СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА НАТУРАЛЬНЫХ ПОЛОВЫХ ФЕРОМОНОВ ХРЯКА Российский патент 1995 года по МПК A61D19/02 A61K35/00 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к получению биологических препаратов, которые используются в свиноводстве в качестве стимуляторов репродуктивной функции у свиноматок.

Известен способ получения препарата натуральных половых феромонов из мочи быков [1] который заключается в пропитывании обезвоженного селикогеля мочой, с последующим удалением воды при помощи пятиокиси фосфора и экстрагирования оставшихся сухих адсорбированных селикогелем феромонов этиловым спиртом. Полученный экстракт является препаратом половых феромонов быка, который применяют как стимулятор репродуктивной функции у коров и телок. Для этого его распыляют с помощью пульверизатора на уровне носового зеркала животных. Недостатком этого метода является то, что использование в качестве исходного материала только одной мочи, длительность технологического процесса (24 ч), а также большие потери препарата во время обезвоживания, не позволяют получить конечный продукт с высокой активностью. В свою очередь применение селикогеля и этилового спирта значительно повышает себестоимость препарата.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является способ получения препарата натуральных половых феромонов из мочи и эякулята половозрелого хряка [2]
Для изготовления препарата 1000 мл мочи хряка смешивают с 200 мл спермы. Смесь инкубируют в течение 24 ч при температуре 25-30^оС в закрытой емкости, затем нагревают до 60^оС в течение 60 мин. К смеси приливают 1,2 г нипангина (метиловый эфир параоксибензойной кислоты) и содержат в закрытой емкости еще сутки при температуре 24-30^оС. После этого смесь нагревают в водяной бане до 80^оС в течение 30 мин, охлаждают, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и готовый препарат расфасовывают в стеклянные флаконы. Используют полученный препарат методом распыления в местах содержания свиноматок.

Недостатком данного способа является длительность процесса получения препарата (только на время фазы инкубации затрачивается 48 ч), более высокая его себестоимость (затраты на содержание хряков-производителей, выработку у хряков рефлекса "садки" на чучело свиноматки, оборудование и материальное обеспечение пункта для получения эякулята у хряков, подготовку операторов для работы с хряками-производителями и взятия у них эякулята). При этом готовый препарат содержит большое количество балластных веществ, что снижает его активность и сокращает срок хранения. Отсутствие надежного обеззараживания препарата не исключает возможность распространения инфекционных болезней в свиноводческих хозяйствах в случае заболевания хряков-производителей, являющихся поставщиками эякулята и мочи.

Целью изобретения является увеличение выхода препарата с высокой активностью, сокращение времени его получения и снижение себестоимости.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве исходного сырья используют семенники, подчелюстные слюнные железы и мочу, которые получают от половозрелых хряков в условиях мясокомбината. Семенники и слюнные железы очищают от соединительной и жировой ткани и измельчают на мясорубке в равном соотношении. В полученный фарш добавляют мочу (1:2-2,5) и гомогенизируют до однородной массы в гомогенизаторе. Для увеличения деструкции клеточной ткани и выхода феромонов в раствор в гомогенизат вносят йодид калия 1,5-2% от массы исходного сырья. Полученную смесь инкубируют в течение 6-7 ч при 4-5^оС. Затем в нее добавляют 15-20%-ный раствор трихлоруксусной кислоты в соотношении 10:1-1,5 и центрифугируют при 3000 оборотах в течение 15-20 мин до разделения смеси на две фракции.

Оптимальное соотношение указанных компонентов подбирали с использованием математического планирования эксперимента методом крутого восхождения. Увеличение количества мочи приводило к снижению выхода препарата на 9% а при уменьшении мочи получали на 47% меньше препарата, чем при оптимальном соотношении компонентов.

Оптимальная температура (4-5^оС) и время инкубации смеси (6-7 ч) подбирались опытным путем. При температуре выше 5^оС и увеличении времени инкубации больше 7 ч происходит размножение микроорганизмов в среде и загнивание ее компонентов. В случае понижения температуры до 2-3^оС и уменьшения времени инкубации до 3-6 ч снижается выход целевого продукта на 11%
После центрифугирования смеси надосадочную жидкость сливают и подвергают перегонке с водяным паром. Полученный конденсат является препаратом, который представляет собой прозрачную жидкость, без оттенков, с пиком поглощения в ультрафиолетовой зоне спектра (λ= 323 нм), со специфическим запахом, стерильную и нетоксичную.

Сопоставительный анализ с прототипом показывает, что предлагаемый способ отличается тем, что в качестве исходного сырья используются органы взрослого хряка, содержащие наиболее высокое количество натуральных половых феромонов (семенники, подчелюстные слюнные железы), для увеличения деструкции клеточной ткани указанных органов и выхода феромонов в раствор используется йодид калия, для получения окончательного препарата используется перегонка с водяным паром.

Таким образом, предлагаемый способ соответствует критерию "новизна". При изучении других известных технических решений в данной области признаки, отличающие предлагаемое изобретение от прототипа, не были выявлены и поэтому они обеспечивают предлагаемому техническому решению соответствие критерию "существенные отличия".

П р и м е р. 500 г семенников и 500 г подчелюстных слюнных желез, полученных от взрослых хряков и очищенных от соединительной и жировой ткани, измельчали на мясорубке. К полученному фаршу добавляли 2000 мл мочи хряка и гомогенизировали до однородной массы. В полученную массу вносили 60 г йодида калия и инкубировали 6-7 ч при 4-5^оС. Затем в смесь добавляли 300 мл 20%-ной трихлоруксусной кислоты и центрифугировали при 3000 об. в течение 15 мин. Надосадочную жидкость сливали и перегоняли с водяным паром. Полученный препарат представлял собой прозрачную жидкость без оттенков со специфическим запахом. Выход препарата с оптимальной активностью составлял 550 мл. Его расфасовывали в стеклянные флаконы, обкатывали алюминиевыми колпачками с резиновыми пробками и хранили до использования при 5^оС. Срок хранения 12 мес.

Стерильность препарата определяли методом посева на питательные среды МПА и Эндо с последующей инкубацией в термостате. Токсичность проверяли на 7 ремонтных свинках, 4 взрослых свиноматках и 10 морских свинках. В специальной камере-станке со свиноматками с помощью генератора САГ-1 создавали аэрозольное насыщение препарата, которое поддерживали в течение 60 мин. Поведенческие реакции, основные клинические и гематологические показатели ремонтных свинок и взрослых свиноматок в период проверки, а также в течение последующих 7 дней, находились в пределах физиологических норм. Не отмечалось явлений токсикоза и у морских свинок, после внутрибрюшинного введения препаратае все животные были живы.

Активность опытного препарата определяли с использованием поведенческого биологического теста и научно-производственных опытов.

Во время биотеста учитывали время, затраченное свиноматками, находившимися в половой охоте, на обнаружение и обнюхивание ольфактометра с ватно-марлевыми тампонами обработанными опытным препаратом и препаратом-прототипом, а также методом оценки в баллах поведенческих реакций самок в момент обнаружения ольфактометра. Контролем служили тампоны, пропитанные синтетическим аналогом половых феромонов хряка СтО-1, мочой свиноматок, этиловым спиртом, отваром комбикорма и дистиллированной водой. Установлено, что наибольшее внимание свиноматок привлекали натуральные и синтетические феромоны. При этом обработанные опытным препаратом тампоны свиноматки обнаруживали на 1,2±0,15 мин быстрее, чем тампоны, обработанные препаратом-прототипом, и на 1,4±0,27 мин быстрее, чем препаратом СтО-1. Результаты биотеста также показали, что у свиноматок процент ключевых (положительных) ответов на опытный препарат было больше (89%), чем на препарат-прототип (75%).

С целью апробации препарата в производственных условиях были проведены опыты в двух хозяйствах Курской области.

В первом опыте препарат был использован для стимуляции у свиней полового созревания. С этой целью было сформировано три группы ремонтных свинок-аналогов крупной белой породы по 15 голов в каждой. Свинок 1-ой группы обрабатывали опытным препаратом, свинок 2-ой группы обрабатывали препаратом-прототипом, животные 3-ей группы были контрольными и их обрабатывали дистиллированной водой. Использовали феромоновые препараты через день, методом распыления на уровне носового зеркала с помощью пульверизатора, начиная с 5-месячного возраста свинок и до включения их в воспроизводительный процесс. Дозировка каждого препарата составляла по 0,5 мл в расчете на одно животное. При достижении свинками 105-115 кг их искусственно осеменяли. Сперму для осеменения получали от трех хряков-производителей крупной белой породы 2-летнего возраста. За каждым хряком было закреплено по 5 свинок из каждой группы. Осеменение проводили двукратно: первый раз сразу после выявления охоты и повторно через 24 ч. После первого опороса проводили сравнительный анализ воспроизводительных и продуктивных качеств свиноматок по каждой группе с учетом используемых производителей.

Содержались опытные и контрольные животные в одном помещении и получали одинаковый рацион, сбалансированный по питательным и минеральным компонентам. Полученные данные подвергались биометрической обработке (Рокицкий П. Ф. 1973).

Результаты исследований показали, что первая половая охота у свинок 1-ой группы проявлялась со 182±1,96 сут, у свинок 2-ой группы со 188±2,30 сут, у свинок 3-ей группы c 201±2,47 сут. При этом масса тела у животных соответственно составляла 73,0±0,85; 76,1±1,14 и 82,3±3,14 кг. Установлено, что если у свинок, обработанных феромонами, к периоду включения в воспроизводительный процесс отмечалось 2-3 половых цикла, то у контрольных животных их было только 1-2. При этом у свинок 1-ой группы и 2-ой группы формирование стадии возбуждения происходило с последовательным проявлением феноменов, а половая охота протекала с хорошо выраженным симптомом "неподвижности". Наоборот, у животных 3-ей группы клинические признаки полового возбуждения проявлялись в более стертой форме, среди них имелось значительно больше животных с неполноценными половыми циклами, чем среди свинок, обработанных феромонами. Сравнительный анализ воспроизводительных и продуктивных качеств свинок по первому опоросу показал, что у животных 1-ой группы они были выше, чем у свинок 2-ой и 3-ей групп (табл. 1).

Во втором опыте проводили испытание препарата в качестве стимулятора воспроизводительной функции у основных свиноматок. С этой целью подбирали свиноматок-аналогов крупной белой породы, из которых одни были обработаны опытным препаратом (1-я группа), другие препаратом-прототипом (2-я группа), третьи животные были контрольными (3-я группа), их обрабатывали дистиллированной водой. Распыление феромонов начинали проводить за 5 дней до отъема поросят от маток и оканчивали при проявлении у свиноматок половой охоты, которую выявляли с помощью хряков-пробников.

Было установлено, что у свиноматок 1-ой группы половая охота после отъема поросят проявлялась раньше, чем у животных 2-ой и 3-ей групп (табл. 2), это позволило значительно сократить у основных свиноматок период бесплодия и повысить многоплодие (табл. 3).

Результаты биологического тестирования и научно-производственных опытов показали, что предлагаемый способ позволяет получить препарат натуральных половых феромонов хряка, который по своей биологической активности превосходит препарат-прототип. При этом предлагаемый способ прост в техническом исполнении, не требует больших затрат времени и средств, его можно использовать в производственных отделах ветеринарных лабораторий.

Использование: ветеринария, а именно, получение биологических препаратов. Сущность изобретения: способ заключается в получении препарата натуральных половых феромонов из тканей и экскретов взрослого хряка. В качестве биологического материала используют семенники, подчелюстные железы и мочу от половозрелых хряков, которые гомогенизируют в соотношении 1:1 - 2 : 2 - 2,3. Затем в полученную смесь добавляют 2 - 2,5% от общей массы смеси йодид калия и инкубируют в течение 6 - 7 ч при 4 - 5°С. После чего смешивают с 15 - 20% трехлоруксусной кислотой в соотношении 10 : 1 - 1,5 и центрифугируют до разделения на две фракции. Затем надосадочную жидкость перегоняют с водяным паром. 3 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА НАТУРАЛЬНЫХ ПОЛОВЫХ ФЕРОМОНОВ ХРЯКА, включающий отбор, смешивание и инкубирование биологического материала, отличающийся тем, что в качестве биологического материала используют семенники, подчелюстные железы и мочу от половозрелых хряков, которые гомогенизируют в соотношении 1: 1-2: 2-2,6, затем в полученную смесь добавляют иодид калия в количестве 2-2,5% от общей массы смеси и инкубируют в течение 6-7 ч при 4-5^oС, после чего смешивают с 15-20%-ной трихлоруксусной кислотой в соотношении 10:1-1,5 и центрифугируют до разделения на две фракции, а затем надосадочную жидкость перегоняют с водяным паром.