Способ определения скороспелости хлопчатника Советский патент 1990 года по МПК A01H1/04 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции хлопчатника на скороспелость.

Цель изобретения - повышение эффективности селекции за счет сохранения и последующего выращивания данных генотипов.

Способ осуществляют следующим образом.

Выращивают хлопчатник до фазы семядольных листьев (или до фазы 4-5 настоящих листьев) в условиях теплицы или лабораторной комнаты в тарных ящиках с почвой.

Выделяют нативные хлоропласты и определяют реакцию Хилла, скорость которой определяет фотохимическую активность хлоропластов.

Выделяют нативные хлоропласты. Листья или высечки листьев, взятые сверлом (2 г), промывают дистиллированной водой, выдерживают 15 мин при температуре тающего льда, растирают в ступке, залив 10 мл среды выделения. Состав среды: 0,3 М NaCl; 0,5 М

сахароза; 0,05 М трис-НС1 - буфер (pil 7,8); 1%-ный поливинил пирроли- дин; бычий сывороточный альбумин. Гомогенат продавливают через два слоя плотного капрона, центрифугируют 3 мин при 3,5 Tbic.g. Осадок, представляющий собой фракцию натив- ных хлоропластов, ресуспендируют в среде выделения. Суспензию хлоропластов немедленно используют для анализа. Процедуры по выделению хлоропластов проводят по холоду и занимают 10-12 мин.

Проведение реакции Хилла. Хлоропласты инкубируют на свету в среде следующего состава: 520 м М NaCl; 225 мМ трис-НС1-буфер (рН 7,8), 6 мМ феррицианид калия, хлорофилл по 70- 100 мкг в пробу. Объем реакционной смеси 3 мл.

Колбы с реакционной смесью термо- статируют при 30 С в стеклянной йанне и освещаются снизу зеркал оной лампой накаливания мощностью 500 Вт, дающей интенсивность освещения SC тыс. лк.

8

(Л

ел

СП

4 00 00 О

Реакция начинается добавлением в колбы по 0,5 мл суспензии хлоропла- стов. Хлоропласты инкубируют в течение 6 мин при перемешивании. Затем реакцию останавливают добавлением в каждую колбу 1 мл 0,10%-ной три- хлоруксусной кислоты и выключением света. Кислотный экстракт переливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 5 мин при тыс. об./мин для осаждения белков. Прозрачный раствор спектрофотометрируют при длине волны 420 нм против контроля. Контрольные пробы ставят аналогично опытным, но инкубируют в полной темноте.

Из суспензии хлоропластов берут nb 0,5 мл для определения содержания хлорофилла в 80%-ном ацетоне. Средняя продолжительность опыта 1 ч. В опыте используют 2-3 варианта при трехкратном повторении.

Нами были проведены определения реакции Хилла у контрастных по скороспелости образцов вида G. hirsutum 1 (девять сортов) и у вида G. barbaden- se (восемь сортов). Исследования проводили на семядольных и на 4-5 настоящих листьях.

В табл. 1 показана фотохимическая активность хлоропластов (мкМ )/ /мг хлорофилла в 1 г) у различных по скороспелости сортов вида G. hirsutum а в табл. 2 - сортов вида G. barbaden

se.

Из табл. 1 и 2 следует, что самые высокие значения ФХА у скороспелых

5

5

0

0

5

форм, а у сортов с более поздним созреванием уровень ФХА заметно ниже, что характерно для обоих изученных видов.

Проростки, выращенные в бумажных стаканчиках с почвой или в ящиках с почвой, после использования одного листа для анализа были высажены в поле и из них получили хорошо развитые растения.

Метод определения ФХА листьев несложен в проведении. Продолжительность опыта 1 ч. В каждом опыте можно проанализировать три образца. В день один лаборант может провести 4-5 опытов, т.е. проанализировать 12-15 образцов. Метод может быть использован в любом селекционном учреждении, имеющем биохимическую лабораторию.

Формула изобретения

Способ определения скороспелости хлопчатника, включающий измерение биологических показателей растений, по значению которых судят о скороспелости, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности селекции за счет сохранения и последующего выращивания ценных генотипов, в качестве биологического показателя измеряют фотохимическую активность хлоропластов из листьев недельных проростков, при этом скороспелость тем больше, чем выше фотохимическая активность.

Таблица 1

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к селекции хлопчатника на скороспелость. Цель - повышение эффективности селекции за счет сохранения и последующего выращивания ценных генотипов. Отбор скороспелого селекционного материала проводят по показателям фотохимической активности хлоропластов из листьев недельных проростков, при этом скороспелость тем больше, чем выше фотохимическая активность хлоропластов. 2 табл.

НС Р.

cS

3,6

5,1

НСР,

ts

М

Таблица 2

М