СПОСОБ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ГРУБОГО РУБЦЕВАНИЯ РОГОВИЦЫ Российский патент 1994 года по МПК G01N33/80 

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для ослабления процесса рубцевания роговицы после ее ранений. Проблема глазного травматизма чрезвычайно актуальна сегодня. Одним из наиболее неприятных последствий ранений роговицы является грубое рубцевание раневого канала, приводящее к помутнению значительной площади роговицы, контракции рубцовой ткани, появлению астигматизма, возникновению оптических и световых обераций. Нередко требуются сложные хирургические вмешательства для восстановления прозрачности роговицы и исправления астигматизма.

Известно, что с целью уменьшения площади и плотности роговичных рубцов применяют биологически активные вещества: препарат спедиан-2М, который способствует рассасыванию инфильтрата, восстановлению структуры поврежденной ткани (Калиниченко И. И. , 1973, в кн. Р. А. Гундорова. А. А. Малаев, А. М. Южаков "Травмы глаза", М. , Медицина, 1986, с. 151). Мазь солкосерила обладает регенераторными свойствами и применяется при травмах роговицы (Tanini et al, 1974, в кн. Р. А. Гундорова, А. Л. Малаев, А. М. Южаков "Травмы глаза", М. , Медицина, 1986, с. 151).

Недостатком применяемых биологически активных веществ является их невысокая эффективность в лечении грубых рубцов роговицы, приводящая к астигматизму.

Целью настоящего изобретения является снятие воспалительных явлений, уменьшение величины рубца, восстановление сферичности роговицы после ее ранений.

Поставленная цель достигается следующим образом. В конъюнктивальный мешок в течение 1-1,5 мес 3-5 раз в день закапывают 0,1-0,15 мл супернатанта культур стимулированных лимфоцитов периферической крови.

На фиг. 1 представлен нормальный глаз кролика; на фиг. 2 - глаз кролика на 7-е сутки после лечения супернатантом культур стимулированных лимфоцитов; на фиг. 3 - глаз кролика на 7-е сутки после лечения средой 199 с антибиотиками; на фиг. 4 - глаз кролика, леченного сульфатным буфером в течение 7 суток; на фиг. 5 - глаз кролика через 1,5 месяца после лечения супернатантом лимфоцитов; на фиг. 6 - глаз кролика через 1,5 мес. после лечения средой 199; на фиг. 7 - динамика изменения размера раны в опытной и контрольной группах.

Сущность изобретения иллюстрируется следующим примерами.

П р и м е р 1. Из краевой вены уха кролика получают 20 мл крови, из которой методом центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографина выделяют чистую суспензию мононуклеарных клеток (МНК), Boyum, 1968.

Клетки в концентрации 5 х 10⁶ в мл стимулируют фитогемаглютинином (ФГА) Difco-P в дозе 10 мкг/мл в течение 3-х ч. Затем клетки отмывают от ФГА путем трехкратного центрифугирования при 1800 об/мин в течение 10 мин и культивируют 20 ч в среде 199 с антибиотиками пенициллином (100 ед/мл) и стрептомицином (100 мкг/мл). После окончания культивирования клетки удаляют центрифугированием (режим: 1800 об/мин, 10 мин), а полученный супернатант стерилизуют фильтрацией через мембранные фильтры (диаметр пор 0,22 мк, "Millipore").

Кроликам наносят линейные проникающие ранения роговицы размером 3,5-4 мм в оптической зоне. В течение 1 мес 3 раза в день в коньюнктивальный мешок закапывают 0,1 мл супернатанта культур стимулированных МНК.

Через 24 ч обнаруживается отек и инфильтрация краев раны. Роговица неправильной сферичной формы (длина раны 3 мм, ширина 1 мм). Передняя камера средней глубины, но несколько мельче, чем в здоровом глазу. Симптом "тиндаля" в жидкости передней камеры (клеточная взвесь). Рефлекс с глазного дна неярко-розовый, детали просматриваются с трудом из-за отека роговицы.

Через 7 суток отек значительно уменьшился (ширина 0,4 м). Края раны почти не инфильтрированы, эпителизация полная, роговица сферичная. Передняя камера средней глубины, влага прозрачная, рефлекс с глазного дна розовый.

Через 2 недели отека и инфильтрации ткани роговицы не обнаруживается, границы рубца более четкие (ширина рубца 0,4 мм, длина 3 мм) роговица сферичная, рефлекс розовый, детали глазного дна просматриваются.

Через 1,5 мес (фиг. 6) определяется рубец с четкими контурами (шириной 0,3 мм, длиной 2,5 мм). Роговица сферичная, влага передней камеры прозрачная.

П р и м е р 2. Кролику наносят линейное проникающее ранение роговицы, размером 4,0 мм в оптической зоне. В течение 1 мес 3 раза в день в конъюнктивальный мешок 3-4 раза в день закапывают 0,1 мл среды 199 с антибиотиками пенициллином (100 ЕД/мл) и стрептомицином (100 мкг/мл). Это обязательный контроль среды культивирования МНК.

Через 24 ч обнаруживается отек и инфильтрация краев раны (ширина - 1,2 мм, длина 4 мм). Роговица неправильной сферической формы. Передняя камера средней глубины, но несколько мельче, чем в здоровом глазу (фиг. 1). Определяется клеточная взвесь в жидкости передней камеры. Рефлекс с глазного дна неярко-розовый, детали просматриваются с трудом из-за отека роговицы. Отмечается наличие слизистого отделяемого.

Через 7 сут отек и инфильтрация раны несколько уменьшаются, но в меньшей степени, чем при введении аутологичного супернатанта МНК раны, границы рубца более четко контурируются, ширина рубца 1 мм. Роговица несферическая, область рубца значительно выступает над остальной поверхностью роговицы. Передняя камера средней глубины. Рефлекс с глазного дна неярко-розовый, детали глазного дна просматриваются более четко.

Через 1,5 мес определяется рубец роговицы с четкими контурами, длиной 4 мм шириной 0,8 мм. Область рубца несколько выступает над остальной поверхностью роговицы (роговица несферической формы).

Предложенный способ лечения проникающих ранений роговицы с использованием супернатантов стимулированных мононуклеарных клеток (МНК) применен в эксперименте на 7 кроликах (14 глаз). Первую контрольную группу составили 5 кроликов (10 глаз), леченных средой 199 с антибиотиками. Вторую контрольную группу составили 4 кролика (8 глаз), леченных фосфатным буфером.

Результаты обобщены в таблице.

Эффективность предлагаемого способа предупреждения грубого рубцевания роговицы после ее ранений заключается в следующем:
в отсутствии воспалительных явлений по сравнению с контрольными группами; быстром (через 7 сут) снятии отека;
в активации процессов нормального заживления раны, что проявлялось в значительном уменьшении размеров рубца, особенно его ширины, уже через 7 сут после лечения. У некоторых животных длина рубца роговицы через 2 мес после ранения и проводимого лечения уменьшилась вдвое;
в раннем восстановлении сферичности роговицы.

Для клинической практики предложенный способ представляет значительный интерес - как методика выбора лечения проникающих ранений роговицы, приводящих к тяжелым формам астигматизма и инвалидизации больного.

(56) Гундорова Р. А. , Малеев А. Л. , А. М. Южаков, "Травмы глаза", М. , Медицина, 1986, с. 151.

Образование грубых рубцов роговицы, развитие астигматизма являются тяжелыми осложнениями проникающих ранений роговицы. Иммунологические методы коррекции процессов воспаления и патологической регенерации находят в настоящее время широкое применение. Предлагаемый способ предупреждения грубого рубцевания роговицы заключается в применении бесклеточного супернатанта культур лимфоцитов периферической крови в виде капель в течение 1 - 1,5 месяцев. Эффективность данного метода заключается в активации процессов нормального заживления раневого дефекта (уменьшении размеров рубца в среднем в 2 раза с момента начала лечения), отсутствии воспалительных явлений, раннем восстановлении сферичности роговицы. Предлагаемый способ является доступным, технически простым в исполнении. Особая ценность его заключается в том, что супернатант культур лимфоцитов, используемый в качестве лечебного средства, содержит естественную комбинацию эндогенных питокинов, аутологичных для данного организма. Поэтому наряду с активацией процессов регенерации и противовоспалительным действием супернатант не оказывает аллергического действия, совершенно безвреден. 7 ил. , 1 табл.

СПОСОБ ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ ГРУБОГО РУБЦЕВАНИЯ РОГОВИЦЫ путем введения биологически активных веществ, отличающийся тем, что в конъюктивный мешок в течение 1,5 мес закапывают 3 - 5 раз в день 0,1 - 0,15 мл супернатанта, полученного после стимуляции 5 · 10⁶ лимфоцитов периферической крови 20 мкг/мл фитогемаглютинина и культивирования их в течение 20 ч.