СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФРАКЦИЙ ФИБРИНА Российский патент 1996 года по МПК A61K35/14 

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и касается поисков путей дальнейшего изучения свертывающей системы крови.

Известными способами разделения фибрина на фракции является радиоиммунологический метод (см. Budzynski A.Z. Marder V.J. Sherry S. Reaction of Fibrinogen in the Radio immunoassy of Human Fibrinopeptide A. "Blood" 1975, 45, N 6, 757-758), или обработка фибрина плазмином или тромбином (см. Ragamon E. Aznar J. Vila V. Degradation of Human Fibrinogen by Plasminum. "Haemostasis" 1978, 7, N 1, стр.26-34; Budzynski A.Z. Marder V.J. Determination of Human Fibrinopeptide A by Radioimmunoassy in Purified Systems and in the Blood "Thrombos. Diathes haem. (Stuttg), 1975, 34, N 3, 709-717). Для растворения фибрина используются различные концентрации бромистого натрия, уксусной кислоты, мочевины (см. Brosstad F. Godal H.C. Kierulf P. Some Characteristic of Various Fibrin Monomer Preparations Made from Disolved Fibrin Clofs. "Haemostasis" 1977, 6, N 4, 213-224).

Однако в выше перечисленных способах используются редкие и сложные реактивы и методы разработаны в основном для разделения фибриногена или фибрина, полученного из плазмы крови.

Цель изобретения разработать простой способ разделения на фракции фибрина, выделенного из сгустков крови, исключить в качестве реактивов плазмин и тромбин.

Цель достигается следующим образом.

Из сгустков крови доноров выделяется фибрин по разработанному способу (см. авт. св. N 1573571). Полученные беловатые хлопья фибрина отмываются от остатков плазмы крови 5-6 разовым промыванием дистиллированной водой в 400-500 кратном объеме при периодическом встряхивании (каждые 10-15 мин по 5-6 мин). После последнего промывания и создания фибрина при прозрачной надосадочной жидкости фибрин фильтруется через бумажный фильтр. Полученная фибринная масса отжимается от остатков воды через бумажный фильтр и взвешивается. После взвешивания фибрин помещается в делительную воронку в 0,5-2%-ный раствор гидрата окиси натрия из расчета 1 г сырого фибрина на 20-40 мл раствора. После этого делительная воронка помещается в термостат при температуре 37-38^оС на 18-24 ч. НЕ ВСТРЯХИВАЕТСЯ! Через 18-24 ч весь фибрин делится на 3 фракции (см. чертеж). Самая нижняя часть (фр.1), средняя часть (фр. 2) и верхняя часть (фр.3). Если общее количество белка в растворе принять за 100% то нижняя часть (фр.1) содержит его 40-60% средняя часть (фр.2) 15-20% и верхняя часть (фр.3) 20-45%
Характеристика конечных продуктов.

Фракция 1. Самая нижняя часть всей массы фибрина имеет красный цвет, мутная, густая, тягучая масса. При стоянии отдельно в сосуде эта фракция через 1-3 ч при температуре 21-23^оС приобретает коричневый цвет. Имеет четкую горизонтальную границу с фракцией 2.

Фракция 2. Имеет светло-коричневый или желтоватый цвет, менее тягуча чем фракция 1, при стоянии своего цвета не меняет. С фракцией N 1 тоже имеет горизонтальную но несколько расплывчатую границу.

Фракция 3. Самая верхняя часть. По объему занимает половину и более всего объема жидкости, прозрачна, имеет слабо желто-зеленый цвет, при стоянии своего цвета не меняет.

Из делительной воронки каждая фракция может быть получена в отдельный сосуд.

Использование предполагаемого изобретения позволяет растворить фибрин сгустка крови и разделить его на фракции простым способом, получить фракции фибрина в раздельном виде.

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и касается поиска новых путей для изучения свертывающей системы крови. Цель изобретения - растворить и разделить на фракции фибрин сгустка крови. Сущность: нерастворенный в воде фибрин сгустка крови растворяется в подобранном реактиве, при этом разделяясь на составные части. Новым в предлагаемом способе является то, что для растворения используется раствор гидрата окиси натрия, в котором выделяются три фракции фибрина. Имеющиеся четкие границы, особенно между первой и второй фракциями, дают возможность предположить о наличии в сгустке различных белков с разным молекулярным весом, соединенных между собой легко разрываемой связью, возможно адсорбцией. 1 ил.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФРАКЦИЙ ФИБРИНА путем растворения его с помощью соединений натрия, отличающийся тем, что в качестве растворителя используют 0,5 - 2,0%-ный раствор гидрата окиси натрия, инкубируют при 7 - 38^oС в течение 18 - 24 ч, образующиеся при этом три фракции разделяют с помощью делительной воронки.