СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ХРОМОСОМ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК Российский патент 1997 года по МПК A01G7/00 A01H1/04 

Изобретение относится к цитогенетике, в частности, к выявлению хромосом растительных клеток.

Известно много способов окраски хромосом растительных клеток-ацитокармином, ацетоорсеинем, реактивов Шиффа и др. Так, например, корни лука обрабатывают 0,2%-м раствором колхицина на протяжении 2 ч, фиксируют уксусным алкоголем, гидролизуют в 1 м растворе соляной кислоты при 60^oС 7 мин и окрашивают реактивом Шиффа, основу которого составляет основной фуксин для фуксиносернистой кислоты. (Паушева З.П. Практикум по цитологии растений, М. Агромпромиздат, 1988).

Однако во всех этих способах выявления хромосом используются дефицитные красители: кармин, орсеин, основной фуксин.

Задачей настоящего изобретения является выявление хромосом в растительных клетках дешевым отечественным красителем.

Поставленная задача достигается тем, что на депарафинированные срезы растительных тканей помещают 2-3 капли основного красителя из плодов воронца заостренного на 20-30 мин, отмывают в водопроводной воде 5-10 мин и проводят по спиртам возрастающей концентрации и заключают в бальзам.

Основной краситель готовят из плодов воронца заостренного, которые настаивают на 70^o-м этиловом спирте. К 100 мл полученного раствора фиолетового цвета добавляют 10-15 мл пропионовой кислоты, 1-1,6 г алюмокалиевых квасцов и 1,6-2,4 г мочевины.

Признаки, указанные заявителем в отличительной части формулы изобретения, не известны ему в других технических решениях. Следовательно, заявляемое техническое решение содержит существенные отличия от прототипа.

Пример 1. Корешки лука репчатого Allium cepu L размером 1-2 см фиксировали в жидкости Буэна, заливали в парафин и изготовляли срезы толщиной 7 мкм. На депарафинированные срезы помещали 2-3 капли основного красителя на 20 мин, затем выдерживали в водопроводной воде 5 мин, споласкивали в дистиллированной воде и проводили по спиртам возрастающей концентрации, просветляли и заключали в бальзам. На препаратах четко просматриваются интерфазные ядра и хромосомы на разных стадиях митоза.

Пример 2. На депарафинированные срезы, приготовленные из корешков лука, помещали 2-3 капли основного красителя на 25 мин, затем после промывки в водопроводной воде в течение 8 мин и споласкивания в дистиллированной воде проводили через спирты возрастающей концентрации, ксилол и бальзам. На готовых гистопрепаратах видны клетки на разных стадиях митоза.

Пример 3. Депарафинированные срезы толщиной 7 мкм окрашивали в основном красителе 30 мин, а затем промывали в водопроводной воде 10 мин, споласкивали в дистиллированной воде и проводили через батарею спиртов возрастающей концентрации, ксилол и канадский бальзам. Хромосомы окрашиваются в синий цвет и четко просматриваются на разных стадиях митоза.

Пример 4. Корешки конских бобов Vicia baba L, выращенные при комнатной температуре, размером 1-2 см фиксировали в жидкости Буэна и заливали в парафин, а затем изготовляли срезы толщиной в 7 мкм. На депарафинированные срезы помещали 2-3 капли основного красителя, приготовленного из воронца заостренного, на 20 мин, выдерживали в водопроводной воде 5 мин, споласкивали в дистиллированной воде и проводили через спирты возрастающей концентрации, просветляли и заключали в бальзам. На препаратах четко просматриваются интерфазные ядра и хромосомы.

Пример 5. На депарафинированные срезы, приготовленные из корешков конских бобов, помещали 2-3 капли основного красителя на 25 мин, затем после промывки в водопроводной воде в течение 8 мин и споласкивали в дистиллированной воде, проводили через спирты возрастающей крепости, ксилол и бальзам. На готовых препаратах видны хромосомы.

Пример 6. Депарафинированные срезы из корешков конских бобов окрашивали в основном красителе 30 мин, промывали в водопроводной воде 10 мин, споласкивали в дистиллированной воде, проводили через спирты возрастающей концентрации, ксилол, бальзам. На препаратах четко просматриваются хромосомы на разных стадиях.

Предложенный способ выявления хромосом в растительных клетках можно использовать на лабораторно-практических занятиях по цитологии, генетике, ботанике, а также для проведения научных исследований.

Использование: цитогенетика, выявление хромосом растительных клеток. Сущность изобретения: на депарафинированные срезы растительных тканей помещают 2-3 капли основного красителя из плодов воронца заостренного на 20-30 мин, отмывают в водопроводной воде 5-10 мин и проводят по спиртам возрастающей концентрации с последующим заключением в бальзам.

Способ идентификации хромосом растительных клеток, включающий нанесение основного красителя на гистологические срезы, отличающийся тем, что в качестве основного красителя используют спиртовый экстракт плодов воронца заостренного в смеси с пропионовой кислотой, алюмокалиевыми квасцами и мочевиной при следующем соотношении компонентов, г:
Спиртовый экстракт плодов воронца заостренного, мл 100
Пропионовая кислота 10 15
Алюмокалиевые квасцы 1 1,6
Мочевина 1,6 2,4н