СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПИЛОРИЧЕСКОГО ГЕЛИКОБАКТЕРИОЗА Российский патент 1994 года по МПК G01N33/534 

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии, а именно к новому способу диагностики пилорического геликобактериоза при поражении гастродуоденальной зоны.

Известен способ диагностики пилорического геликобактериоза иммуноферментным методом, посредством определения в сыворотке крови больных антител и НР, относящихся к иммуноглобулинам класса G, считающихся специфическими для данной инфекции. Но этот метод позволяет лишь констатировать факт возможного риска развития воспалительного процесса в слизистой оболочке желудка вызванного специфическим микроорганизмом НР. Известно, что иммуноглобулины класса G являются "анамнестическими" антителами и по их наличию в сыворотке крови определенно нельзя сказать острый это процесс или больной находится в стадии ремиссии. Иммуноферментный метод использован нами в качестве прототипа.

Целью изобретения является повышение точности диагностики пилорического геликобактериоза при поражении гастродуоденальной зоны язвенно-эрозивными процессами.

Поставленная цель достигается тем, что у больного берется образец сыворотки крови в количестве 15 мкл. Образец инкубируется с антигеном фиксированным на агарозе, после этого добавляется IgE-диагностикум, меченый изотопом 125-I. Результат реакции регистрируется с помощью гамма-счетчика. Характерной чертой радиоиммунологического метода является сочетание специфичности, свойственной реакциям антиген-антитело, с простотой и высокой чувствительностью определения, которые дает применение радиоактивных изотопов, введенных в состав антител. По сравнению с обычными методами анализа преимущество радиоиммунологического состоит в том, что отсутствует необходимость оценивать протекающую реакцию по вторичным проявлениям, таким как агглютинация, преципитация, лизис эритроцитов. Использование IgE при выявлении НР-инфекции ранее не применялось.

Новым в предлагаемом способе является то, что нами впервые предложено для диагностики пилорического геликобактериоза определение уровня специфических иммуноглобулинов-антител класса Е к микроорганизму Helicobacter pylori (HP).

Развитие гиперчувствительности немедленного типа в желудочно-кишечном тракте обычно связывают с пищевой аллергией или воздействием других чужеродных агентов. Этот тип реакции хорошо описан на лабораторных животных и обычно локализуется в тонком кишечнике. В то же время морфологические изменения могут быть и в слизистой оболочке желудка.

Ниже приводятся отдельные клинические наблюдения.

П р и м е р 1. У ребенка 12 лет, страдающего хронической язвенной болезнью луковицы двенадцатиперстной кишки 1 стадии, при гистологическом исследовании слизистой антрального отдела желудка выявлена высокая степень (+++) инвазии НР. При иммунологическом исследовании в сыворотке крови IgG-антител к НР обнаружено не было. Определяли специфические антитела изотипа Е к НР в сыворотке крови: 15 мкл сыворотки больного смешивали с 200 мл PBS, добавляли 15 мкл 2,5% BSA и 15 мкл 0,1% Tween 20. Полученный раствор инкубировали с НР-агарозой в шейкере в течение 2 часов при комнатной температуре. Затем фосфатным буфером два раза. К отмытой НР-агарозе добавляли 100 мкл IgE против иммуноглобулинов человека меченных I-125 и также инкубировали в течение 10-12 часов. Затем отмывали и результат реакции учитывали с помощью гамма-счетчика. Результат выражали в % специфического связывания. Выявлены специфические антитела к НР изотипа Е - 4,53% сп. св. (контроль - 0,07% сп. св. ). После месячного противогеликобактерного курса терапии Де-нолом в дозе 4 таблетки в сутки, контрольное исследование показало отсутствие НР в слизистой оболочке антрального отдела желудка и отсутствие IgE-антител в сыворотке крови.

П р и м е р 2. У ребенка 14 лет с хронической язвенной болезнью луковицы двенадцатиперстной кишки 3 стадии выявлен гистологически активный антральный гастрит с высокой степенью инвазии слизистой оболочки антрального отела желудка НР (+++). Определялись специфические антитела класса G по стандартной методике и IgT-антитела по методике описанной в примере N1. Уровень IgE-антител был 3,75% сп. св. Так же ребенок был положительный и по IgE специфическим антителам. В течение месяца ребенок получал противогеликобактерную терапию Де-нол 4 таблетки в сутки в течение 4-х недель и трихопол в дозе 0,25 три раза в день в течение 10 дней. Контрольное исследование по окончании курса лечения показало отсутствие IgE специфических антител к НР в сыворотке крови, а по IgE-антителам ребенок оставался положительным.

П р и м е р 3. У ребенка 14 лет с хроническим гастродуоденитом, эрозивным гастритом при гистологическом исследовании слизистой антрального отдела желудка выявлен активный хронический гастрит и высокая степень (+++) инвазии НР. При иммулогическом исследовании в сыворотке крови определялись специфические антитела изотипа Е к НР - 5,05% сп. св. После месячного курса противогеликобактерной терапии Де-нолом и трихополом, контрольное исследование показало отсутствие НР в слизистой оболочке антрального отдела желудка и отсутствие IgE-антител к НР в сыворотке крови.

Способ прошел клиническую проверку у 65 детей на базе кафедры пропедевтики детских болезней 2 МОЛГМИ им. Н. И. Пирогова. IgG-антитела определялись нами у 78% больных с эрозивным процессом в гастродуоденальной зоне, а IgE у 100% больных соотношение у больных с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки 82% к 98% . Наш метод является более чувствительным при данных заболеваниях.

Предлагаемый способ обладает большой чувствительностью и информативностью, прост и экономичен. Предложенный нами способ диагностики позволяет с высокой точностью диагностировать язвенно-эрозивные процессы в желудке и двенадцатиперстной кишке связанные с НР-инфекцией. Что очень важно, нет необходимости проводить эндоскопическое исследование и брать биоптат слизистой оболочки желудка для выявления НР. Метод является не инвазивным. (56) Rathbone B. J. et al. Sistemic and local antibody responses to gastric Campylobacter pyloridis in non-ulcer dyspepsia", Gut. 1986, 27, p. 642-647.

Целью изобретения является повышение точности диагностики пилорического геликобактериоза при поражении гастродуоденальной зоны язвенно-эрозивными процессами. Способ состоит в том, что разведенную фосфатным буфером сыворотку крови больного инкубируют с НР-агарозой и после промывки добавляют IgE против иммуноглобулинов человека, меченных йодом-125. Результат реакции фиксируется с помощью гамма-счетчика. При наличии в сыворотке крови специфических иммуноглобулинов-антител класса Е к пилорическому геликобактеру диагностируют пилорический геликобактериоз. Изобретение может быть использовано в гастроэнтерологии.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПИЛОРИЧЕСКОГО ГЕЛИКОБАКТЕРИОЗА путем обнаружения в сыворотке крови больных иммуноглобулинов-антител против Hellcobacter pylori, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют антитела, относящиеся к иммуноглобулину класса E. с помощью радиоиммунологического анализа и при обнаружении их диагностируют пилорический геликобактериоз.