СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ В БИОЛОГИЧЕСКОМ СУБСТРАТЕ Российский патент 1995 года по МПК C12Q1/04 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам обнаружения анаэробных бактерий и продуктов их метаболизма в биологическом субстрате, и может быть использовано для диагностики гнойно-воспалительных заболеваний, вызываемых анаэробными бактериями.

Известен способ определения анаэробных бактерий путем облучения гноя длинноволновой ультрафиолетовой частью спектра (365 нм) в затемненном помещении и обнаружения его флюоресценции в красной части спектра.

Недостатками способа являются невысокая чувствительность определения в связи с возможностью выявления в основном пигментированных неклостридиальных анаэробов, недостаточная яркость свечения, сложность проведения процесса из-за необходимости тщательного затемнения помещения, а также вредное воздействие ультрафиолетового облучения на зрение исследователя.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа за счет увеличения яркости и контрастности люминесцентного свечения гноя, что позволяет расширить диапазон выявляемых анаэробов и продуктов их метаболизма, упрощение способа и устранение побочных эффектов.

Это достигается способом экспресс-обнаружения анаэробных бактерий в исследуемом биологическом субстрате путем облучения его сине-фиолетовой частью спектра с диапазоном волн 400-420 нм, соответствующим максимуму поглощения флюоресцирующих веществ, что приводит к повышению квантового выхода люминесценции и соответственно увеличению яркости свечения с дальнейшим поглощением возбуждающего излучения запирающим светофильтром с границей пропускания более 500 нм.

Способ осуществляют следующим образом. Биологический субстрат облучают источником коротковолновой части видимого спектра с длиной волны 400-420 нм. Наблюдение ведут через запирающий светофильтр с границей пропускания более 500 нм. При наличии анаэробов наблюдают малиново-красное свечение.

П р и м е р 1. Больной П. история болезни N 14742/1997. Диагноз: одонтогенная флегмона поднижнечелюстной области. Гной от больного, взятый шприцом в количестве 2 мл, облучают источником коротковолновой части видимого спектра с длиной волны 400-420 нм. Наблюдение ведут через запирающий светофильтр с границей пропускания более 500 нм. Наблюдается яркое малиново-красное свечение.

Заключение: в гнойном содержимом обнаружены неспорообразующие анаэробные бактерии, что подтверждается бактериологическими исследованиями.

П р и м е р 2. Больной Н. история болезни N 8798/492. Диагноз: остеофлегмона челюстно-лицевой области. Из раны забирают гнойное содержимое (желательно без крови), гной не имеет запаха, сливкобразной консистенции. Гнойное содержимое облучают источником коротковолновой части видимого спектра с длиной волны 400-420 нм, наблюдение ведут через запирающий светофильтр с границей пропускания более 500 нм. Наблюдают интенсивное малиново-красное свечение, сохраняющееся при длительном хранении биоматериала в течение месяца. При бактериологическом исследовании гноя анаэробы не обнаружены, неклостридиальные анаэробы обнаружены в биоптате.

Заключение: способ по изобретению позволяет установить участие неклостридиальных анаэробов в этиологии гнойно-воспалительного процесса, несмотря на отрицательное бактериологическое исследование гноя. Это свидетельствует о необходимости использования данного способа при исследовании гнойного отделяемого даже при отрицательном его бактериологическом анализе.

П р и м е р 3. Больной Н. история болезни N 5712361. Диагноз: аденофлегмона челюстно-лицевой области. Из раны шприцом берут гнойное отделяемое в количестве 2 мл, облучение и наблюдение ведут, как в примерах 1 и 2. Свечение не наблюдается ни в гное, ни в первичных посевах из гноя. В мазке из гноя обнаружены грамположительные кокки.

Заключение: неспорообразующие анаэробы не обнаружены.

Способ по изобретению может быть использован для экспресс-диагностики гнойно-воспалительных заболеваний, вызываемых анаэробными бактериями. Способ обладает высокой чувствительностью, позволяет выявить наличие анаэробов не только в чистой культуре или в первичных посевах, но и в гнойном отделяемом, непосредственно у постели больного, что значительно сократит сроки диагностики и назначения целенаправленного лечения. Способ прост, не требует дорогостоящей аппаратуры, специального затемнения помещения, позволяет избежать вредного воздействия ультрафиолетового излучения на зрение исследователя, сокращает время исследования. Способ может быть использован для определения чувствительности анаэробов к различным лекарственным препаратам.

Использование: обнаружение анаэробных бактерий в биологическом субстрате. Сущность изобретения: способ осуществляют путем облучения биообъекта сине-фиолетовой частью спектра в диапазоне волн 400 420 нм с последующим поглощением флюоресцентного излучения запирающим светофильтром с границей пропускания более 500 нм. При наличии анаэробов наблюдается малиновое свечение. Способ позволяет выявить наличие анаэробов не только в чистой культуре или в первичных посевах, но и в гнойном отделяемом больного.

СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ В БИОЛОГИЧЕСКОМ СУБСТРАТЕ путем облучения исследуемого объекта и регистрации флюоресценции, отличающийся тем, что облучение проводят сине-фиолетовой частью спектра в диапазоне волн 400-420 нм, поглощают возбуждающее излучение запирающим светофильтром с границей пропускания более 500 нм и обнаруживают анаэробные бактерии при регистрации малинового свечения.