Способ получения поливалентного анатоксина для иммунизации против анаэробных инфекций Советский патент 1956 года по МПК A61K39/00 

Известны способы изготовления поливалентных анатоксинов для иммунизации людей против возбудителей анаэробных раневых инфекций.

Особенность предлагаемого способа заключается в том, что культуры соответствующих патогенных анаэробов раздельно выращивают на казеиново-растительной питательной среде, полученной в результате гидролиза с помощью растительной (грибной) протеазы, после чего токсин фильтруют и детоксищтруют, как обычно, а затем освобождают от балластного белка и концентрируют повторным высаживанием в кислой среде. Образовавшийся остаток, содержащий анатоксин, отделяют центрифугированием и растворяют в фосфатном бзфере, адсорбируют на гидроокиси алюминия Н далее анатоксин охлаждают, элюируют, стерилизуют, проверяют на безвредность и иммуногенность, как обычно.

- Полученные таким путем анатоксины применяются для приготовления поливалентного (три, тетра и т. д.) анатоксина.

Предлагаемый способ позволяет получать комплексный нрепарат-трианатоксин для одновременной иммунитации против столбняка и двух возбудителей газовой гангрены-перфрингенс и эдематиенс.

Для осуществления способа производится раздельное выращивание патогенных анаэробов на казеиноBoii растительной среде, получаемой в результате гидролиза с помощью растительной (грибной) протеазы. Каждая культура выращивается при температуре 35° в течение нескольких часов или дней, после чего фильтруется через стерилизующие пластинки фильтра Зейтца.

Токсин проверяется на стерильность высевом в аэробных и анаэробных условиях, затем к нему добавляется 0,3 - 0,4% формалина (из расчета 40%-ного формальдегида), после чего он обезвреживается в термостате при температуре .38° в течение нескольких дней. Выпутый из термостата ппатоксин проверяется на -стерильность, безвредщ). а тигенность. К нативному анатоксину добавляется сухая поваренная соль; после полного растворения которой анатоксин подкисляется 1 нормальной соляной кислотой до определенной рН.

Выпавший осадок определяется центрифугированием, затем растворяется в физиологическом растворе, после чего концентрат подщелачивается 5°o-HbiiM раствором щелочи до рН 6,8 - 7,2,

Далее концентрат разводится фосфатным буфером до получения смеси с рН равной 5,9 - 6,0. Смесь адсорбируется на гидроокисн алюминия л центрифугируется. Полученный осадок промывается фосфатным буфером, центрифугируется, окрашенный промывной буфер отбрасывается, а осадок обрабатывается для элюцин анатоксина.

Для элюцни анатоксина осадок взмучивается в фосфатном буфере и в течение 2 часов выдерживается прн комнатной температуре с периодическим ггеремешиванием. Затем смесь центрифугируется, 1-й элюат сливается н вся процедура элюции повторяется еще трижды тем же буфером. Затем все элюаты сливаются вместе, полученная смесь подкисляется соляной кислотой до рН 6,2 н поступает для стерилизующего фильтрования.

Трнанатоксин получается смепи-шания моновалентных анатоксинов и должен содержать в 1 мл не менее 25 ед. ев, перфрингенс, 25 ед. св. эдиматиенс и 200 ед. св. столбняка. Затем трианатоксин сорбируется 60%-ной гидроокисью алюминия и д;гя отстанвания помещается на 18 часов на ледник, после чего надосадочная жидкость декантируется через сифон до первоначального объема и проверяется на стерильность путем высева на питательные среды.

Стерильный препарат разливается в амнуты и подвергается контролю на стери,л ьность, безвредность и иммуногенность.

Стерильность моновалентных анатоксинов и трианатоксина проверяется путем высева 3 ампул от каждой бутыли из питательной среды в аэробных и в анаэробных условиях: на 2 пробирки Тароцци и 2 пробирки полужидкого агара. Посевы выдерживаются при ЗУ в течение 15 дней, кроме того, производится посев из тех же 3 ампул на агар Сабуро и простой бульон. Последний выдерживается при температуре 20 - 22° в течение 8 дней.

Безвредность трианатоксина проверяется путем введения морским свинкам весом 300 - 350 г под кожу в три места 3 мл препарата по1.0 Л1Л в каждое место и наблюдения за животными в течение 20 дней, У привитых животных на месте введения образуются нлотные узлы - депо, сохраняющиеся на протяжении 1 - 2 месяцев. У привитых животных не должно быть общей реакции или явления столбняка.

H.viM HoreHHOcTb трианатоксина в отногаении столбняка и эдематиенс проверяется на тех же свинках, на когорых проверяется безвредность препарата. Через 20 дней после введения 3 мл содержащего 0,3 мл столбнячного анатоксина и 0,3 мл анатоксина эде.матиенс (в два места по 1.5 мл в каждое) трем морским свинкам вводится 100 ДУМ столбнячного токсина и трем свинкам 10 ДУМ токсина эдематиенс. Наблюдение за животными проводится в течение 7 дней. Годным считается трианатоксин, предохраняющий больше 50% животных от заболевания столбняком и газовой гангреной.

Иммунизирующие свойства трианатоксина в отношении газовой гангрены, вызванной В. perfringens, проверяются на белых мышах путем введения под кожу 1,0 мл трианатоксина. Для испытания берется 10 мыщей. Через 30 дней после введения трианатоксина мыщам вводится внутривенно или внутрибрюшинно DCL токсина перфрингенс.

Наблюдение за животными проводится в течение 3 дней. Годными