонат цезия. Продукт, соединение формулы 404, выделяют. Согласно Схеме 5, стадии 7, соединение формулы 404 восстанавливают до первичного спирта путем восстановления с использованием, например, алюмогидрида лития, с получением соединения формулы 405, которое выделяют. Согласно Схеме 5, стадии 8, соединение формулы 405 превращают в соединение формулы 507 путем взаимодействия с четырехбромистым углеродом и трифенилфосфином. Соединение формулы 507 возможно выделяют. Это соединение может быть центральным промежуточным соединением в синтезе соединений по изобретению.
Реакционная схема 6:
Согласно Схеме 6, стадии 1, соединение формулы 507, синтезированное как описано на Реакционной схеме 5, превращают в соединение формулы 407 путем сочетания с соединением формулы 108 в присутствии основания, например, трет-бутилата калия. Соединение формулы 407 выделяют. Согласно Схеме 6, стадии 2, соединение формулы 407 превращают в соединение формулы 408 путем сочетания, например, с арилбороновой кислотой в присутствии катализаторов реакции сочетания и основания, например, ацетата палладия, трифенилфосфина и карбоната натрия, например. Соединение формулы 408 выделяют.
Реакционная схема 7:
Согласно Схеме 7, стадии 1, соединение формулы 701 приводят во взаимодействие с соединением формулы 702. Продукт, соединение формулы 703, выделяют. Согласно Схеме 7, стадии 2, соединение формулы 703 приводят во взаимодействие с возможно замещенным пурином, таким как соединение формулы 704. Продукт, соединение формулы 705, выделяют.
Реакционная схема 8:
Согласно Схеме 8, стадии 1, соединение формулы 801 обрабатывают реагентом, таким как тионилхлорид, с получением соединения формулы 802, которое выделяют. Согласно Схеме 8, стадии 2, соединение формулы 802 и соединение формулы 803 объединяют в присутствии основания. Продукт, соединение формулы 804, выделяют. Согласно Схеме 8, стадии 3, соединение формулы 804 превращают в соединение формулы 805, которое выделяют.
Реакционная схема 9:
Согласно Схеме 9, стадии 1, соединение формулы 104 приводят во взаимодействие, например, с нитритом натрия и иодидом калия в кислотных условиях с получением соединения формулы 901, которое может быть выделено. Согласно Схеме 9, стадии 2, соединение формулы 901 превращают в его хлорангидрид кислоты путем взаимодействия, например, с оксалилхлоридом, с получением соединения формулы 902, которое может быть выделено. Согласно Схеме 9, стадии 3, хлорангидрид кислоты формулы 902 приводят во взаимодействие с возможно замещенным амино-арилом или амино-гетарилом, соединением 903, получая соединение формулы 904, которое выделяют. Согласно Схеме 9, стадии 4, соединение формулы 904 подвергают реакции сочетания, например, с аллилстаннаном, с получением соединения формулы 905, которое выделяют. Согласно Схеме 9, стадии 5, соединение формулы 905 превращают в его эпоксид путем обработки, например, мета-хлорпербензойной кислотой, получая соединение формулы 906, которое может быть выделено. Согласно Схеме 9, стадии 6, соединение формулы 906 подвергают циклизации путем обработки, например гидридом натрия в диметилформамиде, с получением соединения формулы 907, которое выделяют. Согласно Схеме 9, стадии 7, первичный гидроксил соединения формулы 907 превращают в бромид путем обработки, например четырехбромистым углеродом и трифенилфосфином, с получением соединения формулы 908, которое выделяют. Согласно Схеме 9, стадии 8, соединение формулы 908 подвергают реакции сочетания с пиразолопиримидином формулы 108А путем обработки, например, карбонатом калия в диметилформамиде, получая соединение формулы 909, которое выделяют. Согласно Схеме 9, стадии 9, дигидроизохинолон формулы 909 подвергают реакции сочетания с возможно замещенной арил- или гетарил-бороновой кислотой формулы 910 с получением соединения формулы 911, которое выделяют.
Реакционная схема 10:
Согласно Схеме 10, стадии 1, соединение формулы 1001 обрабатывают ацетатом натрия и ацетоном. Продукт, соединение формулы 1002, выделяют. Согласно Схеме 10, стадии 2, соединение формулы 1002 подвергают циклизации до соответствующего пиразола, например, с использованием гидразина в уксусной кислоте и воде. Продукт, соединение формулы 1003, выделяют. Согласно Схеме 10, стадии 3, соединение формулы 1003, например, алкилируют, используя диметилсульфат. Продукт, соединение формулы 1004, выделяют. Согласно Схеме 10, стадии 4, соединение формулы 1004 подвергают нитрованию, используя, например, раствор азотной кислоты и серной кислоты. Продукт, соединение формулы 1005, выделяют. Согласно Схеме 10, стадии 5, соединение формулы 1005 подвергают омылению, используя основание, такое как гидроксид натрия. Продукт, соединение формулы 1006, выделяют. Согласно Схеме 10, стадии 6, соединение формулы 1006 сначала превращают в хлорангидрид кислоты, используя тионилхлорид, затем приводят во взаимодействие с соответственно замещенным анилином с образованием соответствующего амида. Продукт, соединение формулы 1007, выделяют. Согласно Схеме 10, стадии 7, соединение формулы 1007 восстанавливают до соответствующего амино-пиразола, используя условия гидрирования с примененим Pd/C (палладий-углеродный) в качестве катализатора. Продукт, соединение формулы 1008, выделяют. Согласно Схеме 10, стадии 8, соединение формулы 1008 подвергают циклизации до соответствующего хиназолинона, используя условия, такие как хлорацетилхлорид и уксусная кислота. Продукт, соединение формулы 1009, выделяют. Согласно Схеме 10, стадии 9, соединение формулы 1009 подвергают реакции сочетания с пиразолопиримидином формулы 108, например, используя условия, такие как трет-бутилат калия в DMF при комнатной температуре (КТ). Продукт, соединение формулы 1010, выделяют. Согласно Схеме 10, стадии 9, соединение формулы 1010 подвергают реакции сочетания с арил-бороновой кислотой формулы 910, например, используя катализ с применением ацетата палладия, в присутствии трифенилфосфина и карбоната натрия в DMF с получением соединения формулы 1011. Продукт, соединение формулы 1011, выделяют.
Реакционная схема 11:
Согласно Схеме 11, стадии 1, соединение формулы 1101 приводят во взаимодействие с тиоцианидом калия в ацетонитриле с получением соединения формулы 1102, которое может быть выделено. Согласно Схеме 11, стадии 2, соединение формулы 1102 приводят во взаимодействие с коньюгированным сложным эфиром формулы 1103 с получением соединения формулы 1104, которое выделяют. Согласно Схеме 11, стадии 3, соединение формулы 1104 подвергают циклизации, например, путем обработки его бромом в этаноле, получая тиазол формулы 1105, который выделяют. Согласно Схеме 11, стадии 4, с соединения формулы 1105 удаляют защиту, используя, например, карбонат калия в водном диметилформамиде и получая соединение формулы 1106, которое выделяют. Согласно Схеме 11, стадии 5, сложный эфир соединения формулы 1106 подвергают омылению, используя, например, гидроксид натрия в воде, с получением соединения формулы 1107, которое выделяют. Согласно Схеме 11, стадии 6, свободную кислоту соединения формулы 1107 превращают в хлорангидрид кислоты с использованием методики обработки его, например, тионилхлоридом, получая соединение формулы 1108, которое может быть выделено. Согласно Схеме 11, стадии 7, хлорангидрид кислоты соединения формулы 1108 приводят во взаимодействие с возможно замещенным амино-арил- или амино-гетероарил-содержащим соединением формулы 1109, получая соединение формулы 1110, которое выделяют. Согласно Схеме 11, стадии 8, первичный амин соединения формулы 1110 приводят во взаимодействие с галогеноацил-хлоридом, например, хлорацетилхлоридом в пиридине и метиленхлориде с получением соединения формулы 1111, которое выделяют. Согласно Схеме 11, стадии 9, соединение формулы 1111 подвергают циклизации, например, посредством нагревания в герметично закрытой пробирке в присутствии фосфорилхлорида, получая соединение формулы 1112, которое выделяют. Согласно Схеме 11, стадии 10, соединение тиазолопиримидона формулы 1112 приводят во взаимодействие с an пиразолопиримидином формулы 1113 в присутствии основания, например трет-бутилата калия в диметилформамиде, с получением соединения формулы 1114, которое выделяют.
Реакционная схема 12:
Согласно Схеме 12, стадии 1, соединение формулы 709 алкилируют, используя возможно замещенный пурин формулы 1210. Продукт, соединение формулы 1211, выделяют.
Реакционная схема 13:
Согласно Схеме 13, стадии 1, соединение формулы 1301 сначала превращают в хлорангидрид кислоты, используя тионилхлорид, затем приводят во взаимодействие с соответственно замещенным анилином. Продукт, соединение формулы 1302, выделяют. Согласно Схеме 13, стадии 2, соединение формулы 1302 подвергают циклизации до соответствующего тиено-пиримидинона, например, используя хлорацетилхлорид в уксусной кислоте. Продукт, соединение формулы 1303, выделяют. Согласно Схеме 13, стадии 3, соединение формулы 1303, например алкилируют, используя соответственно замещенный пиразоло-пиримидин. Продукт, соединение формулы 1304, выделяют. Согласно Схеме 13, стадии 4, соединение формулы 1304, например арилируют, используя соответственно замещенную бороновую кислоту. Продукт, соединение формулы 1305, выделяют.
Реакционная схема 14:
Согласно Реакционной схеме 14, стадии 1, йод-содержащий сложный эфир 1401 приводят во взаимодействие с алкином 1402 в присутствии палладиевого катализатора, иодида меди и триэтиламина (TEA) с целью присоединения алкина к арильному ядру соединения 1401 с получением соединения формулы 1403. Соединение формулы 1403 выделяют. Согласно Реакционной схеме 14, стадии 2, соединение формулы 1403 обрабатывают основанием гидроксидом калия с получением карбоновой кислоты, соединения формулы 1404, если продукт реакции подкисляют, или ее соли. Соединение формулы 1404 выделяют. Согласно Реакционной схеме 14, стадии 3, соединение формулы 1404 обрабатывают бис(ацетонитрил)дихлор-палладием(II) и TEA для осуществления внутримолекулярного замыкания кольца с получением соединения формулы 1405. Соединение формулы 1405 выделяют. Согласно Реакционной схеме 14, стадии 4, соединение формулы 1405 приводят во взаимодействие с первичным амином с получением соединения формулы 1406. Соединение формулы 1406 выделяют. Согласно Реакционной схеме 14, стадии 5, соединение формулы 1406 обрабатывают соляной кислотой, удаляя защитную группу на азоте и получая соединение формулы 1407. Соединение формулы 1407 может быть выделено. Согласно Реакционной схеме 14, стадии 6, соединение формулы 1407 приводят во взаимодействие с соединением формулы 1408 с получением соединения формулы 1409. Соединение формулы 1409 выделяют.
Реакционная схема 15:
Согласно Реакционной схеме 15, стадии 1, йод-содержащий сложный эфир 1401 приводят во взаимодействие с алкином 1501 в присутствии палладиевого катализатора реакции сочетания, иодида меди и TEA с получением соединения формулы 1502. Соединение формулы 1502 выделяют. Согласно Реакционной схеме 15, стадии 2, соединение формулы 1502 обрабатывают основанием гидроксидом калия, получая карбоксилат или свободную кислоту соединения формулы 1503. Согласно Реакционной схеме 15, стадии 3, соединение формулы 1503 обрабатывают бис(ацетонитрил)-дихлорпалладием(II) и TEA для осуществления внутримолекулярного замыкания кольца с получением соединения формулы 1504. Соединение формулы 1504 выделяют. Согласно Реакционной схеме 15, стадии 4, соединение формулы 1504 обрабатывают первичным амином с получением соединения формулы 1505. Соединение формулы 1505 выделяют.
Реакционная схема 16:
Согласно Реакционной схеме 16, стадии 1, йод-содержащий сложный эфир 1401 приводят во взаимодействие с алкином 1601 в присутствии палладиевого катализатора реакции сочетания, иодида меди и TEA с получением соединения формулы 1602. Соединение формулы 1602 выделяют. Согласно Реакционной схеме 16, стадии 2, соединение формулы 1602 обрабатывают основанием гидроксидом калия, получая карбоксилат или свободную кислоту соединения формулы 1603. Согласно Реакционной схеме 16, стадии 3, соединение формулы 1603 обрабатывают бис(ацетонитрил)-дихлорпалладием(II) и TEA для осуществления внутримолекулярного замыкания кольца с получением соединения формулы 1604. Соединение формулы 1604 выделяют. Согласно Реакционной схеме 16, стадии 4, соединение формулы 1604 обрабатывают первичным амином с получением соединения формулы 1605. Соединение формулы 1605 выделяют. Согласно Реакционной схеме 16, стадии 5, соединение формулы 1605 обрабатывают кислотой для удаления защитной группы ТНР, получая соединение формулы 1606. Соединение формулы 1606 выделяют.
Реакционная схема 17:
Согласно Реакционной схеме 17, стадии 1, соединение формулы 1701 синтезируют разными путями синтеза, включая варианты Схем 1 или 2, где, например, используют бензиламин на стадии превращения соединения формулы 403 в соединение формулы 404. Бензильная защитная группа амина может быть удалена в соответствии со стандартными химическими реакциями удаления защиты с получением соединения формулы 1701. Соединение формулы 1701 превращают в соединение формулы 1702 путем алкилирования амидного азота, используя ряд 2-углерод-содержащих синтонов, которые могут быть подвергнуты процедуре удаления защиты, окисления и повторного введения защиты в виде соответствующего кеталя на соединение формулы 1702, которое может быть выделено. Согласно Реакционной схеме 17, стадии 2-1, соединение формулы 1702 преобразуют, например, посредством восстановительного аминирования сложноэфирной группировки с целью введения пуринильной группировки соединения формулы 1703 или, альтернативно, алкилируют с целью такого введения пуринильной группировки и получения соединения формулы 1703. Согласно Реакционной схеме 17, стадии 3-1, соединение формулы 1703 обрабатывают кислотой для удаления кетальной защитной группы с получением соединения формулы 1704. Соединение формулы 1704 выделяют. Согласно Реакционной схеме 17, стадии 4-1, соединение формулы 1704 подвергают восстановительному аминированию с использованием амина, получая соединение формулы 1705. Соединение формулы 1705 выделяют. Согласно Реакционной схеме 17, стадии 2-2, соединение формулы 1702 преобразуют в соответствии со стадиями 7 и 8 Схемы 5 и стадией 1 Схемы 6 с целью введения пиразолопиримидиновой группировки соединения формулы 1706. Соединение формулы 1706 выделяют. Согласно Реакционной схеме 17, стадии 3-2, соединение формулы 1706 обрабатывают кислотой для удаления кетальной защитной группы с получением соединения формулы 1707. Соединение формулы 1707 может быть выделено. Согласно Реакционной схеме 17, стадии 4-2, соединение формулы 1707 подвергают восстановительному аминированию, используя амин, с получением соединения формулы 1708. Соединение формулы 1708 выделяют.
Реакционная схема 18:
Согласно Реакционной схеме 18, стадии 1, соединение формулы 1701 синтезируют, как описано на Схеме 17, или посредством любых других общеизвестных химических реакций. Соединение формулы 1701 преобразуют путем алкилирования амидного азота, используя ряд 2-углерод-содержащих синтонов, которые могут быть подвергнуты удалению защиты, и превращают в алкокси-защищенную разновидность, как показано для соединения формулы 1801, которое может быть выделено. Согласно Реакционной схеме 18, стадии 2, соединение формулы 1801 преобразуют с использованием химических реакций, описанных на стадии 2-1 Схемы 17, с целью введения пуринильной группировки и такое полученное соединение преобразуют путем удаления защиты, активации и аминирования с использованием амина, получая соединение формулы 1802, которое выделяют.
Согласно Реакционной схеме 18, стадии 3, соединение формулы 1801 преобразуют с использованием химических реакций, описанных на стадии 2-2 Схемы 17, с целью введения пиразолопиримидиновой группировки и такое полученное соединение преобразуют путем удаления защиты, активации и аминирования с использованием амина, получая соединение формулы 1803, которое выделяют.
Реакционная схема 19:
Согласно Реакционной схеме 19, стадии 1, соединение формулы 1901 обрабатывают амином с получением соединения формулы 1902. Соединение формулы 1902 выделяют. Согласно Реакционной схеме 19, стадии 2, соединение формулы 1902 обрабатывают оксихлоридом фосфора с образованием соединения формулы 1903. Соединение формулы 1903 выделяют. Согласно Реакционной схеме 19, стадии 3, соединение формулы 1903 приводят во взаимодействие с аминопурином формулы 1904 с получением соединения формулы 1905. Соединение формулы 1905 выделяют. Согласно Реакционной схеме 19, стадии 4, соединение формулы 1905 обрабатывают соляной кислотой для удаления защитной группы на азоте пуриновой группировки с получением соединения формулы 1906. Соединение формулы 1906 выделяют.
Реакционная схема 20:
Согласно Реакционной схеме 20, стадии 1, соединение формулы 1401 обрабатывают сложным эфиром винилогического ряда 2001, используя, например реакцию Хека с последующей циклизацией, с получением соединения формулы 2002. Соединение формулы 2002 выделяют. Согласно Реакционной схеме 20, стадии 2, соединение формулы 2002 приводят во взаимодействие с 4-амино-N-Вос-пиперидином с получением соединения формулы 2002. Соединение формулы 2003 выделяют. Соединение формулы 2003 может быть использовано в качестве промежуточного соединения в синтезе соединений по изобретению.
Реакционная схема 21:
Согласно Реакционной схеме 21, стадии 1, соединение формулы 1401 обрабатывают алкиниловым спиртом, например, формулы 2101, в присутствии иодида меди и катализатора палладия на угле с получением соединения формулы 2102. Соединение формулы 2102 возможно выделяют и возможно очищают. Согласно Реакционной схеме 21, стадии 1, соединение формулы 2102 приводят во взаимодействие с 4-амино-N-Вос-пиперидином с получением соединения формулы 2103. Соединение формулы 2103 выделяют. Соединение формулы 2103 может быть использовано в качестве промежуточного соединения в синтезе соединений по изобретению.
Любые соединения формулы I, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII или XIV могут быть синтезированы с использованием реакционных схем, которые изложены в данной заявке, или вариантов этих способов, которые хорошо известны в данной области техники.
Эти химические структуры могут быть синтезированы с использованием соответствующей комбинации общих хорошо известных способов синтеза.
В некоторых воплощениях одно или более соединений, являющихся объектом изобретения, специфично связываются с PI3-киназой или протеинкиназой, выбранной из группы, состоящей из mTor, ДНК-зависимой протеинкиназы (инвентарный номер белка в базе Pubmed (PPAN) ААА79184), тирозинкиназы Abl (САА52387), Bcr-Abl, киназы гемопоэтических клеток (PPAN САН 9695), Src (PPAN САА24495), рецептора-2 фактора роста эндотелия сосудов (PPAN АВВ82619), рецептора-2 фактора роста эндотелия сосудов (PPAN ABB82619), рецептора эпидермального фактора роста (PPAN AG43241), ЕРН-рецептора B4 (эфринового рецептора В4) (PPAN EAL23820), рецептора фактора стволовых клеток (PPAN AAF22141), рецептора тирозин-протеинкиназы TIE-2 (PPAN Q02858), fms-подобной тирозинкиназы 3 (PPAN NP_004110), рецептора-альфа ростового фактора из тромбоцитов (PPAN NP_990080), RET (PPAN CAA73131) и любых других протеинкиназ, приведенных в прилагаемых таблицах и графических материалах, а также любых их функционально активных мутантов. В некоторых воплощениях IC50 для соединения, являющегося объектом изобретения, в отношении р110α, р110β, р110γ или р110δ составляет менее чем примерно 1 мкМ, менее чем примерно 100 нМ, менее чем примерно 50 нМ, менее чем примерно 10 нМ, менее 1 нМ или даже менее чем примерно 0,5 нМ. В некоторых воплощениях IC50 для соединения, являющегося объектом изобретения, в отношении mTor составляет менее чем примерно 1 мкМ, менее чем примерно 100 нМ, менее чем примерно 50 нМ, менее чем примерно 10 нМ, менее 1 нМ или даже менее чем примерно 0,5 нМ. В некоторых других воплощениях одно или более соединений, являющихся объектом изобретения, демонстрируют двойную специфичность связывания и способны ингибировать Р13-киназу (например, PI3-киназу класса I), также как и протеинкиназу (например, mTor) с величиной IC50 менее чем примерно 1 мкМ, менее чем примерно 100 нМ, менее чем примерно 50 нМ, менее чем примерно 10 нМ, менее чем 1 нМ или даже менее чем примерно 0,5 нМ. Одно или более соединений, являющихся объектом изобретения, обладают способностью ингибировать тирозинкиназы включая, например, ДНК-зависимую протеинкиназу (инвентарный номер белка в базе Pubmed (PPAN) ААА79184), тирозинкиназу Abl (САА52387), Bcr-Abl, киназу гемопоэтических клеток (PPAN САМ 9695), Src (PPAN САА24495), рецептор-2 фактора роста эндотелия сосудов (PPAN АВВ82619), рецептор-2 фактора роста эндотелия сосудов (PPAN АВВ82619), рецептор эпидермального фактора роста (PPAN AG43241), ЕРН-рецептор B4 (PPAN EAL23820), рецептор фактора стволовых клеток (PPAN AAF22141), рецептор тирозин-протеинкиназы TIE-2 (PPAN Q02858), fms-подобную тирозинкиназу 3 (PPAN NP_004110), рецептор-альфа ростового фактора из тромбоцитов (PPAN NP_990080), RET (PPAN CAA73131) и их функциональные мутанты. В некоторых воплощениях тирозинкиназа представляет собой Abl, Bcr-Abl, EGFR или Flt-3 и любые другие киназы, приведенные в данной заявке в Таблицах.
В некоторых воплощениях соединения по настоящему изобретению демонстрируют один или более функциональных характерных признаков, раскрытых в данной заявке. Например, одно или более соединений, являющихся объектом изобретения, специфично связываются с PI3-киназой. В некоторых воплощениях IC50 для соединения, являющегося объектом изобретения, в отношении р110α, р110β, р110γ или р110δ составляет менее чем примерно 1 мкМ, менее чем примерно 100 нМ, менее чем примерно 50 нМ, менее чем примерно 10 нМ, менее чем примерно 1 нМ, менее чем примерно 0,5 нМ, менее чем примерно 100 пМ или менее чем примерно 50 пМ.
В некоторых воплощениях одно или более чем одно соединение, являющееся объектом изобретения, может селективно ингибировать один или более членов фосфатидилинозитол-3-киназ (PI3-киназа) I типа или I класса с величиной IC50 примерно 100 нМ, 50 нМ, 10 нМ, 5 нМ, 100 пМ, 10 пМ или 1 пМ или меньше, как измерено в киназном анализе in vitro.
В некоторых воплощениях одно или более чем одно из соединений, являющихся объектом изобретения, может селективно ингибировать одну или две киназы из фосфатидилинозитол-3-киназ (PI3-киназа) I типа или I класса, состоящих из PI3-киназы α, PI3-киназы β, PI3-киназы γ и PI3-киназы δ. В некоторых аспектах некоторые из соединений, являющихся объектом изобретения, селективно ингибируют PI3-киназу δ по сравнению со всеми другими PI3-киназами I типа. В других аспектах некоторые из соединений, являющихся объектом изобретения, селективно ингибируют PI3-киназу δ и PI3-киназу γ по сравнению с остальными PI3-киназами I типа. В еще одних других аспектах некоторые из соединений, являющихся объектом изобретения, селективно ингибируют PI3-киназу α и PI3-киназу β по сравнению с остальными PI3-киназами I типа. В еще одних некоторых других аспектах некоторые из соединений, являющихся объектом изобретения, селективно ингибируют PI3-киназу δ и PI3-киназу α по сравнению с остальными PI3-киназами I типа. В еще одних некоторых других аспектах некоторые из соединений, являющихся объектом изобретения, селективно ингибируют PI3-киназу δ и PI3-киназу β по сравнению с остальными PI3-киназами I типа, или селективно ингибируют PI3- киназу δ и PI3-киназу а по сравнению с остальными PI3-киназами I типа, или селективно ингибируют PI3-киназу α и PI3-киназу γ по сравнению с остальными PI3-киназами I типа, или селективно ингибируют PI3-киназу γ и PI3-киназу β по сравнению с остальными PI3-киназами I типа.
В еще одном другом аспекте ингибитор, который селективно ингибирует один или более киназ из PI3-киназ I типа, или ингибитор, который селективно ингибирует одну или более чем одну PI3-киназу I типа, опосредующую пути передачи сигнала, альтернативно может пониматься как относящийся к соединению, которое демонстрирует вызывающую 50%-ное ингибирование концентрацию (IC50) в отношении заданной PI3-киназы I типа, которая ниже по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 20 раз, по меньшей мере в 50 раз, по меньшей мере в 100 раз, по меньшей мере в 1000 раз, по меньшей мере в 10100 раз или ниже IC50 для данного ингибитора в отношении остальных других PI3-киназ I типа.
Фармацевтические композиции
Согласно данному изобретению предложены фармацевтические композиции, содержащие одно или более соединений по настоящему изобретению.
В некоторых воплощениях согласно данному изобретению предложены фармацевтические композиции для лечения заболеваний или состояний, связанных с нежелательным, сверхактивным, причиняющим вред или повреждающим иммунным ответом у млекопитающего. Такой нежелательный иммунный ответ может быть связан с или может вызывать, например, астму, эмфизему, бронхит, псориаз, аллергию, анафилаксию, аутоиммунные заболевания, ревматоидный артрит, реакцию "трансплантат против хозяина" и красную волчанку. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения других респираторных заболеваний, включая, но не ограничиваясь этим, заболевания, поражающие доли легкого, плевральную полость, бронхиолы, трахею, верхние дыхательные пути или нервы и участвующую в акте дыхания мускулатуру.
В некоторых воплощениях согласно данному изобретению предложены фармацевтические композиции для лечения таких расстройств, как гиперпролиферативное расстройство, включая, но не ограничиваясь этим, рак, такой как острый миелоидный лейкоз, рак вилочковой железы, головного мозга, легких, плоскоклеточный рак, рак кожи, глаз, ретинобластома, внутриглазная меланома, рак полости рта и ротоглотки, мочевого пузыря, желудочно-кишечного тракта, желудка, поджелудочной железы, мочевого пузыря, молочной железы, шейки матки, головы, шеи, почечной сферы, почек, печени, яичников, предстательной железы, толстой кишки, пищевода, яичка, гинекологической сферы, щитовидной железы, ЦНС (центральная нервная система), ПНС (периферическая нервная система), СПИД-ассоциированный (например, лимфома и саркома Капоши) или индуцируемый вирусами рак. В некоторых воплощениях указанная фармацевтическая композиция предназначена для лечения доброкачественного гиперпролиферативного расстройства, такого как доброкачественная гиперплазия кожи (например, псориаз), повторный стеноз или доброкачественное гиперпролиферативное расстройство предстательной железы (например, доброкачественная гипертрофия предстательной железы (ВРН)).
Также, согласно изобретению предложены композиции для лечения заболеваний печени (включая диабет), панкреатита или болезни почек (включая пролиферативный гломерулонефрит и индуцируемое диабетом почечное заболевание) или боли у млекопитающего.
Более того, согласно изобретению предложена композиция для предупреждения имплантации бластоцитов у млекопитающего.
Изобретение также относится к композиции для лечения заболевания, относящегося к васкулогенезу или ангиогенезу у млекопитающего, которое может проявляться в виде опухолевого ангиогенеза, хронического воспалительного заболевания, такого как ревматоидный артрит, воспалительного заболевания кишечника, атеросклероза, кожных заболеваний, таких как псориаз, экзема и склеродермия, диабета, диабетической ретинопатии, ретинопатии недоношенных, возрастной дегенерации желтого пятна, гемангиомы, глиомы, меланомы, саркомы Капоши и рака яичников, молочной железы, легких, поджелудочной железы, предстательной железы, толстой кишки и эпидермоидного рака.
Фармацевтические композиции, являющиеся объектом изобретения, обычно изготавливают содержащими терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента или его фармацевтически приемлемых соли, сложного эфира, пролекарства, сольвата, гидрата или производного. Там, где это желательно, фармацевтические композиции содержат фармацевтически приемлемую соль и/или ее координационный комплекс и один или более из фармацевтически приемлемых эксципиентов, носителей, включая инертные твердые разбавители и наполнители, разбавителей, включая стерильный водный раствор и различные органические растворители, веществ, увеличивающих проницаемость, солюбилизаторов и адъювантов.
Фармацевтические композиции, являющиеся объектом изобретения, могут быть введены сами по себе или в комбинации с одним или более чем одним другим агентом, который обычно вводят в форме фармацевтических композиций. Там, где это желательно, соединения по изобретению и другой(ие) агент(ы) могут быть смешаны в одном препарате или оба компонента могут быть приготовлены в виде отдельных препаратов для использования их в комбинации по отдельности или в одно и то же время.
В некоторых воплощениях концентрация одного или более соединений, предложенных в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, составляет менее 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1%, 0,09%, 0,08%, 0,07%, 0,06%, 0,05%, 0,04%, 0,03%, 0,02%, 0,01%, 0,009%, 0,008%, 0,007%, 0,006%, 0,005%, 0,004%, 0,003%, 0,002%, 0,001%, 0,0009%, 0,0008%, 0,0007%, 0,0006%, 0,0005%, 0,0004%, 0,0003%, 0,0002% или 0,0001% масс./масс., масс./об. или об./об.
В некоторых воплощениях концентрация одного или более соединений по настоящему изобретению составляет более 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19,75%, 19,50%, 19,25% 19%, 18,75%, 18,50%, 18,25% 18%, 17,75%, 17,50%, 17,25% 17%, 16,75%, 16,50%, 16,25% 16%, 15,75%, 15,50%, 15,25% 15%, 14,75%, 14,50%, 14,25% 14%, 13,75%, 13,50%, 13,25% 13%, 12,75%, 12,50%, 12,25% 12%, 11,75%, 11,50%, 11,25% 11%, 10,75%, 10,50%, 10,25% 10%, 9,75%, 9,50%, 9,25% 9%, 8,75%, 8,50%, 8,25% 8%, 7,75%, 7,50%, 7,25% 7%, 6,75%, 6,50%, 6,25% 6%, 5,75%, 5,50%, 5,25% 5%, 4,75%, 4,50%, 4,25%, 4%, 3,75%, 3,50%, 3,25%, 3%, 2,75%, 2,50%, 2,25%, 2%, 1,75%, 1,50%, 125%, 1%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1%, 0,09%, 0,08%, 0,07%, 0,06%, 0,05%, 0,04%, 0,03%, 0,02%, 0,01%, 0,009%, 0,008%, 0,007%, 0,006%, 0,005%, 0,004%, 0,003%, 0,002%, 0,001%, 0,0009%, 0,0008%, 0,0007%, 0,0006%, 0,0005%, 0,0004%, 0,0003%, 0,0002% или 0,0001% масс./масс., масс./об. или об./об.
В некоторых воплощениях концентрация одного или более соединений по настоящему изобретению находится в диапазоне от приблизительно 0,0001% до приблизительно 50%, от приблизительно 0,001% до приблизительно 40%, от приблизительно 0,01% до приблизительно 30%, от приблизительно 0,02% до приблизительно 29%, от приблизительно 0,03% до приблизительно 28%, от приблизительно 0,04% до приблизительно 27%, от приблизительно 0,05% до приблизительно 26%, от приблизительно 0,06% до приблизительно 25%, от приблизительно 0,07% до приблизительно 24%, от приблизительно 0,08% до приблизительно 23%, от приблизительно 0,09% до приблизительно 22%, от приблизительно 0,1% до приблизительно 21%, от приблизительно 0,2% до приблизительно 20%, от приблизительно 0,3% до приблизительно 19%, от приблизительно 0,4% до приблизительно 18%, от приблизительно 0,5% до приблизительно 17%, от приблизительно 0,6% до приблизительно 16%, от приблизительно 0,7% до приблизительно 15%, от приблизительно 0,8% до приблизительно 14%, от приблизительно 0,9% до приблизительно 12%, от приблизительно 1% до приблизительно 10% масс./масс., масс./об. или об./об. об./об.
В некоторых воплощениях концентрация одного или более соединений по настоящему изобретению находится в диапазоне от приблизительно 0,001% до приблизительно 10%, от приблизительно 0,01% до приблизительно 5%, от приблизительно 0,02% до приблизительно 4,5%, от приблизительно 0,03% до приблизительно 4%, от приблизительно 0,04% до приблизительно 3,5%, от приблизительно 0,05% до приблизительно 3%, от приблизительно 0,06% до приблизительно 2,5%, от приблизительно 0,07% до приблизительно 2%, от приблизительно 0,08% до приблизительно 1,5%, от приблизительно 0,09% до приблизительно 1%, от приблизительно 0,1% до приблизительно 0,9% масс./масс., масс./об, или об./об.
В некоторых воплощениях количество одного или более соединений по настоящему изобретению равно или меньше 10 г, 9,5 г, 9,0 г, 8,5 г, 8,0 г, 7,5 г, 7,0 г, 6,5 г, 6,0 г, 5,5 г, 5,0 г, 4,5 г, 4,0 г, 3,5 г, 3,0 г, 2,5 г, 2,0 г, 1,5 г, 1,0 г, 0,95 г, 0,9 г, 0,85 г, 0,8 г, 0,75 г, 0,7 г, 0,65 г, 0,6 г, 0,55 г, 0,5 г, 0,45 г, 0,4 г, 0,35 г, 0,3 г, 0,25 г, 0,2 г, 0,15 г, 0,1 г, 0,09 г, 0,08 г, 0,07 г, 0,06 г, 0,05 г, 0,04 г, 0,03 г, 0,02 г, 0,01 г, 0,009 г, 0,008 г, 0,007 г, 0,006 г, 0,005 г, 0,004 г, 0,003 г, 0,002 г, 0,001 г, 0,0009 г, 0,0008 г, 0,0007 г, 0,0006 г, 0,0005 г, 0,0004 г, 0,0003 г, 0,0002 г или 0,0001 г.
В некоторых воплощениях количество одного или более соединений по настоящему изобретению составляет более 0,0001 г, 0,0002 г, 0,0003 г, 0,0004 г, 0,0005 г, 0,0006 г, 0,0007 г, 0,0008 г, 0,0009 г, 0,001 г, 0,0015 г, 0,002 г, 0,0025 г, 0,003 г, 0,0035 г, 0,004 г, 0,0045 г, 0,005 г, 0,0055 г, 0,006 г, 0,0065 г, 0,007 г, 0,0075 г, 0,008 г, 0,0085 г, 0,009 г, 0,0095 г, 0,01 г, 0,015 г, 0,02 г, 0,025 г, 0,03 г, 0,035 г, 0,04 г, 0,045 г, 0,05 г, 0,055 г, 0,06 г, 0,065 г, 0,07 г, 0,075 г, 0,08 г, 0,085 г, 0,09 г, 0,095 г, 0,1 г, 0,15 г, 0,2 г, 0,25 г, 0,3 г, 0,35 г, 0,4 г, 0,45 г, 0,5 г, 0,55 г, 0,6 г, 0,65 г, 0,7 г, 0,75 г, 0,8 г, 0,85 г, 0,9 г, 0,95 г, 1 г, 1,5 г, 2 г, 2,5, 3 г, 3,5, 4 г, 4,5 г, 5 г, 5,5 г, 6 г, 6,5 г, 7 г, 7,5 г, 8 г, 8,5 г, 9 г, 9,5 г или 10 г.
В некоторых воплощениях количество одного или более соединений по настоящему изобретению находится в диапазоне 0,0001-10 г, 0,0005-9 г, 0,001-8 г, 0,005-7 г, 0,01-6 г, 0,05-5 г, 0,1-4 г, 0,5-4 г или 1-3 г.
Соединения по изобретению эффективны в широком диапазоне доз. Например, при лечении взрослого человека примерами дозировок, которые могут быть использованы, являются дозировки 0,01-1000 мг; 0,5-100 мг; 1-50 мг в сутки и 5-40 мг в сутки. Типичная дозировка составляет 10-30 мг в сутки. Точная дозировка будет зависеть от способа введения, формы, в которой вводят соединение, субъекта, подвергаемого лечению, массы тела субъекта, подвергаемого лечению, и предпочтения и опыта лечащего врача.
Ниже описаны неограничивающие типичные фармацевтические композиции и способы их изготовления.
Фармацевтические композиции для перорального введения. В некоторых воплощениях согласно данному изобретению предложена фармацевтическая композиция для перорального введения, содержащая соединение по настоящему изобретению и фармацевтический эксципиент, подходящий для перорального введения.
В некоторых воплощениях согласно данному изобретению предложены твердая фармацевтическая композиция для перорального введения, содержащая: (1) эффективное количество соединения по настоящему изобретению; возможно (2) эффективное количество второго агента; и (3) фармацевтический эксципиент, подходящий для перорального введения. В некоторых воплощениях композиция дополнительно содержит: (4) эффективное количество третьего агента.
В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция может представлять собой жидкую фармацевтическую композицию, подходящую для перорального приема. Фармацевтические композиции по изобретению, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде дискретных лекарственных форм, таких как капсулы, саше или таблетки либо жидкости или аэрозольные спреи, каждая из которых содержит предварительно определенное количество активного ингредиента в виде порошка или в гранулах, растворе или суспензии в водной или безводной жидкости, эмульсии типа масло-в-воде или жидкой эмульсии типа вода-в-масле. Такие лекарственные формы могут быть изготовлены любым из способов, известных в фармацевтике, тем не менее, все способы включают стадию приведения активного ингредиента в ассоциацию с носителем, который составляет один или более чем один необходимый ингредиент. В общем случае композиции изготавливают путем непрерывного и равномерного смешивания активного ингредиента с жидкими носителями или тонкоизмельченными твердыми носителями или ими обоими и затем, если необходимо, придания продукту формы желаемого вида. Например, таблетка может быть изготовлена путем прессования или формования, возможно с одним или более чем одним вспомогательным ингредиентом. Прессованные таблетки могут быть изготовлены путем прессования в подходящей машине активного ингредиента в свободно текучей форме, такой как порошок или гранулы, возможно смешанного с таким эксципиентом, как связующее вещество, смазывающее вещество, инертный разбавитель и/или поверхностно-активное вещество или диспергирующий агент, но не ограничиваясь этим. Формованные таблетки могут быть изготовлены путем формования в подходящей машине смеси порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем.
Более того, данное изобретение охватывает безводные фармацевтические композиции и лекарственные формы, содержащие активный ингредиент, поскольку вода может способствовать разрушению некоторых соединений. Например, в области фармацевтики вода может быть добавлена (например, 5%) как средство для моделирования длительного хранения с целью определения таких характеристик, как срок годности или стабильность композиций во времени. Безводные фармацевтические композиции и лекарственные формы по изобретению могут быть изготовлены с использованием безводных ингредиентов или ингредиентов с низким содержанием влаги и условий с низким содержанием влаги или низкой влажностью. Фармацевтические композиции и лекарственные формы по изобретению, которые содержат лактозу, могут быть изготовлены безводными, если в процессе изготовления, упаковки и/или хранения предполагается существенный контакт с влажностью и/или влагой. Безводную фармацевтическую композицию можно изготавливать и хранить таким образом, чтобы сохранить ее безводное состояние. Соответственно, безводные композиции могут быть упакованы с использованием материалов, известных тем, что они защищают от попадания воды, таких которые могут быть включены в подходящие наборы, определенные в фармакологическом справочнике. Примеры подходящей упаковки включают, но не ограничиваются этим, фольгу, пластик или тому подобное для герметичного укупоривания, одноразовые контейнеры, блистерные упаковки и контурные упаковки ленточного типа.
Активный ингредиент может быть объединен в однородной смеси с фармацевтическим носителем в соответствии с традиционными методиками приготовления фармацевтических смесей. Носитель может принимать большое разнообразие форм в зависимости от формы препарата, желательной для введения. При изготовлении композиций лекарственной формы для перорального введения в качестве носителей могут быть использованы любые обычные фармацевтические среды, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты, корригенты, консерванты, окрашивающие вещества и тому подобное в случае пероральных жидких препаратов (таких как суспензии, растворы и эликсиры) или аэрозолей; или такие носители, как крахмалы, сахара, микрокристаллическая целлюлоза, разбавители, гранулирующие агенты, смазывающие вещества, связующие вещества и разрыхлители, могут быть использованы в случае пероральных твердых препаратов, в некоторых воплощениях без использования лактозы. Например, подходящие носители включают порошки, капсулы и таблетки, содержащие твердые пероральные препараты. Если необходимо, на таблетки может быть нанесено покрытие с использованием стандартных водных или безводных методик.
Связующие вещества, подходящие для использования в фармацевтических композициях и лекарственных формах, включают, но не ограничиваются этим, кукурузный крахмал, картофельный крахмал или другие крахмалы, желатин, природные и синтетические смолы, такие как аравийская камедь, альгинат натрия, альгиновая кислота, другие альгинаты, порошкообразный трагакант, гуаровая камедь, целлюлоза и ее производные (например, этилцеллюлоза, ацетат целлюлозы, кальциевая соль карбоксиметилцеллюлозы, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы), поливинилпирролидон (PVP), метил целлюлоза, прежелатинизированный крахмал, гидроксипропилметил-целлюлоза, микрокристаллическая целлюлоза и их смеси.
Примеры подходящих наполнителей для использования в фармацевтических композициях и лекарственных формах, изложенных в данной заявке, включают, но не ограничиваются этим, тальк, карбонат кальция (например, в гранулах или порошке), микрокристаллическую целлюлозу, порошкообразную целлюлозу, декстраны, каолин, маннит, кремниевую кислоту, сорбит, крахмал, прежелатинизированный крахмал и их смеси.
В композициях по изобретению могут быть использованы разрыхлители, чтобы приготовить таблетки, которые распадаются при помещении их в водное окружение. Если разрыхлителя будет слишком много, при изготовлении могут быть получены таблетки, которые могут распадаться в бутылке. Слишком малое количество может оказаться недостаточным для того, чтобы происходило разрушение, и таким образом может изменять скорость и степень высвобождения активного ингредиента(ов) из лекарственной формы. Таким образом, для образования лекарственных форм соединений, изложенных в данной заявке, может быть использовано достаточное количество разрыхлителя, то есть не слишком маленькое и не слишком большое, чтобы не оказывать пагубного воздействия на высвобождение активного ингредиента(ов). Количество используемого разрыхлителя может варьировать в зависимости от типа композиции и способа введения и может быть легко оценено специалистом обычной квалификации в данной области техники. В фармацевтической композиции может быть использовано от примерно 0,5 до примерно 15 массовых процентов разрыхлителя или от примерно 1 до примерно 5 массовых процентов разрыхлителя. Разрыхлители, которые можно использовать для образования фармацевтических композиций и лекарственных форм по изобретению, включают, но не ограничиваются этим, агар-агар, альгиновую кислоту, карбонат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, натриевую соль кроскармелозы, кросповидон, полакрилин калия, натрия крахмала гликолят, крахмал из картофеля или тапиоки, другие крахмалы, прежелатинизированный крахмал, другие крахмалы, глины, другие альгины, другие целлюлозы, смолы или их смеси.
Смазывающие вещества, которые могут быть использованы для образования фармацевтических композиций и лекарственных форм по изобретению, включают, но не ограничиваются этим, стеарат кальция, стеарат магния, минеральное масло, легкое минеральное масло, глицерин, сорбит, маннит, полиэтиленгликоль (ПЭГ), другие гликоли, стеариновую кислоту, лаурилсульфат натрия, тальк, гидрогенизированное растительное масло (например, арахисовое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло), стеарат цинка, этилолеат, этиллаурат, агар или их смеси. Дополнительные смазывающие вещества включают, например, силикагель силоид, коагулированный аэрозоль синтетического диоксида кремния или их смеси. Смазывающее вещество возможно может быть добавлено в количестве менее чем примерно 1 массовый процент от фармацевтической композиции.
Если желательны водные суспензии и/или эликсиры для перорального введения, то основной активный ингредиент для них может быть объединен с различными подсластителями или корригентами, окрашивающим веществом или красителями и, если так будет необходимо, эмульгирующими и/или суспендирующими агентами, вместе с такими разбавителями, как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин и их различные комбинации.
Таблетки могут быть без покрытия или с покрытием, нанесенным на них посредством известных методик, для замедления распадаемости и всасывания в желудочно-кишечном тракте и тем самым для обеспечения непрерывного действия в течение более продолжительного периода времени. Например, можно использовать такое обеспечивающее задержку по времени вещество, как глицерил-моностеарат или глицерил-дистеарат. Композиции для перорального применения также могут быть представлены в виде твердых желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, например, карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, где активный ингредиент смешан с водной или масляной средой, например, арахисовым маслом, вазелиновым маслом или оливковым маслом.
Поверхностно-активные вещества, которые могут быть использованы для образования фармацевтических композиций и лекарственных форм по изобретению, включают, но не ограничиваются этим, гидрофильные поверхностно-активные вещества, липофильные поверхностно-активные вещества и их смеси. То есть, может быть использована смесь гидрофильных поверхностно-активных веществ, может быть использована смесь липофильных поверхностно-активных веществ или может быть использована смесь по меньшей мере одного гидрофильного поверхностно-активного вещества и по меньшей мере одного липофильного поверхностно-активного вещества.
Подходящее гидрофильное поверхностно-активное вещество обычно может иметь величину HLB по меньшей мере 10, тогда как подходящие липофильные поверхностно-активные вещества обычно могут иметь величину HLB, равную или менее чем примерно 10. Эмпирическим параметром, используемым для характристики относительной гидрофильности и гидрофобности неионных амфифильных соединений, является гидрофильно-липофильный баланс (величина "HLB"). Поверхностно-активные вещества с более низкими величинами HLB являются более липофильными или гидрофобными и имеют более высокую растворимость в маслах, тогда как поверхностно-активные вещества с более высокими величинами HLB являются более гидрофильными и имеют более высокую растворимость в водных растворах. В общем случае считается, что гидрофильными поверхностно-активными веществами являются такие соединения, которые имеют величину HLB выше примерно 10, а также анионные, катионные или цвиттерионные соединения, для которых шкала HLB обычно не применяется. Аналогично, липофильными (то есть, гидрофобными) поверхностно-активными веществами являются соединения, имеющие величину HLB, равную или меньшую, чем примерно 10. Однако, величина HLB поверхностно-активного вещества представляет собой всего лишь приближенный ориентир, обычно используемый при изготовлении фармацевтических и косметических эмульсий в промышленности.
Гидрофильные поверхностно-активные вещества могут быть либо ионными, либо неионными. Подходящие ионные поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваются этим, соли алкиламмония; соли фусидовой кислоты; производные жирных кислот и аминокислот, олигопептидов и полипептидов; производные глицеридов и аминокислот, олигопептидов и полипептидов; лецитины и гидрогенизированные лецитины; лизолецитины и гидрогенизированные лизолецитины; фосфолипиды и их производные; лизофосфолипиды и их производные; соли сложных эфиров жирных кислот и карнитина; соли алкилсульфатов; соли жирных кислот; докузат натрия; ациллактилаты; моно- и диацетилированные сложные эфиры винной кислоты и моно- и диглицеридов; сукцинилированные моно- и диглицериды; сложные эфиры лимонной кислоты и моно- и диглицеридов; и их смеси.
Среди вышеупомянутой группы ионные поверхностно-активные вещества включают в качестве примера: лецитины, лизолецитин, фосфолипиды, лизофосфолипиды и их производные; соли сложных эфиров жирных кислот и карнитина; соли алкилсульфатов; соли жирных кислот; докузат натрия; ациллактилаты; моно- и диацетилированные сложные эфиры винной кислоты и моно- и диглицеридов; сукцинилированные моно- и диглицериды; сложные эфиры лимонной кислоты и моно- и диглицеридов; и их смеси.
Ионные поверхностно-активные вещества могут представлять собой ионизированные формы лецитина, лизолецитина, фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилглицерина, фосфатидной кислоты, фосфатидилсерина, лизофосфатидилхолина, лизофосфатидилэтаноламина, лизофосфатидилглицерина, лизофосфатидной кислоты, лизофосфатидил-серина, ПЭГ-фосфатидилэтаноламина, PVP-фосфатидилэтаноламина, лактиловые сложные эфиры жирных кислот, стеароил-2-лактилат, стеароиллактилат, сукцинилированные моноглицериды, моно/диацетилированные сложные эфиры винной кислоты и моно/диглицеридов, сложные эфиры лимонной кислоты и моно/диглицеридов, холилсаркозин, капроат, каприлат, капрат, лаурат, миристат, пальмитат, олеат, рицинолеат, линолеат, линоленат, стеарат, лаурилсульфат, teracecyl сульфат, докузат, лауроил-карнитины, пальмитоил-карнитины, миристоил-карнитины и их соли и смеси.
Гидрофильные неионные поверхностно-активные вещества могут включать, но не ограничиваются этим, алкилглюкозиды; алкилмальтозиды; алкилтиоглюкозиды; лаурил-макроголглицериды; алкиловые простые эфиры полиоксиалкилена, такие как алкиловые простые эфиры полиэтиленгликолей; алкилфенолы полиоксиалкилена, такие как алкилфенолы полиэтиленгликолей; сложные эфиры жирных кислот и алкилфенолов полиоксиалкилена, такие как моноэфиры жирных кислот и полиэтиленгликоля и диэфиры жирных кислот и полиэтиленгликоля; сложные эфиры жирных кислот и полиэтиленгликоль-глицерина; сложные эфиры жирных кислот и полиглицерина; сложные эфиры жирных кислот и полиоксиалкилен-сорбитана, такие как сложные эфиры жирных кислот и полиэтиленгликоль-сорбитана; гидрофильные продукты переэтерификации полиола по меньшей мере с одним членом группы, состоящей из глицеридов, растительных масел, гидрогенизированных растительных масел, жирных кислот и стеринов; полиоксиэтилен-стерины, их производные и аналоги; полиоксиэтилированные витамины и их производные; блоксополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена и их смеси; сложные эфиры жирных кислот и полиэтиленгликоль-сорбитана и гидрофильные продукты переэтерификации пол иола по меньшей мере с одним членом группы, состоящей из триглицеридов, растительных масел и гидрогенизированных растительных масел. Полиол может представлять собой глицерин, этиленгликоль, полиэтиленгликоль, сорбит, пропиленгликоль, пентаэритрит или сахарид.
Другие гидрофильные неионные поверхностно-активные вещества включают, без ограничения, ПЭГ-10 лаурат, ПЭГ-12 лаурат, ПЭГ-20 лаурат, ПЭГ-32 лаурат, ПЭГ-32 дилаурат, ПЭГ-12 олеат, ПЭГ-15 олеат, ПЭГ-20 олеат, ПЭГ-20 диолеат, ПЭГ-32 олеат, ПЭГ-200 олеат, ПЭГ-400 олеат, ПЭГ-15 стеарат, ПЭГ-32 дистеарат, ПЭГ-40 стеарат, ПЭГ-100 стеарат, ПЭГ-20 дилаурат, ПЭГ-25 глицерилтриолеат, ПЭГ-32 диолеат, ПЭГ-20 глицериллаурат, ПЭГ-30 глицериллаурат, ПЭГ-20 глицерилстеарат, ПЭГ-20 глицерилолеат, ПЭГ-30 глицерилолеат, ПЭГ-30 глицериллаурат, ПЭГ-40 глицериллаурат, ПЭГ-40 пальмоядровое масло, ПЭГ-50 гидрогенизированное касторовое масло, ПЭГ-40 касторовое масло, ПЭГ-35 касторовое масло, ПЭГ-60 касторовое масло, ПЭГ-40 гидрогенизированное касторовое масло, ПЭГ-60 гидрогенизированное касторовое масло, ПЭГ-60 кукурузное масло, ПЭГ-6 капрат/каприлат-глицериды, ПЭГ-8 капрат/каприлат-глицериды, полиглицерил-10-лаурат, ПЭГ-30 холестерин, ПЭГ-25 фитостерин, ПЭГ-30 соевый стерин, ПЭГ-20 триолеат, ПЭГ-40 сорбитан олеат, ПЭГ-80 сорбитан лаурат, полисорбат 20, полисорбат 80, РОЕ-9 простой лауриловый эфир, РОЕ-23 простой лауриловый эфир, РОЕ-10 простой олеиловый эфир, РОЕ-20 простой олеиловый эфир, РОЕ-20 простой стеариловый эфир, токоферил-ПЭГ-100-сукцинат, ПЭГ-24-холестерин, полиглицерил-10-олеат, Твин 40, Твин 60, моностеарат сахарозы, монолаурат сахарозы, монопальмитат сахарозы, серию ПЭГ 10-100 нонилфенолов, серию ПЭГ 15-100 октилфенолов и полоксамеры.
Подходящие липофильные поверхностно-активные вещества включают, только в качестве примера: жирные спирты; сложные эфиры жирных кислот и глицерина; ацетилированные сложные эфиры жирных кислот и глицерина; сложные эфиры жирных кислот и низших спиртов; сложные эфиры жирных кислот и пропиленгликоля; сложные эфиры жирных кислот и сорбитана; сложные эфиры жирных кислот и полиэтиленгликоль-сорбитана; стерины и производные стеринов; полиоксиэтилированные стерины и производные стеринов; алкиловые простые эфиры полиэтиленгликолей; сложные эфиры сахаров; простые эфиры сахаров; производные молочной кислоты и моно- и диглицеридов; гидрофобные продукты переэтерификации полиола по меньшей мере с одним членом группы, состоящей из глицеридов, растительных масел, гидрогенизированных растительных масел, жирных кислот и стеринов; растворимые в масле витамины/производные витаминов; и их смеси. Среди этой группы предпочтительные липофильные поверхностно-активные вещества включают сложные эфиры жирных кислот и глицерина, сложные эфиры жирных кислот и пропиленгликоля и их смеси, или ими являются гидрофобные продукты переэтерификации полиола по меньшей мере с одним членом группы, состоящей из растительных масел, гидрогенизированных растительных масел и триглицеридов.
В одном воплощении композиция может включать солюбилизатор для обеспечения хорошей солюбилизации и/или растворения соединения по настоящему изобретению и для сведения к минимуму осаждения соединения по настоящему изобретению. Это может быть особенно важным для композиций, предназначенных для неперорального применения, например, композиций для инъекций. Солюбилизатор также может быть добавлен для увеличения растворимости гидрофильного лекарственного средства и/или других компонентов, таких как поверхностно-активные вещества, или для поддержания композиции в виде стабильного или гомогенного раствора или дисперсии.
Примеры подходящих солюбилизаторов включают, но не ограничиваются этим, следующее далее: спирты и полиолы, такие как этанол, изопропанол, бутанол, бензиловый спирт, этиленгликоль, пропиленгликоль, бутандиолы и их изомеры, глицерин, пентаэритрит, сорбит, маннит, транскутол, диметил-изосорбид, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, поливиниловый спирт, гидроксипропилметилцеллюлозу и другие производные целлюлозы, циклодекстрины и производные циклодекстринов; простые эфиры полиэтиленгликолей, имеющих среднюю молекулярную массу от примерно 200 до примерно 6000, такие как простой эфир ПЭГ и тетрагидрофурфурилового спирта (гликофурол) или метокси-ПЭГ; амиды и другие азот-содержащие соединения, такие как 2-пирролидон, 2-пиперидон, эпсилон-капролактам, N-алкилпирролидон, N-гидроксиалкилпирролидон, N-алкилпиперидон, N-алкилкапролактам, диметилацетамид и поливинилпирролидон; сложные эфиры, такие как этилпропионат, трибутилцитрат, ацетилтриэтилцитрат, ацетилтрибутилцитрат, триэтилцитрат, этилолеат, этилкаприлат, этилбутират, триацетин, пропиленгликоля моноацетат, пропиленгликоля диацетат, ε-капролактон и их изомеры, δ-валеролактон и их изомеры, β-бутиролактон и их изомеры; и другие солюбилизаторы, известные в данной области техники, такие как диметилацетамид, диметилизосорбид, N-метилпирролидоны, монооктаноин, моноэтиловый простой эфир диэтиленгликоля и вода.
Кроме того, могут быть использованы смеси солюбилизаторов. Примеры включают, но не ограничиваются этим, триацетин, триэтилцитрат, этилолеат, этилкаприлат, диметилацетамид, N-метилпирролидон, N-гидроксиэтил-пирролидон, поливинилпирролидон, гидроксипропилметил-целлюлозу, гидроксипропил-циклодекстрины, этанол, полиэтиленгликоль 200-100, гликофурол, транскутол, пропиленгликоль и диметилизосорбид. Особенно предпочтительные солюбилизаторы включают сорбит, глицерин, триацетин, этиловый спирт, ПЭГ-400, гликофурол и пропиленгликоль.
Количество солюбилизатора, которое может быть включено, особенно не ограничивают. Количество заданного солюбилизатора может быть ограничено биологически приемлемым количеством, которое может быть легко определено специалистом в данной области техники. В некоторых случаях преимуществом может быть включение количества солюбилизаторов, намного превышающего биологически приемлемые количества, например с целью максимального увеличения концентрации лекарственного средства, при этом избыток солюбилизатора удаляют перед введением композиции пациенту, используя традиционные методики, такие как дистилляция или упаривание. Так, если он присутствует, солюбилизатор может находиться в массовом отношении, составляющем 10%, 25%, 50%, 100% или вплоть до примерно 200% по массе включительно из расчета на объединенную массу лекарственного средства и других эксципиентов. Если необходимо, также можно использовать очень небольшие количества солюбилизатора, такие как 5%, 2%, 1% или даже меньше. Обычно, солюбилизатор может присутствовать в количестве от примерно 1% до примерно 100%, в более типичном случае от примерно 5% до примерно 25% по массе.
Кроме того, композиция может включать одно или более чем одно из фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ и эксципиентов. Такие вспомогательные вещества и эксципиенты включают, без ограничения, вещества, уменьшающие липкость, противовспенивающие вещества, буферные агенты, полимеры, антиоксиданты, консерванты, хелатирующие агенты, вещества, изменяющие вязкость, вещества, изменяющие тоничность, корригенты, красители, отдушки, заглушающие агенты, суспендирующие агенты, связующие вещества, наполнители, смягчители, смазывающие вещества и их смеси.
В дополнение к этому, в композицию могут быть включены кислота или основание для облегчения технологии изготовления, для усиления стабильности или по другим причинам. Примеры фармацевтически приемлемых оснований включают аминокислоты, сложные эфиры аминокислот, гидроксид аммония, гидроксид калия, гидроксид натрия, гидрокарбонат натрия, гидроксид алюминия, карбонат кальция, гидроксид магния, алюмосиликат магния, синтетический алюмосиликат, синтетический гидрокальцит, гидроксид алюминия магния, диизопропилэтиламин, этаноламин, этилендиамин, триэтаноламин, триэтиламин, триизопропаноламин, триметиламин, трис(гидроксиметил)аминометан (ТРИС) и тому подобное. Также подходят основания, которые являются солями фармацевтически приемлемой кислоты, такой как уксусная кислота, акриловая кислота, адипиновая кислота, альгиновая кислота, алкансульфоновая кислота, аминокислоты, аскорбиновая кислота, бензойная кислота, борная кислота, масляная кислота, карбоновая кислота, лимонная кислота, жирные кислоты, муравьиная кислота, фумаровая кислота, глюконовая кислота, гидрохинонсульфоновая кислота, изоаскорбиновая кислота, молочная кислота, малеиновая кислота, щавелевая кислота, лара-бромфенилсульфоновая кислота, пропионовая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота, стеариновая кислота, янтарная кислота, дубильная кислота, винная кислота, тиогликолевая кислота, толуолсульфоновая кислота, мочевая кислота и тому подобное. Соли полипротонных кислот, такие как фосфат натрия, гидрофосфат динатрия и дигидрофосфат натрия, также могут быть использованы. Если основанием является соль, то катион может быть любым удобным и фармацевтически приемлемым катионом, таким как аммоний, катионы щелочных металлов, щелочноземельных металлов и тому подобное. Пример может включать, но не ограничиваться этим, натрий, калий, литий, магний, кальций и аммоний.
Подходящими кислотами являются фармацевтически приемлемые органические или неорганические кислоты. Примеры подходящих неорганических кислот включают соляную кислоту, бромистоводородную кислота, иодистоводородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, борную кислоту, фосфорную кислоту и тому подобное. Примеры подходящих органических кислот включают уксусную кислоту, акриловую кислоту, адипиновую кислоту, альгиновую кислоту, алкансульфоновые кислоты, аминокислоты, аскорбиновую кислоту, бензойную кислоту, борную кислоту, масляную кислоту, карбоновую кислоту, лимонную кислоту, жирные кислоты, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, глюконовую кислоту, гидрохинонсульфоновую кислоту, изоаскорбиновую кислоту, молочную кислоту, малеиновую кислоту, метансульфоновую кислоту, щавелевую кислоту, пара-бромфенилсульфоновую кислоту, пропионовую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, салициловую кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту, дубильную кислоту, винную кислоту, тиогликолевую кислоту, толуолсульфоновую кислоту, мочевую кислоту и тому подобное.
Фармацевтические композиции для инъекций. В некоторых воплощениях согласно данному изобретению предложена фармацевтическая композиция для инъекций, содержащая соединение по настоящему изобретению и фармацевтический эксципиент, подходящий для инъекций. Компоненты и количества агентов в таких композициях такие, как они описаны в данной заявке.
Формы, в которые могут быть включены новые композиции по настоящему изобретению для их введения путем инъекции, включают водные или масляные суспензии или эмульсии с кунжутным маслом, кукурузным маслом, хлопковым маслом или арахисовым маслом, а также эликсиры, маннит, декстрозу или стерильный водный раствор и подобные фармацевтические разбавители.
Водные растворы в физиологическом растворе также традиционно используются для инъекций. Также могут быть использованы этанол, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и тому подобное (и их подходящие смеси), производные циклодекстринов и растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путем использования вещества для покрытия, такого как лецитин, для поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и путем использования поверхностно-активных веществ. Предотвращение действия микроорганизмов может быть осуществлено различными антибактериальными и противогрибковыми агентами, например, парабенами, хлорбутанолом, фенолом, сорбиновой кислотой, тимеросалом и тому подобным.
Стерильные инъекционные растворы готовят путем введения соединения по настоящему изобретению в необходимом количестве в соответствующий растворитель вместе с различными другими ингредиентами, которые перечислены выше, как будет необходимо, с последующей стерилизацией фильтрованием. Обычно дисперсии готовят путем введения различных стерильных активных ингредиентов в стерильный разбавитель, который содержит основную диспергирующую среду и необходимые другие ингредиенты из тех, которые перечислены выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных инъекционных растворов некоторыми желаемыми способами изготовления являются методики вакуумной сушки и лиофилизационной сушки, которые позволяют получить порошок активного ингредиента плюс любого дополнительного желаемого ингредиента из раствора, подвергнутого предварительной стерилизации фильтрованием.
Фармацевтические композиции для местной (например, трансдермальной) доставки. В некоторых воплощениях согласно данному изобретению предложена фармацевтическая композиция для трансдермальной доставки, содержащая соединение по настоящему изобретению и фармацевтический эксципиент, подходящий для трансдермальной доставки.
Композиции по настоящему изобретению могут быть изготовлены в виде препаратов в твердой, полутвердой или жидкой формах, подходящих для локального или местного введения, таких как гели, водорастворимые желе, кремы, лосьоны, суспензии, пенки, порошки, взвеси, мази, растворы, масла, пасты, суппозитории, спреи, эмульсии, солевые растворы, растворы на основе диметилсульфоксида (DMSO). Как правило, использование носителей, имеющих более высокие значения плотности, позволяет получить область с пролонгированным действием активных ингредиентов. Напротив, композиция в растворе может обеспечивать более быстрое действие активного ингредиента на выбранную область.
Фармацевтические композиции также могут содержать подходящие носители или эксципиенты в твердой или гелеобразной фазе, представляющие собой соединения, которые позволяют увеличить проникновение или способствуют доставке молекул терапевтических средств через определяемый роговым слоем кожи барьер проницаемости. Существует много таких усиливающих проникновение молекул, известных специалистам в области композиций для местного применения. Примеры таких носителей и эксципиентов включают, но не ограничиваются этим, увлажнители (например, мочевину), гликоли (например, пропиленгликоль), спирты (например, этанол), жирные кислоты (например, олеиновую кислоту), поверхностно-активные вещества (например, изопропилмиристат и лаурилсульфат натрия), пирролидоны, глицеринмонолаурат, сульфоксиды, терпены (например, ментол), амины, амиды, алканы, алканолы, воду, карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара, крахмалы, производные целлюлозы, желатин и полимеры, такие как полиэтиленгликоли.
В другой типичной композиции, предназначенной для применения в способах по настоящему изобретению, используются устройства для трансдермальной доставки ("пластыри"). Такие трансдермальные пластыри могут быть использованы для обеспечения непрерывной или прерываемой инфузии соединения по настоящему изобретению в регулируемых количествах, либо в присутствии, либо в отсутствие другого агента.
Конструкция и применение трансдермальных пластырей для доставки фармацевтических агентов хорошо известны в данной области техники. См., например, патенты США №№5023252, 4992445 и 5001139. Такие пластыри могут быть сконструированы для непрерывной, пульсирующей доставки или доставки по необходимости фармацевтических агентов.
Фармацевтические композиции для ингаляции. Композиции для ингаляции или инсуффляции включают растворы и суспензии в фармацевтически приемлемых, водных или органических растворителях или их смесях и порошках. Жидкие или твердые композиции могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты, которые описаны выше. Предпочтительно, композиции вводят пероральным или назальным способом через дыхательные пути для оказания местного или системного эффекта. Композиции предпочтительно в фармацевтически приемлемых растворителях можно распылять, используя инертные газы. Распыляемые растворы можно вдыхать непосредственно из распыляющего устройства или распыляющее устройство может быть присоединено к респиратору, или с помощью дыхательной установки, работающей под перемежающимся положительном давлении. Композиции в виде раствора, суспензии или порошка могут быть введены, предпочтительно перорально или назально, из устройств, с помощью которых композицию доставляют надлежащим способом.
Другие фармацевтические композиции. Фармацевтические композиции также могут быть изготовлены из композиций, изложенных в данной заявке, и одного или более чем одного фармацевтически приемлемого эксципиента, подходящего для сублингвального, трансбуккального, ректального, внутрикостного, внутриглазного, интраназального, эпидурального или интраспинального введения. Изготовление таких фармацевтических композиций хорошо известно в данной области техники. См., например, Anderson, Philip О.; Knoben, James Е.; Troutman, William G, eds., Handbook of Clinical Drug Data, десятое издание, McGraw-Hill, 2002; Pratt and Taylor, eds., Principles of Drug Action, третье издание, Churchill Livingston, New York, 1990; Katzung, ed., Basic and Clinical Pharmacology, девятое издание, McGraw Hill, 20037ybg; Goodman and Gilman, eds., The Pharmacological Basis of Therapeutics, десятое издание, McGraw Hill, 2001; Remingtons Pharmaceutical Sciences, 20-e издание, Lippincott Williams & Wilkins., 2000; Martindale, The Extra Pharmacopoeia, тридцать второе издание (The Pharmaceutical Press, London, 1999); все они включены в данное описание во всей своей полноте посредством ссылки.
Введение соединений или фармацевтической композиции по настоящему изобретению может быть осуществлено любым способом, который обеспечивает доставку соединений к месту действия. Эти способы включают пероральные способы, интрадуоденальные способы, парентеральную инъекцию (включая внутривенную, внутриартериальную, подкожную, внутримышечную, интраваскулярную, внутрибрюшинную или инфузию), местное (например, трансдермальные применения), ректальное введение, посредством локальной доставки с использованием катетера или стента или посредством ингаляции. Соединения также можно вводить внутрь жировой ткани или интратекально.
Количество вводимого соединения будет зависеть от подвергаемого лечению млекопитающего, тяжести расстройства или состояния, скорости введения, фармакокинетики соединения и выбора лечащего врача. Тем не менее, эффективная дозировка находится в диапазоне от примерно 0,001 до примерно 100 мг на кг массы тела в сутки, предпочтительно от примерно 1 до примерно 35 мг/кг/сутки в разовой или разделенных дозах. Для человека массой 70 кг это количество будет составлять от примерно 0,05 до 7 г/сутки, предпочтительно от примерно 0,05 до примерно 2,5 г/сутки. В некоторых случаях более адекватными могут оказаться уровни дозировок меньше нижнего предела вышеуказанного диапазона, тогда как в других случаях могут быть использованы существенно более высокие дозы, что не вызовет никакого опасного побочного эффекта, например, путем разделения таких больших доз на несколько небольших доз для введения в течение суток.
В некоторых воплощениях соединение по изобретению вводят в разовой дозе. Обычно, такое введение будет осуществлено путем инъекции, например, внутривенной инъекции, с целью быстрого введения агента. Тем не менее, могут быть использованы другие способы, которые будут целесообразны. Разовую дозу соединения по изобретению также можно применять для лечения острого состояния.
В некоторых воплощениях соединение по изобретению вводят в виде многократных доз. Введение может быть выполнено примерно один раз, два раза, три раза, четыре раза, пять раз, шесть раз или более шести раз в сутки. Введение может быть выполнено примерно один раз месяц, один раз каждые две недели, один раз в неделю или один раз в каждые из последующих суток. В другом воплощении соединение по изобретению и другой агент вводят вместе от примерно одного раза в сутки до примерно 6 раз в сутки. В другом воплощении введение соединения по изобретению и агента продолжают выполнять в течение менее чем примерно 7 суток. В еще одном другом воплощении введение продолжают выполнять в течение более чем примерно 6, 10, 14, 28 суток, двух месяцев, шести месяцев или одного года. В некоторых случаях осуществляют непрерывное введение и поддерживают его так долго, как это необходимо.
Введение агентов по изобретению может продолжаться так долго, как это необходимо. В некоторых воплощениях агент по изобретению вводят в течение более 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14 или 28 суток. В некоторых воплощениях агент по изобретению вводят в течение менее 28, 14, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 суток. В некоторых воплощениях агент по изобретению вводят постоянно, например, для лечения хронических эффектов.
Эффективное количество соединения по изобретению может быть введено или в разовой дозе, или в виде множественных доз любым из приемлемых способов введения агентов, обладающих сходным применением, включая ректальный, трансбуккальный, интраназальный и трансдермальный способы, путем внутриартериальной инъекции, внутривенно, внутрибрюшинно, парентерально, внутримышечно, подкожно, перорально, местно или в виде средства для ингаляции.
Композиции по изобретению также могут быть доставлены с помощью устройства с пропиткой или покрытием, такого как стент, например, или вводимый в артерию полимерный материал цилиндрической формы. Такой способ введения может помочь, например, в предупреждении или уменьшении рестеноза после таких процедур, как баллонная ангиопластика. Без связи с теорией полагают, что соединения по изобретению могут замедлять или ингибировать миграцию и пролиферацию гладкомышечных клеток в стенке артерии, которые вносят вклад в рестеноз. Соединение по изобретению может быть введено, например, путем локальной доставки из страт стента, из трансплантата стента, из трансплантатов или из покрытия или оболочки стента. В некоторых воплощениях соединение по изобретению смешивают с матрицей. Такая матрица может представлять собой полимерную матрицу и может служить для связывания соединения со стентом. Полимерные матрицы, подходящие для такого использования, включают, например, сложные полиэфиры или сополимеры сложных полиэфиров на основе лактона, такие как полилактид, поликапролактонгликолид, сложные полиортоэфиры, полиангидриды, полиаминокислоты, полисахариды, полифосфазены, сополимеры поли-[(простой эфир)-(сложный эфир)] (например PEO-PLLA (сополимер на основе полиэтиленоксида и полимолочной кислоты)); полидиметилсилоксан, поли(этилен-винилацетат), полимеры или сополимеры на основе акрилата (например полигидроксиэтил-метилметакрилат, поливинил-пирролидинон), фторированные полимеры, такие как политетрафторэтилен и сложные эфиры целлюлозы. Подходящие матрицы могут быть неразлагаемыми или могут со временем разлагаться, высвобождая соединение или соединения. Соединения по изобретению могут быть нанесены на поверхность стента различными способами, такими как нанесение покрытия методом погружения/центрифугирования, нанесение покрытия методом распыления, нанесение покрытия методом погружения и/или нанесение покрытия с помощью щеточного устройства (brush-coating). Соединение может быть нанесено в расворителе, и растворитель может быть оставлен для выпаривания, в результате чего образуется слой соединения на стенте. Альтернативно, соединение может быть локализовано в корпусе стента или трансплантата, например в микроканалах или микропорах. После имплантации соединение диффундирует из корпуса стента для контакта со стенкой артерии. Такие стенты могут быть изготовлены путем погружения стента, изготавливаемого с тем, чтобы он содержал такие микропоры или микроканалы, в раствор соединения по изобретению в подходящем растворителе с последующим выпариванием растворителя. Избыток лекарственного средства на поверхности стента может быть удален путем дополнительной непродолжительной промывки растворителем. В следующих других воплощениях соединения по изобретению могут быть связаны ковалентной связью со стентом или трансплантатом. Можно использовать ковалентный линкер, который разрушается in vivo, приводя к высвобождению соединений по изобретению. Для такой цели может быть использована любая биологически лабильная связь, как например, сложноэфирная, амидная или ангидридная связи. Соединения по изобретению могут быть дополнительно введены интраваскулярно из баллона, используемого в процессе ангиопластики. Для уменьшения рестеноза также может быть выполнено экстраваскулярное введение соединений путем внесения композиций по изобретению через перикард или адвентициальную оболочку.
Разнообразные стентовые устройства, которые могут быть использованы как описано, раскрыты, например, в следующих ссылках, все они тем самым включены здесь посредством ссылки: патент США №5451233; патент США №5040548; патент США №5061273; патент США №5496346; патент США №5292331; патент США №5674278; патент США №3657744; патент США №4739762; патент США №5195984; патент США №5292331; патент США №5674278; патент США №5879382; патент США №6344053.
Соединения по изобретению могут быть введены дозированно. В данной области техники известно, что вследствие межличностной вариабельности в фармакокинетике соединений, индивидуализация режима введения является необходимой чертой для оптимальной терапии. Режим дозирования для соединения по изобретению может быть определен на основании обычного экспериментирования с учетом настоящего описания.
В том случае, когда соединение по изобретению вводят в композиции, которая содержит один или более агентов и этот агент имеет более короткий период полувыведения по сравнению с соединением по изобретению, стандартные лекарственные формы агента и соединения по изобретению могут быть соответственным образом скорректированы.
Фармацевтическая композиция, являющаяся объектом изобретения, может быть, например, в форме, подходящей для перорального введения в виде таблетки, капсулы, пилюли, порошка, композиций с непрерывным высвобождением, раствора, суспензии, для парентеральной инъекции в виде стерильного раствора, суспензии или эмульсии, для местного введения в виде мази или крема или для ректального введения в виде суппозитория. Такая фармацевтическая композиция может быть в стандартных лекарственных формах, подходящих для однократного введения точных дозировок. Фармацевтическая композиция будет включать традиционный фармацевтический носитель или эксципиент и соединение по изобретению в качестве активного ингредиента. В дополнение к этому, она может включать другие медицинские или фармацевтические агенты, носители, адъюванты и т.д.
Типичные формы для парентерального введения включают растворы или суспензии активного соединения в стерильных водных растворах, например, растворах водного пропиленгликоля или декстрозы. Такие лекарственные формы могут быть подходящим образом забуферены, если необходимо.
Активность соединений по настоящему изобретению может быть определена согласно следующей методике, а также методике, описанной ниже в разделе Примеры. Активность киназы оценивают путем измерения, в присутствии киназы, включения γ-33Р-фосфата из γ-33Р-АТФ в содержащий N-концевую His-метку субстрат, который экспрессируется в Е. coli, и который очищают традиционными способами. Этот анализ выполняют в 96-луночном полипропиленовом планшете. Инкубируемая смесь (100 мкл) содержит 25 мМ Hepes (N-2-гидроксиэтил-пиперазин-N-2-этансульфоновая кислота), pH 7,4, 10 мМ MgCl2, 5 мМ β-глицерофосфат, 100 мкМ Na-ортованадат, 5 мМ DTT (дитиотреитол), 5 нМ киназу и 1 мкМ субстрат. Ингибиторы суспендируют в DMSO и все реакции, включая контроли, выполняют при конечной концентрации DMSO, равной 1%. Реакции инициируют добавлением 10 мкМ АТФ (в дозе 0,5 мкКи γ-33Р-АТФ/лунка) и инкубируют при температуре окружающей среды в течение 45 минут. Добавляют равный объем 25%-ной ТСА (трихлоруксусной кислоты) для остановки реакции и осаждения белков. Осажденные белки захватывают на фильтровальных планшетах с фильтром из стекловолокна B и избыток меченого АТФ отмывают, используя харвестер Tomtec MACH III. Планшеты оставляют сушиться на воздухе, после чего в каждую лунку добавляют по 30 мкл Packard Microscint 20 и планшеты просчитывают с использованием Packard TopCount.
Согласно изобретению также предложены наборы. Наборы включают соединение или соединения по настоящему изобретению, как они изложены в данной заявке, в подходящей упаковке, и письменный документ, который может включать инструкции по применению, обсуждение клинических исследований, список побочных эффектов и тому подобное. Такие наборы также могут включать такую информацию, как ссылки из научной литературы, материалы, относящиеся к инструкциям по применению препарата, результаты клинических испытаний и/или краткий отчет о них и тому подобное, в которых указаны или установлены активности и/или преимущества данной композиции и/или в которых описаны дозировки, способы введения, побочные эффекты, лекарственные взаимодействия или другая информация, полезная учреждениям и специалистам, обеспечивающим медицинское обслуживание. Такая информация может быть основана на результатах различных исследований, например, исследований с использованием экспериментальных животных, участвующих в моделях in vivo, и исследований, основанных на клинических испытаниях на людях. Данный набор может дополнительно содержать другой агент. В некоторых воплощениях соединение по настоящему изобретению и агент представлены в наборе в виде отдельных композиций в отдельных контейнерах. В некоторых воплощениях соединение по настоящему изобретению и агент представлены в наборе в виде единой композиции в контейнере. Подходящая упаковка и дополнительные изделия для применения (например, мерный стаканчик для жидких препаратов, обертывание в фольгу для сведения в минимуму воздействия воздуха и тому подобное) известны в данной области техники и могут быть включены в набор. Наборы, изложенные в данной заявке, могут быть предложены, выставлены на продажу и/или рекламированы учреждениям и специалистам, обеспечивающим медицинское обслуживание, включая врачей, медицинских сестер, фармацевтов, должностных лиц, ответственных за составление формуляров лекарственных средств, и тому подобное. Кроме того, наборы, в некоторых воплощениях, можно продавать непосредственно потребителю.
СПОСОБЫ
Кроме того, согласно изобретению предложены способы применения соединений или фармацевтических композиций по настоящему изобретению для лечения болезненных состояний, включая, но не ограничиваясь этим, заболевания, связанные с неправильной работой PI3-киназы одного или более типов. Подробное описание состояний и расстройств, опосредуемых р110δ-киназной активностью, приведено в заявке Sadu и др., WO 01/81346, которая включена в данное описание во всей своей полноте посредством ссылки для всех назначений.
Способы лечения, предложенные в данной заявке, включают введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения по изобретению. В одном воплощении настоящего изобретения предложен способ лечения воспалительного расстройства, включая аутоиммунные заболевания, у млекопитающего. Способ включает введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемых соли, сложного эфира, пролекарства, сольвата, гидрата или производного. Примеры аутоиммунных заболеваний включают, но не ограничиваются этим, острый диссеминирующий энцефаломиелит (ADEM), болезнь Аддисона, антифосфолипидный синдром (APS), гипопластическую анемию, аутоиммунный гепатит, глютеновую энтеропатию, болезнь Крона, сахарный диабет (1 типа), синдром Гудпасчера, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре (GBS), болезнь Хашимото, красную волчанку, множественный склероз, тяжелую псевдопаралитическую миастению, опсоклонус-миоклонус синдром (OMS), ретробульбарный неврит, тиреоидит Орда, пузырчатку, полиартрит, первичный биллиарный цирроз, псориаз, ревматоидный артрит, синдром Рейтера, артериит Такаясу, темпоральный артериит (также известный как "гигантоклеточный артериит"), аутоиммунную гемолитическую анемию с синдромом тепловых агглютининов, гранулематоз Вегенера, универсальную алопецию, болезнь Шагаса, синдром хронической усталости, вегетативную дистонию, эндометриоз, гнойный гидраденит, интерстициальный цистит, нейромиотонию, саркоидоз, склеродермию, язвенный колит, витилиго и вульводинию. Другие расстройства включают нарушения резорбции кости и тромбоз.
В некоторых воплощениях способ лечения воспалительных или аутоиммунных заболеваний включает введение субъекту (например, млекопитающему) терапевтически эффективного количества одного или более соединений по настоящему изобретению, которые селективно ингибируют PI3K-δ и/или PI3K-γ по сравнению со всеми другими PI3-киназами I типа. Такое селективное ингибирование PI3K-δ и/или PI3K-γ может иметь преимущество при лечении любого из заболеваний или состояний, изложенных в данной заявке. Например, селективное ингибирование PI3K-δ может ингибировать воспалительные ответы, ассоциированные с воспалительными заболеваниями, аутоиммунным заболеванием или заболеваниями, связанными с нежелательным иммунным ответом, включая, но не ограничиваясь этим, астму, эмфизему, аллергию, дерматит, ревматоидный артрит, псориаз, красную волчанку или реакцию "трансплантат против хозяина". Кроме того, селективное ингибирование PI3K-δ может обеспечивать уменьшение воспалительного или нежелательного иммунного ответа без сопутствующего уменьшения способности ослаблять бактериальную, вирусную и/или грибковую инфекцию. Селективное ингибирование как PI3K-δ, так и PI3K-γ может иметь преимущество в большей степени ингибирования воспалительного ответа у субъекта, чем это можно было бы получить с использованием ингибиторов, которые селективно ингибируют только PI3K-δ или PI3K-γ. В одном из аспектов один или более способов, являющихся объектом изобретения, эффективны в уменьшении продукции антигенспецифических антител in vivo примерно в 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 7,5 раза, 10 раз, 25 раз, 50 раз, 100 раз, 250 раз, 500 раз, 750 раз или примерно 1000 раз или больше. В другом аспекте один или более способов, являющихся объектом изобретения, эффективны в уменьшении продукции антигенспецифических IgG3 и/или IgGM in vivo примерно в 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 7,5 раза, 10 раз, 25 раз, 50 раз, 100 раз, 250 раз, 500 раз, 750 раз или примерно 1000 раз или больше.
В одном из аспектов один или более способов, являющихся объектом изобретения, эффективны в уменьшении интенсивности симптомов, ассоциированных с ревматоидным артритом, включая, но не ограничиваясь этим, уменьшение опухания суставов, уменьшение уровней антител против коллагена в сыворотке крови и/или уменьшение патологии суставов, такой как резорбция кости, поражение хряща, паннус и/или воспаление. В другом аспекте способы, являющиеся объектом изобретения, эффективны в уменьшении воспаления голеностопного сустава по меньшей мере примерно на 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 50%, 60% или примерно 75%-90%. В другом аспекте способы, являющиеся объектом изобретения, эффективны в уменьшении воспаления коленного сустава по меньшей мере примерно на 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 50%, 60% или примерно 75%-90% или больше. В еще одном другом аспекте способы, являющиеся объектом изобретения, эффективны в уменьшении уровней антител против коллагена II типа в сыворотке крови по меньшей мере примерно на 10%, 12%, 15%, 20%, 24%, 25%, 30%, 35%, 50%, 60%, 75%, 80%, 86%, 87% или примерно 90% или больше. В другом аспекте способы, являющиеся объектом изобретения, эффективны в уменьшении показателей по гистопатологической шкале для голеностопного сустава примерно на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 90% или больше. В еще одном другом аспекте способы, являющиеся объектом изобретения, эффективны в уменьшении показателей по гистопатологической шкале для коленного сустава примерно на 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 90% или больше.
В других воплощениях настоящего изобретения предложены способы применения соединений или фармацевтических композиций для лечения респираторных заболеваний, включая, но не ограничиваясь этим, заболевания, поражающие доли легкого, плевральную полость, бронхиолы, трахею, верхние дыхательные пути или нервы и участвующую в акте дыхания мускулатуру. Например, предложены способы для лечения обструктивной болезни легких. Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) представляет собой обобщающий термин для группы заболеваний респираторного тракта, которые характеризуются обструкцией или ограничением дыхательных путей. Состояниями, включенными в этот обобщающий термин являются: хроническое бронхит, эмфизема и бронхоэктаз.
В другом воплощении соединения, изложенные в данной заявке, используют для лечения астмы. Кроме того, соединения или фармацевтические композиции, изложенные в данной заявке, могут быть применены для лечения эндотоксикоза и сепсиса. В одном воплощении соединения или фармацевтические композиции, изложенные в данной заявке, используют для лечения ревматоидного артрита (RA). В еще одном другом воплощении соединения или фармацевтические композиции, изложенные в данной заявке, используют для лечения контактного или атопического дерматита. Контактный дерматит включает раздражающий дерматит, фототоксический дерматит, аллергический дерматит, фотоаллергический дерматит, контактную крапивницу, системный дерматит контактного типа и тому подобное. Раздражающий дерматит может иметь место, когда на кожу наносят слишком много вещества или когда кожа обладает чувствительностью к определенному веществу. Атопический дерматит, иногда называемый экземой, представляет собой вид дерматита - атопическое кожное заболевание.
Изобретение также относится к способу лечения гиперпролиферативного расстройства у млекопитающего, включающему введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемых соли, сложного эфира, пролекарства, сольвата, гидрата или производного. В некоторых воплощениях указанный способ относится к лечению рака, такого как острый миелоидный лейкоз, рак вилочковой железы, головного мозга, легкого, плоскоклеточный рак, рак кожи, глаз, ретинобластома, внутриглазная меланома, рак полости рта и ротоглотки, мочевого пузыря, желудочно-кишечного тракта, желудка, поджелудочной железы, мочевого пузыря, молочной железы, шейки матки, головы, шеи, почечной сферы, почек, печени, яичников, предстательной железы, колоректальный рак, рак пищевода, яичка, гинекологической сферы, щитовидной железы, ЦНС, ПНС, СПИД-ассоциированный (например, лимфома и саркома Капоши) или индуцируемый вирусами рак. В некоторых воплощениях указанный способ относится к лечению доброкачественного гиперпролиферативного расстройства, такого как доброкачественная гиперплазия кожи (например, псориаз), рестеноз или доброкачественное гиперпролиферативное расстройство предстательной железы (например, доброкачественная гипертрофия предстательной железы (ВРН)).
Изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного с васкулогенезом или ангиогенезом, у млекопитающего, включающему введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемых соли, сложного эфира, пролекарства, сольвата, гидрата или производного. В некоторых воплощениях указанный способ относится к лечению заболевания, выбранного из группы, состоящей из опухолевого ангиогенеза, хронического воспалительного заболевания, такого как ревматоидный артрит, атеросклероза, воспалительного заболевания кишечника, кожных заболеваний, таких как псориаз, экзема и склеродермия, диабета, диабетической ретинопатии, ретинопатии недоношенных, возрастной макулярной дегенерации, гемангиомы, глиомы, меланомы, саркомы Капоши и рака яичников, молочной железы, легкого, поджелудочной железы, предстательной железы, толстой кишки и эпидермоидного рака.
Пациенты, которые могут быть подвергнуты лечению соединениями по настоящему изобретению или фармацевтически приемлемыми солью, сложным эфиром, пролекарством, сольватом, гидратом или производным указанных соединений в соответствии со способами по данному изобретению, включают, например, пациентов, которым был поставлен диагноз псориаз; рестеноз; атеросклероз; ВРН; рак молочной железы, такой как дуктальная карцинома в ткани протоков молочной железы, виды медуллярного рака, виды коллоидного рака, тубулярные карциномы и воспалительный рак молочной железы; рак яичников, включая эпителиальные опухоли яичников, такие как аденокарцинома в яичнике и аденокарцинома, которая мигрирует из яичника в брюшную полость; рак матки; рак шейки матки, такой как аденокарцинома в эпителии шейки, включая плоскоклеточный(ые) рак и аденокарциномы; рак предстательной железы, например, рак предстательной железы, выбранный из следующего далее: аденокарциномы или аденокарциномы, которая мигрирует в кость; рак поджелудочной железы, такой как эпителиоидная карцинома в ткани протоков поджелудочной железы и аденокарцинома в протоке поджелудочной железы; рак мочевого пузыря, такой как переходно-клеточный рак в мочевом пузыре, уротелиальные карциномы (переходно-клеточные карциномы), опухоли в уротелиальных клетках, выстилающих мочевой пузырь, плоскоклеточный рак, аденокарциномы и мелкоклеточный рак; лейкоз, такой как острый миелоидный лейкоз (AML), острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, волосатоклеточный лейкоз, миелодисплазия, миелопролиферативные расстройства, острый миелогенный лейкоз (AML), хронический миелогенный лейкоз (CML), мастоцитоз, хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL), множественная миелома (ММ) и миелодиспластический синдром (MDS); рак кости; рак легкого, такой как немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), который подразделяется на плоскоклеточный рак, аденокарциномы и крупноклеточные недифференцируемые карциномы, и мелкоклеточный рак легкого; рак кожи, такой как базальноклеточный рак, меланома, плоскоклеточный рак и актинический кератоз, представляющий собой состояние кожи, которое иногда развивается в плоскоклеточный рак; глазная ретинобластома; кожная или внутриглазная меланома (меланома глаза); первичный рак печени (рак, который начинается в печени); рак почек; рак щитовидной железы, как например, папиллярный, фолликулярный, медуллярный и анапластический; СПИД-ассоциированная лимфома, такая как диффузная В-крупноклеточная лимфома, В-клеточная иммунобластная лимфома и мелкоклеточная лимфома из нерасщепленных клеток; саркома Калоши; виды рака, индуцируемые вирусами, включая рак, индуцируемый вирусом гепатита B (HBV), вирусом гепатита C (HCV), и гепатоклеточную карциному; рак, индуцируемый Т-лимфотропным вирусом человека 1 типа (HTLV-1), и Т-клеточный лейкоз/лимфома взрослых; и рак, индуцируемый папиллома-вирусом человека (HPV), и рак шейки матки; виды рака центральной нервной системы (ЦНС), такие как первичная опухоль головного мозга, которая включает глиомы (астроцитому, анапластическую астроцитому или мультиформную глиобластому), олигодендроглиому, эпендимому, менингиому, лимфому, шванному и медуллобластому; виды рака периферической нервной системы (ПНС), такие как акустическая невринома и злокачественная опухоль оболочек периферических нервов (MPNST), включая нейрофибромы и шванномы, злокачественна фиброзна цитома, злокачественная фиброзная гистиоцитома, злокачественная менингиома, злокачественная мезотелиома и злокачественная смешанная опухоль Мюллера; рак полости рта и ротоглотки, такой как рак подроточной части глотки, рак гортани, носоглоточный рак и рак ротоглотки; рак желудка, такой как лимфомы, стромальные опухоли и карциноидные опухоли желудочно-кишечного тракта; рак яичка, такой как эмбрионально-клеточные опухоли (GCT), которые включают семиномы и несеминомные опухоли, и гонадные стромальные опухоли, которые включают опухоли из клеток Лейдига и опухоли из клеток Сертоли; рак вилочковой железы, такой как тимомы, карциномы тимуса, болезнь Ходжкина, неходжкинские лимфомы карциноиды или карциноидные опухоли; рак прямой кишки; и рак толстой кишки.
Изобретение также относится к способу лечения диабета у млекопитающего, включающему введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемых соли, сложного эфира, пролекарства, сольвата, гидрата или производного.
К тому же, соединения, изложенные в данной заявке, могут быть применены для лечения акне.
К тому же, соединения, изложенные в данной заявке, могут быть применены для лечения артериосклероза, включая атеросклероз. Артериосклероз представляет собой общий термин, описывающий любое склерозирование средних или больших артерий. Атеросклероз представляет собой склерозирование артерии главным образом из-за атеросклеротической бляшки.
Другие соединения, изложенные в данной заявке, могут быть применены для лечения гломерулонефрита. Гломерулонефрит представляет собой первичное или вторичное аутоиммунное почечное заболевание, характеризующееся воспалением клубочков. Оно может быть бессимптомным или протекать вместе с гематурией и/или протеинурией. Существует много общепризнанных типов, которые подразделяют на острый, подострый или хронический гломерулонефрит. Причины бывают инфекционные (бактериальные, вирусные или паразитические патогены), аутоиммунные или паранеопластические.
К тому же, соединения, изложенные в данной заявке, могут быть применены для лечения бурсита, волчанки, острого диссеминирующего энцефаломиелита (ADEM), болезни Аддисона, антифосфолипидного синдрома (APS), гипопластической анемии, аутоиммунного гепатита, глютеновой энтеропатии, болезни Крона, сахарного диабета (1 типа), синдрома Гудпасчера, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре (GBS), болезни Хашимото, воспалительного заболевания кишечника, красной волчанки, тяжелой псевдопаралитической миастении, опсоклонус-миоклонус синдрома (OMS), ретробульбарного неврита, тиреоидита Орда, остеоартрита, увеоретинита, пузырчатки, полиартрита, первичного биллиарного цирроза, синдрома Рейтера, артериита Такаясу, темпорального артериита, аутоиммунной гемолитической анемии с синдромом тепловых агглютининов, гранулематоза Вегенера, универсальной алопеции, болезни Шагаса, синдрома хронической усталости, вегетативной дистонии, эндометриоза, гнойного гидраденита, интерстициального цистита, нейромиотонии, саркоидоза, склеродермии, язвенного колита, витилиго, вульводинии, аппендицита, артериита, артрита, блефарита, бронхиолита, бронхита, цервицита, холангита, холецистита, хориоамнионита, колита, конъюнктивита, цистита, дакриоаденита, дерматомиозита, эндокардита, эндометрита, энтерита, энтероколита, эпикондилита, эпидидимита, фасцита, фиброзита, гастрита, гастроэнтерита, гингивита, гепатита, гидраденита, илеита, ирита, ларингита, мастита, менингита, миелита, миокардита, миозита, нефрита, омфалита, оофорита, орхита, остита, отита, панкреатита, паротита, перикардита, перитонита, фарингита, плеврита, флебита, пневмонита, проктита, простатита, пиелонефрита, ринита, сальпингита, синусита, стоматита, синовита, тендонита, тонзилита, увеита, вагинита, васкулита или вульвита.
Изобретение также относится к способу лечения сердечно-сосудистого заболевания у млекопитающего, включающему введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемых соли, сложного эфира, пролекарства, сольвата, гидрата или производного. Примеры сердечно-сосудистых состояний включают, но не ограничиваются этим, атеросклероз, рестеноз, васкулярную окклюзию и обструктивную болезнь сонной артерии.
В другом аспекте настоящего изобретения предложены способы нарушения функции лейкоцитов или нарушения функции остеокластов. Способ включает приведение лейкоцитов или остеокластов в контакт с нарушающим функцию количеством соединения по изобретению.
В другом аспекте настоящего изобретения предложены способы лечения глазного заболевания путем введения одного или более чем одного соединения или одной или более чем одной фармацевтической композиции, являющихся объектом изобретения, в глаз субъекта.
Кроме того, предложены способы введения соединений по настоящему изобретению посредством глазных капель, внутриглазной инъекции, интравитреальной инъекции, местно или посредством использования устройства, элюирующего лекарственное средство, микрокапсул, имплантата или микроструйного устройства. В некоторых случаях соединения по настоящему изобретению вводят вместе с носителем или эксципиентом, который улучшает проникновение соединения внутрь глаза, таким как масляная и водная эмульсия с коллоидными частицами, имеющими масляное ядро, окруженное пленкой на границе раздела фаз.
В некоторых случаях коллоидные частицы включают по меньшей мере один катионный агент и по меньшей мере одно неионное поверхносто-активное вещество, такое как полоксамер, тилоксапол, полисорбат, производное полиоксиэтилена и касторового масла, сложный эфир сорбитана или полиоксил-стеарат. В некоторых случаях катионным агентом является алкиламин, третичный алкиламин, соединение четвертичного аммония, катионный липид, аминоспирт, соль бигуанида, катионное соединение или их смесь. В некоторых случаях катионным агентом является соль бигуанида, такая как хлоргексидин, полиаминопропил-бигуанид, фенформин, алкилбигуанид или их смесь. В некоторых случаях соединение четвертичного аммония представляет собой бензалконий-галогенид, лауралконий-галогенид, цетримид, гексадецилтриметиламмоний-галогенид, тетрадецилтриметил-аммоний-галогенид, додецилтриметиламмоний-галогенид, цетримоний-галогенид, бензетоний-галогенид, бегеналконий-галогенид (behenalkonium halide), цеталконий-галогенид, цетэтилдимоний-галогенид (cetethyldimonium halide), цетилпиридиний-галогенид, бензододециний-галогенид, хлораллил-метенамин-галогенид, миристилалконий-галогенид, стеаралконий-галогенид или смесь двух или более чем двух из них. В некоторых случаях катионный агент представляет собой бензалконий-хлорид, лауралконий-хлорид, бензододециний-бромид, бензетоний-хлорид, гексадецилтриметиламмоний-бромид, тетрадецилтриметиламмоний-бромид, додецилтриметиламмоний-бромид или смесь двух или более чем двух из них. В некоторых случаях масляная фаза представляет собой минеральное масло и легкое минеральное масло, триглицериды с цепью средней длины (МСТ), кокосовое масло; гидрогенизированные масла, включая гидрогенизированное хлопковое масло, гидрогенизированное пальмовое масло, гидрогенизированное касторовое масло или гидрогенизированное соевое масло; производные полиоксиэтилена и гидрогенизированного касторового масла, включая полиоксил-40 и гидрогенизированное касторовое масло, полиоксил-60 и гидрогенизированное касторовое масло или полиоксил-100 и гидрогенизированное касторовое масло.
Кроме того, согласно изобретению предложены способы модуляции киназной активности путем приведения киназы в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для модуляции активности киназы. Модуляция может представлять собой ингибирование или активацию киназной активности. В некоторых воплощениях согласно изобретению предложены способы ингибирования киназной активности путем приведения киназы в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для ингибирования активности киназы. В некоторых воплощениях согласно изобретению предложены способы ингибирования киназной активности в растворе путем приведения указанного раствора в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для ингибирования активности киназы в указанном растворе. В некоторых воплощениях согласно изобретению предложены способы ингибирования киназной активности в клетке путем приведения указанной клетки в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для ингибирования активности киназы в указанной клетке. В некоторых воплощениях согласно изобретению предложены способы ингибирования киназной активности в ткани путем приведения указанной ткани в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для ингибирования активности киназы в указанной ткани. В некоторых воплощениях согласно изобретению предложены способы ингибирования киназной активности в организме путем приведения указанного организма в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для ингибирования активности киназы в указанном организме. В некоторых воплощениях согласно изобретению предложены способы ингибирования киназной активности у животного путем приведения указанного животного в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для ингибирования активности киназы у указанного животного. В некоторых воплощениях согласно изобретению предложены способы ингибирования киназной активности у млекопитающего путем приведения указанного млекопитающего в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для ингибирования активности киназы у указанного млекопитающего. В некоторых воплощениях согласно изобретению предложены способы ингибирования киназной активности у человека путем приведения указанного человека в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для ингибирования активности киназы у указанного человека. В некоторых воплощениях % киназной активности после приведения киназы в контакт с соединением по изобретению составляет менее 1,5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 90, 95 или 99% киназной активности, замеряемой в отсутствие указанной стадии приведения в контакт.
В некоторых воплощениях киназа представляет собой липидкиназу или протеинкиназу. В некоторых воплощениях киназа выбрана из группы, состоящей из PI3-киназы, включая разные изоформы, такие как PI3-киназа α, PI3-киназа β, PI3-киназа γ, PI3-киназа δ; DNA-PK; mTor; Abl, VEGFR, эфринового рецептора B4 (EphB4); рецепторной тирозинкиназы TEK (TIE2); Fms-подобной тирозинкиназы 3 (FLT-3); рецептора ростового фактора из тромбоцитов (PDGFR); RET; ATM; ATR; hSmg-1; Hck; Src; рецептора эпидермального фактора роста (EGFR); KIT (рецептор фактора роста стволовых клеток); инсулинового рецептора (IR) и IGFR (рецептор инсулиноподобного фактора роста).
Кроме того, согласно изобретению предложены способы модуляции PI3-киназной активности путем приведения PI3-киназы в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для модуляции активности PI3-киназы. Модуляция может представлять собой ингибирование или активацию PI3-киназной активности. В некоторых воплощениях согласно изобретению предложены способы ингибирования PI3-киназной активности путем приведения PI3-киназы в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для ингибирования активности PI3-киназы. В некоторых воплощениях согласно изобретению предложены способы ингибирования PI3-киназной активности. Такое ингибирование может происходить в растворе, в клетке, экспрессирующей одну или более чем одну PI3-киназу, в ткани, содержащей клетку, экспрессирующую одну или более чем одну PI3-киназу, или в организме, экспрессирующем одну или более чем одну PI3-киназу. В некоторых воплощениях согласно изобретению предложены способы ингибирования PI3-киназной активности у животного (включая млекопитающих, например, людей) путем приведения указанного животного в контакт с количеством соединения по изобретению, достаточным для ингибирования активности PI3-киназы у указанного животного.
КОМБИНИРОВАННОЕ ЛЕЧЕНИЕ
Также, согласно настоящему изобретению предложены способы комбинированной терапии, в которых агент, известный тем, что модулирует другие пути или другие компоненты того же пути или даже перекрывающиеся наборы ферментов-мишеней, используют в комбинации с соединением по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемыми солью, сложным эфиром, пролекарством, сольватом, гидратом или производным. В одном аспекте такая терапия включает, но не ограничивается этим, комбинацию соединения, являющегося объектом изобретения, с химиотерапевтическими агентами, терапевтическими антителами и лучевой терапией для обеспечения синергического или аддитивного терапевтического эффекта.
В одном аспекте соединения или фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут проявлять синергическую или аддитивную эффективность при введении в комбинации с агентами, которые ингибируют продукцию или активность IgE. Такая комбинация может снижать нежелательный эффект высокого уровня IgE, ассоциированный с применением одного или более ингибиторов PI3Kδ, если такой эффект имеет место. Это может быть особенно полезно в лечении аутоиммунных и воспалительных расстройств (AIID), таких как ревматоидный артрит. Кроме того, введение ингибиторов PI3Kδ или PI3Kδ/γ по настоящему изобретению в комбинации с ингибиторами mTOR также может приводить к синергическому действию посредством усиленного ингибирования PI3K-пути.
В отдельном, но родственном аспекте настоящего изобретения предложено комбинированное лечение заболевания, ассоциированного с PI3Kδ, включающее введение ингибитора PI3Kδ и агента, который ингибирует продукцию или активность IgE. Для этой комбинации применимы другие типичные ингибиторы PI3Kδ, и они описаны, например, в патенте США №6800620. Такое комбинированное лечение особенно полезно для лечения аутоиммунных и воспалительных заболеваний (AIID), в том числе ревматоидного артрита, но им не ограничивается.
Агенты, которые ингибируют продукцию IgE, известны в данной области техники и включают, но не ограничиваются этим, один или более агентов из TEI-9874, 2-(4-(6-циклогексилокси-2-нафтилокси)фенилацетамид)бензойной кислоты, рапамицина, аналогов рапамицина (то есть рапалогов), ингибиторов TORC1, ингибиторов TORC2 и любых других соединений, которые ингибируют mTORC1 и mTORC2. Агенты, которые ингибируют активность IgE, включают, например, анти-IgE антитела, такие как, например омализумаб и TNX-901.
Для лечения аутоиммунных заболеваний соединения или фармацевтические композиции, являющиеся объектом изобретения, могут быть использованы в комбинации с обычно назначаемыми лекарственными средствами, включая, но не ограничиваясь этим, Enbrel®, Remicade®, Humira®, Avonex® и Rebif®. Для лечения респираторных заболеваний соединения или фармацевтические композиции, являющиеся объектом изобретения, могут быть введены в комбинации с обычно назначаемыми лекарственными средствами, включая, но не ограничиваясь этим, Xolair®, Advair®, Singulair® и Spiriva®.
Соединения по изобретению могут быть изготовлены или введены вместе с другими агентами, которые действуют, устраняя симптомы воспалительных состояний, таких как энцефаломиелит, астма и другие заболевания, изложенные в данной заявке. Эти агенты включают нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (NSAID), например, ацетилсалициловую кислоту; ибупрофен; напроксен; индометацин; набуметон; толметин; и т.д. Кортикостероиды используются для уменьшения воспаления и подавления активности иммунной системы. Наиболее часто назначаемым лекарственным средством этого типа является преднизон. Хпороквин (арален) или гидроксихлороквин (плаквенил) также могут быть очень полезны для некоторых индивидуумов с диагнозом волчанка. Их наиболее часто назначают при кожных и суставных симптомах волчанки. Азатиоприн (имуран) и циклофосфамид (цитоксан) подавляют воспаление и имеют тенденцию подавлять иммунную систему. Другие агенты, например метотрексат и циклоспорин, используются для регуляции симптомов волчанки. Антикоагулянты применяют для предупреждения быстрого сворачивания крови. Дапазон антикоагулянтов варьирует от аспирина в очень низкой дозе, что предупреждает адгезию тромбоцитов, до гепарина/кумадина.
В одном из других аспектов данное изобретение также относится к фармацевтической композиции для ингибирования аномального клеточного роста у млекопитающего, которая содержит количество соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемых соли, сложного эфира, пролекарства, сольвата, гидрата или производного в комбинации с количеством противоракового агента (например, химиотерапевтического агента). Многие химиотерапевтические средства в настоящее время известны в данной области техники и могут быть использованы в комбинации с соединениями по изобретению.
В некоторых воплощениях химиотерапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из ингибиторов митоза, алкилирующих агентов, антиметаболитов, интеркалирующих антибиотиков, ингибиторов ростовых факторов, ингибиторов клеточного цикла, ферментов, ингибиторов топоизомеразы, модификаторов биологического ответа, антигормонов, ингибиторов ангиогенеза и антиандрогенов. Неограничивающими примерами являются химиотерапевтические агенты, цитотоксические агенты и небольшие непептидные молекулы, такие как гливек (иматиниба мезилат), велкад (бортезомиб), казодекс (бикалутамид), пресса (гефитиниб) и адриамицин, а также множество химиотерапевтических агентов. Неограничивающие примеры химиотерапевтических агентов включают алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклофосфамид (CYTOXAN™); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеламин; азотистые аналоги иприта, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, гидрохлорид оксида мехлоретамина, мелфалан, новэмбихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урациловый иприт; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорзотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как аклациномизины, актиномицин, аутрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, калихеамицин, карабицин, карминомицин, карзинофилин, Casodex™, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин, эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадренальные средства, такие как аминоглутетимид, митотан, трилостан; пополнитель фолиевой кислоты, такой как фолиновая кислота; ацеглатон; гликозид альдофосфамида; аминолевулиновую кислоту; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элфомитин; эллиптиния ацетат; этоглуцид; галлия нитрат; гидроксимочевину; лентинан; лонидамин; митоквазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; подофиллиновую кислоту; 2-этилгидразид; прокарбазин; PSK.R™; разоксан; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновую кислоту; триазиквон; 2,2',2''-трихлортриэтиламин; уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид ("Ara-С"); циклофосфамид; тиотепа; таксаны, например, паклитаксел (TAXOL™, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.) и доцетаксел (TAXOTERE™, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); ретиноевую кислоту; эсперамицины; капецитабин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из упомянутых выше. Также в качестве веществ, подходящих для улучшения состояния клеток при химиотерапии, включены антигормональные агенты, которые действуют, регулируя или ингибируя гормональную активность опухолей, такие как антиэстрогены, в том числе, например, тамоксифен (Nolvadex™), ралоксифен, ингибирующие ароматазу 4(5)-имидазолы, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY 117018, онапристон и торемифен (фарестон); и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и госелерин; хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (VP-16); ифосфамид; митомицин C; митоксантрон; винкристин; винорелбин; навелбин; новантрон; тенипозид; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; каптотецин-11 (СРТ-11); ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO). Там, где это желательно, соединения или фармацевтическая композиция по настоящему изобретению могут быть использованы в комбинации с обычно назначаемыми противораковыми лекарственными средствами, такими как Herceptin®, Avastin®, Erbitux®, Rituxan®, Taxol®, Arimidex®, Taxotere® и Velcade®.
Данное изобретение также относится к способу применения соединений или фармацевтической композиции в комбинации с лучевой терапией для ингибирования аномального клеточного роста или к способу лечения гиперпролиферативного расстройства у млекопитающего. Методики применения лучевой терапии известны в данной области техники, и эти методики могут быть использованы в комбинированной терапии, изложенной в данной заявке. Введение соединения по изобретению в такой комбинированной терапии может быть определено, как изложено в данной заявке.
Лучевая терапия может быть проведена путем использования одного из нескольких способов или комбинации способов, включая, без ограничения, наружную дистанционную лучевую терапию, внутреннюю лучевую терапию, облучение с использованием имплантата, стереотаксическую радиохирургию, системную лучевую терапию, радиотерапию и длительную или кратковременную интерстициальную брахитерапию. Термин "брахитерапия", как он использован в данной заявке, относится к лучевой терапии, осуществляемой посредством пространственно ограниченного радиоактивного вещества, вводимого в место опухоли или рядом с ней или в другое место пролиферативного заболевания ткани. Подразумевается, что термин включает, без ограничения, воздействие радиоактивных изотопов (например, At-211, I-131, I-125, Y-90, Re-186, Re-188, Sm-153, Bi-212, P-32 и радиоактивных изотопов Lu). Подходящие источники излучения для использования в качестве улучшающего состояние клеток вещества по настоящему изобретению включают как твердые вещества, так и жидкости. В качестве неограничивающего примера, источником излучения может быть радионуклид, такой как I-125, I-131, Yb-169, Ir-192 в качестве твердого источника, I-125 в качестве твердого источника или другие радионуклиды, которые испускают протоны, бета-частицы, гамма-излучение или другие виды излучения, используемые в терапии. Кроме того, радиоактивное вещество может представлять собой жидкость, приготовленную из любого раствора радионуклида(ов), например, раствора I-125 или I-131, или радиоактивную жидкость можно приготовить, используя взвесь подходящей жидкости, содержащей небольшие частицы твердых радионуклидов, таких как Au-198, Y-90. Кроме того, радионуклид(ы) может быть включен в гель или входить в состав радиоактивных микросфер.
Не ограничивая себя какой-либо теорией, можно сказать, что соединения по настоящему изобретению могут делать аномальные клетки более чувствительными к лечению облучением в целях уничтожения и/или ингибирования роста таких клеток. Соответственно, данное изобретение также относится к способу сенсибилизации аномальных клеток у млекопитающего к лечению облучением, включающему введение млекопитающему количества соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемых соли, сложного эфира, пролекарства, сольвата, гидрата или производного, которое эффективно для сенсибилизации аномальных клеток к лечению облучением. Количество соединения, соли или сольвата в этом способе может быть определено в соответствии со способами определения эффективных количеств таких соединений, изложенных в данной заявке.
Соединения или фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть использованы в комбинации с количеством одного или более веществ, выбранных из антиангиогенезных агентов, ингибиторов сигнальной трансдукции и антипролиферативных агентов.
Антиангиогенезные агенты, такие как ингибиторы ММР-2 (матриксной металлопротеиназы 2), ингибиторы ММР-9 (матриксной металлопротеиназы 9) и ингибиторы СОХ-11 (циклооксигеназы 11), могут быть использованы вместе с соединением по настоящему изобретению и фармацевтическими композициями, изложенными в данной заявке. Примеры полезных ингибиторов СОХ-II включают CELEBREX™ (алекоксиб), валдекоксиб и рофекоксиб. Примеры полезных ингибиторов матриксных металлопротеиназ описаны в WO 96/33172 (опубликованной 24 октября, 1996 г.), WO 96/27583 (опубликованной 7 марта 1996 г.), заявке на европейский патент №97304971.1 (поданной 8 июля 1997 г.), заявке на европейский патент №99308617.2 (поданной 29 октября 1999 г.), WO 98/07697 (опубликованной 26 февраля 1998 г.), WO 98/03516 (опубликованной 29 января 1998 г.), WO 98/34918 (опубликованной 13 августа 1998 г.), WO 98/34915 (опубликованной 13 августа 1998 г.), WO 98/33768 (опубликованной 6 августа 1998 г.), WO 98/30566 (опубликованной 16 июля 1998 г.), публикации европейского патента 606046 (опубликованной 13 июля 1994 г.), публикации европейского патента 931788 (опубликованной 28 июля 1999 г.), WO 90/05719 (опубликованной 31 мая 1990 г.), WO 99/52910 (опубликованной 21 октября 1999 г.), WO 99/52889 (опубликованной 21 октября 1999 г.), WO 99/29667 (опубликованной 17 июня 1999 г.), международной заявке РСТ № PCT/IB 98/01113 (поданной 21 июля 1998 г.), заявке на европейский патент №99302232.1 (поданной 25 марта 1999 г.), заявке на патент Великобритании №9912961.1 (поданной 3 июня 1999 г.), предварительной заявке США №60/148464 (поданной 12 августа 1999 г.), патенте США 5863949 (опубликованном 26 января 1999 г.), патенте США 5861510 (опубликованном 19 января 1999 г.) и публикации европейского патента 780386 (опубликованной 25 июня 1997 г.), все они включены в данное описание во всей своей полноте посредством ссылки. Предпочтительными ингибиторами ММР-2 и ММР-9 являются такие, которые имеют незначительную активность или не имеют никакой активности в отношении ингибирования ММР-1. Более предпочтительными являются такие, которые селективно ингибируют ММР-2 и/или АМР-9 по сравнению с другими матриксными металлопротеиназами (то есть МАР-1, ММР-3, ММР-4, ММР-5, ММР-6, ММР-7, ММР-8, ММР-10, ММР-11, ММР-12 и ММР-13). Некоторыми конкретными примерами ингибиторов ММР, полезных в настоящем изобретении, являются AG-3340, RO 32-3555 и RS 13-0830.
Изобретение также относится к способу лечения и к фармацевтической композиции для лечения сердечно-сосудистого заболевания у млекопитающего, содержащей количество соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемых соли, сложного эфира, пролекарства, сольвата, гидрата или производного или их меченного изотопом производного и количество одного или более терапевтических агентов, используемых для лечения сердечно-сосудистых заболеваний.
Примерами для использования применительно к сердечно-сосудистым заболеваниям являются антитромботические агенты, например, простациклин и салицилаты, тромболитические агенты, например, стрептокиназа, урокиназа, тканевой активатор плазминогена (ТРА) и анизоилированный активаторный комплекс плазминогена и стрептокиназы (APSAC), антитромбоцитарные агенты, например, ацетил-салициловая кислота (ASA) и клопидрогель, вазодилататоры, например, нитраты, лекарственные средства, блокирующие кальциевые каналы, антипролиферативные агенты, например, колхицин и алкилирующие агенты, интеркалирующие агенты, модулирующие рост факторы, такие как интерлейкины, трансформирующий ростовой фактор-бета и соединения, родственные фактору роста из тромбоцитов, моноклональные антитела, направленные против ростовых факторов, противовоспалительные агенты, как стероидные, так и нестероидные средства, и другие агенты, которые могут модулировать тонус сосудов, функцию, артериосклероз и реакцию заживления на повреждение сосудов или органов после воздействия. Согласно изобретению в состав комбинаций или веществ для покрытия также могут быть включены антибиотики. Более того, вещество для покрытия можно использовать для осуществления терапевтической доставки к очагу в стенке сосуда. Благодаря включению активного агента в набухаемый полимер активный агент будет высвобождаться по мере набухания полимера.
Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть изготовлены и введены вместе с веществами, представляющими собой жидкие или твердые тканевые барьеры, также известными как смазывающие вещества. Примеры тканевых барьеров включают, но не ограничиваются этим, полисахариды, политиканы, сепрафильм, интерсид и гиалуроновую кислоту.
Лекарственные средства, которые могут быть введены вместе с соединениями, изложенными в данной заявке, включают любые подходящие лекарственные средства, с пользой доставляемые ингаляцией, например, аналгетики, например, кодеин, дигидроморфин, эрготамин, фентанил или морфин; ангинозные препараты, например, дилтиазем; антиаллергические средства, например, кромогликат, кетотифен или недокромил; противоинфекционные средства, например, цефалоспорины, пенициллины, стрептомицин, сульфонамиды, тетрациклины или пентамидин; антигистамины, например, метапирилен; противовоспалительные средства, например, беклометазон, флунизолид, будесонид, типредан, триамцинолона ацетонид или флутиказон; противокашлевые средства, например, носкапин; бронходилататоры, например, эфедрин, адреналин, фенотерол, формотерол, изопреналин, метапротеренол, фенилэфрин, фенилпропаноламин, пирбутерол, репротерол, римитерол, сальбутамол, салметерол, тербуталин, изоэтарин, тулобутерол, орципреналин или (-)-4-амино-3,5-дихлор-α-[[[6-[2-(2-пиридинил)этокси]гексил]-амино]метил]бензолметанол; диуретики, например амилорид; антихолинергические средства, например, ипратропий, атропин или окситропий; гормоны, например, кортизон, гидрокортизон или преднизолон; ксантины, например, аминофиллин, холина теофиллинат, лизина теофиллинат или теофиллин; и терапевтические белки и пептиды, например, инсулин или глюкагон. Специалисту в данной области техники будет очевидно, что там, где это целесообразно, лекарственные средства могут быть использованы в форме солей (например, в виде солей щелочных металлов или аминов или в виде солей присоединения кислоты) или в виде сложных эфиров (например, низших алкиловых эфиров) или в виде сольватов (например, гидратов) для оптимизации активности и/или стабильности лекарственного средства.
Другие типичные терапевтические агенты, полезные для комбинированной терапии, включают, но не ограничиваются этим, описанные выше агенты, лучевую терапию, антагонисты гормонов, гормоны и их рилизинг-факторы, тиреоидные и антитиреоидные лекарственные средства, эстрогены и прогестины, андрогены, адренокортикотропный гормон;
адренокортикостероиды и их синтетические аналоги; ингибиторы синтеза и действия гормонов коры надпочечников, инсулина, пероральных гипогликемических агентов и фармакологии эндокринного отдела поджелудочной железы; агенты, воздействующие на кальцификацию и ремоделирование кости: кальций, фосфат, гормон паращитовидной железы, витамин D, кальцитонин, витамины, такие как водорастворимые витамины, комплекс витаминов B, аскорбиновая кислота, жирорастворимые витамины, витамины A, K и E, ростовые факторы, цитокины, хемокины, агонисты и антагонисты мускариновых рецепторов; антихолинэстеразные агенты; агенты, действующие на нервно-мышечный синапс и/или вегетативный ганглий; катехоламины, симпатомиметические лекарственные средства и агонисты или антагонисты адренергического рецептора; и агонисты и антагонисты рецептора 5-гидрокситриптамина (5-НТ, серотонина).
Терапевтические агенты также могут включать агенты против боли и воспаления, такие как гистамин и антагонисты гистамина, брадикинин и антагонисты брадикинина, 5-гидрокситриптамин (серотонин), липидные вещества, созданные путем биотрансформации продуктов селективного гидролиза мембранных фосфолипидов, эйкозаноиды, простагландины, тромбоксаны, лейкотриены, аспирин, нестероидные противовоспалительные агенты, болеутоляющие-жаропонижающие средства, агенты, ингибирующие синтез простагландинов и тромбоксанов, селективные ингибиторы индуцибельной циклооксигеназы, селективные ингибиторы индуцибельной циклооксигеназы-2, аутакоиды, гормоны паракринного действия, соматостатин, гастрин, цитокины, опосредующие взаимодействия, вовлеченные в гуморальный и клеточный иммунные ответы, аутакоиды липидов, эйкозаноиды, β-адренергические агонисты, ипратропий, глюкокортикоиды, метилксантины, блокаторы натриевых каналов, агонисты опиоидных рецепторов, блокаторы кальциевых каналов, стабилизаторы мембран и ингибиторы лейкотриенов.
Дополнительные терапевтические агенты, рассматриваемые в данной заявке, включают диуретики, вазопрессин, агенты, воздействующие на удержание воды почками, реннин, ангиотензин, агенты, полезные в лечении ишемии миокарда, антигипертензивные агенты, ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента, антагонисты β-адренергического рецептора, агенты для лечения гиперхолестеринемии и агенты для лечения дислипидемии.
Другие рассматриваемые терапевтические агенты включают лекарственные средства, используемые для регуляции кислотности желудочно-кишечного тракта, средства для лечения пептических язв, средства для лечения гастроэзофагеальной рефлюксной болезни, прокинетические агенты, противорвотные средства, средства, применяемые при синдроме раздраженного кишечника, средства, применяемые при диарее, средства, применяемые при запоре, средства, применяемые при воспалительном заболевании кишечника, средства, применяемые при заболевании желчевыводящих путей, средства, применяемые при заболевании поджелудочной железы. Терапевтические агенты, используемые для лечения протозойных инфекций, лекарственные средства, используемые для лечения малярии, амебиаза, лямблиоза, трихомоноза, трипаносомоза и/или лейшманиоза, и/или лекарственные средства, используемые в химиотерапии гельминтоза. Другие терапевтические агенты включают антимикробные агенты, сульфонамиды, триметоприм-сульфаметоксазол хинолоны и агенты для инфекций мочевыводящих путей, пенициллины, цефалоспорины и другие, β-лактамные антибиотики, агент, содержащий аминогликозид, ингибиторы синтеза белка, лекарственные средства, используемые в химиотерапии туберкулеза, комплексного заболевания, вызванного Mycobacterium avium, и лепры, противогрибковые агенты, противовирусные агенты, в том числе неретровирусные агенты и противоретровирусные агенты.
Примеры терапевтических антител, которые могут быть объединены с соединением, являющимся объектом изобретения, включают, но не ограничиваются этим, антитела против рецепторных тирозинкиназ (цетуксимаб, панитумумаб, трастузумаб), антитела против CD20 (кластер дифференцировки 20) (ритуксимаб, тозитумомаб) и другие антитела, такие как алемтузумаб, бевацизумаб и гемтузумаб.
Кроме того, в способах, изложенных в данной заявке, предусматриваются терапевтические агенты, используемые для иммуномодуляции, как например, иммуномодуляторы, иммуносупрессивные агенты, толерогены и иммуностимуляторы. Помимо этого, терапевтические агенты, воздействующие на кровь и органы кроветворения, гематопоэтические агенты, ростовые факторы, минералы и витамины, антикоагулянтные, тромболитические и антитромбоцитарные лекарственные средства.
Дополнительные терапевтические агенты, которые могут быть объединены с соединением, являющимся объектом изобретения, можно найти в книге Goodman и Gilman "The Pharmacological Basis of Therapeutics", десятое издание, под редакцией Hardman, Limbird и Gilman, или в Настольном справочнике врача (Physician's Desk Reference); и то и другое включено в данное описание во всей своей полноте посредством ссылки.
Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть использованы в комбинации с агентами, изложенными в данной заявке, или другими подходящими агентами в зависимости от подвергаемого лечению состояния. Другими словами, в некоторых воплощениях соединения по изобретению будут введены вместе с другими агентами, как описано выше. При использовании в комбинированной терапии соединения, изложенные в данной заявке, могут быть введены вместе со вторым агентом одновременно или по отдельности. Такое введение в комбинации может включать одновременное введение двух агентов в одной и той же лекарственной форме, одновременное введение в отдельных лекарственных формах и раздельное введение. То есть, соединение, изложенное в данной заявке, и любой из агентов, описанных выше, могут быть изготовлены вместе в одной и той же лекарственной форме и введены одновременно. Альтернативно, соединение по настоящему изобретению и любой из агентов, описанных выше, могут быть введены одновременно, при этом оба агента присутствуют в отдельных композициях. В другом альтернативном варианте за соединением по настоящему изобретению может быть сразу введен и любой из агентов, описанных выше, или наоборот. Согласно протоколу раздельного введения соединение по настоящему изобретению и любой из агентов, описанных выше, могут быть введены с интервалом в несколько минут, или с интервалом в несколько часов, или с интервалом в несколько суток.
Примеры и подготовительные примеры, представленные ниже, дополнительно иллюстрируют соединения по настоящему изобретению и способы получения таких соединений и приведены в качестве примера. Следует понимать, что объем настоящего изобретения никоим образом не ограничен объемом следующих далее примеров и подготовительных примеров. В следующих далее примерах молекулы с единственным хиральным центром, если не указано иное, существуют в виде рацемической смеси. Такие молекулы с двумя или более хиральными центрами, если не указано иное, существуют в виде рацемической смеси диастереомеров. Единичные энантиомеры/диастереомеры могут быть получены способами, известными специалистам в данной области техники.
ПРИМЕРЫ
Пример 1. Синтез 2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-5-метил-3-о-толилпиридо[2,3-d]пиримидин-4(3Н)-она (Соединение 1406).
Схема 14. Описан синтез 2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-5-метил-3-о-толилпиридо[2,3-d]пиримидин-4(3Н)-она (Соединение 1406).
К перемешиваемому раствору 4,4-диметокси-2-бутанона (101) (61 г; 85%; 0,393 моль), уксусной кислоты (2,2 мл; 0,038 ммоль) и пиперидина (3,8 мл; 0,038 моль) в толуоле (150 мл), порциями в течение 20 мин добавляли малононитрил (25 г; 0,394 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученный темно-красный раствор промывали H2O (50 мл), сушили над MgSO4 и концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 2-(4,4-диметоксибутан-2-илиден)малононитрил (102) (70 г; 99%), который использовали непосредственно на следующей стадии.
Газообразный аммиак барботировали через раствор 102 (32 г; 0,178 ммоль) в МеОН (500 мл) в течение 3 ч, полученный темно-красный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Смесь концентрировали и остаток распределяли между раствором HCl (2 н.; 600 мл) и EtOAc (600 мл). Водный слой отделяли и подщелачивали охлажденным на льду концентрированным раствором NaHCO3 (600 мл). Твердое вещество выпадало в осадок из раствора и его собирали фильтрованием, что позволило получить желаемый продукт 2-амино-4-метилникотинонитрил (103) (3,0 г; 33%).
Соединение 103 (5,32 г; 40 ммоль) суспендировали в растворе гидроксида калия (26,88 г; 480 ммоль) в воде (26,85 мл) и изопропаноле (9,6 мл). Реакционную смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение 50 ч, затем охлаждали до комнатной температуры, разбавляли смесью лед-вода (100 мл) и нейтрализовали концентрированным раствором HCl до pH 6-7. Смесь концентрировали в вакууме и полученный остаток очищали флэш-хроматографией, элюируя этанолом, что позволило получить желаемый продукт 2-амино-4-метилникотиновую кислоту (104) (3,284 г; 54,7%).
К перемешиваемому раствору соединения 104 (3,2 г; 21,2 ммоль) в DMF (40 мл) и DCM (80 мл) добавляли EDCl (8,12 г; 42,4 ммоль), HOBt (1-гидроксибензотриазол) (2,86 г; 21,4 ммоль) и о-Толуидин (4,53 мл; 42,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем выливали в воду (120 мл). Водную фазу экстрагировали DCM (60 мл × 2). Объединенные органические фазы промывали рассолом, сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Твердое вещество выпадало в осадок из раствора. Твердое вещество собирали фильтрованием и сушили, что позволило получить желаемый продукт 2-амино-4-метил-N-о-толилникотинамид (1401) (3,6 г; 70,4%).
К суспензии соединения 1401 (1,2 г; 4,96 ммоль) в безводном THF (60 мл) по каплям в атмосфере аргона добавляли бутиллитий (2,5 М; 2,38 мл; 5,96 ммоль) при -40°C и перемешивали при этой температуре в течение 1 ч. Затем реакционную смесь охлаждали до -78°C и добавляли хлорацетилхлорид (0,432 мл; 5,4 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч при -78°C реакционную смесь выливали в смесь лед-вода (100 мл). После удаления большей части THF в вакууме твердое вещество выпадало в осадок из раствора. Твердое вещество собирали фильтрованием и промывали эфиром, что позволило получить желаемый продукт 2-(2-хлорацетамидо)-4-метил-N-о-толилникотинамид (1402) (890 мг; 56,4%).
Смесь соединения 1402 (320 мг; 1 ммоль) и оксихлорида фосфора (20 мл; 214 ммоль) нагревали при 115°C в течение ночи в герметично закрытой пробирке. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Остаток выливали в смесь лед-вода и нейтрализовали насыщенным раствором NaHCO3 до pH 8-9, полученное выпавшее в осадок твердое вещество собирали фильтрованием и промывали эфиром, что позволило получить желаемый продукт 2-(хлорметил)-5-метил-3-о-толилпиридо[2,3-d]пиримидин-4(3Н)-он (1403) (200 мг; 66,8%).
К раствору 3-иод-4-амин-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидина (108А) (261 мг; 1,2 ммоль) в безводном DMF (9 мл) в атмосфере азота добавляли при 0°C трет-бутилат калия (123 мг; 1,1 ммоль). Полученную смесь перемешивали при этой температуре в течение 45 мин. Добавляли раствор соединения 1403 (300 мг; 1 ммоль) в безводном DMF (5 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°C и затем дополнительно в течение 1 ч при комнатной температуре. Смесь концентрировали в вакууме и полученный остаток очищали флэш-хроматографией, что позволило получить желаемый продукт 2-((4-амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-5-метил-3-о-толилпиридо[2,3-d]пиримидин-4(3Н)-он (1404) (450 мг; 83,3%).
К раствору соединения 1404 (36 мг; 0,069 ммоль) и 3-гидроксифенил-бороновой кислоты (1405) (12 мг; 0,083 ммоль) в DMF (2 мл), EtOH (1 мл) и воде (1 мл) добавляли в атмосфере аргона Pd(PPh3)4 (7 мг; 0,006 ммоль) и раствор Na2CO3 (1 М; 0,5 мл; 0,5 ммоль). Полученную смесь дегазировали и снова заполняли аргоном три раза, затем нагревали в течение ночи при 80°C. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры, концентрировали. Остаток разбавляли водой (20 мл), нейтрализовали раствором HCl (1 М) до pH 6-7 и экстрагировали DCM (10 мл × 3). Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Na2SO4 и концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией, что позволило получить желаемый продукт 2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-5-метил-3-о-толилпиридо[2,3-d]пиримидин-4(3Н)-он (1406) (8 мг; 23,7%).
Пример 2. Синтез 5-((4-амино-3-(3-фтор-4-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-1,3-диметил-6-о-толил-1Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-7(6Н)-она (Соединение 1511).
Схема 15. Описан синтез 5-((4-амино-3-(3-фтор-4-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-1,3-диметил-6-о-толил-1Н-пиразоло[4,3-d]пиримидин-7(6Н)-она (Соединение 1512).
Натрий (5,2 г; 0,226 моль) растворяли в безводном этаноле (120 мл). К указанному выше раствору добавляли смесь диэтилоксалата (1501) (31,8 мл; 0,235 моль) и ацетона (16,0 мл; 0,218 моль), поддерживая температуру ниже 10°C. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при КТ. Полученный осадок собирали фильтрованием, промывали петролейным эфиром (РЕ) и сушили, что позволило получить желаемый продукт 1502 в виде желтого твердого вещества (30,4 г; 77,5%).
Гидразина гидрат (9,7 мл; 85%; 0,200 моль) добавляли по каплям к уксусной кислоте (34 мл). К этому раствору при 25°C порциями добавляли соединение 1502 (30,4 г; 0,169 моль). Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, затем подщелачивали насыщенным раствором NaHCO3 до pH 8 и экстрагировали DCM (200 мл × 3). Объединенные органические фазы промывали рассолом, сушили и концентрировали, что позволило получить желаемый продукт, соединение 1503, в виде желтого твердого вещества (22 г; 84,6%).
Диметилсульфат (3,2 мл; 33,8 ммоль) по каплям добавляли к раствору соединения 1503 (4,2 г; 29,9 ммоль) в толуоле (20 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при 80°C, затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры и концентрировали. Добавляли к остатку 40%-ный раствор NaOH (15 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 1 ч при 80°C, затем охлаждали до комнатной температуры, разбавляли H2O (30 мл) и подкисляли концентрированным раствором HCl до pH 3-4. Выпавшее в осадок твердое вещество собирали фильтрованием, промывали холодной водой и сушили, что позволило получить желаемый продукт, соединение 1505, в виде беловатого твердого вещества (3,54 г; 84,4%).
К перемешиваемой смеси концентрированной H2SO4 (3,6 мл) и дымящей HNO3 (3,1 мл; 73,9 ммоль) добавляли кислоту 1505 (2,813 г; 20 ммоль) при 70-80°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 6 ч при 70°C, охлаждали до комнатной температуры и затем выливали в смесь льда с водой. Выпавшее в осадок твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и сушили, что позволило получить желаемый продукт, соединение 1506, в виде желтого твердого вещества (0,795 г; 21,5%).
Смесь соединения 1506 (1,508 г; 8,15 ммоль) и SOCl2 (6 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч, затем концентрировали для удаления SOCl2. Остаток растворяли в CH2Cl2 (8 мл). К этому раствору при 0°C добавляли Et3N (1,13 мл) и о-толуидин (1,12 г; 12,23 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч при 10°C, концентрировали и разбавляли водой. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и петролейным эфиром, сушили, что позволило получить желаемый продукт, соединение 1507, в виде желтого твердого вещества (1,74 г; 77,6%).
К перемешиваемой смеси соединения 1507 (1,73 г; 6,31 ммоль) в МеОН (100 мл) и THF (10 мл) добавляли 5% Pd/C (0,2 г). Смесь дегазировали и снова заполняли водородом три раза. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Твердое вещество сушили, что позволило получить желаемый продукт, соединение 1508, в виде твердого вещества бледной окраски (1,47 г; 95,4%).
Хлорацетилхлорид (1,44 мл; 1,99 ммоль) добавляли к раствору соединения 1508 (1,46 г; 5,98 ммоль) в уксусной кислоте (20 мл) и реакционную смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли в DCM (100 мл), промывали насыщенным раствором NaHCO3 и рассолом, сушили и концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией с элюированием петролейным эфиром в этилацетате (ЕА) (10/1), что позволило получить желаемый продукт, соединение 1509, в виде беловатого твердого вещества (0,48 г; 26,7%).
Раствор 3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина (108А) (311 мг; 1,19 ммоль) и K2CO3 (330 мг; 2,39 ммоль) в DMF (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, по каплям добавляли раствор соединения (1509) (180 мг; 1,15 ммоль; 1 экв.) в DMF (5 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч при 80°C. Реакционную смесь концентрировали в вакууме для удаления органического растворителя. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, что позволило получить желаемый продукт, соединение 1509, (142 мг; выход 44,9%) в виде бледно-желтого твердого вещества.
Соединение 1510 (40 мг; 0,076 ммоль), Na2CO3 (40 мг; 0,38 ммоль), Pd(PPh3)4 (17,6 мг; 0,015 ммоль) и 3-фтор-4-гидроксифенилбороновую кислоту (15,8 мг; 0,101 ммоль) растворяли в растворе DMF, этанола и воды (4 мл/2 мл/2 мл). Полученную смесь дегазировали, снова заполняли аргоном три раза и затем нагревали до 80°C в течение 4 ч при перемешивании. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, нейтрализовали 1 н. раствором HCl до pH 7, концентрировали в вакууме и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией с элюированием смесью DCM/MeOH (50/1), что позволило получить желаемый продукт 1511 (32 мг; 82%).
Пример 3. Синтез 3-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 1610) (способ А).
Схема 16. Описан синтез 3-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 1610) способом А.
Раствор 2-амино-6-метилбензойной кислоты (104) (106,5 г; 705 ммоль) в H2O (200 мл) охлаждали до 0-5°C, медленно добавляли концентрированную HCl (250 мл). Раствор перемешивали в течение 15 мин при 0-5°C. По каплям при 0-5°C добавляли раствор нитрита натрия (58,4 г; 6,85 моль) в H2O (120 мл) и полученную смесь перемешивали в течение 30 мин. Затем указанный выше раствор добавляли к раствору KI (351 г; 2,11 моль) в H2O (200 мл) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 16 ч. Раствор выливали в ледяную воду (2000 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×1000 мл). Объединенный органический слой промывали водным NaOH (15%, 3×200 мл). Водный слой подкисляли до рН 1 и экстрагировали этилацетатом (3×1000 мл). Объединенные органические слои сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 2-иод-6-метилбензойную кислоту (901) (145 г; выход 79%) в виде желтого твердого вещества.
К перемешиваемой смеси 2-иод-6-метилбензойной кислоты (901) (105 г; 400 ммоль), Pd(OAc)2 (27 г; 120 ммоль) и PPh3 (63 г; 240 моль) в THF (1000 мл) при КТ добавляли трибутил(винил)олово (152 г; 480 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение ночи. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, фильтровали через силикагель (10 г) и затем концентрировали в вакууме. Остаток выливали в ледяную воду (1000 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×1000 мл). Объединенный органический слой промывали водным NaOH (15%, 5×200 мл). Объединенный водный слой подкисляли до рН 1, экстрагировали этилацетатом (3×1000 мл). Объединенный органический слой сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 2-метил-6-винилбензойную кислоту (902) (61 г; выход 95%) в виде желтого твердого вещества.
Смесь 2-метил-6-винилбензойной кислоты (902) (56 г; 350 ммоль) и тионилхлорида (208 г; 1750 ммоль) в толуоле (400 мл) перемешивали при температуре дефлегмации в течение 2 ч. Смесь концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 2-метил-6-винилбензоилхлорид (1601) (63 г; выход 95%) в виде желтого масла. Полученный продукт использовали непосредственно на следующей стадии без очистки.
Смесь о-толуидина (45 г; 420 ммоль) и триэтиламина (71 г; 70 ммоль) в CH2Cl2 (300 мл) перемешивали в течение 10 мин при КТ. К этой смеси добавляли 2-метил-6-винилбензоилхлорид (1601) (63 г; 35 ммоль) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. Раствор выливали в воду (300 мл), экстрагировали CH2Cl2 (3×200 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, что позволило получить неочищенный продукт. Неочищенный продукт суспендировали в IPE (изопропиловый эфир) (300 мл), перемешивали при температуре дефлегмации в течение 30 мин и затем охлаждали до 0-5°C.Осадок собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 2-метил-N-о-толил-6-винилбензамид (1602) (81 г; выход 80%) в виде желтого твердого вещества.
К раствору 2-метил-N-о-толил-6-винилбензамида (1602) (80 г; 320 ммоль) в DMF (250 мл) при КТ медленно добавляли NaH (60%-ный в минеральном масле; 25,6 г; 640 ммоль) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. К этой смеси добавляли этилхлорацетат (78 г; 640 ммоль) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 2 ч. Раствор выливали в воду (500 мл), экстрагировали этилацетатом (3×200 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт суспендировали в МеОН (160 мл), перемешивали при температуре дефлегмации в течение 10 мин и затем охлаждали до 0-5°C. Осадок собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт этил-2-(2-метил-N-о-толил-6-винилбензамидо)ацетат (1603) (67 г; выход 62%) в виде белого твердого вещества.
К перемешиваемой смеси этил-2-(2-метил-N-о-толил-6-винилбензамидо)ацетата (1603) (67 г; 200 ммоль) в 1,4-диоксане (300 мл) и H2O (100 мл) при КТ добавляли тетроксид осмия (20 мг) и перемешивали при КТ в течение 30 мин. К этой смеси добавляли периодат натрия (86 г; 400 ммоль) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 16 ч. Реакционную смесь фильтровали через силикагель (10 г), фильтрат экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом (100 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт этил-2-(2-формил-6-метил-N-о-толилбензамидо)ацетат (1604) (38 г; выход 57%) в виде желтого твердого вещества.
К перемешиваемому раствору этил-2-(2-формил-6-метил-N-о-толилбензамидо)ацетата (1604) (38 г; 112 ммоль) в ЕtOН (200 мл) и этилацетате (100 мл) при КТ добавляли карбонат цезия (22 г; 112 ммоль). Полученную смесь дегазировали, снова заполняли аргоном три раза и затем перемешивали при 50°C в течение 5 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, фильтровали через силикагель (10 г) и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток выливали в H2O (200 мл), экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт суспендировали в IPE (120 мл), нагревали до температуры дефлегмации в течение 10 мин и затем охлаждали до 0-5°C. Осадок собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт этил-8-метил-1-оксо-2-о-толил-1,2-дигидроизохинолин-3-карбоксилат (1605) (28 г; выход 77%) в виде белого твердого вещества.
К перемешиваемому раствору алюмогидрида лития (8,28 г; 218 моль) в безводном THF (500 мл) при -78°C в атмосфере азота медленно в течение 10 мин добавляли этил-8-метил-1-оксо-2-о-толил-1,2-дигидроизохинолин-3-карбоксилат (1605) (28 г; 87 ммоль). Полученную смесь оставляли нагреваться до -30°C, перемешивали в течение 30 мин, и данные ТСХ показали, что реакция завершена. Затем смесь охлаждали до -78°C и медленно добавляли воду (50 мл). Смесь оставляли нагреваться до КТ, фильтровали через силикагель (10 г) и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт выливали в H2O (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт суспендировали в этилацетате (30 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Твердое вещество собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 3-(гидроксиметил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1606) (22 г; выход 92%) в виде белого твердого вещества.
PBr3 (25,6 г; 95 ммоль) медленно добавляли к перемешиваемому раствору DMF (11,5 г; 158 моль) в ацетонитриле (200 мл) при 0°C и полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин. Медленно добавляли 3-(гидроксиметил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1-(2Н)-он (1606) (22 г; 78,8 ммоль). Затем реакционную смесь оставляли нагреваться до КТ и перемешивали в течение 30 мин. Медленно добавляли насыщенный водный раствор NaHCO3 (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом, сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт суспендировали в IPE (50 мл) и затем перемешивали в течение 10 мин. Осадок собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 3-(бромметил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1607) (21 г; выход 80%) в виде белого твердого вещества.
3-Иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин (108А) (10,8 г; 41,4 ммоль) и трет-бутилат калия (4,4 г; 40 ммоль) растворяли в безводном DMF (150 мл) и перемешивали при КТ в течение 30 мин. Добавляли 3-(бромметил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1607) (13,7 г; 40 ммоль). Полученную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин, выливали в ледяную воду (300 мл) и затем экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали примерно до 100 мл в вакууме, осадок собирали фильтрованием, что позволило получить первую партию желаемого продукта 3-((4-амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (1608) (12 г; выход 60%) в виде белого твердого вещества. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (2-20% MeOH/DCM), что позволило получить вторую партию желаемого продукта 3-((4-амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (1608) (6 г; выход 30%) в виде белого твердого вещества.
3-((4-Амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1608) (13 г; 24,9 ммоль) и 3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенол (1609) (6,6 г; 30 ммоль) растворяли в DMF-EtOH-H2O (120 мл; 40 мл; 40 мл). Последовательно добавляли Pd(OAc)2 (1,684 г; 7,5 ммоль), PPh3 (3,935 г; 15 ммоль) и Na2CO3 (13,25 г; 125 ммоль). Полученную смесь дегазировали, снова заполняли аргоном три раза и затем перемешивали при 100°C в течение 1 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, фильтровали через силикагель (10 г) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (2-20% MeOH/DCM), что позволило получить продукт (1610) (9 г; выход 76%) в виде светло-желтого твердого вещества. Затем указанный выше продукт суспендировали в EtOH (100 мл) и нагревали до температуры дефлегмации в течение 30 мин. Смесь оставляли охлаждаться до КТ и твердое вещество собирали фильтрованием. Твердое вещество затем суспендировали в ЕА (этилацетате) (100 мл) и перемешивали в течение ночи. Осадок собирали фильтрованием затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 3-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1610) (8,4 г; выход 69%) в виде белого твердого вещества.
Пример 4. Синтез 3-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 1610) (способ В).
Схема 17. Описан синтез 3-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 1610) способом В.
3-(3-Метоксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин (1701) (964 мг; 4 ммоль) и трет-бутилат калия (0,44 г; 4 ммоль) растворяли в безводном DMF (150 мл) и перемешивали при КТ в течение 30 мин. Добавляли 3-(бромметил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1607) (1,37 г; 4,0 ммоль). Полученную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин, выливали в ледяную воду (30 мл) и затем экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (25 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (2-20% MeOH/DCM), что позволило получить желаемый продукт 3-((4-амино-3-(3-метоксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1702) (1,4 г; выход 70%) в виде белого твердого вещества.
К раствору 3-((4-амино-3-(3-метоксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (1702) (100 мг; 0,2 ммоль) в CH2Cl2 (20 мл) при -78°C в атмосфере азота добавляли BBr3 (1 мл) и полученную смесь перемешивали при -78°C в течение 3 ч. Смесь оставляли нагреваться до КТ, выливали в смесь лед-вода (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (20 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (10-50% МеОН/CH2Cl2), что позволило получить желаемый продукт 3-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1610) (87 мг; выход 91%) в виде белого твердого вещества.
Пример 5. Синтез (R)-3-((4-амино-3-(3-гидроксибут-1-инил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 1802).
Схема 18. Описан синтез (R)-3-((4-амино-3-(3-гидроксибут-1-инил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 1802).
3-((4-Амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1608) (522 мг; 1 ммоль) и (R)-бут-3-ин-2-ол(84 мг; 1,2 ммоль) растворяли в безводном THF (40 мл). Смесь дегазировали и снова заполняли азотом три раза. Последовательно добавляли Pd(PPh3)2Cl2 (12 мг; 0,1 ммоль), CuI (47 мг; 0,25 ммоль) и (изо-Pr)2NH (505 мг; 5 ммоль). Полученную смесь дегазировали, снова заполняли аргоном три раза и затем перемешивали при температуре дефлегмации в течение 4 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, фильтровали через силикагель (10 г) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (2-20% MeOH/DCM), что позволило получить продукт 3(R)-3-((4-амино-3-(3-гидроксибут-1-инил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1802) (324 мг; выход 70%) в виде светло-желтого твердого вещества.
Пример 6. Синтез 3-((6-амино-9Н-пурин-9-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 1902).
Схема 19. Описан синтез 3-((6-амино-9Н-пурин-9-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 1902).
9Н-Пурин-6-амин (1901) (540 мг; 4,0 ммоль) растворяли в безводном DMF (20 мл). Добавляли NaH (60% в минеральном масле; 160 мг; 4,0 ммоль) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. Добавляли 3-(бромметил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1607) (1,37 г; 4,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин, выливали в смесь лед-вода (30 мл) и затем экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (25 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (2-20% MeOH/DCM), что позволило получить желаемый продукт 3-((6-амино-9Н-пурин-9-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (1902) (1,1 г; выход 70%) в виде белого твердого вещества.
Пример 7. Синтез 3-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-2-изопропил-8-метилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 2009).
Схема 20. Описан синтез 3-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-2-изопропил-8-метилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 2009).
К перемешиваемой смеси 2-иод-6-метилбензойной кислоты (901) (105 г; 400 ммоль), Pd(OAc)2 (27 г; 120 ммоль) и PPh3 (63 г; 240 моль) в THF (1000 мл) при КТ добавляли трибутил(винил)олово (152 г; 480 ммоль). Полученную смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение ночи. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, фильтровали через силикагель (10 г) и затем концентрировали в вакууме. Остаток выливали в ледяную воду (1000 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×1000 мл). Объединенный органический слой промывали водным NaOH (15%; 5×200 мл). Объединенный водный слой подкисляли до pH 1, экстрагировали этилацетатом (3×1000 мл). Объединенный органический слой сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 2-метил-6-винилбензойную кислоту (902) (61 г; выход 95%) в виде желтого твердого вещества.
Смесь 2-метил-6-винилбензойной кислоты (902) (56 г; 350 ммоль) и тионилхлорида (208 г; 1750 ммоль) в толуоле (400 мл) перемешивали при температуре дефлегмации в течение 2 ч. Смесь концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 2-метил-6-винилбензоилхлорид (1601) (63 г; выход 95%) в виде желтого масла. Полученный продукт использовали непосредственно на следующей стадии без очистки.
Пропан-2-амин (2001) (59 г; 1,0 моль) и этилхлорацетат (122 г; 1,0 моль) растворяли в толуоле (200 мл) и смесь перемешивали при температуре дефлегмации в течение 2 ч. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до КТ, выливали в смесь лед-вода (500 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×250 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (10-50% ЕА/РЕ), что позволило получить продукт этил-2-(изопропиламино)ацетат (2002) (70 г; выход 51%) в виде масла.
Этил-2-(изопропиламино)ацетат (2002) (14,5 г; 100 ммоль) и триэтиламин (200 г; 200 ммоль) растворяли в CH2Cl2 (300 мл) и смесь перемешивали в течение 10 мин при КТ. Добавляли 2-метил-6-винилбензоилхлорид (1601) (18 г; 100 ммоль) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. Реакционную смесь выливали в воду (300 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (3×200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, что позволило получить неочищенный продукт. Неочищенный продукт суспендировали в IPE (изопропиловый эфир) (300 мл), перемешивали при температуре дефлегмации в течение 30 мин и затем охлаждали до 0-5°C. Осадок собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт этил-2-(N-изопропил-2-метил-6-винилбензамидо)-ацетат (2003) (14,5 г; выход 50%) в виде желтого твердого вещества.
К перемешиваемому раствору этил-2-(N-изопропил-2-метил-6-винилбензамидо)ацетата (2003) (14,0 г; 48,0 ммоль) в 1,4-диоксане (100 мл) и H2O (30 мл) добавляли тетроксид осмия (20 мг) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. К этой смеси добавляли периодат натрия (22 г; 100 ммоль) и затем перемешивали при КТ в течение 16 ч. Реакционную смесь фильтровали через силикагель (10 г), фильтрат экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт этил-2-(2-формил-N-изопропил-6-метилбензамидо)ацетат (2004) (8,33 г; выход 57%) в виде желтого твердого вещества.
К перемешиваемому раствору этил-2-(2-формил-N-изопропил-6-метилбензамидо)ацетата (2004) (8,3 г; 28,0 ммоль) в EtOH (100 мл) и этилацетате (50 мл) при КТ добавляли карбонат цезия (5,9 г; 30 ммоль). Полученную смесь дегазировали, снова заполняли аргоном три раза и затем перемешивали при 50°C в течение 5 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, фильтровали через силикагель (10 г) и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток выливали в H2O (200 мл), экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт суспендировали в IPE (120 мл), перемешивали при температуре дефлегмации в течение 10 мин и затем охлаждали до 0-5°C. Осадок собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт этил-2-изопропил-8-метил-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-3-карбоксилат (2005) (5,35 г; выход 70%) в виде белого твердого вещества.
К перемешиваемому раствору алюмогидрида лития (2,88 г; 76 моль) в безводном THF (200 мл) при -78°C медленно в течение 10 мин в атмосфере азота добавляли этил-2-изопропил-8-метил-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-3-карбоксилат (2005) (5,2 г; 19 ммоль). Полученную смесь оставляли нагреваться до -30°C, перемешивали в течение 30 мин, и данные ТСХ показали, что реакция завершена. Затем смесь охлаждали до -78°C медленно добавляли воду (50 мл). Смесь оставляли нагреваться до КТ, фильтровали через силикагель (10 г) и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт выливали в НгО (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт суспендировали в этилацетате (30 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Твердое вещество собирали фильтрованием, затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 3-(гидроксиметил)-2-изопропил-8-метилизохинолин-1(2Н)-он (2006) (3,51 г; выход 80%) в виде белого твердого вещества.
К раствору 3-(гидроксиметил)-2-изопропил-8-метилизохинолин-1 (2Н)-она (2006) (1,61 г; 7,0 ммоль) в CH2Cl2, добавляли PPh3 (3,67 г; 14,0 ммоль) и смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. Смесь охлаждали до 0°C и порциями добавляли CBr4 (4,64 г; 14,0 ммоль). Полученную смесь перемешивали при температуре от 0°C до КТ в течение 30 мин и затем концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (30-50% ЕА/РЕ), что позволило получить желаемый продукт 3-(бромметил)-2-изопропил-8-метилизохинолин-1(2Н)-он (2007) (1,65 г; выход 80%) в виде белого твердого вещества.
Смесь 3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина (108А) (1,3 г; 5 ммоль) и трет-бутилата калия (0,55 г; 5 ммоль) в безводном DMF (20 мл) перемешивали при КТ в течение 30 мин и затем добавляли 3-(бромметил)-2-изопропил-8-метилизохинолин-1(2Н)-он (2007) (1,47 г; 5 ммоль). Полученную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин, выливали в смесь лед-вода (30 мл) и затем экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (25 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (2-20% MeOH/DCM), что позволило получить желаемый продукт 3-((4-амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1 -ил)метил)-2-изопропил-8-метил изохинол ин-1(2Н)-он (2008) (1,66 г; выход 70%) в виде белого твердого вещества.
К перемешиваемой смеси 3-((4-амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-2-изопропил-8-метилизохинолин-1(2Н)-она (2008) (95 мг; 0,2 ммоль) и 3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенола (66 мг; 0,3 ммоль) в смеси DMF-EtOH-H2O (3:1:1; 20 мл) последовательно добавляли Pd(OAc)2 (16 мг; 0,075 ммоль), РРпз (39,3 мг; 0,15 ммоль) и Na2CO3 (132 мг; 1,25 ммоль). Полученную смесь дегазировали, снова заполняли аргоном три раза и затем перемешивали при 100°C в течение 1 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, фильтровали через силикагель (10 г) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (2-20% MeOH/DCM), что позволило получить продукт 3-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-2-изопропил-8-метилизохинолин-1(2Н)-он (2009) (53 мг; выход 61%) в виде светло-желтого твердого вещества.
Пример 8. Синтез 7-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-4-метил-6-о-толил-1,6-нафтиридин-5(6Н)-она (Соединение 2115).
Схема 21. Описан синтез 7-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-4-метил-6-о-толил-1,6-нафтиридин-5(6Н)-она (Соединение 2115).
К смеси этил-2-цианоацетата (2101) (45,2 г; 400 ммоль) и ацетона (46,4 г; 800 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (50 мл) добавляли пиперидин (2 мл; 20 ммоль) и полученную смесь перемешивали при температуре дефлегмации в течение 24 ч. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до КТ и затем концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли водой (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (0-2% ЕА/РЕ), что позволило получить желаемый продукт этил-2-циано-3-метилбут-2-еноат (2102) (49,6 г; выход 81%) в виде белого твердого вещества.
К раствору этил-2-циано-3-метилбут-2-еноата (2102) (43,6 г; 285 моль) в абсолютном EtOH (300 мл) по каплям добавляли диметилацеталь N,N-диметилформамида (37,3 г; 313 ммоль) и полученную смесь перемешивали при температуре дефлегмации в течение 6 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, концентрировали в вакууме, что позволило получить неочищенный желаемый продукт этил-2-циано-5-(диметиламино)-3-метилпента-2,4-диеноат (2103) (39,8 г; выход 67%) в виде желтого твердого вещества.
Этил-2-циано-5-(диметиламино)-3-метилпента-2,4-диеноат (2103) (30,8 г; 148 ммоль) растворяли в АсОН (120 мл) и смесь перемешивали при 40°C. По каплям добавляли раствор 45% HBr-AcOH (120 мл) и затем смесь перемешивали при 55°C в течение 2 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, выливали на лед, нейтрализовали твердым Na2CO3 и экстрагировали этилацетатом (3×150 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (50 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (5-20% ЕА/РЕ), что позволило получить желаемый продукт этил-2-бром-4-метилникотинат (2104) (17,6 г; выход 49%) в виде желтого масла.
К раствору этил-2-бром-4-метилникотината (2104) (12,8 г; 52 ммоль) в 1,4-диоксане (15 мл) добавляли раствор NaOH (8,0 г; 200 ммоль) в H2O (15 мл) и полученную смесь перемешивали при температуре дефлегмации в течение 12 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, разбавляли H2O, промывали этилацетатом (3×30 мл). Водный слой подкисляли концентрированной соляной кислотой до pH 1 и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (25 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 2-бром-4-метилникотиновую кислоту (2105) (9,7 г; выход 85%) в виде белого твердого вещества.
К раствору 2-бром-4-метилникотиновой кислоты (2105) (13 г; 60 ммоль) и DMF (3 капли) в CH2Cl2 (150 мл) по каплям добавляли оксалилхлорид (11,4 г; 90 ммоль) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 2-бром-4-метилникотиноилхлорид (2106) (13,4 г; выход 95%) в виде желтого масла. Полученный продукт использовали непосредственно на следующей стадии без дальнейшей очистки.
о-Толуидин (7,7 г; 72 ммоль) и триэтиламин (9,1 г; 90 ммоль) растворяли в CH2Cl2 (100 мл) и перемешивали в течение 10 мин при КТ. Добавляли 2-бром-4-метилникотиноилхлорид (2106) (13,4 г; 57 ммоль) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 1 ч. Смесь выливали в воду (200 мл) и экстрагировали CH2Cl2 (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (20 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, что позволило получить неочищенный продукт. Неочищенный продукт суспендировали в IPE (изопропиловый эфир) (50 мл). Смесь перемешивали при температуре дефлегмации в течение 30 мин и затем охлаждали до 0-5°C. Осадок собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 2-бром-4-метил-N-о-толилникотинамид (2107) (13 г; выход 75%) в виде желтого твердого вещества.
К раствору 2-бром-4-метил-N-о-толилникотинамида (2107) (13 г; 43 ммоль) и трибутил(винил)олова (16,4 г; 52 ммоль) в THF (200 мл) в атмосфере азота добавляли Pd(OAc)2 (2,9 г; 13 ммоль) и PPh3 (6,8 г; 26 моль). Полученную смесь перемешивали при температуре дефлегмации в течение 16 ч. Затем смесь оставляли охлаждаться до КТ, фильтровали через силикагель (10 г) и концентрировали в вакууме. Остаток выливали в воду (200 мл), экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (30 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (20-50% ЕА/РЕ), что позволило получить желаемый продукт 4-метил-N-о-толил-2-винилникотинамид (2108) (8,7 г; выход 80%) в виде желтого твердого вещества.
К перемешиваемому раствору 4-метил-N-о-толил-2-винилникотинамида (2108) (8,1 г; 32 ммоль) в DMF (50 мл) при КТ медленно добавляли NaH (60% в минеральном масле; 2,6 г; 65 ммоль) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. К этой смеси по каплям добавляли этилхлорацетат (78 г; 640 ммоль) при КТ и перемешивали в течение 2 ч. Раствор выливали в воду (300 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×80 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (25 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт суспендировали в МеОН (60 мл) и перемешивали при температуре дефлегмации в течение 10 мин. Затем смесь охлаждали до 0-5°C. Осадок собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт этил-2-(4-метил-N-о-толил-2-винилникотинамидо)ацетат (2109) (6,3 г; выход 58%) в виде белого твердого вещества.
К раствору этил-2-(4-метил-N-о-толил-2-винилникотинамидо)ацетата (2109) (6,1 г; 18 ммоль) в 1,4-диоксане (90 мл) и H2O (30 мл) при КТ добавляли тетроксид осмия (5 мг) и полученную смесь перемешивали в течение 30 мин. Добавляли периодат натрия (7,7 г; 36 ммоль) и смесь перемешивали при КТ в течение 16 ч. Смесь фильтровали через силикагель (5 г) и фильтрат экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (25 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток дополнительно сушили при пониженном давлении, что позволило получить желаемый продукт этил-2-(2-формил-4-метил-N-о-толилникотинамидо)ацетат (2110) (4,4 г; выход 72%) в виде желтого твердого вещества.
К перемешиваемому раствору этил-2-(2-формил-4-метил-N-о-толилникотинамидо)ацетата (2110) (4,4 г; 13 ммоль) в EtOH (30 мл) и этилацетате (10 мл) при КТ добавляли карбонат цезия (4,3 г; 13 ммоль). Полученную смесь дегазировали, снова заполняли аргоном три раза и затем перемешивали при 50°C в течение 5 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, фильтровали через силикагель (5 г) и фильтрат концентрировали в вакууме. Остаток выливали в H2O (200 мл), экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт суспендировали в IPE (30 мл), перемешивали при температуре дефлегмации в течение 10 мин и затем охлаждали до 0-5°C. Осадок собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт этил-4-метил-5-оксо-6-о-толил-5,6-дигидро-1,6-нафтиридин-7-карбоксилат (2111) (3,0 г; выход 72%) в виде белого твердого вещества.
К перемешиваемому раствору алюмогидрида лития (0,86 г; 23 моль) в безводном THF (100 мл) при -78°C в атмосфере азота по каплям добавляли раствор этил-4-метил-5-оксо-6-о-толил-5,6-дигидро-1,6-нафтиридин-7-карбоксилата (2111) (2,9 г; 9,0 ммоль) в безводном THF (20 мл). Полученную смесь оставляли нагреваться до -10°C, перемешивали в течение 30 мин, и данные ТСХ показали, что реакция завершена. Затем смесь охлаждали до -78°C и медленно добавляли воду (50 мл). Смесь оставляли нагреваться до КТ, фильтровали через силикагель (5 г) и фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт выливали в H2O (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (25 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт суспендировали в этилацетате (10 мл) и перемешивали в течение 10 мин. Твердое вещество собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 7-(гидроксиметил)-4-метил-6-о-толил-1,6-нафтиридин-5(6Н)-он (2112) (2,1 г; выход 83%) в виде белого твердого вещества.
К раствору 7-(гидроксиметил)-4-метил-6-о-толил-1,6-нафтиридин-5(6Н)-она (2112) (1,96 г; 7,0 ммоль) в CH2Cl2 добавляли PPh3 (3,67 г; 14,0 ммоль) и перемешивали при КТ в течение 30 мин. К смеси порциями добавляли CBr4 (4,64 г; 14,0 ммоль) при 0°C. Полученную смесь оставляли нагреваться до КТ, перемешивали в течение 30 мин и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (30-50% ЕА/РЕ), что позволило получить желаемый продукт 7-(бромметил)-4-метил-6-о-толил-1,6- нафтиридин-5(6Н)-он (2113) (1,92 г; выход 80%) в виде белого твердого вещества.
Смесь 3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина (108А) (1,08 г; 4,14 ммоль) и трет-бутилата калия (0,44 г; 4,0 ммоль) в безводном DMF (50 мл) перемешивали при КТ в течение 30 мин и затем добавляли 7-(бромметил)-4-метил-6-о-толил-1,6-нафтиридин-5(6Н)-он (2113) (1,37 г; 4,0 ммоль). Полученную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин, выливали в ледяную воду (300 мл) и затем экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (30 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (0-2% MeOH/DCM), что позволило получить желаемый продукт 7-((4-амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-4-метил-6-о-толил-1,6-нафтиридин-5(6Н)-он (2114) (1,07 г; выход 50%) в виде белого твердого вещества.
К перемешиваемой смеси 7-((4-амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-4-метил-6-о-толил-1,6-нафтиридин-5(6Н)-она (2114) (1,05 г; 2,0 ммоль) и 3-гидроксифенилбороновой кислоты (0,33 г; 2,4 ммоль) в смеси DMF-EtOH-H2O (3:1:1, 50 мл) последовательно добавляли Pd(OAc)2 (0,14 г; 0,60 ммоль), PPh3 (0,31 г; 1,2 ммоль) и Na2CO3 (1,06 г; 10,0 ммоль). Полученную смесь дегазировали, снова заполняли аргоном три раза и затем перемешивали при 80°C в течение 1 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, фильтровали через силикагель (5 г) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (2-5% MeOH/DCM), что позволило получить желаемый продукт 7-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-4-метил-6-о-толил-1,6-нафтиридин-5(6Н)-он (2115) (0,68 г; выход 69%) в виде светло-желтого твердого вещества. Затем продукт растворяли в ЕtOН (5 мл) и перемешивали при температуре дефлегмации в течение 30 мин. Раствор оставляли охлаждаться до КТ и твердое вещество собирали фильтрованием. Твердое вещество затем суспендировали в этилацетате (5 мл) и перемешивали при КТ в течение 16 ч. Осадок собирали фильтрованием и затем сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 7-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-4-метил-6-о-толил-1,6-нафтиридин-5(6Н)-он (2115) (0,59 г; выход 60%) в виде белого твердого вещества.
Пример 9. 3-((4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толил-3,4-дигидроизохинолин-1(2Н)-он (Соединение 2208).
Схема 22. Описан 3-((4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толил-3,4-дигидроизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 2208).
2-Иод-6-метил-N-о-толилбензамид (2201) (1,5 г; 4,27 ммоль), полученный в результате взаимодействия соединения 902 и 2-метил-анилина и аллилтрибутилолова (2,10 г; 1,5 ммоль), растворяли в безводном DMF (12 мл). Раствор дегазировали и снова заполняли аргоном (три раза). Добавляли Pd(PPh3)4 (148 мг; 0,13 ммоль). Реакционную смесь дегазировали, снова заполняли аргоном (три раза) и затем перемешивали при 90°C в течение 16 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, распределяли между этилацетатом и H2O. Органический слой промывали рассолом, сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя EtOAc и гексанами, что позволило получить желаемый продукт 2-аллил-6-метил-N-о-толилбензамид (2202) (1,1 г; выход 95%).
2-Аллил-6-метил-N-о-толилбензамид (2202) (800 мг; 3,01 ммоль) растворяли в безводном дихлорметане (20 мл). Добавляли м-СРВА (мета-хлорпероксибензойную кислоту) (70%; 1,11 г; 4,52 ммоль) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 24 ч. Добавляли Na2SO3 (1,0 г) и перемешивали в течение 1 ч. Смесь распределяли между EtOAc и водой. Органический слой промывали рассолом, сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя EtOAc и гексанами, что позволило получить желаемый продукт 2-метил-6-(оксиран-2-илметил)-N-о-толилбензамид (2203) (660 мг; выход 83%).
2-Метил-6-(оксиран-2-илметил)-N-о-толилбензамид (2203) (860 мг; 3,06 ммоль) растворяли в безводном DMF (15 мл) и охлаждали до 0°C в атмосфере аргона. Порциями добавляли NaH (60%-ный в минеральном масле; 245 мг; 6,12 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 3 ч. Медленно добавляли H2O (30 мл) и смесь экстрагировали EtOAc (3×25 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом, сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя EtOAc и гексанами, что позволило получить желаемый продукт 3-(гидроксиметил)-8-метил-2-о-толил-3,4-дигидроизохинолин-1(2Н)-он (2204) (435 мг; выход 51%).
3-(Гидроксиметил)-8-метил-2-о-толил-3,4-дигидроизохинолин-1(2Н)-он (2204) (430 мг; 1,53 ммоль) растворяли в безводном дихлорметане (25 мл) и охлаждали до 0°C в атмосфере аргона. Последовательно добавляли PPh3 (600 мг; 2,29 ммоль) и CBr4 (761 мг; 2,29 ммоль) и полученную смесь перемешивали при температуре от 0°C до КТ в течение 16 ч. Реакционную смесь распределяли между EtOAc и водой. Органический слой промывали рассолом, сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя EtOAc и гексанами, что позволило получить желаемый продукт 3-(бромметил)-8-метил-2-о-толил-3,4-дигидроизохинолин-1(2Н)-он (2205) (480 мг; выход 91%).
3-(Бромметил)-8-метил-2-о-толил-3,4-дигидроизохинолин-1(2Н)-он (2205) (387 мг; 1,12 ммоль) и 3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин (108А) (440 мг; 1,69 ммоль) растворяли в безводном DMF (20 мл). Добавляли K2CO3 (309 мг; 2,24 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 50°C в течение 3 ч. Реакционную смесь распределяли между EtOAc и водой. Органический слой промывали рассолом, сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя метанолом и дихлорметаном, что позволило получить желаемый продукт 3-((4-амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толил-3,4-дигидроизохинолин-1(2Н)-он (2206) (100 мг; выход 17%).
3-((4-Амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толил-3,4-дигидроизохинолин-1(2Н)-он (2206) (100 мг; 0,11 ммоль) и 3-фтор-5-гидроксифенилбороновую кислоту (2207) (36 мг; 0,23 ммоль) растворяли в DME (4 мл). Раствор дегазировали и снова заполняли аргоном (три раза). Последовательно добавляли Pd(PPh3)4 (6,4 мг; 5,5 мкмоль) и водный раствор Na2CO3 (1,0 М; 0,44 мл; 0,44 ммоль). Реакционную смесь дегазировали, снова заполняли аргоном (три раза) и затем перемешивали при 80°C в течение 24 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ, распределяли между этилацетатом и рассолом. Органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя метанолом и дихлорметаном, что позволило получить желаемый продукт 3-((4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4 d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толил-3,4-дигидроизохинолин-1 (2Н)-он (2208) (12 мг; выход 22%).
Пример 10. Синтез 6-((4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-3-метил-5-о-толилизотиазоло[5,4-d]пиридин-4(5H)-она (Соединение 2313).
Схема 23. Описан синтез 6-((4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-3-метил-5-о-толилизотиазоло[5,4-d]пиримидин-4(5Н)-она (Соединение 2313).
Раствор соединения 2302 (24,9 г; 0,19 моль) в CH3CN (50 мл) добавляли к раствору соединения 2301 (30 г; 0,19 моль) при 0°C. Смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре и выливали в 500 мл воды. Реакционную смесь оставляли стоять в течение 1 ч. Твердое вещество выпадало в осадок из раствора, его собирали фильтрованием, промывали водой и сушили, что позволило получить желаемое соединение 2303 в виде красно-оранжевого твердого вещества (50 г; 85,5%).
К раствору соединения 2303 (54 г; 0,175 моль) в этилацетате (200 мл) по каплям при комнатной температуре добавляли раствор Br2 (56 г; 0,35 моль) в этилацетате (50 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали этилацетатом, что позволило получить желаемый продукт, соединение 2304 (40 г; 74,6%).
Смесь соединения 2304 (40 г; 0,13 моль) и насыщенного раствора Na2CO3 (10 мл) в DMF (100 мл) нагревали в течение 5 ч при 80°C.Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли 1 л воды. Твердое вещество собирали фильтрованием и сушили, что позволило получить желаемый продукт, соединение 2305 (16 г; 66%).
Смесь соединения 2305 (16 г; 0,086 моль) и NaOH (6,88 г; 0,172 моль) в воде (50 мл) нагревали в течение 4 ч при температуре дефлегмации. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и подкисляли 1 н. раствором HCl до pH 3-4. Твердое вещество собирали фильтрованием и сушили, что позволило получить желаемый продукт, соединение 2306 (12 г; 88%).
Смесь соединения 2306 (1 г; 0,0063 моль) в SOCl2 (15 мл) перемешивали в течение 5 ч при температуре дефлегмации, реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали для удаления избытка SOCl2. К остатку добавляли безводный толуол (30 мл) и концентрировали. Этот процесс повторяли дважды для удаления остатка SOCl2.
Неочищенное соединение 2307 растворяли в безводном толуоле (5 мл). К вышеуказанному раствору добавляли 2-метил-анилин (2 г; 0,0187 моль). Полученную смесь нагревали в течение 1 ч при температуре дефлегмации, охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали досуха и распределяли между этилацетатом и рассолом. Водную фазу экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы промывали рассолом, сушили с использованием MgSO4 и фильтровали. Остаток очищали флэш-хроматографией с элюированием смесью петролейный эфир:этилацетат (от 50:1 до 5:1), что позволило получить желаемый продукт, соединение 2308 (600 мг; 38,55%).
Раствор соединения 2308 (600 мг; 2,43 ммоль) и пиридина (0,78 мл) в DCM (30 мл) перемешивали в течение 10 мин при 0°C. Добавляли хлорацетилхлорид (423 мг; 3,74 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч и гасили водой. Органическую фазу отделяли и промывали водой, рассолом, сушили, фильтровали и концентрировали, что позволило получить желаемый продукт, соединение 2309 (700 мг; 89%).
Смесь соединения 2309 (600 мг; 1,85 ммоль) и POCl3 (10 мл) нагревали в течение ночи при 120-130°C (масляная баня) в герметично закрытой пробирке. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали. Остаток распределяли между этилацетатом и водой и затем подщелачивали насыщенным раствором Na2CO3 до pH 7-8. Органический слой отделяли, промывали рассолом, сушили над MgSO4 и концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией с элюированием петролейным эфиром в этилацетате (РЕ/ЕА составляет 20/1), что позволило получить желаемый продукт, соединение 2310, в виде желтого порошка (300 мг; 53,0%).
трет-BuOK (28,7 мг; 0,256 ммоль) добавляли к раствору соединения 2311 (76 мг; 0,295 ммоль) в безводном DMF (3 мл) при КТ. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и по каплям добавляли раствор соединения 2310 (60 мг; 0,196 ммоль) в DMF (2 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 2 ч и концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией с элюированием смесью (DCM/MeOH составляет 50/1), что позволило получить желаемый продукт 2312 в виде беловатого твердого вещества (65 мг; 62,7%).
К раствору соединения 2312 (40 мг; 0,076 ммоль) в безводном DCM (10 мл) по каплям при -78°C добавляли BBr3 (190,4 мг; 0,76 ммоль), затем реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь выливали в смесь лед-вода, подщелачивали насыщенным раствором NaHCO3 до pH 8-9 и экстрагировали DCM. Объединенные органические фазы сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали флэш-хроматографией с элюированием смесью DCM/MeOH (30/1), что позволило получить желаемый продукт, соединение 2313 (15 мг; 38,5%).
Пример 11. Синтез 2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-5-метил-3-о-толилтиено[2,3-с!]пиримидин-4(3Н)-она (Соединение 2407).
Схема 24. Описан синтез 2-((4-амино-3-(3-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-5-метил-3-о-толилтиено[2,3-с!]пиримидин-4(3Н)-она (Соединение 2407).
К перемешиваемому раствору 2-амино-4-метилтиофен-3-карбоновой кислоты (2401) (2,4 г; 15,2 ммоль) в THF (50 мл) медленно в течение 20 мин по каплям при 0°C добавляли раствор трифосгена (9,0 г; 30 ммоль; 2 экв.) в THF (10 мл). Полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили водой (20 мл) при 0°C и затем концентрировали в вакууме для удаления органического растворителя. Коричневое твердое вещество выпадало в осадок из раствора. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой (5 мл × 2) и сушили в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 5-метил-1Н-тиено[2,3-d][1,3]оксазин-2,4-дион (2402) (2,5 г; выход 89,3%) в виде коричневого твердого вещества.
К перемешиваемому раствору о-толуидина (1,4 г; 12,8 ммоль; 1,2 экв.) в безводном THF (20 мл) медленно в течение 30 мин по каплям при -40°C в атмосфере аргона добавляли н-BuLi (2,5 н., 7,7 мл; 19,3 ммоль; 1,8 экв.). Полученную смесь перемешивали при -40°C в течение следующих 30 мин. Медленно в течение 20 мин по каплям при -40°C добавляли раствор 5-метил-1Н-тиено[2,3-d][1,3]оксазин-2,4-диона (2402) (1,95 г; 10,7 ммоль; 1 экв.) в безводном THF (50 мл). Реакционную смесь перемешивали при -40°C в течение 1 ч и затем оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. Реакционную смесь гасили водой (20 мл) при 0°C и затем нейтрализовали концентрированным раствором HCl до pH 8-9. Смесь концентрировали в вакууме для удаления органического растворителя. Остаток экстрагировали этилацетатом (25 мл × 3). Объединенные органические фазы промывали рассолом (10 мл), сушили над MgSO4 и концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, используя 5%-20%-ный этилацетат в петролейном эфире в качестве элюента, что позволило получить желаемый продукт 2-амино-4-метил-N-о-толилтиофен-3-карбоксамид (2403) (0,74 г; выход 28,1%) в виде желтого твердого вещества.
К перемешиваемому раствору 2-амино-4-метил-М-о-толилтиофен-3-карбоксамида (2403) (740 мг; 3 ммоль) и пиридина (406,8 мг; 3,6 ммоль; 1,2 экв.) в безводном DCM (20 мл) медленно в течение 30 мин по каплям при 0°C добавляли 2-хлорацетилхлорид (284,8 мг; 3,6 ммоль; 1,2 экв.). Полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили водой (20 мл) при 0°C и экстрагировали DCM. Объединенные органические фазы промывали 1 н. раствором HCl (10 мл), рассолом (10 мл), сушили над MgSO4 и концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 2-(2-хлорацетамидо)-4-метил-N-о-толилтиофен-3-карбоксамид (2404) (950 мг; выход 98,1%) в виде желтого твердого вещества.
Смесь 2-(2-хлорацетамидо)-4-метил-N-о-толилтиофен-3-карбоксамида (2404) (1,07 г; 3,32 ммоль) и POCl3 (25 мл) перемешивали в течение ночи в герметично закрытой пробирке при 120°C. Реакционную смесь концентрировали в вакууме для удаления избытка POCl3. Остаток распределяли между DCM (30 мл) и насыщенный раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой отделяли, промывали насыщенным NaHCO3 (10 мл), рассолом (10 мл), сушили над MgSO4 и концентрировали в вакууме. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, что позволило получить желаемый продукт 2-(хлорметил)-5-метил-3-о-толилтиено[2,3-d]пиримидин-4(3Н)-он (2405) (760 мг; выход 75,2%) в виде желтого твердого вещества.
Раствор 3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина (108А) (314,3 мг; 1,2 ммоль; 1,5 экв.) трет-BuOK (155 мг; 1,38 ммоль; 1,2 экв.) в DMF (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин, по каплям при комнатной температуре добавляли раствор 2-(хлорметил)-5-метил-3-о-толилтиено[2,3-d] пиримидин-4(3Н)-она (2405) (350 мг; 1,15 ммоль; 1 экв.) в DMF (5 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме для удаления органического растворителя. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, что позволило получить желаемый продукт 2-((4-амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-5-метил-3-о-толилтиено[2,3-d]пиримидин-4(3H)-он (2406) (250 мг; выход 41,1%) в виде желтого твердого вещества.
2-((4-Амино-3-иод-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-5-метил-3-о-толилтиено[2,3-d]пиримидин-4(3Н)-он (2406) (50 мг; 0,092 ммоль), PPh3 (14,5 мг; 0,056 ммоль; 0,6 экв.) и 3-фтор-5-гидроксифенилбороновую кислоту (2207) (17,2 мг; 0,11 ммоль; 1,2 экв.) растворяли в растворе DMF, этанола и воды (5 мл/2 мл/2 мл). К этой смеси последовательно добавляли Pd(OAc)2 (4,14 мг; 0,018 ммоль; 0,2 экв.) и карбонат натрия (48,7 мг; 0,46 ммоль; 5 экв.). Полученную смесь дегазировали, снова заполняли аргоном три раза и затем нагревали до 80°C в течение 0,5 ч при перемешивании. Реакционную смесь концентрировали в вакууме для удаления органического растворителя. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, что позволило получить желаемый продукт 2-((4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-5-метил-3-о-толилтиено[2,3-d]пиримидин-4(3Н)-он (2407) (22,8 мг; выход 48,2%) в виде желтого твердого вещества.
Пример 12. Синтез 8-метил-3-((метил(9Н-пурин-6-ил)амино)метил)-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она.
Схема 25. Описан синтез 8-метил-3-((метил(9Н-пурин-6-ил)амино)метил)-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 4004).
3-(Бромметил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (342 мг; 1,0 ммоль) (1607) растворяли в растворе метиламина (100 мл) и перемешивали в течение 2 ч. Смесь выливали в смесь льда в воде (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (20 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 8-метил-3-((метиламино)метил)-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (4001) (250 мг; выход 86%) в виде желтого твердого вещества. Полученный продукт использовали непосредственно на следующей стадии без очистки.
8-Метил-3-((метиламино)метил)-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (233 мг; 0,8 ммоль) (4001) и 6-хлор-9-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-9Н-пурин (4002) (238 мг; 1,0 ммоль) растворяли в EtOH (50 мл) и полученную смесь перемешивали при температуре дефлегмации в течение 2 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (2-20% MeOH/DCM), что позволило получить продукт 8-метил-3-((метил(9-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-9Н-пурин-6-ил)амино)метил)-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (4003) (200 мг; выход 51%) в виде светло-желтого твердого вещества.
8-Метил-3-((метил(9-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-9Н-пурин-6-ил)амино)метил)-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (4003) (180 мг; 0,36 ммоль) растворяли в МеОН (HCl) (50 мл) и смесь перемешивали при КТ в течение 2 ч. К реакционной смеси добавляли водный раствор NaHCO3 и pH подводили до 9. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 8-метил-3-((метил(9Н-пурин-6-ил)амино)метил)-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он (4004) (80 мг; выход 54%) в виде желтого твердого вещества.
Пример 13. Синтез 3-(1-(9Н-пурин-6-иламино)этил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1 (2Н)-она.
Схема 26. Описан синтез 3-(1-(9Н-пурин-6-иламино)этил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она (Соединение 4106).
К перемешиваемому раствору 3-(гидроксиметил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-она 1606 (2,79 г; 10 ммоль) в CH2Cl2 (200 мл) добавляли MnO2 (5 г) и полученную смесь перемешивали при температуре дефлегмации в течение 3 ч. Смесь оставляли охлаждаться до КТ и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (10-50% ЕА/РЕ), что позволило получить продукт 8-метил-1-оксо-2-о-толил-1,2-дигидроизохинолин-3-карбальдегид 4101 (2,5 г; выход 90%) в виде белого твердого вещества.
8-Метил-1-оксо-2-о-толил-1,2-дигидроизохинолин-3-карбальдегид 4101 (2,4 г; 8,6 ммоль) растворяли в безводном THF (280 мл) и охлаждали до -78°C в атмосфере азота. Медленно добавляли метил - MgBr (2 М; 5 мл; 10 ммоль) и полученную смесь перемешивали при -78°C в течение 2 ч. Добавляли H2O (5 мл) и затем раствор выливали в смесь лед-вода (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом, сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и оставшийся продукт очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (10-50% ЕА/РЕ), что позволило получить продукт 3-(1-гидроксиэтил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он 4102 (1,8 г; выход 71%) в виде белого твердого вещества.
К раствору 3-(1 -гидроксиэтил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1 (2Н)-она 4102 (1,6 г; 5,5 ммоль) в CH2Cl2 добавляли PPh3 (2,88 г; 11,0 ммоль) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин. Затем к смеси порциями при 0°C добавляли CBr4 (3,64 г; 11,0 ммоль). Полученную смесь оставляли нагреваться до КТ, перемешивали в течение 30 мин и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (30-50% ЕА/РЕ), что позволило получить желаемый продукт 3-(1-бромэтил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он 4103 (1,8 г; выход 91%) в виде белого твердого вещества.
К перемешиваемому раствору 9-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-9Н-пурин-6-амина 4103 (436 мг; 2 ммоль) в безводном DMF (10 мл) добавляли NaH (60%-ный в минеральном масле; 77 мг; 2 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин. Добавляли 3-(1-бромэтил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он 4104 (700 мг; 2 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2 ч, выливали в смесь лед-вода (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×50 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (20 мл), сушили над Na2SO4 и фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме и остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (10-50% MeOH/DCM), что позволило получить продукт 8-метил-3-(1-(9-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он 4105 (500 мг; выход 51%) в виде белого твердого вещества.
8-Метил-3-(1-(9-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-9Н-пурин-6-иламино)этил)-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он 4105 (180 мг; 0,36 ммоль) растворяли в МеОН (HCl) (50 мл) и перемешивали в течение 2 ч. К реакционной смеси добавляли водный раствор NaHCO3 и рН подводили до 9. Смесь затем фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 3-(1-(9Н-пурин-6-иламино)этил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он 4106 (80 мг; выход 54%) в виде желтого твердого вещества.
Пример 14. Синтез 3-(4-амино-1-((8-метил-1-оксо-2-о-толил-1,2-дигидроизохинолин-3-ил)метил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил)-5-фторфенил-дигидрофосфата.
Схема 27. Описан синтез 3-(4-амино-1-((8-метил-1-оксо-2-о-толил-1,2-дигидроизохинолин-3-ил)метил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил)-5-фторфенил-дигидрофосфата (Соединение 4303).
3-((4-Амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)метил)-8-метил-2-о-толилизохинолин-1(2Н)-он 4301 (250 мг; 0,5 ммоль) растворяли в безводном THF (15 мл) в темноте в круглодонной колбе (покрытой алюминиевой фольгой) и охлаждали до 0°C в атмосфере аргона. Добавляли CBr4 (498 мг; 1,5 ммоль), затем диэтилфосфит (129 мкл; 1,0 ммоль) и триэтиламин (417 мкл; 1,5 ммоль). Полученную смесь перемешивали в темноте при температуре от 0°C до КТ в течение 16 ч. Затем смесь распределяли между этилацетатом и рассолом. Органический слой сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя метанолом и дихлорметаном, что позволило получить желаемый продукт 3-(4-амино-1-((8-метил-1-оксо-2-о-толил-1,2-дигидроизохинолин-3-ил)метил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил)-5-фторфенил-диэтилфосфат 4302 (200 мг; выход 62%) в виде беловатого твердого вещества.
3-(4-Амино-1-((8-метил-1-оксо-2-о-толил-1,2-дигидроизохинолин-3-ил)метил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил)-5-фторфенил-диэтилфосфат 4302 (170 мг; 0,26 ммоль) растворяли в безводном CH3CN (5 мл) и охлаждали до 0°C в атмосфере аргона. Медленно с помощью шприца добавляли TMSBr (триметилсилил-Br) (0,34 мл; 2,64 ммоль) и полученную смесь перемешивали при температуре от 0°C до КТ в течение 16 ч. Данные LC-MS (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия) показали, что израсходовано небольшое количество исходного материала, поэтому добавляли дополнительные количества TMSBr (0,1 мл) и перемешивали при КТ в течение 5 ч. Данные LC-MS показали полную конверсию исходного материала. Смесь концентрировали в вакууме и остаток растворяли в Et2O (10 мл) и H2O (0,5 мл) и перемешивали в течение 30 мин. Смесь концентрировали в вакууме, что позволило получить желаемый продукт 3-(4-амино-1-((8-метил-1-оксо-2-о-толил-1,2-дигидроизохинолин-3-ил)метил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-3-ил)-5-фторфенил-дигидрофосфат 4903 (140 мг; выход 91%).
Пример 15. Величины IC50 для отдельных соединений
Пример 16. Анализы экспрессии и ингибирования р110α/р85α, р110β/р85α, р110δ/р85α и р110γ.
PI3-K класса I может быть или приобретена (р110α/р85α, р110β/р85α, р110δ/р85α от Upstate и р110γ от Sigma), или экспрессирована, как описано ранее (Knight и др., 2004). Величины IC50 измеряют, используя или стандартный ТСХ-анализ для липидкиназной активности (описанный ниже), или высокопроизводительный анализ с захватом на мембране. Киназные реакции проводят, готовя реакционную смесь, содержащую киназу, ингибитор (конечная концентрация DMSO 2%), буфер (25 мМ HEPES; pH 7,4; 10 мМ MgCl2) и свежеприготовленный, обработанный ультразвуком фосфатидилинозит (100 мкг/мл). Реакции инициируют добавлением раствора АТФ, содержащего 10 мкКи γ-32Р-АТФ, до конечной концентрации 10 или 100 мкМ и оставляют протекать в течение 5 минут при комнатной температуре. Далее для проведения ТСХ-анализа реакции останавливают, добавляя 105 мкл 1 н. HCl, затем 160 мкл смеси CHCl3:МеОН (1:1). Двухфазную смесь перемешивают на вортексе, быстро центрифугируют и органическую фазу переносят в новую пробирку, используя наконечник пипетки для нанесения на гель, предварительно покрытый CHCl3. Этот экстракт наносят в виде пятна на ТСХ-пластинки и хроматографируют в течение 3-4 часов в растворе 65:35 н-пропанол:1 М уксусная кислота. Затем ТСХ-пластинки сушат, помещают на экран фосфоимиджера (Storm, Amersham) и производят количественное определение. Киназную активность для каждого соединения измеряют для 10-12 концентраций ингибитора, представляющих собой двукратные разведения от наивысшей тестируемой концентрации (обычно 200 мкМ). Для соединений, демонстрирующих значительную активность, определения IC50 повторяют от двух до четырех раз, и представленные величины являются средним значением этих независимых измерений.
Доступны другие имеющиеся в продаже наборы или системы для анализа активностей PI3-K. Имеющиеся в продаже наборы или системы могут быть использованы для скрининга ингибиторов и/или агонистов PI3-K, включая, но не ограничиваясь этим, PI3-киназы α, β, δ и γ. Типичной системой является система для анализа PI3-киназы (человека) HTRF™ от Upstate. Данный анализ может быть проведен в соответствии с методиками, предлагаемыми производителем. Кратко, этот анализ представляет собой исследование резонансного переноса энергии флуоресценции с разрешением по времени (TR-FRET), в котором опосредованно измеряют продукт PIP3, образованный в результате действия PI3-K. Киназную реакцию проводят в микротитрационном планшете (например, 384-луночном микротитрационном планшете). Общий объем реакционной смеси составляет приблизительно 20 мкл на одну лунку. На первой стадии в каждую лунку помещают по 2 мкл раствора тестируемого соединения в 20%-ном диметилсульфоксиде, что приводит к получению конечной концентрации DMSO 2%. Далее в каждую лунку добавляют приблизительно по 14,5 мкл смеси киназа/PIP2 (фосфатидилинозит-дифосфат) (разбавленной в 1Х реакционном буфере) для получения конечной концентрации киназы 0,25-0,3 мкг/мл и PIP2 10 мкМ. Планшет герметично закрывают и инкубируют в течение 15 минут при комнатной температуре. Для запуска реакции в каждую лунку добавляют по 3,5 мкл раствора АТФ (разбавленного в 1Х реакционном буфере) до получения конечной концентрации АТФ 10 мкМ. Планшет герметично закрывают и инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакцию останавливают путем добавления по 5 мкл раствора для остановки реакции на одну лунку и затем по 5 мкл детектирующей смеси на одну лунку. Планшет герметично закрывают, инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре и затем прочитывают на соответствующем планшетном ридере. Данные анализируют и величины IC50 получают, используя GraphPad Prism 5.
Пример 17. Анализы экспрессии и ингибирования AbI
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении Abl-киназы можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть проанализированы в трех повторах в отношении рекомбинантной полноразмерной Abl или Abl (T315I) (Upstate) в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, pH 7,4; 10 мМ MgCl2; 200 мкМ АТФ (2,5 мкКи γ-32Р-АТФ) и 0,5 мг/мл BSA (бычий сывороточный альбумин). Оптимизированный пептидный субстрат для Abl EAIYAAPFAKKK используют в качестве фосфоакцептора (200 мкМ). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на фосфоцеллюлозные пластинки, которые промывают 0,5%-ной фосфорной кислотой (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и перенесенное радиоактивное соединение количественно измеряют посредством визуализация с использованием радионуклида фосфора (phosphorimaging).
Пример 18. Анализы экспрессии и ингибирования Нск
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении Hck-киназы можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть проанализированы в трех повторах в отношении рекомбинантной полноразмерной Нск в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, pH 7,4; 10 мМ MgCl2; 200 мкМ АТФ (2,5 мкКи γ-32Р-АТФ) и 0,5 мг/мл BSA. Оптимизированный пептидный субстрат для киназ Src-семейства EIYGEFKKK используют в качестве фосфоакцептора (200 мкМ). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на фосфоцеллюлозные пластинки, которые промывают 0,5%-ной фосфорной кислотой (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и радиоактивное соединение количественно измеряют посредством визуализации с использованием радионуклида фосфора.
Пример 19. Анализы экспрессии и ингибирования инсулинового рецептора (IR)
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении рецепторной киназы IR можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть проанализированы в трех повторах в отношении рекомбинантного киназного домена рецептора инсулина (Upstate) в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, pH 7,4; 10 мМ MgCl2; 10 мМ MnCl2; 200 мкМ АТФ (2,5 мкКи γ-32Р-АТФ) и 0,5 мг/мл BSA. В качестве субстрата используют поли-E-Y (сополимер глутаминовой кислоты и тирозина) (Sigma; 2 мг/мл). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на нитроцеллюлозу, которую промывают смесью 1 М NaCl/1%-ная фосфорная кислота (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и радиоактивное соединение количественно измеряют посредством визуализации с использованием радионуклида фосфора.
Пример 20. Анализы экспрессии и ингибирования Src
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении Src-киназы можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть проанализированы в трех повторах в отношении рекомбинантной полноразмерной Src или Src (T338I) в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, рН 7,4; 10 мМ MgCl2; 200 мкМ АТФ (2,5 мкКи γ-32Р-АТФ) и 0,5 мг/мл BSA. Оптимизированный пептидный субстрат для киназ Src-семейства EIYGEFKKK используют в качестве фосфоакцептора (200 мкМ). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на фосфоцеллюлозные пластинки, которые промывают 0,5%-ной фосфорной кислотой (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и радиоактивное соединение количественно измеряют посредством визуализации с использованием радионуклида фосфора.
Пример 21. Анализы экспрессии и ингибирования DNA-PK
(DNAK) Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении киназы DNAK можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники. DNA-PK может быть приобретена у Promega и проанализирована с использованием системы для анализа DNA-PK (Promega) в соответствии с инструкциями производителя.
Пример 22. Анализы экспрессии и ингибирования mTOR
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении mTOR можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть протестированы в отношении рекомбинантной mTOR (Invitrogen) в анализе, содержащем 50 мМ HEPES, pH 7,5; 1 мМ EGTA (этиленгликоль-тетрауксусную кислоту); 10 мМ MgCl2; 2,5 мМ, 0,01% Твина; 10 мкМ АТФ (2,5 мкКи μ-32Р-АТФ) и 3 мкг/мл BSA. В качестве субстрата используют рекомбинантный PHAS-1/4EBP1 (фосфорилированный термо- и кислотоустойчивый белок-1/4Е-связывающий белок-1 (phosphorylated heat and acid stable protein-1/4E binding protein-1)) крысы (Calbiochem, 2 мг/мл). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на нитроцеллюлозу, которую промывают смесью 1 М NaCl/1%-ная фосфорная кислота (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и радиоактивное соединение количественно измеряют посредством визуализации с использованием радионуклида фосфора.
В продаже имеются другие наборы или системы для анализа активности mTOR. Например, можно использовать набор для анализа киназ LanthaScreen™ (Invitrogen) для тестирования ингибиторов mTOR, изложенных в данной заявке. Этот анализ основан на применении FRET-платформы с временным разрешением, где измеряют фосфорилирование 4ЕВР1, меченного GFP (зеленым флюоресцентным белком), под действием киназы mTOR. Киназную реакцию проводят в белом 384-луночном микротитрационном планшете. Общий реакционный объем составляет 20 мкл на одну лунку, и реакционный буфер имеет следующий состав: 50 мМ HEPES, pH 7,5; 0,01% полисорбата 20; 1 мМ EGTA; 10 мМ MnCl2 и 2 мМ DTT. На первой стадии в каждую лунку помещают по 2 мкл раствора тестируемого соединения в 20%-ном диметилсульфоксиде, что приводит к получению конечной концентрации DMSO 2%. После этого добавляют по 8 мкл на одну лунку mTOR, разбавленной в реакционном буфере до конечной концентрации 60 нг/мл. Для запуска реакции в каждую лунку добавляют по 10 мкл смеси ATФ/GFP-4EBP1 (разбавленной в реакционном буфере) до получения конечной концентрации АТФ 10 мкМ и GFP-4EBP1 0,5 мкМ. Планшет герметично закрывают и инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре. Реакцию останавливают путем добавления по 10 мкл на одну лунку смеси Tb-анти-рТ46-4ЕВР1-антитело/ЕРТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) (разведенной в буфере для TR-FRET) до получения конечной концентрации антитела 1,3 нМ и EDTA 6,7 мМ. Планшет герметично закрывают, инкубируют в течение 1 часа при комнатной температуре и затем прочитывают на планшетном ридере с настройками для TR-FRET LanthaScreen™. Данные анализируют и величины IC50 получают, используя GraphPad Prism 5.
Пример 23. Анализы экспрессии и ингибирования рецептора фактора роста эндотелия сосудов.
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении рецептора VEGF можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть протестированы в отношении киназного домена рекомбинантного KDR (киназный инсерционный домен-содержащий рецептор (Invitrogen) рецептора в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, рН 7,4; 10 мМ MgCl2; 0,1% ВМЕ (2-меркаптоэтанол); 10 мкМ АТФ (2,5 мкКи γ-32Р-АТФ) и 3 мкг/мл BSA. В качестве субстрата используют поли-E-Y (Sigma; 2 мг/мл). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на нитроцеллюлозу, которую промывают смесью 1 М NaCl/1%-ная фосфорная кислота (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и радиоактивное соединение количественно измеряют посредством визуализации с использованием радионуклида фосфора.
Пример 24. Анализы экспрессии и ингибирования эфринового рецептора В4 (EphB4)
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении EphB4 можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть протестированы в отношении киназного домена рекомбинантного эфринового рецептора В4 (Invitrogen) в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, pH 7,4; 10 мМ MgCl2; 0,1% ВМЕ; 10 мкМ АТФ (2,5 мкКи μ-32Р-АТФ) и 3 мкг/мл BSA. В качестве субстрата используют поли-E-Y (Sigma; 2 мг/мл). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на нитроцеллюлозу, которую промывают смесью 1 М NaCl/1%-ая фосфорная кислота (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и радиоактивное соединение количественно измеряют посредством визуализации с использованием радионуклида фосфора.
Пример 25. Анализы экспрессии и ингибирования рецептора эпидермального фактора роста (EGFR)
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении киназы EGFR можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть протестированы в отношении киназного домена рекомбинантного рецептора EGF (Invitrogen) в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, pH 7,4; 10 мМ MgCl2; 0,1% ВМЕ; 10 мкМ АТФ (2,5 мкКи μ-32Р-АТФ) и 3 мкг/мл BSA. В качестве субстрата используют поли-E-Y (Sigma; 2 мг/мл). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на нитроцеллюлозу, которую промывают смесью 1 М MaCl/1%-ная фосфорная кислота (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и радиоактивное соединение количественно измеряют посредством визуализации с использованием радионуклида фосфора.
Пример 26. Анализы экспрессии и ингибирования KIT
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении киназы KIT можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть протестированы в отношении киназного домена рекомбинантного KIT (Invitrogen) в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, pH 7,4; 10 мМ MgCl2; 1 мМ DTT; 10 мМ MnCl2; 10 мкМ АТФ (2,5 мкКи μ-32Р-АТФ) и 3 мкг/мл BSA. В качестве субстрата используют поли-E-Y (Sigma; 2 мг/мл). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на нитроцеллюлозу, которую промывают смесью 1 М NaCl/1%-ная фосфорная кислота (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и радиоактивное соединение количественно измеряют посредством визуализации с использованием радионуклида фосфора.
Пример 27. Анализы экспрессии и ингибирования RET
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении киназы RET можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть протестированы в отношении киназного домена рекомбинантного RET (Invitrogen) в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, pH 7,4; 10 мМ MgCl2; 2,5 мМ DTT; 10 мкМ АТФ (2,5 мкКи μ-32Р-АТФ) и 3 мкг/мл BSA. Оптимизированный пептидный субстрат для Abl EAIYAAPFAKKK используют в качестве фосфоакцептора (200 мкМ). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на фосфоцеллюлозные пластинки, которые промывают 0,5%-ной фосфорной кислотой (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и радиоактивное соединение количественно измеряют посредством визуализации с использованием радионуклида фосфора.
Пример 28. Анализы экспрессии и ингибирования рецептора ростового фактора из тромбоцитов (PDGFR)
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении киназы PDGFR можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть протестированы в отношении киназного домена рекомбинантного рецептора PDGF (Invitrogen) в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, рН 7,4; 10 мМ MgCl2; 2,5 мМ DTT; 10 мкМ АТФ (2,5 мкКи μ-32Р-АТФ) и 3 мкг/мл BSA. Оптимизированный пептидный субстрат для Abl EAIYAAPFAKKK используют в качестве фосфоакцептора (200 мкМ). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на фосфоцеллюлозные пластинки, которые промывают 0,5%-ной фосфорной кислотой (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и радиоактивное соединение количественно измеряют посредством визуализации с использованием радионуклида фосфора.
Пример 29. Анализы экспрессии и ингибирования Fms-подобной тирозинкиназы 3 (FLT-3)
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении киназы FLT-3 можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть протестированы в отношении киназного домена рекомбинантного FLT-3 (Invitrogen) в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, pH 7,4; 10 мМ MgCl2; 2,5 мМ DTT; 10 мкМ АТФ (2,5 мкКи μ-32Р-АТФ) и 3 мкг/мл BSA. Оптимизированный пептидный субстрат для Abl EAIYAAPFAKKK используют в качестве фосфоакцептора (200 мкМ). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на фосфоцеллюлозные пластинки, которые промывают 0,5%-ной фосфорной кислотой (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и перенесенное радиоактивное соединение количественно измеряют с помощью визуализация с использованием радионуклида фосфора.
Пример 30. Анализы экспрессии и ингибирования рецепторной тирозинкиназы TEK (TIE2)
Перекрестную активность или ее отсутствие для одного или более соединений по настоящему изобретению в отношении киназы TIE2 можно измерить в соответствии с любой методикой, известной в данной области техники, или со способами, изложенными ниже. Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть протестированы в отношении киназного домена рекомбинантного TIE2 (Invitrogen) в анализе, содержащем 25 мМ HEPES, рН 7,4; 10 мМ MgCl2; 2 мМ DTT; 10 мМ MnCl2; 10 мкМ АТФ (2,5 мкКи μ-32Р-АТФ) и 3 мкг/мл BSA. В качестве субстрата используют поли-E-Y (Sigma; 2 мг/мл). Реакции останавливают, нанося реакционную смесь в виде пятен на нитроцеллюлозу, которую промывают смесью 1 М NaCl/1%-ная фосфорная кислота (приблизительно 6 раз, каждый раз по 5-10 минут). Пластинки сушат и перенесенное радиоактивное соединение количественно измеряют с помощью визуализации с использованием радионуклида фосфора.
Пример 31. Анализ активации и пролиферации В-клеток
Способность одного или более соединений, являющихся объектом изобретения, ингибировать активацию и пролиферацию В-клеток определяют в соответствии со стандартными методиками, известными в данной области техники. Например, установлен метод анализа клеточной пролиферации in vitro, в котором измеряют метаболическую активность живых клеток. Анализ проводят в 96-луночном микротитрационном планшете, используя восстановление красителя Alamar Blue. В-клетки селезенки Balb/c очищают, применяя градиент Ficoll-Paque™ PLUS, с последующим магнитным разделением клеток с использованием набора для выделения В-клеток MACS (Miletenyi). Клетки высевают на планшеты в объеме 90 мкл в количестве 50000 клеток/лунка в среде для В-клеток (среда RPMI (Roswell Park Memorial Institute) + 10% FBS (эмбриональная бычья сыворотка) + пенициллин/стрептомицин + 50 мкМ bME) + 5 мМ HEPES). Соединение, изложенное в данной заявке, разбавляют в среде для В-клеток и добавляют в объеме 10 мкл. Планшеты инкубируют в течение 30 мин при 37°C и 5% CO2 (конечная концентрация DMSO 0,2%). Затем добавляют по 50 мкл смеси для стимулирования В-клеток, содержащей или LPS (липополисахарид) (10 мкг/мл), или F(ab')2 антитела осла против IgM мыши (5 мкг/мл) плюс рекомбинантный IL4 (интерлейкин-4) мыши (2 нг/мл) в среде для В-клеток. Планшеты инкубируют в течение 72 часов при 37°C и 5% CO2. В каждую лунку добавляют реагент Alamar Blue в объеме 15 мкл и планшеты инкубируют в течение 5 часов при 37°C и 5% CO2. Флуоресценцию Alamar Blue прочитывают при 560Ех/590Em (возбуждение на длине волны 560 нм, эмиссия на длине волны 590 нм) и величины IC50 или ЕС50 рассчитывают, используя GraphPad Prism 5.
Пример 32. Анализ пролиферации опухолевой клеточной линии
Способность одного или более соединений, являющихся объектом изобретения, ингибировать пролиферацию опухолевой клеточной линии определяют в соответствии со стандартными методиками, известными в данной области техники. Например, можно провести анализ клеточной пролиферации in vitro, в котором измеряют метаболическую активность живых клеток. Данный анализ проводят в 96-луночном микротитрационном планшете, используя восстановление Alamar Blue. Опухолевые клеточные линии человека получают из АТСС (Американская коллекция типовых культур) (например, MCF7, U-87 MG; MDA-MB-468, РС-3), выращивают до конфлюентного состояния во флаконах Т75, проводят трипсинизацию с использованием 0,25%-ного трипсина, промывают один раз средой для опухолевых клеток (DMEM (модифицированная Дульбекко среда Игла) + 10% FBS) и высевают на планшеты в объеме 90 мкл в количестве 5000 клеток/лунка в среде для опухолевых клеток. Соединение, изложенное в данной заявке, разбавляют в среде для опухолевых клеток и добавляют в объеме 10 мкл. Планшеты инкубируют в течение 72 часов при 37°C и 5% CO2. В каждую лунку добавляют реагент Alamar Blue в объеме 15 мкл и планшеты инкубируют в течение 3 часов при 37°C и 5% CO2. Флуоресценцию Alamar Blue прочитывают при 560Ех/590Em и величины IC50 рассчитывают, используя GraphPad Prism 5.
Пример 33. Противоопухолевая активность in vivo
Можно провести оценку соединений, изложенных в данной заявке, в ряде моделей опухолей человека и мыши.
Модели опухолей, устойчивых к паклитакселу.
1. Модель рака яичника, полученная на клиническом материале.
Эта опухолевая модель создана в результате биопсии опухоли пациента с раком яичника. Биоптат опухоли взят у пациента.
Соединения, изложенные в данной заявке, вводят бестимусным мышам, несущим опухоли с установленной стадией развития, используя схему: каждые 2 суток × 5.
2. Ксенотрансплантат рака яичника человека А2780Тах (с мутантным тубулином).
А2780Тах представляет собой модель устойчивого к паклитакселу рака яичника человека. Он получен из чувствительной исходной линии А2780 в результате совместной инкубации с паклитакселом и верапамилом, агентом, устраняющим MDR (множественную лекарственную устойчивость). Показано, что механизм устойчивости к нему не является родственным механизму MDR и объясняется наличием мутации в гене, кодирующем белок бета-тубулин.
Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть введены мышам, несущим опухоли с установленной стадией развития, по схеме: каждые 2 суток × 5.
3. Ксенотрансплантат рака толстой кишки человека НСТ116/VM46 (с множественной лекарственной устойчивостью)
HCT116/VM46 представляет собой MDR-устойчивый рак толстой кишки из чувствительной исходной линии НСТ116. При росте in vivo в бестимусных мышах HCT116/VM46 неизменно демонстрирует высокую устойчивость к паклитакселу.
Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть введены мышам, несущим опухоли с установленной стадией развития, по схеме: каждые 2 суток × 5.
4. Модель мышиной саркомы М5076
М5076 представляет собой мышиную фибросаркому, от природы резистентную к паклитакселу in vivo.
Соединения, изложенные в данной заявке, могут быть введены мышам, несущим опухоли с установленной стадией развития, по схеме: каждые 2 суток × 5.
Одно или более соединений по изобретению могут быть использованы в комбинации с другими терапевтическими агентами in vivo для ксенотрансплантатов рака толстой кишки человека с множественной лекарственной устойчивостью HCT/VM46 или для любой другой модели, известной в данной области техники, включая модели, изложенные в данной заявке.
Пример 34. Анализ стабильности в присутствии микросом
Стабильность одного или более соединений, являющихся объектом изобретения, определяют в соответствии со стандартными методиками, известными в данной области техники. Например, стабильность одного или более соединений, являющихся объектом изобретения, устанавливают в анализе in vitro. В частности, можно провести анализ стабильности в присутствии микросом in vitro, в котором измеряют стабильность одного или более соединений, являющихся объектом изобретения, при взаимодействии с микросомами из печени мыши, крысы или человека. Взаимодействие микросом с соединениями проводят в пробирке Эппендорфа емкостью 1,5 мл. Каждая пробирка содержит 0,1 мкл NADPH (никотинамидадениндинуклеотида восстановленного) (10,0 мг/мл); 75 мкл микросом из печени мыши, крысы или человека (20,0 мг/мл); 0,4 мкл 0,2 М фосфатного буфера и 425 мкл ddH2O (дважды дистиллированной воды). Пробирка с отрицательным контролем (без NADPH) содержит 75 мкл микросом из печени мыши, крысы или человека (20,0 мг/мл); 0,4 мкл 0,2 М фосфатного буфера и 525 мкл ddH2O. Взаимодействие инициируют путем добавления 1,0 мкл 10,0 мМ тестируемого соединения. Пробирки с реакционной смесью инкубируют при 37°C. По 100 мкл образца отбирают в новую пробирку Эппендорф, содержащую 300 мкл холодного метанола, через 0, 5, 10, 15, 30 и 60 минут от начала реакции. Образцы центрифугируют при 15000 об/мин для удаления белка. Супернатант центрифугированного образца переносят в новую пробирку. Концентрацию стабильного соединения в супернатанте после взаимодействия с микросомами измеряют жидкостной хроматографией/масс-спектрометрией (LC-MS).
Пример 35. Анализ стабильности в плазме крови
Стабильность одного или более соединений, являющихся объектом изобретения, в плазме крови определяют в соответствии со стандартными методиками, известными в данной области техники. См., например, Rapid Commun. Mass Spectrom., 10: 1019-1026. Приведенная ниже методика представляет собой HPLC-MS/MS-анализ с использованием плазмы крови человека; возможно также использование плазмы других видов, включая обезьяну, собаку, крысу и мышь. Замороженную гепаринизированную плазму крови человека размораживают на холодной водяной бане и перед использованием центрифугируют в течение 10 минут при 2000 об/мин при 4°C. Соединение, являющееся объектом изобретения, добавляют из 400 мкМ концентрированного раствора к аликвоте предварительно нагретой плазмы с получением конечного объема для проведения анализа 400 мкл (или 800 мкл для определения периода полувыведения), содержащего 5 мкМ тестируемого соединения и 0,5% DMSO. Реакционные смеси инкубируют со встряхиванием в течение 0 минут и 60 минут при 37°C или в течение 0, 15, 30, 45 и 60 минут при 37°C для определения периода полувыведения. Реакции останавливают, перенося 50 мкл инкубационной смеси в 200 мкл охлажденного на льду ацетонитрила и перемешивая посредством встряхивания в течение 5 минут. Образцы центрифугируют при 6000×g в течение 15 минут при 4°C и по 120 мкл супернатанта отбирают в чистые пробирки. Затем образцы упаривают досуха и подвергают анализу с использованием HPLC-MS/MS.
Там, где желательно, одновременно с тестируемыми соединениями тестируют одно или более чем одно контрольное соединение или соединение сравнения (5 мкМ): одно соединение, пропоксикаин, с низкой стабильностью в плазме, и другое соединение, пропантелин, с промежуточной стабильностью в плазме.
Образцы повторно разводят в смеси ацетонитрил/метанол/вода (1/1/2, об./об./об.) и анализируют с использованием обращенно-фазовой (RP) HPLC-MS/MS, применяя метод селективного мониторинга реакций (SRM). Условия проведения HPLC включают двойной насос для LC с автодозатором, комбинированный режим работы, С12, колонку 2×20 мм и программу градиента. Площади пиков, соответствующих аналитам, регистрируют с использованием HPLC-MS/MS. Соотношение исходного соединения, оставшегося через 60 минут, и количества на момент времени ноль, выраженное в процентах, принимают за стабильность в плазме. В случае определения периода полувыведения его определяют из наклона начального линейного участка логарифмической кривой зависимости оставшегося соединения (%) от времени, предполагая наличие кинетики первого порядка.
Пример 36. Химическая стабильность
Химическую стабильность одного или более соединений, являющихся объектом изобретения, определяют в соответствии со стандартными методиками, известными в данной области техники. Далее приводятся подробности типичной методики определения химической стабильности соединения, являющегося объектом изобретения. Стандартным буфером, используемым для анализа химической стабильности, является фосфатно-солевой буфер (PBS) с рН 7,4; можно использовать и другие подходящие буферы. Соединение, являющееся объектом изобретения, добавляют из 100 мкМ концентрированного раствора к аликвоте PBS (в двух повторах) с получением конечного объема для проведения анализа 400 мкл, содержащего 5 мкМ тестируемое соединение и 1% DMSO (для определения периода полувыведения готовят образец общим объемом 700 мкл). Реакционные смеси инкубируют со встряхиванием в течение 0 минут и 24 часов при 37°C; для определения периода полувыведения образцы инкубируют в течение 0, 2, 4, 6 и 24 часов. Реакции останавливают путем незамедлительного добавления 100 мкл инкубационной смеси к 100 мкл ацетонитрила и встряхивания на вортексе в течение 5 минут. Образцы далее хранят при -20°C до проведения HPLC-MS/MS-анализа. Там, где желательно, контрольное соединение или соединение сравнения, такое как хлорамбуцил (5 мкМ), тестируют одновременно с представляющим интерес соединением, являющимся объектом изобретения, поскольку это соединение в значительной степени гидролизуется в течение 24 часов. Образцы анализируют с использованием (RP)HPLC-MS/MS, применяя метод селективного мониторинга реакций (SRM). Условия проведения HPLC включают двойной насос для LC с автодозатором, комбинированный режим работы, С12, колонку 2×20 мм и программу градиента. Площади пиков, соответствующих аналитам, регистрируют с использованием HPLC-MS/MS. Соотношение исходного соединения, оставшегося через 24 часа, и количества на момент времени ноль, выраженное в процентах, принимают за химическую стабильность. В случае определения периода полувыведения его определяют из наклона начального линейного участка логарифмической кривой зависимости оставшегося соединения (%) от времени, предполагая наличие кинетики первого порядка.
Пример 37. Анализ Akt-киназы
Клетки, содержащие компоненты пути Akt/mTOR, включая, но не ограничиваясь этим, миобласты L6, клетки B-ALL, В-клетки, Т-клетки, лейкозные клетки, клетки костного мозга, р190-трансдуцированные клетки, клетки с положительной филадельфийской хромосомой (Ph+) и эмбриональные фибробласты мыши, обычно растят в средах для выращивания клеток, таких как DMEM, дополненных эмбриональной бычьей сывороткой и/или антибиотиками, и растят до конфлюентного состояния.
С целью сравнения влияния одного или более соединений, приведенных в данной заявке, на активацию Akt, указанные клетки истощают по сыворотке в течение ночи и инкубируют с одним или более чем одним соединением, изложенным в данной заявке, или с примерно 0,1% DMSO в течение от приблизительно 1 минуты до примерно 1 часа, после чего стимулируют инсулином (например, 100 нМ) в течение от примерно 1 минуты до примерно 1 часа. Клетки подвергают лизису путем соскабливания их в охлажденный во льду лизирующий буфер, содержащий детергенты, такие как например, додецилсульфат натрия, и ингибиторы протеаз (например, PMSF (фенилметилсульфонил-фторид)). После приведения клеток в контакт с лизирующим буфером раствор подвергают краткому облучению ультразвуком, осветляют центрифугированием, разделяют с использованием SDS-PAGE (электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия), переносят на нитроцеллюлозу или PVDF (поливинилиденфторид) и подвергают иммуноблоттингу, используя антитела к фосфо-Akt (pAkt) S473, фосфо-Akt Т308, Akt и 6-актину (Cell Signaling Technologies).
В результате продемонстрировано, что одно или более соединений из настоящего описания ингибируют стимулируемое инсулином фосфорилирование Akt в положении S473. Альтернативно, некоторые соединения, изложенные в данной заявке, дополнительно ингибируют стимулируемое инсулином фосфорилирование Akt в положении Т308. Такой класс соединений может ингибировать Akt более эффективно, чем рапамицин, и может быть отнесен к ингибиторам mTORC2 или ингибиторам киназ, расположенных "вверх по течению", таких как PI3K или Akt.
Пример 38. Передача сигнала в крови посредством киназ
PI3K/Akt/mTor-опосредованную передачу сигнала измеряют в клетках крови, используя метод phosflow (Methods Enzymol. 2007, 434: 131-54). Преимуществом этого способа является то, что по своей природе он представляет собой метод анализа единичной клетки, так что дает возможность детектировать клеточную гетерогенность, а не средние по популяции величины. Это позволяет одновременно проводить распознавание состояния сигнальных путей в различных популяциях, определяемых по другим маркерам. Кроме того, метод phosflow является количественным методом с высокой чувствительностью. Для тестирования влияния одного или более соединений, представленных в данной заявке, нефракционированные спленоциты или мононуклеарные клетки периферической крови стимулируют антителами против CD3 для инициации передачи сигнала с участием Т-клеточных рецепторов. После этого клетки фиксируют и окрашивают на предмет наличия поверхностных маркеров и внутриклеточных фосфопротеинов. Ожидается, что ингибиторы, изложенные в данной заявке, ингибируют анти-CD3-опосредованное фосфорилирование Akt-S473 и S6, в то время как рапамицин ингибирует фосфорилирование S6 и усиливает фосфорилирование Akt в условиях тестирования.
Аналогично, аликвоты цельной крови инкубируют в течение 15 минут с растворителем (например, 0,1% DMSO) или киназными ингибиторами в различных концентрациях, после чего добавляют стимулирующие вещества для проведения перекрестного сшивания Т-клеточного рецептора (TCR) (анти-CD3 с вторичным антителом) или В-клеточного рецептора (BCR), используя антитела против легкой цепи каппа (
-фрагментов). Приблизительно через 5 и 15 минут образцы фиксируют (например, холодным 4%-ным параформальдегидом) и используют для метода phosflow. Применяют поверхностное окрашивание для различения Т- и В-клеток, используя антитела к маркерам клеточной поверхности, которые известны в данной области техники. Уровень фосфорилирования киназных субстратов, таких как Akt и S6, далее измеряют, инкубируя фиксированные клетки с мечеными антителами, специфичными к фосфорилированным изоформам этих белков. Популяцию клеток затем анализируют с использованием проточной цитометрии.
Пример 39. Анализ образования колоний
Клетки костного мозга мыши, непосредственно перед этим трансформированные р190-содержащим ретровирусом BCR-Abl (обозначаемые в данной заявке как р190-трансдуцированные клетки), высевают в присутствии различных комбинаций лекарственных средств примерно на 7 суток на метилцеллюлозные среды М3630 с рекомбинантным IL-7 человека примерно в 30% сыворотке и подсчитывают количество образовавшихся колоний путем визуального наблюдения в микроскоп.
Альтернативно, мононуклеарные клетки периферической крови человека получают от пациентов с положительной филадельфийской хромосомой (Ph+) и с отрицательной филадельфийской хромосомой (Ph-) по данным начального диагноза или с рецидивом заболевания. Живые клетки выделяют и обогащают по CD19+ CD34+ В-клеткам-предшественникам. После нахождения в течение ночи в жидкой культуре клетки высевают на среду methocult GF+Н4435 (Stem Cell Technologies), дополненную цитокинами (IL-3, IL-6, IL-7, G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор), GM-CSF (гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор), CF, лигандом для Flt3 и эритропоэтином) и известными химиотерапевтическими агентами в различных концентрациях в комбинации с любыми соединениями из настоящего описания. Колонии подсчитывают через 12-14 суток, используя микроскоп. Это способ может быть применен для тестирования доказательств кумулятивной или синергической активности.
Пример 40. Влияние киназных ингибиторов на лейкозные клетки in vivo
Самок мышей-реципиентов облучают летальной дозой, используя источник γ-излучения, двумя отдельными дозами с интервалом примерно 4 ч, приблизительно по 5 Гр каждая. Примерно через 1 ч после второй дозы облучения мышам вводят в/в (внутривенной) инъекцией примерно 1×106 лейкозных клеток (например, Ph+ клеток человека или мыши или р190-трансдуцированных клеток костного мозга). Эти клетки вводят вместе с противолучевой дозой, равной примерно 5×106 нормальных клеток костного мозга от мышей-доноров в возрасте 3-5 недель. Реципиентам дают антибиотики в воде и проводят ежесуточный мониторинг. Мышей, заболевших примерно через 14 суток, подвергают эвтаназии и извлекают лимфоидные органы для анализа. Лечение киназными ингибиторами начинают примерно через 10 суток после введения лейкозных клеток и продолжают ежесуточно до тех пор, пока мыши не заболеют, или максимально приблизительно до 35 суток после введения трансплантата. Ингибиторы дают с применением перорального лаважа.
Клетки периферической крови собирают приблизительно на 10-е сутки (до лечения) и после эвтаназии (после лечения), приводят в контакт с мечеными антителами против hCD4 (CD4 человека) и подсчитывают с использованием проточной цитометрии. Это способ может быть использован для демонстрации того, что благодаря синергическому эффекту одного или более соединений, изложенных в данной заявке, в комбинации с известными химиотерапевтическими агентами значительно уменьшается количество лейкозных клеток крови по сравнению с лечением только лишь известными химиотерапевтическими агентами (например, Гливеком) в условиях тестирования.
Пример 41. Лечение мышей, являющихся моделями заболевания волчанкой
У мышей, у которых отсутствует ингибирующий рецептор FcγRIIb, препятствующий PI3K-опосредованной передаче сигнала в В-клетках, с высокой вероятностью развивается волчанка. FcγRIIb-нокаутированные мыши (R2KO, Jackson Labs) считаются подходящей моделью такого заболевания у человека, поскольку некоторые пациенты с диагнозом волчанки демонстрируют пониженную экспрессию или функцию FcγRIIb (S. Bolland and J.V. Ravtech, 2000. Immunity 12: 277-285).
У R2KO-мышей развивается волчаночноподобное заболевание с антинуклеарными антителами, гломерулонефритом и протеинурией в возрасте примерно 4-6 месяцев. Для этих экспериментов в качестве эталонного соединения используют аналог рапамицина RAD001 (поставляемый LC Laboratories) и его вводят перорально. Показано, что это соединение облегчает симптомы волчанки в модели B6.Sle1z.Sle3z (Т. Wu et al. J. Clin. Invest. 117: 2186-2196).
Мышей, являющихся моделями заболевания волчанкой, таких как R2KO, BXSB или MLR/Ipr, в возрасте примерно 2 месяцев подвергают лечению в течение примерно двух месяцев. Мышам дают дозы: растворителя, RAD001 (примерно 10 мг/кг) или изложенных в данной заявке соединений (от приблизительно 1 мг/кг до примерно 500 мг/кг). На протяжении приблизительно всего периода тестирования отбирают образцы крови и мочи и анализируют на антинуклеарные антитела (в разведениях в сыворотке) или концентрацию белка (в моче). Сыворотку также тестируют на антитела против ssDNA (одноцепочечная ДНК) и против dsDNA (двухцепочечная ДНК) посредством ELISA (иммуноферментный твердофазный анализ). Животных подвергают эвтаназии на 60-е сутки и извлекают ткани для определения веса селезенки и заболевания почек. Гломерулонефрит оценивают посредством окрашивания срезов почек с помощью Н&Е (гематоксилина и эозина). Других животных исследуют примерно через два месяца после прекращения лечения, используя те же самые конечные точки.
Эта модель, общепризнанная в данной области техники, может быть применена для демонстрации того, что ингибиторы киназ, изложенные в данной заявке, могут подавлять или задерживать начало развития симптомов волчанки у мышей, являющихся моделями заболевания волчанкой.
Пример 42. Анализ трансплантата костного мозга у мышей
Самок мышей-реципиентов облучают летальной дозой, используя источник γ-излучения. Примерно через 1 ч после дозы облучения мышам вводят примерно 1×106 лейкозных клеток с ранних пассажей р190-трансдуцированных культур (например, как описано в Cancer Genet. Cytogenet. 2005 Aug, 161 (1): 51-6). Эти клетки вводят вместе с противолучевой дозой, равной примерно 5×106 нормальных клеток костного мозга от мышей-доноров в возрасте 3-5 недель. Реципиентам дают антибиотики в воде и проводят ежесуточный мониторинг. Мышей, заболевших примерно через 14 суток, подвергают эвтаназии и извлекают лимфоидные органы для проточной цитометрии и/или магнитного обогащения. Лечение начинают примерно на 10-е сутки и продолжают ежесуточно до тех пор, пока мыши не заболеют, или максимально приблизительно до 35 суток после введения трансплантата. Лекарственные средства вводят через желудочный зонд (п/о). В пробном эксперименте идентифицируют дозу химиотерапевтического средства, не являющуюся лечебной, но задерживающую начало развития лейкоза примерно на одну неделю или меньше; в качестве контролей используют обработку растворителем или обработку химиотерапевтическим агентом, для которого ранее в этой модели было показано, что он задерживает начало развития, но не излечивает лейкозогенез (например, иматиниб в дозе примерно 70 мг/кг два раза в сутки). На первом этапе используют р190-содержащие клетки, экспрессирующие eGFP (усиленный GFP), и посмертный анализ ограничивают подсчетом процентного содержания лейкозных клеток в костном мозге, селезенке и лимфатических узлах (LN) с использованием проточной цитометрии. На втором этапе используют р190-несущие клетки, экспрессирующие "не содержащую хвоста" форму CD4 человека, и посмертный анализ включает магнитную сортировку hCD4+ клеток из селезенки с последующим анализом иммуноблоттингом ключевых сигнальных конечных точек: pAkt-T308 и -S473; pS6 и р4ЕВР-1. В качестве контролей для детекции иммуноблоттингом сортированные клетки инкубируют перед лизисом в присутствии или в отсутствие киназных ингибиторов из настоящего описания. При желании используют метод "phosflow" для детекции pAkt-S473 и pS6-S235/236 в клетках hCD4-gated без предварительной сортировки. Такие исследования передачи сигнала особенно полезны, если, например, у получающих лекарственную терапию мышей не развивается клинический лейкоз на момент времени 35 суток. Строят графики кривой выживаемости Каплана-Мейера и проводят статистический анализ способами, известными в данной области техники. Результаты по р190-содержащим клеткам анализируют по отдельности, а также кумулятивно.
Один раз в неделю у всех мышей отбирают образцы периферической крови (100-200 мкл), начиная с 10-х суток непосредственно перед началом лечения. Плазму крови используют для измерения концентраций лекарственных средств и клетки анализируют на маркеры лейкоза (eGFP или hCD4) и биомаркеры передачи сигнала, как изложено в данной заявке.
Этот общий анализ, известный в данной области техники, может быть использован для демонстрации того, что эффективные терапевтические дозы соединений, изложенных в данной заявке, могут быть использованы для ингибирования пролиферации лейкозных клеток.
Пример 43. Клеточная культура, имеющая происхождение от эпителиальных клеток глаза
Эпителиальные клетки глаза получают не позднее 5 суток после смерти из роговиц, сохраняемых в холодных условиях в Оптисоле (Bausch and Lomb, Irvine, CA), или из биоптатов роговиц живых доноров. Ткань промывают фосфатно-солевым буферным раствором, инкубируют в растворе диспазы II (Roche Diagnostics, Basel, Switzerland) при 37°C в течение 30 минут и эпителиальную осторожно соскребают с поверхности для отделения эпителия от расположенной под ним стромы. Отделенный эпителий затем инкубируют и пипетируют в смеси трипсина с этилендиаминтетрауксусной кислотой для получения суспензии отдельных клеток. Затем трипсин нейтрализуют культуральной средой для роговичного эпителия. Культуральная среда для роговичного эпителия состоит из основных сред - среды Игла в модификации Дульбекко F12 в соотношении 2:1, содержащей 10% облученной эмбриональной бычьей сыворотки, гидрокортизон (0,4 мкг/мл), холерный токсин (0,1 нмоль), рекомбинантный инсулин человека (5 мкг/мл), эпидермальный фактор роста (10 нг/мл) и противомикробные средства: пенициллин (100 международных единиц (IU)/мл), стрептомицин (100 мкг/мл) и амфотерицин В (0,25 мкг/мл). Клетки поддерживают субкультивированием в соотношении 1:4 после достижения 80% плотности. Эпителиальные клетки глаза подвергают скринингу на предмет ингибирования пролиферации или токсичности, приводя тестируемое соединение в контакт с клетками и анализируя жизнеспособность с использованием имеющегося в продаже набора для анализа с применением МТТ (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-тетразолий бромид) (Promega).
Пример 44. Клеточная культура, имеющая происхождение от эндотелиальных клеток глаза
Все ткани поддерживают при 4°C в среде для хранения (Оптисол; Chiron Vision, Irvine, СА) в течение менее 10 суток перед исследованием. Ткань промывают три раза DMEM, содержащей гентамицин (50 мг/мл) и амфотерицин B (1,25 мг/мл). Центральную роговицу удаляют с помощью трефина диаметром 8 мм. После этого клетки десцеметовой мембраны и эндотелиальные клетки роговицы с тыльной стороны поверхности периферической корнеосклеральной ткани снимают под препаровальной лупой и переваривают при 37°C в течение 1,5-16 часов, используя коллагеназу A (2 мг/мл) в среде для эпителия с добавками гормонов (SHEM), которую готовят, смешивая равные объемы HEPES-забуференной DMEM и среды Хэма F12 с добавками 5% FBS, 0,5% диметилсульфоксида, EGF мыши (2 нг/мл), инсулина (5 мкг/мл), трансферрина (5 мкг/мл), селена (5 нг/мл), гидрокортизона (0,5 мкг/мл), холерного токсина (1 нМ), гентамицина (50 мкг/мл) и амфотерицина B (1,25 мкг/мл). После переваривания НСЕС (эндотелиальные клетки роговицы человека) образуют агрегаты, которые собирают центрифугированием при 2000 об/мин в течение 3 минут для удаления раствора для переваривания. В качестве контроля полоски десцеметовой мембраны также переваривают в растворе диспазы II (10 мг/мл) в SHEM и смеси трипсина и EDTA в течение до 3 часов включительно.
Хранение выделенных агрегатов НСЕС
Полученные агрегаты НСЕС хранят в KSFM (не содержащей сыворотки среде для кератиноцитов) с полным набором добавок (среда для хранения 1), DMEM/F12 с добавками для KSFM (среда для хранения 2) или DMEM/F12 с добавками для SHEM, но без FBS (среда для хранения 3). Все эти среды не содержат сыворотки, и одно из основных отличий между ними заключается в концентрации ионов кальция, которая составляет 0,09 мМ в среде для хранения 1, а в средах для хранения 2 и 3 составляет 1,05 мМ. Агрегаты НСЕС хранят в инкубаторе для тканевых культур при 37°C в течение до 3 недель включительно. Определяют жизнеспособность клеток (анализ Live and Dead; Invitrogen), а также оценивают посредством субкультивирования их в SHEM.
Наращивание выделенных агрегатов НСЕС
Полученные агрегаты НСЕС или незамедлительно после переваривания, или после хранения в среде для хранения далее культивируют в SHEM с дополнительными ростовыми факторами, такими как bFGF (основный FGF) (40 нг/мл), ВРЕ (экстракт гипофиза быка) (0,1 мг/мл) и NGF (фактор роста нервов) (20 нг/мл), или без них на пластиковой чашке при 37°C и 5% CO2. Среды заменяют каждые 2-3 суток. Некоторые агрегаты НСЕС предварительно обрабатывают смесью трипсин/EDTA при 37°C в течение 10 минут для разъединения эндотелиальных клеток перед упомянутым выше культивированием.
Иммунологическое окрашивание
Агрегаты НСЕС заливают в ОСТ (смесь для поддержания оптимальной температуры) и осуществляют приготовление срезов из замороженного состояния. Криосрезы толщиной 4 мкм сушат на воздухе при комнатной температуре (КТ) в течение 30 минут и фиксируют в холодном ацетоне в течение 10 минут при -20°C. Срезы, используемые для иммунологического окрашивания, повторно гидратируют в PBS и инкубируют в 0,2%-ном Тритоне X-100 в течение 10 минут. После трех промывок в PBS в течение 5 минут каждая и предварительной инкубации с 2%-ным BSA для блокирования неспецифического окрашивания срезы инкубируют с антителами против ламинина 5, коллагена IV типа, перлекана, ZO-1 и коннексина 43 (все в разведении 1:100) в течение 1 часа. После трех промывок в PBS в течение 15 минут срезы инкубируют, используя конъюгированное с FITC (флуоресцеинизотиоцианатом) вторичное антитело (антитело козы против IgG кролика или мыши в разведении 1:100) в течение 45 минут. После трех дополнительных промывок в PBS в течение 10 минут каждая их контрастно окрашивают, используя иодид пропидия (1:1000) или Hoechst 33342 (10 мкг/мл), затем заключают в раствор для предотвращения выцветания и анализируют с использованием флуоресцентного микроскопа. НСЕС, культивируемые в 24-луночных планшетах или слайд-камерах, фиксируют в 4%-ном параформальдегиде в течение 15 минут при КТ и окрашивают антителами против ZO-1 и коннексина 43, как уже было описано. Для иммуногистохимического окрашивания на Ki67 эндогенную пероксидазную активность блокируют 0,6%-ной перекисью водорода в течение 10 минут. Неспецифическое окрашивание блокируют нормальной 1%-ной козьей сывороткой в течение 30 минут. Затем клетки инкубируют с антителом против Ki67 (1:100) в течение 1 часа. После трех промывок в PBS в течение 15 минут клетки инкубируют с биотинилированным антителом кролика против IgG мыши (1:100) в течение 30 минут с последующей инкубацией с АВС-реагентом (реагент авидин-биотинового комплекса) в течение 30 минут. Продукт реакции проявляют с помощью DAB (3,3'-диаминобензидина) в течение 5 минут и исследуют с использованием светового микроскопа.
Анализ жизнеспособности клеток и TUNEL-анализ
Анализ жизнеспособности клеток и анализ с использованием опосредованного терминальной дезоксирибонуклеотидилтрансферазой (ТоТ) мечения конъюгированным с FITC dUTP (дезоксиуридинтрифосфатом) одноцепочечных разрывов по концам (TUNEL) в молекуле ДНК применяют для определения живых и апоптозных клеток, соответственно. Агрегаты НСЕС инкубируют с реагентами для анализа жизнеспособности клеток в течение 15 минут при КТ. Живые клетки отличают по зеленому флуоресцентному окрашиванию клеточной цитоплазмы, а для мертвых клеток характерна красная флуоресценция ядер. TUNEL-анализ проводят в соответствии с инструкциями производителя. Кратко, поперечные срезы агрегатов НСЕС фиксируют в 4%-ном параформальдегиде в течение 20 минут при КТ и осуществляют пермеабилизацию, используя 1%-ный Тритон Х-100. Затем образцы инкубируют в течение 60 минут при 37°C с экзогенной TdT и конъюгированным с флуоресцеином dUTP для репарации однонитевых разрывов с 3'-гидрокси-концов ДНК. Клетки обрабатывают ДНКазой I в качестве положительного контроля, тогда как клетки, взятые в качестве отрицательного контроля, инкубируют с буфером без фермента rTdT. Ядра апоптозных клеток метят зеленой флуоресценцентной меткой.
Пример 45. Клеточная культура клеток сетчатки
Глаза разрезают пополам вдоль их экватора и нейральную сетчатку иссекают из остальной части глаза в забуференный физиологический раствор в соответствии со стандартными способами, известными в данной области техники. Кратко, сетчатку, цилиарное тело и стекловидное тело иссекают из передней половины глаза в виде одного куска и сетчатку осторожно отсоединяют от прозрачного стекловидного тела. Каждую сетчатку разъединяют, используя папаин (Worthington Biochemical Corporation, Lakewood, N.J.), затем инактивируют эмбриональной бычьей сывороткой (FBS) и добавляют ДНКазу I (134 единицы Кунитца/мл). Ферментативно разъединенные клетки растирают и собирают центрифугированием, ресуспендируют в смеси модифицированной Дульбекко среды Игла (DMEM)/F12 среды (Gibco BRL, Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, Calif.), содержащей инсулин (25 мкг/мл), трансферрин (100 мкг/мл), 60 мкМ путресцин, 30 нМ селен, 20 нМ прогестерон, пенициллин (100 ед/мл), стрептомицин (100 мкг/мл), 0,05 М Hepes и 10% FBS. Разъединенные первичные клетки сетчатки рассевают на покрытые поли-D-лизином и матригелем (BD, Franklin Lakes, N.J.) стеклянные покровные стекла, которые помещают в 24-луночные планшеты для тканевых культур (Falcon Tissue Culture Plates, Fisher Scientific, Pittsburgh, Pa.). Клетки поддерживают в культуре в течение от 5 суток до одного месяца в 0,5 мл сред (как указано выше, за исключением только 1% FBS) при 37°C и 5% CO2.
Иммуноцитохимический анализ
Клетки нейральной сетчатки культивируют в течение 1, 3, 6 и 8 недель в присутствии и отсутствие тестируемых соединений по настоящему изобретению и клетки анализируют с использованием иммуногистохимии для каждой временной точки. Иммуноцитохимический анализ проводят в соответствии со стандартными методиками, известными в данной области техники. Фоторецепторы палочек идентифицируют, используя мечение специфичным к родопсину антителом (мышиное моноклональное, разбавленное 1:500; Chemicon, Temecula, Calif.). Антитело к белку нейрофиламента средней молекулярной массы (кроличье поликлональное к белку NFM, разбавленное 1:10000, Chemicon) используют для идентификации ганглиозных клеток; антитело к β3-тубулину (G7121, мышиное моноклональное, разбавленное 1:1000, Promega, Madison, Wis.) используют для общей идентификации промежуточных нейронов и ганглиозных клеток, а антитела к кальбиндину (АВ1778, кроличье поликлональное, разбавленное 1:250, Chemicon) и кальретинину (АВ5054, кроличье поликлональное, разбавленное 1:5000, Chemicon) используют для идентификации субпопуляций кальбиндин- и кальретинин-экспрессирующих промежуточных нейронов во внутреннем нуклеарном слое. Кратко, культуры клеток сетчатки фиксируют 4%-ным параформальдегидом (Polysciences, Inc, Warrington, Ра.) и/или этанолом, промывают в фосфатно-соляном буфере Дульбекко (DPBS) и инкубируют с первичным антителом в течение 1 часа при 37°C. Затем клетки промывают DPBS, инкубируют с вторичным антителом (Alexa 488- или Alexa 568- конъюгированными вторичными антителами (Molecular Probes, Eugene, Oreg.)) и промывают DPBS. Ядра окрашивают 4',6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI, Molecular Probes) и культуры промывают DPBS, удаляют со стеклянных покровных стекол и закрепляют их с помощью Fluoromount-G (Southern Biotech, Birmingham, Ala.) на предметных стеклах для рассмотрения и анализа.
Пример 46. Анализ ангиогенеза с использованием "пробки" (plug) из матригеля
Матригель, содержащий тестируемые соединения, вводят под кожу или внутрь глаза, где он отвердевает с образованием "пробки". "Пробку" извлекают через 7-21 сутки из животного и исследуют гистологически для определения степени проникновения в нее кровеносных сосудов. Ангиогенез оценивают путем количественного определения сосудов в гистологических срезах. Альтернативно, проводят измерение объема плазмы с применением флуоресценции, используя меченный флуоресцеинизотиоцианатом (FITC) декстран 150. Ожидается, что на основании этих результатов будут отмечены одно или более соединений, изложенных в данной заявке, которые ингибируют ангиогенез, и ввиду этого ожидается, что они будут полезными в лечении офтальмологических нарушений, связанных с аберрантным ангиогенезом и/или аберрантной проницаемостью сосудов.
Пример 47. Анализ ангиогенеза роговицы
В роговице делают углубление, и "пробка", содержащая индуцирующую ангиогенез композицию (например, VEGF, FGF или опухолевые клетки), будучи введена в это углубление, вызывает прорастание новых сосудов из периферической лимбальной сосудистой сети. Вещества с медленным высвобождением, такие как ELVAX (сополимер этилен-винила) или Hydron, используют для введения ангиогенез-индуцирующих веществ в углубление в роговице. Альтернативно, используют губчатый материал.
Влияние предполагаемых ингибиторов на локально индуцированную (например, губчатым имплантатом) ангиогенезную реакцию в роговице (например, под действием FGF, VEGF или опухолевых клеток). Тестируемое соединение вводят перорально, системно или непосредственно в глаз. Системное введение осуществляют болюсной инъекцией или, более эффективно, путем использования способа, обеспечивающего замедленное высвобождение, такого как имплантация осмотических насосов, заполненных тестируемым ингибитором. Введение в глаз осуществляют любым из способов, изложенных в данной заявке, включая, но не ограничиваясь этим, капли для глаз, местное введение крема, эмульсии или геля, интравитреальную инъекцию.
Сосудистую реакцию регистрируют посредством прямого наблюдения по ходу эксперимента на мышах, используя стереомикроскоп. Точной визуализации сосудистой сети роговицы добиваются благодаря введению меченного флуорохромом декстрана с большой молекулярной массой. Количественное определение проводят путем измерения площади проникновения сосудов, продвижения сосудов с течением времени по направлению к ангиогенному стимулу или, в случае с использованием флуоресценции, путем анализа гистограмм или количества элементов изображения, превышающих конкретный (фоновый) порог.
Ожидается, что на основании этих результатов будут отмечены одно или более соединений, изложенных в данной заявке, которые ингибируют ангиогенез, и ввиду этого ожидается, что они будут полезными в лечении офтальмологических нарушений, связанных с аберрантным ангиогенезом и/или аберрантной проницаемостью сосудов.
Пример 48. Анализ ангиогенеза с использованием микротитрационного планшета
Планшет для анализа готовят, помещая на дно каждой лунки коллагеновую "пробку" с 5-10 клеточными сфероидами на одну коллагеновую "пробку", при этом каждый сфероид содержит 400-500 клеток. Каждую коллагеновую "пробку" покрывают средой для хранения, внося по 1100 мкл на одну лунку, и хранят для будущего использования (1-3 суток при 37°C, 5% CO2). Планшет герметично закрывают с укупориванием. Тестируемые соединения растворяют в 200 мкл среды для анализа, при этом по меньшей мере одна лунка содержит VEGF в качестве положительного контроля, и по меньшей мере одна лунка в качестве отрицательного контроля не содержит VEGF или тестируемого соединения. Планшет для анализа извлекают из инкубатора и среду для хранения осторожно удаляют с помощью пипетки. Среду для анализа, содержащую тестируемые соединения, наносят с помощью пипетки на коллагеновую "пробку". "Пробку" помещают в инкубатор с увлажнением (37°C, 5% CO2) на 24-48 часов. Количественную оценку ангиогенеза проводят, подсчитывая количество отростков, измеряя среднюю длину отростков или определяя кумулятивную длину отростков. Чтобы провести анализ позднее, материалы анализа можно законсервировать путем удаления среды для анализа, добавления в каждую лунку 1 мл 10%-ного параформальдегида в сбаланированном солевом растворе (BSS) Хенка и хранения при 4°C. Ожидается, что результаты позволят идентифицировать соединения, которые ингибируют ангиогенез в различных типах тестируемых клеток, включая клетки, имеющие происхождение из глаза.
Пример 49. Анализ независимой от Т-клеток активации В-клеток TNP-фиколлом (TNP-F)
Для тестирования влияния соединений по настоящему изобретению на супрессию независимой от Т-клеток продукции антител использовали анализ активации В-клеток TNP-фиколлом, как изложено в данной заявке. Соединения по настоящему изобретению растворяли в соответствующем растворителе (например, содержащем 5% 1-метил-2-пирролидинона, 85% полиэтиленгликоля 400, 10% солутора (solutor)). Соединения вводили мышам в возрасте 4-10 недель перорально приблизительно за 1 ч до обработки TNP-фиколлом. Для изучения влияния данных соединений на активацию В-клеток одну партию мышей объединяли в группы согласно следующей таблице:
Четырех животных в группе 1 и восемь животных в группах 2-7 подвергали эвтаназии в CO2 через 2 часа после последнего введения соединений на 7-е сутки. Производили незамедлительный забор крови посредством пункции сердца и кровь хранили при 37°C в течение 1 ч, чтобы она свернулась, после чего инкубировали в течение ночи при 4°C для сокращения тромба. На следующий день собирали сыворотку крови путем декантации и центрифугирования при 3000 об/мин в течение 10 мин. Собранную сыворотку затем замораживали при -80°C для дальнейшего анализа.
Образцы сыворотки анализировали посредством ELISA на предмет титров антител против TNP, как изложено в данной заявке. Лунки микротитрационного планшета Nunc Maxisorb покрывали раствором TNP-BSA в количестве 100 мкл/лунка в концентрации 10 мкг/мл в фосфатно-солевом буфере (PBS). Планшет Maxisorb инкубировали в течение 1,5 часа при комнатной температуре и раствор удаляли. В каждую лунку добавляли по 200 мкл/лунка блокирующего буфера (например, 1%-ного BSA в PBS) и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшет промывали один раз по 200 мкл/лунка 0,05% Твин-20 в PBS (буфер для промывки). В каждую лунку первой колонки (1) микротитрационного планшета добавляли разведенную 1:2 сыворотку в блокирующем буфере от каждой мыши. Сыворотку в каждой лунке колонки 1 затем разбавляли в 3 раза в блокирующем буфере и добавляли в колонку 2. Сыворотку в каждой лунке колонки 2 разбавляли в 3 раза в блокирующем буфере и добавляли в колонку 3. Данную процедуру повторяли во всех двенадцати колонках микротитрационного планшета. Микротитрационный планшет инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Сыворотку удаляли из планшета и планшет трижды промывали буфером для промывки. В каждую лунку добавляли по 100 мкл/лунка конъюгированных с HRP (пероксидаза хрена) антител козы против lgG3 мыши, разбавленных 1:250 в блокирующем буфере и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре. Конъюгированные с HRP антитела против IgG3 мыши удаляли из микротитрационного планшета и планшет промывали шесть раз буфером для промывки. В каждую лунку добавляли субстрат для HRP (200 мкл раствора ABTS (2,2'-азино-бис-(3-этилбензтиазолин-6-сульфоновая кислота) + 30% H2O2 + 10 мл цитратного буфера) по 100 мкл/лунка, инкубировали в течение 2-20 минут в темноте и количество анти-TNP IgG3 определяли спектрофотометрически на 405 нм. Аналогично, количество анти-TNP IgM и общее количество Ab (антитела) против TNP определяли, используя конъюгированные с HRP антитела против IgM мыши и конъюгированные с HRP антитела против Ig мыши, соответственно.
Результаты, приведенные на Фиг. 2, также показывают, что в условиях тестирования соединения №7 и №53 демонстрируют 3,4- и 6,5-кратное снижение, соответственно, уровней lgG3 у мышей по сравнению с растворителем в качестве контроля, при уровне доз 30 мг/кг. На Фиг. 2 также показано, что в условиях тестирования соединение №53 демонстрирует 29,9-кратное снижение уровней IgG3 у мышей по сравнению с растворителем в качестве контроля, при уровне доз 60 мг/кг.
Пример 50. Анализ развивающегося индуцированного коллагеном II типа артрита у крыс
С целью изучения влияния соединений по настоящему изобретению на аутоиммунное заболевание артрит использовали модель развивающегося индуцированного коллагеном артрита. Самкам крыс Льюиса делали инъекции коллагена на 0-е сутки. Бычий коллаген II типа готовили в виде раствора в концентрации 4 мг/мл в 0,01 н. уксусной кислоте. Равные объемы раствора коллагена и неполного адъюванта Фрейда эмульгировали, перемешивая вручную до тех пор, пока капелька эмульгируемого вещества не начинала сохранять свою форму в воде. Каждому грызуну посредством подкожной инъекции вводили по 300 мкл смеси, в каждый момент введения инъекции распределяя ее по трем участкам на спине.
Пероральное введение соединений начинали на 0-е сутки и продолжали по 16-е сутки включительно, вводя растворитель (5% NMP, 85% ПЭГ 400, 10% Солутол) или соединения по настоящему изобретению в растворителе или контроль (например, метотрексат) с 12-ти часовыми интервалами один раз в сутки. Крыс взвешивали на 0, 3, 6, 9-17-е сутки и измерения голеностопных суставов с помощью штангенциркуля проводили на 9-17-е сутки. Проводили окончательное измерение массы тела и далее животных подвергали эвтаназии на 17-е сутки. После эвтаназии отбирали кровь и отделяли задние лапы и коленные суставы. Далее кровь обрабатывали для фармакокинетических экспериментов, а также ELISA-анализа на антитела против коллагена II типа. Задние лапы взвешивали и затем вместе с коленными суставами хранили в 10%-ном формалине. Лапы и коленные суставы далее обрабатывали для проведения микроскопии. Также взвешивали печень, селезенку и вилочковую железу. Седалищные нервы готовили для гистопатологического исследования.
Коленный и голеностопный суставы фиксировали в течение 1-2 суток и декальцифицировали в течение 4-5 суток. Голеностопные суставы разрезали на две равные части в продольном направлении, коленные суставы разрезали на две равные части вдоль фронтальной плоскости. Затем суставы обрабатывали, закрепляли, делали срезы и окрашивали толуидиновым синим. Оценку суставов проводили в соответствии с приведенными далее критериями.
Воспаление коленного и голеностопного суставов
0 - в норме.
1 - минимальная инфильтрация воспалительных клеток в синовиальную/околосуставную ткань.
2 - легкая инфильтрация.
3 - умеренная инфильтрация с умеренным отеком.
4 - заметная инфильтрация с заметным отеком.
5 - сильная инфильтрация с сильным отеком.
Паннус голеностопного сустава
0 - в норме.
1 - минимальная инфильтрация паннуса в хрящ и подхрящевую кость.
2 - легкая инфильтрация (менее 1/4 большой берцовой кости или предплюсны в краевых зонах).
3 - умеренная инфильтрация (1/4-1/3 большой берцовой кости или мелкие кости предплюсны в краевых зонах).
4 - заметная инфильтрация (1/2-3/4 большой берцовой кости или предплюсны в краевых зонах).
5 - сильная инфильтрация (более 3/4 большой берцовой кости или предплюсны в краевых зонах, сильное нарушение общей структуры).
Паннус коленного сустава
0 - в норме.
1 - минимальная инфильтрация паннуса в хрящ и подхрящевую кость.
2 - легкая инфильтрация (распространяется вплоть до 1/4 поверхности или подхрящевой области большой берцовой кости или бедренной кости).
3 - умеренная инфильтрация (распространяется в диапазоне от более 1/4, но менее 1/2 поверхности или подхрящевой области большой берцовой кости или бедренной кости).
4 - заметная инфильтрация (распространяется в диапазоне от 1/2 до 3/4 поверхности большой берцовой кости или бедренной кости).
5 - сильная инфильтрация (охватывает более 3/4 поверхности).
Поражение хряща (голеностопный сустав, с акцентом на мелких костях предплюсны)
0 - в норме.
1 - минимальное - ослабление окраски толуидиновым синим от минимальной до легкой степени без какого-либо видимого уменьшения количества хондроцитов или разрушения коллагена.
2 - легкое - легкая степень ослабления окраски толуидиновым синим с легким (поверхностным), очагового характера, уменьшением количества хондроцитов и/или разрушением коллагена.
3 - умеренное - умеренная степень ослабления окраски толуидиновым синим с умеренным (на толщину до середины зоны), многоочагового характера, уменьшением количества хондроцитов и/или разрушением коллагена, с поражением мелких костей предплюсны на 1/2-3/4 глубины.
4 - заметное - заметное ослабление окраски толуидиновым синим с заметным (на толщину до глубокой зоны), многоочагового характера, уменьшением количества хондроцитов и/или разрушением коллагена, с утратой хряща по всей толщине на 1 или более мелких костях предплюсны.
5 - тяжелое - значительное диффузное ослабление окраски толуидиновым синим со значительным (на толщину до демаркационной линии), многоочагового характера, уменьшением количества хондроцитов и/или разрушением коллагена.
Поражение хряща (коленный сустав, с акцентом на мыщелках бедренной кости).
0 - в норме.
1 - минимальное - ослабление окраски толуидиновым синим от минимальной до легкой степени без какого-либо видимого уменьшения количества хондроцитов или разрушения коллагена.
2 - легкое - легкая степень ослабления окраски толуидиновым синим с легким (поверхностным), очагового характера, уменьшением количества хондроцитов и/или разрушением коллагена.
3 - умеренное - умеренная степень ослабления окраски толуидиновым синим с умеренным (на толщину до середины зоны), от многоочагового до диффузного характера, уменьшением количества хондроцитов и/или разрушением коллагена.
4 - заметное - заметное ослабление окраски толуидиновым синим с заметным (на толщину до глубокой зоны), от многоочагового до диффузного характера, уменьшением количества хондроцитов и/или разрушением коллагена на поверхности одной бедренной кости с полной утратой или утратой, близкой к полной.
5 - тяжелое - значительное диффузное ослабление окраски толуидиновым синим со значительным (на толщину до демаркационной линии), многоочагового характера, уменьшением количества хондроцитов и/или разрушением коллагена на обеих бедренных костях и/или больших берцовых костях.
Резорбция кости (голеностопный сустав)
0 - в норме.
1 - минимальная - небольшие области резорбции, с трудом различимые при низком увеличении, редкие остеокласты.
2 - легкая - более многочисленные области резорбции, с трудом различимые при низком увеличении, остеокласты более многочисленны, менее 1/4 большой берцовой кости или костей предплюсны в краевых зонах подвергнуты резорбции.
3 - умеренная - явно заметная резорбция медуллярной трабекулярной или кортикальной кости без глубоких, на всю толщину, дефектов поверхностного слоя, утрата некоторых медуллярных трабекул, поражение различимо при низком увеличении, остеокласты более многочисленны, поражено от 1/4 до 1/3 большой берцовой кости или костей предплюсны в краевых зонах.
4 - заметная - глубокие, на всю толщину, дефекты кортикальной кости, часто с деформацией профиля остальной кортикальной поверхности, заметная утрата медуллярной части кости, многочисленные остеокласты, поражено 1/2-3/4 большой берцовой кости или костей предплюсны в краевых зонах.
5 - сильная - глубокие, на всю толщину, дефекты кортикальной кости, часто с деформацией профиля остальной кортикальной поверхности, заметная утрата медуллярной части кости, многочисленные остеокласты, поражено более 3/4 большой берцовой кости или костей предплюсны в краевых зонах, сильная деформация общей структуры.
Резорбция кости (коленный сустав)
0 - в норме.
1 - минимальная - небольшие области резорбции, с трудом различимые при низком увеличении, редкие остеокласты.
2 - легкая - более многочисленные области резорбции, некоторая утрата субхондральной кости, включая 1/4 поверхности большой берцовой кости или бедренной кости (медиальной или латеральной).
3 - умеренная - явно заметная резорбция подхрящевой кости, включая более 1/4, но менее 1/2 поверхности большой берцовой кости или бедренной кости (медиальной или латеральной).
4 - заметная - явно заметная резорбция подхрящевой кости, включая не менее 1/2, но менее 3/4 поверхности большой берцовой кости или бедренной кости (медиальной или латеральной).
5 - сильная - деформация всего сустава, обусловленная разрушением, вовлекающим более 3/4 поверхности большой берцовой кости или бедренной кости (медиальной или латеральной).
Статистический анализ массы тела/лапы, параметры AUC (площадь под кривой) для лап и гистопатологические параметры оценивали, используя t-тест Стьюдента или другие соответствующие критерии (дисперсионный анализ ANOVA с послеэкспериментальным тестом), с уровнем значимости равным 5%. Процент ингибирования массы лапы и AUC рассчитывали, используя следующую формулу:
% ингибирования = (А-В/А)×100, где
А представляет собой среднее значение для контрольных объектов заболевания минус среднее значение для нормы;
B представляет собой среднее значение для получающих лечение объектов минус среднее значение для нормы.
Результаты, показанные на Фиг. 3, демонстрируют влияние соединения №53 в дозах 10, 30 и 60 мг/кг с 12-ти часовыми интервалами в условиях тестирования на средний диаметр голеностопного сустава во времени в модели развивающегося индуцированного коллагеном II типа артрита у крыс. В сравнении с контролем в виде одного только растворителя или контролем в виде метотрексата, соединения по настоящему изобретению демонстрировали значительное уменьшение индуцированного артритом увеличения диаметра голеностопного сустава во времени.
Результаты, показанные на Фиг. 4, демонстрируют влияние соединений №7 и №53 на гистопатологию голеностопного сустава в категориях: воспаление, паннус, повреждение хряща и резорбция кости, как описано ранее в условиях тестирования. Результаты указывают на значительное уменьшение в одной или более категориях под действием одного из соединений по настоящему изобретению (то есть соединения №53) в условиях тестирования. На Фиг. 4 также показано, что в дозе 60 мг/кг в условиях тестирования имеется статистически значимое уменьшение во всех категориях гистопатологии голеностопного сустава, выявленное для одного из соединений по настоящему изобретению (то есть соединения №53). Это является подтверждением того, что одно или более соединений по настоящему изобретению могут быть полезны для лечения и ослабления симптомов заболевания артритом.
Результаты, показанные на Фиг. 5, демонстрируют влияние соединений №7 и №53 в условиях тестирования на гистопатологию коленного сустава. Результаты демонстрируют дозозависимое уменьшение гистопатологии коленного сустава. Это является подтверждением того, что одно или более соединений по настоящему изобретению могут быть полезны для лечения и ослабления симптомов заболевания артритом.
Результаты, показанные на Фиг. 6, демонстрируют влияние соединений №7 и №53 в условиях тестирования на уровни антител против коллагена II типа в сыворотке крови. Результаты также указывают на значительное снижение уровней антител против коллагена II типа в сыворотке крови при уровнях доз соединения №53, равных 10, 20 и 60 мг/кг, что является подтверждением того, что одно или более соединений по настоящему изобретению могут быть полезны не только для лечения и ослабления симптомов заболевания артритом, но также могут быть полезны для ингибирования самой аутоиммунной реакции.
Результаты, показанные на Фиг. 7, демонстрируют влияние соединения №7 в дозах 10, 30 и 60 мг/кг с 12-ти часовыми интервалами в условиях тестирования на средний диаметр голеностопного сустава во времени. В сравнении с контролем в виде одного только растворителя или контролем в виде метотрексата, соединение в условиях тестирования демонстрировало значительное уменьшение индуцированного артритом увеличения диаметра голеностопного сустава во времени.
Пример 51. Анализ установленного индуцированного коллагеном II типа артрита у крыс
С целью изучения дозозависимой эффективности соединений по настоящему изобретению в ингибировании воспаления, разрушения хряща и резорбции кости с установленным на 7-е сутки индуцированным коллагеном II типа артритом у крыс соединения вводили перорально один или два раза в сутки в течение 6 суток.
Самок крыс Льюиса анестезировали и делали инъекции коллагена, приготовленные и вводимые, как описано ранее, на 0-е сутки. На 6-е сутки животных анестезировали и делали вторую инъекцию коллагена. Измерения с помощью штангенциркуля нормальных (до заболевания) правого и левого голеностопных суставов проводили на 9-е сутки. Обычно артрит появлялся на 10-11-е сутки, и крыс рандомизировали на группы, подвергаемые лечению. Рандомизацию проводили после того, как с очевидностью устанавливали опухание голеностопного сустава и имели хорошее доказательство наличия билатерального заболевания.
После отбора животных для участия в данном исследовании лечение инициировали, используя пероральный путь введения. Животные получали растворитель, контроль (энбрел) или дозы соединений два раза в сутки или один раз в сутки (2х/сут или 1х/сут, соответственно). Введение осуществляли на 1-6-е сутки, используя объем 2,5 мл/кг (2х/сут) или 5 мл/кг (1х/сут) для пероральных растворов. Крыс взвешивали на 1-7-е сутки после установления артрита и каждый день проводили измерения голеностопных суставов с помощью штангенциркуля. Конечные значения массы тела определяли на 7-е сутки и животных подвергали эвтаназии.
Результаты, показанные на Фиг. 8, демонстрируют значительное уменьшение увеличения среднего диаметра голеностопного сустава во времени для соединения №53 при введении его один раз в сутки в условиях тестирования. Результаты, показанные на Фиг. 9, также демонстрируют значительное уменьшение увеличения среднего диаметра голеностопного сустава во времени для соединения №53 при введении его два раза в сутки в условиях тестирования. Это является подтверждением того, что соединения по настоящему изобретению могут быть полезны для лечения аутоиммунных заболеваний, таких как артрит.
Пример 52. Анализ артрита, индуцированного адъювантом
Интратекальная катетеризация крыс
Анестезированным изофлураном крысам Льюиса (200-250 г) имплантировали интратекальный (и/т) катетер. После восстановительного периода в течение 6 сут для экспериментов использовали всех животных за исключением тех, которые демонстрировали аномалии чувствительности или двигательной активности, (менее 5% от общего количества). Для осуществления и/т введения через катетер вводили 10 мкл лекарственного средства или физиологического раствора, затем 10 мкл изотонического физиологического раствора.
Индуцированный адъювантом артрит и лекарственная терапия
Крыс Льюиса иммунизировали в основание хвоста, используя 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда (CFA), на 0-е сутки через несколько суток после имплантации катетера (n равен 6/группа). Лекарственную терапию (например, одним или более чем одним соединением по настоящему изобретению или растворителем) обычно начинали на 8-е сутки и продолжали ежесуточно вплоть до 20-х суток. Клинические признаки артрита, как правило, появляются на 10-е сутки, и опухание лап определяли на каждые вторые сутки с использованием плетизмометрии водного смещения.
Результаты, приведенные на Фиг. 10, посредством среднего изменения объема лапы для указанных схем введения показывают, что в условиях тестирования соединение №53 демонстрирует дозозависимое уменьшение увеличения среднего объема лапы по результатам измерений в этой модельной системе индуцированного адъювантом артрита. Эти результаты являются подтверждением того, что одно или более соединений по настоящему изобретению могут быть полезны для лечения одного или более заболеваний или состояний, изложенных в данной заявке.
Результаты, приведенные на Фиг. 11, показывают, что соединение №53 не проявляет токсичности или другой побочной реакции в условиях тестирования, что оценено по отсутствию уменьшения массы.
Пример 53. Фармакокинетический анализ на грызунах
С целью изучения фармакокинетики соединений по настоящему изобретению из партии мышей в возрасте 4-10 недель составляют группы в соответствии со следующей таблицей:
Соединения по настоящему изооретению растворяют в соответствующем носителе (например, содержащем 5% 1-метил-2-пирролидинона, 85% полиэтиленгликоля 400, 10% Солутора (Solutor)) и вводят перорально с интервалами 12 часов один раз в сутки. Всех животных подвергают эвтаназии в CO2 через 2 часа после заключительного введения соединения. Осуществляют незамедлительный забор крови и хранят на льду для выделения плазмы. Плазму выделяют центрифугированием при 5000 об/мин в течение 10 минут. Собранную плазму замораживают для проведения фармакокинетического определения.
Ожидается, что результаты продемонстрируют фармакокинетические параметры, такие как параметры всасывания, распределения, метаболизма, экскреции и токсичности для соединений по настоящему изобретению.
Пример 54. Базотест (Basotest)-анализ (анализ с помощью теста активации базофилов аллергенами)
Basotest-анализ проводят, используя набор реагентов для Basotest от Orpegen Pharma. Цельную гепаринизированную кровь предварительно инкубируют с тестируемым соединением или растворителем при 37°C в течение 20 мин. Далее кровь инкубируют со стимулирующим буфером из набора для анализа (чтобы примировать клетки для получения ответа), затем с аллергеном (экстрактом пыли, содержащей пылевого клеща, или экстрактом растительного происхождения) в течение 20 мин. Процесс дегрануляции останавливают путем инкубации образцов крови на льду. После этого в клетки вводят метку, используя анти-IgE-PE (фикоэритрин), для детекции базофильных гранулоцитов, и aHTH-gp53-FITC для детекции gp53 (гликопротеина, экспрессируемого на активированных базофилах). После окрашивания эритроциты подвергают лизису путем добавления лизирующего раствора. Клетки промывают и анализируют с использованием проточной цитометрии. Соединения 7 и 53, в том случае, когда их тестируют в данном анализе, ингибируют индуцируемую аллергеном активацию базофильных гранулоцитов в диапазоне субмикромолярных концентраций.
Пример 55. Комбинированное применение ингибиторов PI3Kδ и агентов, которые ингибируют продукцию или активность IgE
Соединения по настоящему изобретению могут проявлять синергическую или аддитивную эффективность при введении в комбинации с агентами, которые ингибируют продукцию или активность IgE.
Агенты, которые ингибируют продукцию IgE, включают, например, один или более агентов из TEI-9874, 2-(4-(6-циклогексилокси-2-нафтилокси)-фенилацетамид)бензойной кислоты, рапамицина, аналогов рапамицина (то есть рапалогов), ингибиторов TORC1, ингибиторов TORC2 и любых других соединений, которые ингибируют mTORCI и mTORC2. Агенты, которые ингибируют активность IgE, включают, например, антитела против IgE, такие как, например омализумаб и TNX-901.
Одно или более соединений, являющихся объектом изобретения, способных ингибировать PI3Kδ, эффективны в лечении аутоиммунных и воспалительных расстройств (AIID), например, ревматоидного артрита. Если какое-либо из соединений вызывает нежелательный уровень продукции IgE, его можно выбрать для введения в комбинации с агентом, который ингибирует продукцию IgE или активность IgE. Кроме того, введение ингибиторов PI3Kδ или Р13Кδ/γ по настоящему изобретению в комбинации с ингибиторами mTOR также может приводить к синергизму посредством усиленного ингибирования PI3K-пути. Для установления влияния такого комбинированного лечения на AIID могут быть использованы различные модели in vivo и in vitro, включая, но не ограничиваясь этим, (а) анализ продукции антител В-клетками in vitro, (б) TNP-анализ in vivo и (в) модель индуцированного коллагеном артрита у грызунов.
(а) Анализ с использованием В-клеток
Мышей подвергают эвтаназии, селезенки извлекают и измельчают через нейлоновую сетку для получения суспензии отдельных клеток. Спленоциты промывают (после удаления эритроцитов посредством осмотического шока) и инкубируют с микрогранулами, конъюгированными с антителами против CD43 и против Мас-1, (Miltenyi Biotec). Связавшиеся с гранулами клетки отделяют от несвязавшихся клеток, используя магнитный сортер клеток. Ненужные клетки удерживаются в намагниченной колонке, а оставшиеся В-клетки собирают в проходящем потоке. Очищенные В-клетки стимулируют липополисахаридом или антителом против CD40 и интерлейкином 4. Стимулированные В-клетки обрабатывают только растворителем или растворителем вместе с PI3Kδ-ингибиторами по настоящему изобретению, такими как соединение 53, с ингибиторами mTOR, такими как рапамицин, рапалоги или ингибиторами mTORC1/C2, или без них. Ожидается, что на основании этих результатов будет продемонстрировано, что в присутствии только лишь ингибиторов mTOR (например, рапамицина) влияние на IgG- и IgE-ответ будет оказано в диапазоне от небольшого до по существу нулевого. Тем не менее, ожидается, что в присутствии ингибиторов PI3Kδ и mTOR В-клетки будут демонстрировать ослабленный IgG-ответ по сравнению с В-клетками, обработанными только растворителем, и ожидается, что В-клетки будут демонстрировать ослабленный IgE-ответ по сравнению с ответом от В-клеток, обработанных только ингибиторами PI3Kδ.
(б) TNP-анализ
Мышей иммунизировали TNP-фиколлом или TNP-KHL (гемоцианин моллюска фиссурелии) и обрабатывали: растворителем, ингибитором PI3Kδ, например, соединением 53 по настоящему изобретению, ингибитором mTOR, например, рапамицином, или ингибитором PI3Kδ в комбинации с ингибитором mTOR, таким как рапамицин. Содержание в сыворотке антиген-специфичного IgE измеряют посредством ELISA, используя планшеты, покрытые TNP-BSA, и изотип-специфичные меченые антитела. Ожидается, что мыши, обработанные только ингибитором mTOR, будут демонстрировать незначительное влияние или по существу никакого влияния на антиген-специфичный lgGS-ответ и никакого статистически значимого повышения IgE-ответа по сравнению с растворителем в качестве контроля. Также ожидается, что мыши, обработанные совместно ингибиторами PI3Kδ и ингибиторами mTOR, будут демонстрировать снижение антиген-специфичного IgGS-ответа по сравнению с мышами, обработанными только растворителем. Кроме того, мыши, обработанные как ингибиторами PI3Kδ, так и ингибиторами mTOR, будут демонстрировать повышение в IgE-ответе по сравнению с мышами, обработанными только ингибитором PI3Kδ.
(в) Модель индуцированного коллагеном артрита у крыс
Самок крыс Льюиса анестезируют и на 0-е сутки делают инъекции коллагена, которые готовят и вводят, как описано ранее. На 6-е сутки животных анестезируют и делают вторую инъекцию коллагена. Измерения с помощью штангенциркуля нормальных (до заболевания) правого и левого голеностопных суставов проводят на 9-е сутки. Обычно артрит появляется на 10-11-е сутки и крыс рандомизируют на группы, подвергаемые лечению. Рандомизацию проводят после того, как с очевидностью устанавливают опухание голеностопного сустава и имеется хорошее доказательство наличия билатерального заболевания.
После отбора животных для участия в данном исследовании начинают лечение. Животные получают растворитель, ингибитор PI3Kδ или ингибитор PI3Kδ в комбинации с рапамицином. Введение осуществляют на 1-6-е сутки. Крыс взвешивают на 1-7-е сутки после установления артрита и каждый день проводят измерения голеностопных суставов с помощью штангенциркуля. Конечные значения массы тела определяют на 7-е сутки и животных подвергают эвтаназии.
Ожидается, что комбинированное лечение с использованием ингибитора PI3Kδ и рапамицина будет обеспечивать большую эффективность, чем лечение только ингибитором PI3Kδ.
Несмотря на то, что в данной заявке показаны и изложены предпочтительные воплощения настоящего изобретения, специалистам в данной области техники будет очевидно, что такие воплощения приведены только в качестве примера. У специалистов в данной области техники сразу же появятся идеи многочисленных вариаций, изменений и замещений без отклонения от изобретения. Следует понимать, что при практическом применении изобретения могут быть использованы различные альтернативы воплощениям изобретения, изложенным в данной заявке. Подразумевается, что прилагаемая формула определяет объем изобретения и что тем самым охватываются способы и структуры, попадающие в пределы объема этой формулы, и их эквиваленты.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| НЕКОТОРЫЕ ХИМИЧЕСКИЕ СТРУКТУРЫ, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ | 2009 |
|
RU2537549C2 |
| НЕКОТОРЫЕ ХИМИЧЕСКИЕ СТРУКТУРЫ, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ | 2009 |
|
RU2513636C2 |
| НЕКОТОРЫЕ ХИМИЧЕСКИЕ СОЕДИНЕНИЯ, КОМПОЗИЦИИ И СПОСОБЫ | 2010 |
|
RU2582676C2 |
| Некоторые химические соединения, композиции и способы | 2010 |
|
RU2746319C2 |
| НОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И КОМПОЗИЦИИ ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ FASN | 2014 |
|
RU2686323C2 |
| БИ- И ПОЛИЦИКЛИЧЕСКИЕ ЗАМЕЩЕННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ИЗОХИНОЛИНА И ИЗОХИНОЛИНОНА, ПОЛЕЗНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ RHO-КИНАЗЫ | 2009 |
|
RU2532481C2 |
| ЛЕЧЕНИЕ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МОДУЛЯТОРОВ ИЗОФОРМ PI3-КИНАЗЫ | 2013 |
|
RU2702908C2 |
| БОРСОДЕРЖАЩИЕ МАЛЫЕ МОЛЕКУЛЫ В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ СРЕДСТВ | 2007 |
|
RU2508113C2 |
| 6-ЗАМЕЩЕННЫЕ ИЗОХИНОЛИНЫ И ИЗОХИНОЛИНОНЫ ПОЛЕЗНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ Rho-КИНАЗЫ | 2009 |
|
RU2528229C2 |
| ТРИЦИКЛИЧЕСКИЕ ИНГИБИТОРЫ ЯНУС-КИНАЗЫ 1, ИХ КОМПОЗИЦИИ, СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ | 2019 |
|
RU2824349C2 |
Изобретение относится к вариантам способа получения нового соединения формулы I, которое обладает свойствами модулирования активности РI3-киназы (фосфоинозитид-3-киназы). В соединении формулы I
R' представляет собой группировку формулы II
где Wc представляет собой фенил, q равен 0; R1 представляет собой водород, C1-С6алкил или галоген; и R3 представляет собой водород, C1-С6алкил, C1-С6алкокси или галоген. Способ получения соединения формулы I включает взаимодействие соединения формулы 1407
с соединением формулы:
где X представляет собой галоген. Либо способ получения соединения формулы I включает его вариант, включающий снятие защиты в присутствии кислоты с соединения формулы 1605
.
Формула изобретения также описывает способ получения исходных соединений 1407 и 1605 и соответствующих промежуточных продуктов для их получения. 2 н. и 30 з.п. ф-лы, 11 ил., 7 табл., 53 пр.
1. Способ получения соединения следующей формулы:
где
R' представляет собой группировку формулы II:
где Wc представляет собой фенил, q равен 0;
R1 представляет собой водород, C1-С6алкил или галоген; и
R3 представляет собой водород, C1-С6алкил, C1-С6алкокси или галоген;
включающий взаимодействие соединения формулы 1407:
с соединением формулы:
где X представляет собой галоген.
2. Способ по п. 1, где X представляет собой бромо.
3. Способ по п. 1, где соединение формулы 1407 получают способом, включающим:
стадию взаимодействия соединения формулы 1405:
с NH2R' с получением соединения формулы 1406:
и стадию снятия защиты с соединения формулы 1406 путем добавления кислоты с получением соединения формулы 1407;
где R' и R3 имеют значения, указанные в п. 1.
4. Способ по п. 3, где кислотой, добавленной на стадии снятия защиты, является HCl.
5. Способ по п. 3, где соединение формулы 1405 получают способом, включающим внутримолекулярное замыкание кольца соединения формулы 1404 или его соли:
в присутствии палладиевого катализатора и третичного амина;
где R3 имеет значение, указанное в п. 1.
6. Способ по п. 5, где внутримолекулярное замыкание кольца протекает в присутствии Pd(MeCN)2Cl2 и триэтиламина (TEA).
7. Способ по п. 5, где соединение формулы 1404 или его соль получают способом, включающим взаимодействие соединения формулы 1403 с KOH:
где R3 имеет значение, указанное в п. 1.
8. Способ по п. 7, где соединение формулы 1403 получают способом, включающим сочетание соединения формулы 1401:
с соединением формулы 1402:
в присутствии палладиевого катализатора, йодида меди и триэтиламина;
где R3 имеет значение, указанное в п. 1.
9. Способ по п. 8, где палладиевый катализатор представляет собой Pd(PPh3)2Cl2.
10. Способ по любому из пп. 1-9, где R1 представляет собой водород, метил, изопропил или фторо.
11. Способ по любому из пп. 1-9, где R3 представляет собой водород, метил, этил, -CF3, хлоро или фторо.
12. Способ по п. 11, где R3 представляет собой метил или хлоро.
13. Способ по любому из пп. 1-9, где R' представляет собой незамещенный фенил.
14. Способ получения соединения следующей формулы
где
R' представляет собой группировку формулы II:
где Wc представляет собой фенил,
q равен 0;
R1 представляет собой водород, C1-С6алкил или галоген; и
R3 представляет собой водород, C1-С6алкил, C1-С6алкокси или галоген;
включающий снятие защиты с соединения формулы 1605:
где снятие защиты протекает в присутствии кислоты.
15. Способ по п. 14, где соединение формулы 1605 получают способом, включающим взаимодействие соединения формулы 1604 с NH2R':
где R' и R3 имеют значения, указанные в п. 14.
16. Способ по п. 15, где соединение формулы 1604 получают способом, включающим внутримолекулярное замыкание кольца соединения формулы 1603 или его соли:
в присутствии палладиевого катализатора и третичного амина;
где R3 имеет значение, указанное в п. 14.
17. Способ по п. 16, где внутримолекулярное замыкание кольца протекает в присутствии Pd(MeCN)2Cl2 и TEA.
18. Способ по п. 16, где соединение формулы 1603 или его соль получают способом, включающим взаимодействие соединения формулы 1602 с KOH:
где R3 имеет значение, указанное в п. 14.
19. Способ по п. 18, где соединение формулы 1602 получают способом, включающим сочетание соединения формулы 1401:
с соединением формулы 1601:
в присутствии палладиевого катализатора, йодида меди и триэтиламина;
где R3 имеет значение, указанное в п. 14.
20. Способ по п. 19, где палладиевый катализатор представляет собой Pd(PPh3)2Cl2.
21. Способ по п. 14, где соединение формулы 1605 получают способом, включающим взаимодействие соединения формулы:
с соединением формулы 4104:
где R' и R3 имеют значения, указанные в п. 14.
22. Способ по п. 21, где получение соединения формулы 1605 происходит в присутствии NaH.
23. Способ по п. 21, где соединение формулы:
получают способом, включающим взаимодействие соединения формулы:
с PPh3 и CBr4,
где R' и R3 имеют значения, указанные в п. 14.
24. Способ по п. 23, где соединение формулы:
получают способом, включающим взаимодействие соединения формулы:
с MeMgBr;
где R' и R3 имеют значения, указанные в п. 14.
25. Способ по п. 24, где соединение формулы:
получают способом, включающим взаимодействие соединения формулы:
с MnO2;
где R' и R3 имеют значения, указанные в п. 14.
26. Способ по п. 25, где соединение формулы:
получают способом, включающим взаимодействие соединения формулы:
с LiAlH4,
где R' и R3 имеют значения, указанные в п. 14.
27. Способ по п. 26, где соединение формулы:
получают способом, включающим взаимодействие соединения формулы:
в присутствии Cs2CO3;
где R' и R3 имеют значения, указанные в п. 14.
28. Способ по п. 27, где соединение формулы:
получают способом, включающим взаимодействие соединения формулы:
с OsO4 и NaIO4;
где R' и R3 имеют значения, указанные в п. 14.
29. Способ по любому из пп. 14-28, где R1 представляет собой водород, метил, изопропил или фторо.
30. Способ по любому из пп. 14-28, где R3 представляет собой водород, метил, этил, -CF3, хлоро или фторо.
31. Способ по п. 30, где R3 представляет собой метил или хлоро.
32. Способ по любому из пп. 14-28, где R' представляет собой незамещенный фенил.
| WO 2005113556 A1, 01.12.2005 | |||
| US 20060019988 A1, 26.01.2006 | |||
| WO 2005105760 A1, 10.11.2005 & RU 2006142305 | |||
| US 2005197340 A1, 08.09.2005 | |||
| RU 2006132729 A1, 20.03.2008 & RU 2358969. |
