Тест-система для определения ДНК ткани дятла (Picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах Российский патент 2020 года по МПК C12Q1/68 

Описание патента на изобретение RU2725216C1

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к методам определения видовой принадлежности мяса с помощью полимеразной цепной реакции.

Известно использование тест-системы при проведении ПЦР в реальном времени для определения ДНК тканей животных в мясном продукте (CN 108624659 A, кл C12G 1/6851, 2018 г.).

Также известно техническое решение содержащее набор для идентификации ДНК животных в кормах и мясных продуктах (патент РФ №2560579, C12Q 1/68, 2015 г.), включающий буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения состоящая из дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентных зондов специфичные для участка генома животного и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE, внутренний контрольный образец и другие контрольные образцы.

Однако известный набор используется для полимеразной цепной реакции с электрофоретической детекцией, в которой нуклеотидная последовательность непосредственно читается по электрофореграмме. Длина фрагмента, который может быть расшифрован этим методом, ограничивается разрешающей способностью метода гель-электрофореза, что влияет на точность диагностирования видовой принадлежности ткани животного в кормах и мясных продуктах.

Наиболее близким по технической сущности является техническое решение (патент РФ №2680094, кл. C12Q 1/68, G01N 33/569, 2019 г.) включающий буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения состоящая из дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентных зондов специфичные для участка генома животного и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE, внутренний контрольный образец в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 фаговых частиц на 1 мкл, отрицательный контрольный образец, представляющий собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащую фрагмент генома животного и фрагмент генома бактериофага Т4 с нуклеотидной последовательностью:

взятых в объемном соотношении 1:1.

Недостатком известного технического решения является отсутствие возможности выявления ДНК ткани дятла в кормах и пищевых продуктах, недостаточная точность из-за использования суспензии бактериофага, которая требует предварительную обработку, включая центрифугирование, концентрирование и перевод в определенный буферный раствор, что влечет за собой значительную трудоемкость и финансовые затраты, а также использование генома бактериофага Т4 с возможными повреждениями, после исследования, что также влияет на точность выявления объекта.

Техническим результатом является расширение функциональных возможностей и повышение точности идентификации видовой принадлежности ткани дятла, упрощение процесса подготовки внутреннего контроля и уменьшение стоимости этого процесса.

Технический результат достигается тем, что в тест-системе для определения ДНК ткани дятла (Picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающей буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящая из дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентных зондов специфичные для участка генома животного и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE, внутренний контрольный образец в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 фаговых частиц на 1 мкл, отрицательный контрольный образец представляющий собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащую фрагмент генома животного и фрагмент генома бактериофага Т4 с нуклеотидной последовательностью:

взятых в объемном соотношении 1:1, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют фаголизат бактериофага Т4, а для положительного контрольного образца - фрагменты геномов нативного бактериофага Т4 и ткани дятла (Picidae) со следующей нуклеотидной последовательностью:

Новизна заявляемой тест-системы состоит в идентификации видовой принадлежности ткани птиц семейства дятловых с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени, что в свою очередь позволяет с высокой точностью определить наличие их ингредиентов в продовольственном сырье, кормах и пищевых продуктах.

Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».

Заявляемая тест-система рекомендовано использовать в специализированных ветеринарных, санитарно-эпидемиологических, животноводческих, сельскохозяйственных предприятиях, что соответствует критерию «промышленная применимость».

Тест-система для определения ДНК ткани дятла (Picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах реализуется следующим образом.

Для исследования сухих кормов и мясных полуфабрикатов на содержание ДНК ткани дятла проводят полимеразную цепную реакцию с флуоресцентной детекцией с применением термоциклера типа Rotor-Gene Q при соответствующих температурно-временных режимах амплификации и измеряют накопление флуоресцентных сигналов по каналам соответствующих флуоресцентных красителей: JOE/Yellow для специфического сигнала для ДНК ткани дятла (Picidae) и Cy5/Red - для внутреннего контрольного образца. Интерпретацию результатов проводят на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считается положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.

Для повышения точности идентификации ткани дятла для внутреннего контрольного образца используют фаголизат бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 фаговых частиц на 1 мкл, если концентрация фаговых частиц отклоняется в большую или меньшую сторону, то наблюдаются повторности сомнительных образцов. Для положительного контрольного образца используют смесь, содержащую фрагменты геномов ДНК ткани птиц семейства дятловых (Picidae) и бактериофага Т4 взятых в соотношении 1:1 со следующими нуклеотидными последовательностями:

Использование для разных видов контроля различные формы материала бактериофага Т4: фаголизата и фрагмента генома нативного бактериофага Т4 со специфическими к нему праймерами и зондом обусловлено тем, что это позволяет контролировать корректное прохождение реакции в каждой пробирки, а также контролируется этап выделения ДНК из образцов. Кроме того, использование фаголизата бактериофага Т4, представляющего собой суспензию бактериофага, полученную после лизиса зараженных фагом клеток ткани, повышает чувствительность и упрощает процесс идентификации ткани птиц семейства дятловых в продуктах. Использование нативного бактериофага, т.е. неповрежденного при исследовании, улучшает синтез ДНК, что также улучшает качество процесса идентификации.

При конструировании праймеров и зонда основными требованиями были: степень гомологии (комплементарность) с выбранным участком гена; отсутствие самокоплементарных участков внутри олигонуклеотидов и комплементарности друг другу, чтобы не допускать возникновения устойчивых вторичных структур (димеров); близость значений температуры отжига праймеров.

Конструирование специфических праймеров и зонда осуществляли с помощью компьютерных программ на основании анализа нуклеотидных последовательностей референтных штаммов и изолятов, опубликованных на ресурсе GenBank и подбора условий для проведения ПЦР в реальном времени с применением разработанных праймеров и зонда, несущего флуорофор и тушитель, и комплементарного части амплифицируемого со специфическими праймерами фрагмента.

Праймеры, специфичные для ДНК птиц семейства дятловых (Picidae) были отобраны на основе нуклеотидной последовательности фибриногена пестрого (Picoides major isolate PMAJ51755 beta fibrinogen (Bfib) gene, intron 7, Length: 868) на уастке между 50 и 250 нуклеотидами.

Код доступа нуклеотидной последовательности в GeneBank NCBI: AF394320.1.

Праймеры были спроектированы с использованием Primer Express Software v3.0 (Applied Biosystems) и исследованы на специфичность с использованием программы BLAST на сервере NCBI. Для детекции продуктов амплификации был подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд Pic Р (комплементарный участку нуклеотидной последовательности, фланкированной позициями для праймеров Pic F и Pic R). На 5'-конец зонда Pic Р добавлен флуоресцентный краситель карбоксифлуор«сцеин (FAM).

Предлагаемые нуклеотидные последовательности:

Используя программу "Oligo 6.0" описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПНР. Ни одна из выбранных последовательностей не обнаружена в геномах каких либо животных и птиц (исключая представителей семейства Picidae) и любых видов растений, которые потенциально могут быть использованы при производстве кормов и пищевых продуктов.

В качестве внутреннего контроля использовался бактериофаг Т4, имеющий геномную ДНК порядка 170 тысяч пар нуклеотидов (Enterobacteria phage Т4Т, complete genome GenBank: HM137666.1). В результате анализа был выбран участок между 400 и 600 нуклеотидами, содержащий уникальные нуклеотидные последовательности, рассчитаны первичные структуры олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих выбранный участок генома. Праймеры были спроектированы с использованием Primer Express Software v3.0 (Applied Biosystems) и исследованы на специфичность с использованием программы BLAST на сервере NCBI.

Для детекции продуктов амплификации подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд Т4Р, комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров T4F и T4R. Зонд был помечен красителем HEX. Используя программу "Oligo 6.0", описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПНР.

Пример конкретного использования тест-системы для определения ДНК ткани дятла

Для подтверждения эффективности тест-системы были использованы сухие корма в виде рыбной и мясной муки; сырые и термически обработанные мясные продукты, т.е. мясные полуфабрикаты.

От пробы плотной консистенции отбирают на исследование общую пробу весом 10-50 г. Гранулированную или консервированную продукцию перед исследованием (10-20 г) растирают в ступке до гомогенного состояния.

Лабораторные пробы (20-40 мг) отбирают на исследование в одноразовые микропробирки вместимостью 1,5 мл в двух повторах. Отобранные лабораторные пробы направляют на выделения ДНК.

Исследование проводят с помощью набора реагентов «ПЦР-ДЯТЕЛ-ФАКТОР». Набор состоит из комплекта реагентов для проведения мультиплексной ПЦР (комплект №1) и комплекта контрольных образцов (комплект №2). Набор выпускается в двух вариантах: 1) Для анализа 55 образцов (включая контрольные образцы)

2) Для анализа 110 образцов (включая контрольные образцы). Наборы используют в соответствии с инструкцией по применению набора реагентов «ПЦР-ДЯТЕЛ-ФАКТОР» для определения ДНК ткани птиц дятлах (Picidae) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в РВ ТУ 21.10.60-163-51062356-2018, для диагностики in vitro, http://www.vetfaktor.ru/.

Состав набора приведен в Таблицах 1 и 2.

Исследования состоит из трех этапов:

экстракция нуклеиновая кислота (НК);

проведение реакции ПЦР РВ;

учет результатов анализа.

Для экстракции (выделение) НК из исследуемых проб отбирают необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл, включая отрицательный контроль выделения. Во все пробирки с исследуемыми образцами, включая пробирку для отрицательного контрольного образца (ОКО), вносят по 10 мкл внутреннего контрольного образца (ВКО) для ткани птиц семейства дятловых, в качестве которого, используют фаголизат бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 фаговых частиц на 1 мкл. Следующий этап это подготовка образцов к проведению ПЦР. Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, объем ДНК-пробы - 10 мкл.

Успешное прохождение реакции контролируют использованием положительного контрольного образца (ПКО) ДЯТЕЛ, ВКО ДЯТЕЛ и ДНК буфера. В качестве ПКО используют смесь содержащую фрагменты геномов ткани птиц семейства дятловых и нативного бактериофага Т4 взятых в соотношении 1:1. со следующими нуклеотидными последовательностями:

В отдельной пробирке смешивают компоненты набора из расчета на каждую реакцию:

5 мкл ПЦР СМЕСЬ ДЯТЕЛ;

10 мкл ПЦР БУФЕР ДЯТЕЛ;

0,5 мкл TAQ POLYMERASE

Перемешивают смесь на вортексе и сбрасывают капли кратковременным центрифугированием.

Отбирают необходимое количество пробирок для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб. Вносят по 15 мкл приготовленной реакционной смеси.

Помещают подготовленные для проведения ПЦР пробирки в ячейки амплификатора и используют программное обеспечение прибора. Далее проводят ПЦР РВ с флуоресцентной детекцией.

Параметры температурно-временного режима амплификации на приборе «Rotor-Gene Q» представлены в таблице 3.

Интерпретация результатов анализа. Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в соответствии с инструкцией производителя к прибору.

Учет результатов ПЦР РВ проводится по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла «Ct» для исследуемого образца).

Результат считается достоверным в случае корректного прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и экстракции ДНК в соответствии с таблицей 4.

Появление любого значения Ct в таблице 4 результатов для отрицательного контроля этапа экстракции ВК- на канале JOE/Yellow и для отрицательного контроля этапа ПНР К- на любом из каналов свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа для всех проб считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех проб, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации.

Образцы, для которых значение Ct по каналу Cy5/Red отсутствует или превышает 35 цикл (и при этом не получен положительный результат на канале JOE/Yellow) требуют повторного проведения исследования с этапа экстракции ДНК. Задержка в значениях пороговых циклов для исследуемых образцов указывает на присутствие ингибиторов в пробе(ах) или на ошибки при экстракции ДНК или при постановке реакции ПЦР РВ.

В образце обнаружена ДНК ткани птиц семейства дятловых (Picidae), если наблюдается экспоненциальный рост сигнала на канале JOE/Yellow, при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (Табл. 4,).

Если для исследуемого образца по каналам JOE/Yellow значение Ct определяется позднее 37 цикла при корректном прохождении положительных и отрицательных контролей, образец исследуется повторно с этапа экстракция ДНК. Если при повторной постановке Ct более 37 результат считается отрицательным.

Образец считается отрицательным ДНК (Picidae) не обнаружена), если не определяется значение Ct (не наблюдается рост специфического сигнала) на канале JOE/Yellow при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (Табл. 4), а значение Ct по каналу Cy5/Red менее 35.

Для исследуемых образцов (сухой корм и мясные полуфабрикаты) предел точности содержания ткани птиц семейства дятловых представлен в таблице 5.

Для доказательства эффективности использования ПЦР с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени проводился сравнительный анализ чувствительности заявляемого с прототипом, в котором использовался метод ПЦР с использованием внутреннего контроля в виде суспензии бактериофага, а в заявляемом - использовался фаголизат бактериофага и геном нативного бактериофага. Оказалось чувствительность ПЦР при обнаружении примеси ткани птиц семейства дятловых в кормах и в мясных фаршах примерно в 1,5 раза выше. Трудоемкость и стоимость процесса определения ДНК ткани птиц семейства дятловых в кормах и фаршах снизилась на 3-5%.

Похожие патенты RU2725216C1

название год авторы номер документа
Способ определения ДНК ткани дятла (Picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах 2019
  • Черных Олег Юрьевич
  • Баннов Василий Александрович
  • Малышев Денис Владиславович
  • Черных Владимир Олегович
  • Лысенко Александр Анатолиевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Котельникова Александра Андреевна
  • Кривонос Роман Анатольевич
  • Шевкопляс Владимир Николаевич
  • Шевченко Александр Алексеевич
  • Хахов Латиф Асланбиевич
  • Гугушвили Нино Нодариевна
  • Исаева Альбина Геннадьевна
  • Шаравьев Павел Викторович
  • Усенко Валентина Владимировна
RU2714287C1
Тест-система для идентификации ДНК ткани перепелки обыкновенной (Coturnix coturnix) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах 2019
  • Черных Олег Юрьевич
  • Баннов Василий Александрович
  • Малышев Денис Владиславович
  • Лысенко Александр Анатолиевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Дайбова Любовь Анатольевна
  • Еньшин Александр Васильевич
  • Нестеренко Антон Алексеевич
RU2725210C1
Тест-система для идентификации ДНК ткани ежа обыкновенного (Erinaceus europaeus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах 2019
  • Черных Олег Юрьевич
  • Баннов Василий Александрович
  • Малышев Денис Владиславович
  • Котельникова Александра Андреевна
  • Черных Владимир Олегович
  • Лысенко Александр Анатолиевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Кривонос Роман Анатольевич
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Шаравьев Павел Викторович
  • Кривоногова Анна Сергеевна
  • Кузьминова Елена Васильевна
  • Усенко Валентина Владимировна
  • Забашта Сергей Николаевич
RU2725215C1
Способ идентификации ДНК ткани перепелки обыкновенной (Coturnix coturnix) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах 2019
  • Черных Олег Юрьевич
  • Баннов Василий Александрович
  • Малышев Денис Владиславович
  • Лысенко Александр Анатолиевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Лунева Альбина Владимировна
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Дайбова Любовь Анатольевна
  • Еньшин Александр Васильевич
  • Нестеренко Антон Алексеевич
RU2734035C1
Способ идентификации видовой принадлежности тканей крыс и мышей в сухих кормах и мясных полуфабрикатах 2019
  • Черных Олег Юрьевич
  • Баннов Василий Александрович
  • Котельникова Александра Андреевна
  • Малышев Денис Владиславович
  • Черных Владимир Олегович
  • Лысенко Александр Анатолиевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Кривонос Роман Анатольевич
  • Шевкопляс Владимир Николаевич
  • Шевченко Александр Алексеевич
  • Вацаев Шахаб Вахидович
  • Исаева Альбина Геннадьевна
  • Шаравьев Павел Викторович
  • Лоретц Ольга Геннадьевна
  • Лихоман Александр Владимирович
RU2742952C1
Тест-система для идентификации ДНК тканей крыс и мышей в сухих кормах и мясных полуфабрикатах 2019
  • Черных Олег Юрьевич
  • Баннов Василий Александрович
  • Малышев Денис Владиславович
  • Котельникова Александра Андреевна
  • Черных Владимир Олегович
  • Лысенко Александр Анатолиевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Кривонос Роман Анатольевич
  • Дробин Юрий Дмитриевич
  • Шевкопляс Владимир Николаевич
  • Шевченко Александр Алексеевич
  • Вацаев Шахаб Вахидович
  • Щукина Ирина Владимировна
  • Гугушвили Нино Нодариевна
  • Донник Ирина Михайловна
  • Усенко Валентина Владимировна
RU2725539C1
Способ идентификации ДНК ткани кошки домашней (Felis silvestris catus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах 2019
  • Черных Олег Юрьевич
  • Баннов Василий Александрович
  • Котельникова Александра Андреевна
  • Малышев Денис Владиславович
  • Черных Владимир Олегович
  • Лысенко Александр Анатолиевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Кривонос Роман Анатольевич
  • Шевкопляс Владимир Николаевич
  • Шевченко Александр Алексеевич
  • Вацаев Шахаб Вахидович
  • Инюкина Татьяна Андреевна
  • Нестеренко Антон Алексеевич
  • Семененко Марина Петровна
  • Семенов Владимир Григорьевич
  • Забашта Сергей Николаевич
RU2728662C1
Способ идентификации ДНК ткани ежа обыкновенного (Erinaceus europaeus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах 2019
  • Черных Олег Юрьевич
  • Баннов Василий Александрович
  • Малышев Денис Владиславович
  • Черных Владимир Олегович
  • Лысенко Александр Анатольевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Кривонос Роман Анатольевич
  • Шевкопляс Владимир Николаевич
  • Шевченко Александр Алексеевич
  • Котельникова Александра Андреевна
  • Хахов Латиф Асланбиевич
  • Лысенко Юрий Андреевич
  • Кузьминова Елена Васильевна
  • Щукина Ирина Владимировна
  • Инюкина Татьяна Андреевна
  • Лихоман Александр Владимирович
  • Забашта Сергей Николаевич
RU2726433C1
Способ выявления ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах 2019
  • Черных Олег Юрьевич
  • Малышев Денис Владиславович
  • Баннов Василий Александрович
  • Черных Владимир Олегович
  • Котельникова Александра Андреевна
  • Лысенко Александр Анатолиевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Кривонос Роман Анатольевич
  • Шевкопляс Владимир Николаевич
  • Шевченко Александр Алексеевич
  • Хахов Латиф Асланбиевич
  • Семененко Марина Петровна
  • Неверова Ольга Петровна
  • Кощаева Ольга Викторовна
  • Семенов Владимир Григорьевич
RU2726248C1
Тест-система для идентификации ДНК ткани кошки домашней (Felis silvestris catus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах 2019
  • Черных Олег Юрьевич
  • Малышев Денис Владиславович
  • Баннов Василий Александрович
  • Черных Владимир Олегович
  • Лысенко Александр Анатолиевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Кривонос Роман Анатольевич
  • Дробин Юрий Дмитриевич
  • Котельникова Александра Андреевна
  • Лоретц Ольга Геннадьевна
  • Быкова Ольга Александровна
  • Щукина Ирина Владимировна
  • Тюрин Владимир Григорьевич
RU2728639C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 725 216 C1

Реферат патента 2020 года Тест-система для определения ДНК ткани дятла (Picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой тест систему для идентификации ДНК ткани ткани дятла (Picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающую буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящая из дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентных зондов специфичные для участка генома животного и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE, внутренний контрольный образец в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 фаговых частиц на 1 мкл, отрицательный контрольный образец, представляющий собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома животного и фрагмент генома бактериофага Т4 с нуклеотидной последовательностью, взятых в объемном соотношении 1:1, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют фаголизат бактериофага Т4, а для положительного контрольного образца используют фрагменты геномов нативного бактериофага Т4 и дятла (Picidae) со следующей нуклеотидной последовательностью. Изобретение позволяет расширить функциональные возможности и повысить точность идентификации видовой принадлежности, упростить процесс подготовки. 5 табл., 1 ил.

Формула изобретения RU 2 725 216 C1

Тест система для определения ДНК ткани дятла (Picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающая буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящая из дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентных зондов специфичные для участка генома животного и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE, внутренний контрольный образец в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 фаговых частиц на 1 мкл, отрицательный контрольный образец, представляющий собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащую фрагмент генома животного и фрагмент генома бактериофага Т4 с нуклеотидной последовательностью:

взятых в объемном соотношении 1:1, отличающийся тем, что для внутреннего контрольного образца используют фаголизат бактериофага Т4, а для положительного контрольного образца используют фрагменты геномов нативного бактериофага Т4 и дятла (Picidae) со следующей нуклеотидной последовательностью:

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2020 года RU2725216C1

Тест-система для выявления ДНК возбудителя лептоспироза (Leptospira spp.) у сельскохозяйственных животных 2018
  • Котельникова Александра Андреевна
  • Черных Олег Юрьевич
  • Баннов Василий Александрович
  • Малышев Денис Владиславович
  • Василевич Федор Иванович
  • Донник Ирина Михайловна
  • Дробин Юрий Дмитриевич
  • Самуйленко Анатолий Яковлевич
  • Лысенко Александр Анатолиевич
  • Калашникова Татьяна Валерьевна
  • Кривонос Роман Анатольевич
  • Лоретц Ольга Геннадьевна
  • Шевкопляс Владимир Николаевич
  • Гринь Светлана Анатольевна
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Исаева Альбина Геннадиевна
  • Кулакова Мария Александровна
RU2680094C1
Тест-система для определения видовой принадлежности тканей кур и свиней в продовольственном сырье, кормах и пищевых продуктах 2018
  • Котельникова Александра Андреевна
  • Черных Олег Юрьевич
  • Баннов Василий Александрович
  • Малышев Денис Владиславович
  • Донник Ирина Михайловна
  • Лысенко Александр Анатолиевич
  • Кривонос Роман Анатольевич
  • Шевкопляс Владимир Николаевич
  • Кощаев Андрей Георгиевич
  • Дайбова Любовь Анатольевна
  • Фисинин Владимир Иванович
  • Кочиш Иван Иванович
  • Стекольников Анатолий Александрович
  • Клименко Александр Иванович
  • Шахов Алексей Гаврилович
  • Суханова Светлана Фаилевна
  • Забашта Николай Николаевич
  • Дробин Юрий Дмитриевич
RU2700480C1
CN 108624659 A, 09.10.2018
ДРАГУНОВА Е.Е., и др., ПЦР-тест-система для идентификации патогенного прионного белка: необходимость разработки, методика изготовления и основные характеристики, Фундаментальные исследования, N10, 2013, с.1739-1744.

RU 2 725 216 C1

Авторы

Черных Олег Юрьевич

Баннов Василий Александрович

Малышев Денис Владиславович

Лысенко Александр Анатолиевич

Черных Владимир Олегович

Кощаев Андрей Георгиевич

Котельникова Александра Андреевна

Дробин Юрий Дмитриевич

Неверова Ольга Петровна

Семененко Марина Петровна

Нестеренко Антон Алексеевич

Юлдашбаев Юсупжан Артыкович

Даты

2020-06-30Публикация

2019-10-16Подача