Способ посмертной диагностики аспирации грудного молока или молочной смеси у детей первого года жизни Российский патент 2023 года по МПК G01N33/50 A61B5/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к судебной медицине, и может быть использовано при проведении судебно-медицинских экспертиз для установления характера желудочного содержимого, а именно грудного молока или молочной смеси при аспирации.

Первый год жизни ребенка - один из наиболее уязвимых периодов развития, поскольку для него характерны существенные морфофункциональные изменения органов и систем. Регистрируется большое количество случаев смерти детей вследствие аспирации желудочного содержимого грудным молоком или молочными смесями при срыгивании. Во всех случаях это была неожиданная для окружающих смерть совершенно здоровых детей.

Аспирации желудочного содержимого у детей первых месяцев жизни способствует недостаточное развитие у них защитных рефлекторных механизмов дыхательных путей, способствующих удалению инородных частиц. К рождению ребенка дно и кардиальный отдел желудка развиты недостаточно, а пилорический отдел - значительно лучше, чем объясняются частые срыгивания. Срыгиванию способствуют также заглатывание воздуха при сосании, при неправильной технике вскармливания, короткой уздечке языка, жадном сосании, слишком быстром выделении молока из груди матери. Аспирация желудочного содержимого может возникать при недостаточном наблюдении за ребенком при срыгивании.

Основной вопрос, который приходится решать судебно-медицинскому эксперту при исследовании трупа, является установление причины смерти. В случаях смерти детей первого года жизни при подозрении на аспирацию желудочным содержимым современный уровень развития судебной медицины не позволяет в каждом конкретном случае научно обоснованно решать этот вопрос. В большинстве случаев при секционном исследовании трупа никаких характерных изменений не наблюдается, кроме общеасфиктических признаков. Это связано с тем, что частички аспирата грудного молока или молочной смеси проникают глубоко в терминальные бронхиолы и альвеолярные пространства, в отличие от грубых комочков пищи, которые легко обнаружить в дыхательных путях взрослых. Кроме того, асфиксия может возникнуть даже от небольшого количества аспирированной пищи за счет рефлекторного спазма дыхательной мускулатуры. В связи с этим очевидна необходимость дальнейшей разработки способов посмертной диагностики аспирации желудочного содержимого у детей первого года жизни.

Известен способ определения аспирации пищевых масс путем обнаружения инородных частиц в окрашенных гистологических препаратах легких при исследовании микропрепаратов в проходящем свете биологического микроскопа (В.Г. Науменко, В.А. Митяева. Гистологический и цитологический методы исследования в судебной медицине. Руководство. Москва: Медицина. 1980 г.). Указанный способ включает в себя изъятие кусочков легкого, фиксацию материала в консервирующих жидкостях в течение 1-2 суток, изготовление срезов при помощи замораживающего микротома или парафиновой проводки. Приготовленные срезы окрашивают по общепринятой методике, затем проводят микроскопическое исследование. При обнаружении в отдельных бронхах, бронхиолах и альвеолах пищевых масс в виде мышечных волокон (частиц мяса), базофильных аморфных глыбок (зерен крахмала), крупных клеток, по структуре не свойственных животным тканям (растительных клеток), судят об аспирации пищевых масс.

Применение данного способа для диагностики аспирации желудочного содержимого у детей первого года жизни, находящихся на грудном или искусственном вскармливании, невозможно ввиду отсутствия мышечных волокон, зерен крахмала, растительных клеток в грудном молоке или молочных смесях. Кроме этого, обычные методы заливки применять нельзя, так как эфир, ксилол и крепкие спирты, употребляемые при заливке, растворяют и извлекают жиры из изучаемых объектов.

Известен способ посмертной экспресс-диагностики аспирации желудочного содержимого (Н.С. Эделев, А.Л. Шершевский, С.В. Мотова. Патент на изобретение RU 2276787 C1) путем выявления протеаз желудочного сока в пищевых массах легких трупа. В известном способе у трупа берут мазок-отпечаток с поверхности разреза легкого, накладывают на эмульсионный слой фотопленки, предварительно смоченный раствором соляной кислоты, помещают во влажную камеру и инкубируют в термостате в течение 1-2 часов, затем фотопленку промывают проточной водой и при наличии не менее одного участка просветления на пленке диагностируют аспирацию желудочного содержимого.

Применение данного способа для диагностики аспирации желудочного содержимого у детей невозможно ввиду того, что секреторный аппарат желудка у ребенка первого года жизни развит недостаточно, функциональные способности его низкие, соответственно, и протеазная активность резко снижена. Кроме этого применение фотопленки с каждым годом все затруднительнее в связи с развитием современных технологий, где применение, а соответственно и изготовление пленки незначительно.

Известно, что дети первого года жизни находятся на грудном или искусственном вскармливании. В состав грудного молока и молочных смесей для кормления входят вода, белки (альбумин, казеин, незаменимые аминокислоты, нуклеотиды), жиры (ненасыщенные жирные кислоты), углеводы (лактоза, олигосахариды), минеральные вещества, витамины. При этом в грудном молоке содержатся полиненасыщенные длинноцепочные жирные кислоты, в молочных смесях - короткоцепочные и среднецепочные кислоты. Гистохимическое исследование позволяет определить с высокой долей вероятности происхождение аспирированных масс и соотнести это с обстоятельствами наступления смерти и видом аспирируемого вещества.

Известен способ Нортона (Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия - М.: Мир, 1969. - 646 с. - С. 175 - 176), где в патологоанатомической практике с целью выявления ненасыщенных жиров в подкожной клетчатке кожи или в выделениях сальных желез используют электрофильное присоединение брома к двойным связям ненасыщенных липидов и взаимодействие полученных галоидных алкилов с азотнокислым серебром с образованием нитропроизводных липидов и осаждением бромида серебра, которое на свету восстанавливается с выделением молекулярного серебра.

Известный способ осуществляют следующим образом. Производят изъятие кожи с подлежащей клетчаткой, фиксируют 18 часов или более в формалин-кальций-кадмиевой смеси Бэкера, насыщенной карбонатом кальция. Промывают блоки 3-5 часов в проточной воде. Готовят срезы толщиной 10 мк на замораживающем микротоме, расправляют в дистиллированной воде и монтируют на предметном стекле. Затем срезы погружают на 1 минуту в 1н раствор брома в 2% растворе бромистого калия, промывают в дистиллированной воде, погружают в 1% раствор тиосульфата натрия, промывают в семи сменах дистиллированной воды, обрабатывают 1% раствором нитрата серебра в 1н азотной кислоты в течение 18-22 часов, промывают в семи сменах дистиллированной воды, проявителе Eastman Dectol, разбавленном водой (1:1), заключение в глицерин-желатин. Участки, в которых прошла реакция, окрашены в оттенки от коричневого до черного.

Известный способ требует предварительной подготовки образцов, подлежащих анализу (фиксация биологического материла 18 часов или более, промывание блоков в проточной воде 3-5 часов), использование не всегда доступной формалин-кальций-кадмиевой смеси Бэкера; и используется способ по назначению, отличному от посмертной диагностики аспирации грудного молока или молочной смеси у детей.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа посмертной диагностики аспирации желудочного содержимого, а именно грудного молока и молочных смесей в ходе установления причины смерти ребенка первого года жизни при проведении судебно-медицинской экспертизы.

Технический результат предлагаемого изобретения заключается в повышении точности и объективности диагностики аспирации грудного молока и молочных смесей как непосредственной причины смерти ребенка первого года жизни, сокращении сроков исследования.

Технический результат достигается тем, что в способе, включающем забор тканей легкого, приготавливают в микротом-криостате срезы тканей легких без предварительной фиксации; приготовленные срезы расправляют в дистиллированной воде и монтируют на предметном стекле; погружают на 1 минуту в 0,1н раствор брома в 2% растворе бромистого калия; промывают в дистиллированной воде; погружают в 1% раствор тиосульфата натрия на 1 минуту; промывают в семи сменах дистиллированной воды; обрабатывают 1% раствором нитрата серебра в 1н азотной кислоте в течение 18-22 часов; промывают в семи сменах дистиллированной воды; промывают в проявителе Foma Fomadon R09, разбавленном дистиллированной водой в отношении 1:1 в течение 10 минут; промывают в дистиллированной воде; заключают в глицерин-желатин; проводят микроскопическое исследование; при обнаружении в просветах бронхов/бронхиол/альвеол гранул от желтого до черного цвета судят об аспирации грудного молока или молочных смесей, при этом цвета от коричневого до черного свидетельствуют об аспирации грудного молока, а желтые - об аспирации молочных смесей.

Предлагаемое изобретение осуществляют следующим образом.

Производят изъятие кусочков легких у трупа ребенка первого года жизни с подозрением на смерть от аспирации желудочным содержимым. После забора биоматериала образцы изучаемой ткани помещают в микротом-криостат для приготовления замороженных срезов ткани без предварительной фиксации. Приготовленные срезы расправляют в дистиллированной воде и монтируют на предметном стекле. Срезы погружают на 1 минуту в 0,1н раствор брома в 2% растворе бромистого калия (добавляют 1 мл брома к 388 мл 2% KBr). Промывают в дистиллированной воде. Погружают в 1% раствор тиосульфата натрия на 1 минуту. Промывают в семи сменах дистиллированной воды. Обрабатывают 1% раствором нитрата серебра в 1н азотной кислоте в течение 18-22 часов. Промывают в семи сменах дистиллированной воды. Промывают в проявителе Foma Fomadon R09, разбавленном дистиллированной водой в отношении 1:1 в течение 10 минут. Промывают в дистиллированной воде. Заключают в глицерин-желатин. Проводят микроскопическое исследование. При обнаружении в просветах бронхов/ бронхиол/альвеол пищевых масс в виде гранул от желтого до черного цвета судят об аспирации грудного молока и молочных смесей, при этом цвета от коричневого до черного свидетельствуют об аспирации грудного молока, а желтые - об аспирации молочных смесей.

При морфологическом исследовании выявлено, что максимальное насыщение цвета аспирата при бромировании и серебрении было обнаружено при аспирации грудным молоком. В этих случаях цвет частичек аспирированных масс варьировал от темно-коричневого до почти черного, что свидетельствовало об отложении высоких концентраций серебра вследствие большого количества бромированных двойных связей в ненасыщенных жирных кислотах. В случаях аспирации молочными смесями для кормления насыщенность и глубина цвета были менее яркими, от желтого до желто-коричневого.

Часть аспирационных масс с положительной реакцией на непредельные связи располагалась свободно в середине просвета альвеол, бронхов или бронхиол. В других случаях аспирационные массы располагались пристеночно, «сливаясь» с непредельными соединениями, которые присутствовали в межальвеолярной стенке, стенках бронхов или бронхиол и представляли собой компоненты нормального строения ткани легких. В этих случаях данные аспирационные фрагменты учету не подлежали в связи с возможной путаницей с неотъемлемыми клеточными и внеклеточными элементами ткани легких.

Пример 1

У трупа ребенка двух месяцев жизни с подозрением на смерть от аспирации желудочным содержимым произведено изъятие кусочков легких. Без предварительной фиксации образцы ткани легкого были помещены в микротом-криостат для приготовления замороженных срезов ткани. Приготовленные срезы расправляли в дистиллированной воде и монтировали на предметном стекле. Срезы погружали на 1 минуту в 0,1н раствор брома в 2% растворе бромистого калия (1 мл брома добавлен к 388 мл 2% KBr). Затем срезы промывали в дистиллированной воде и погружали в 1% раствор тиосульфата натрия на 1 минуту. Срезы промывали в семи сменах дистиллированной воды, затем обрабатывали 1% раствором нитрата серебра в 1н азотной кислоте. Обрабатывали в течение 18 часов. Промывали в семи сменах дистиллированной воды, затем - в проявителе Foma Fomadon R09, разбавленном дистиллированной водой в отношении 1:1 в течение 10 минут. Промывали в дистиллированной воде, заключали в глицерин-желатин. В результате получены гистологические препараты высокого качества с сохраненной гистоструктурой. Проводили микроскопическое исследование. На фиг. 1 (увеличение 4×40) и фиг. 2 (увеличение 20×40) в просветах альвеол определяются гранулы коричневого цвета (показаны стрелками), что свидетельствует об аспирации грудного молока.

Следственно-оперативными мероприятиями подтверждено, что ребенок до смерти находился на грудном вскармливании.

Пример 2

У трупа ребенка пяти месяцев жизни с подозрением на смерть от аспирации желудочным содержимым проведено изъятие кусочков легких. Без предварительной фиксации образцы ткани легкого были помещены в микротом-криостат для приготовления замороженных срезов ткани. Приготовленные срезы расправляли в дистиллированной воде и монтировали на предметном стекле. Срезы погружали на 1 минуту в 0,1н раствор брома в 2% растворе бромистого калия (1 мл брома добавлен к 388 мл 2% KBr). Затем срезы промывали в дистиллированной воде и погружали в 1% раствор тиосульфата натрия на 1 минуту. Срезы промывали в семи сменах дистиллированной воды, затем обрабатывали 1% раствором нитрата серебра в 1н азотной кислоте. Обрабатывали в течение 19 часов. Промывали в семи сменах дистиллированной воды, затем - в проявителе Foma Fomadon R09, разбавленном дистиллированной водой в отношении 1:1 в течение 10 минут. Промывали в дистиллированной воде, заключали в глицерин-желатин. В результате получены гистологические препараты высокого качества с сохраненной гистоструктурой. Провели микроскопическое исследование.

На фиг. 3 (увеличение 40×40) в просвете альвеолы определяются гранулы желтого цвета (показаны стрелкой), что свидетельствует об аспирации молочной смеси.

Следственно-оперативными мероприятиями подтверждено, что ребенок до смерти находился на искусственном вскармливании (молочная смесь «Малютка»).

Пример 3

У трупа ребенка трех недель жизни с подозрением на смерть от аспирации желудочным содержимым проведено изъятие кусочков легких. Без предварительной фиксации образцы ткани легкого были помещены в микротом-криостат для приготовления замороженных срезов ткани. Приготовленные срезы расправляли в дистиллированной воде и монтировали на предметном стекле. Срезы погружали на 1 минуту в 0,1н раствор брома в 2% растворе бромистого калия (1 мл брома добавлен к 388 мл 2% KBr). Затем срезы промывали в дистиллированной воде и погружали в 1% раствор тиосульфата натрия на 1 минуту. Срезы промывали в семи сменах дистиллированной воды, затем обрабатывали 1% раствором нитрата серебра в 1н азотной кислоте. Обрабатывали в течение 21 часа. Промывали в семи сменах дистиллированной воды, затем - в проявителе Foma Fomadon R09, разбавленном дистиллированной водой в отношении 1:1 в течение 10 минут. Промывали в дистиллированной воде, заключали в глицерин-желатин. В результате получены гистологические препараты высокого качества с сохраненной гистоструктурой. В результате получают гистологические препараты высокого качества с сохраненной гистоструктурой, позволяющей быстро и достоверно провести микроскопическое исследование.

В просвете бронха Фиг. 4 (увеличение 4×40) на фоне слущенного эпителия определяются гранулы черного цвета (показаны стрелками), что свидетельствует об аспирации грудного молока.

Следственно-оперативными мероприятиями подтверждено, что ребенок до смерти находился на грудном вскармливании.

Пример 4

У трупа ребенка первого месяца жизни с подозрением на смерть от аспирации желудочным содержимым проведено изъятие кусочков легких. Без предварительной фиксации образцы ткани легкого были помещены в микротом-криостат для приготовления замороженных срезов ткани. Приготовленные срезы расправляли в дистиллированной воде и монтировали на предметном стекле. Срезы погружали на 1 минуту в 0,1н раствор брома в 2% растворе бромистого калия (1 мл брома добавлен к 388 мл 2% KBr). Затем срезы промывали в дистиллированной воде и погружали в 1% раствор тиосульфата натрия на 1 минуту. Срезы промывали в семи сменах дистиллированной воды, затем обрабатывали 1% раствором нитрата серебра в 1н азотной кислоте. Обрабатывали в течение 22 часов. Промывали в семи сменах дистиллированной воды, затем - в проявителе Foma Fomadon R09, разбавленном дистиллированной водой в отношении 1:1 в течение 10 минут. Промывали в дистиллированной воде, заключали в глицерин-желатин. В результате получены гистологические препараты высокого качества с сохраненной гистоструктурой. В результате получены гистологические препараты высокого качества с сохраненной гистоструктурой, позволяющей быстро и достоверно провести микроскопическое исследование.

В просвете бронхиолы Фиг. 5 (увеличение 4×40) на фоне слущенного эпителия определяются гранулы желтого цвета (показаны стрелкой), что свидетельствует об аспирации молочной смеси.

Следственно-оперативными мероприятиями подтверждено, что ребенок до смерти находился на искусственном вскармливании (молочная смесь «NAN»).

Способ повышает точность и объективность диагностики аспирации грудного молока и молочных смесей как непосредственной причины смерти ребенка первого года жизни, сокращает сроки исследования.

Способ позволяет без предварительной подготовки изъятых тканей перед изготовлением срезов, определить внеклеточные включения ненасыщенных жирных кислот в частичках аспирата (грудном молоке или молочной смеси), находящихся в просветах альвеол, бронхов или бронхиол, при этом отличается окрашивание всех остальных элементов, таких, как стенки альвеол, бронхов, бронхиол. Такая выборочность гистохимической методики исследования резко поднимает диагностическую ценность судебно-гистологического метода в постмортальной диагностике.

Изобретение относится к медицине, а именно к судебной медицине, и может быть использовано при проведении судебно-медицинских экспертиз для установления характера желудочного содержимого, а именно грудного молока или молочной смеси при аспирации. Сущность способа: приготавливают в микротом-криостате срезы тканей легких без предварительной фиксации, срезы расправляют в дистиллированной воде и монтируют на предметном стекле. Затем погружают на 1 минуту в 0,1н раствор брома в 2% растворе бромистого калия, промывают, погружают в 1% раствор тиосульфата натрия на 1 минуту, промывают в семи сменах дистиллированной воды, обрабатывают 1% раствором нитрата серебра в 1н азотной кислоте в течение 18-22 часов, промывают в семи сменах дистиллированной воды. Затем в проявителе Foma Fomadon R09, разбавленном дистиллированной водой, в отношении 1:1 в течение 10 минут. Промывают. Заключают в глицерин-желатин, проводят микроскопическое исследование. При обнаружении в просветах бронхов/бронхиол/альвеол гранул от желтого до черного цвета судят об аспирации грудного молока или молочных смесей. Способ повышает точность и объективность диагностики аспирации грудного молока и молочных смесей как непосредственной причины смерти ребенка первого года жизни, сокращает сроки исследования. 4 пр., 5 ил.

Способ посмертной диагностики аспирации грудного молока или молочной смеси у детей первого года жизни, включающий забор тканей легкого, отличающийся тем, что приготавливают в микротом-криостате срезы тканей легких без предварительной фиксации; приготовленные срезы расправляют в дистиллированной воде и монтируют на предметном стекле; погружают на 1 минуту в 0,1н раствор брома в 2% растворе бромистого калия; промывают в дистиллированной воде; погружают в 1% раствор тиосульфата натрия на 1 минуту; промывают в семи сменах дистиллированной воды; обрабатывают 1% раствором нитрата серебра в 1н азотной кислоте в течение 18-22 часов; промывают в семи сменах дистиллированной воды; промывают в проявителе Foma Fomadon R09, разбавленном дистиллированной водой в отношении 1:1 в течение 10 минут; промывают в дистиллированной воде; заключают в глицерин-желатин; проводят микроскопическое исследование; при обнаружении в просветах бронхов/бронхиол/альвеол гранул от желтого до черного цвета судят об аспирации грудного молока или молочных смесей, при этом цвета от коричневого до черного свидетельствуют об аспирации грудного молока, а желтые – об аспирации молочных смесей.