СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОСТИМУЛЯТОРА ИЗ ПЛАЦЕНТЫ КОРОВ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/50 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к ветеринарному акушерству, точнее к технологии получения и применения лекарственных средств и тканевых препаратов из натурального сырья, взятого от здоровых животных.

Известен "Способ получения биостимулятора "Пом" из плаценты коров" (См. а. с. N 1730762, A 61 K 35/12; Опубл. 20.07.96. Бюл. N 20). По этому способу после охлаждения и выдержки плаценту измельчают на мясорубке и гомогенизируют, после гомогенизации фарш из ткани плаценты смешивают с мочевиной в соотношении 0,4-0,5: 1,0 и добавляют формалин, а экстракцию осуществляют путем нагревания полученной смеси до 100^oC, а затем добавляют дистиллированную воду, отстаивают, контролируют и фасуют.

Биостимулятор "ПОМ" из плаценты коров применяют для профилактики задержаний последов субинволюции матки и эндометритов у коров в ранний послеотельный период, а также для стимулирования стадии возбуждения полового цикла у коров и телок, не приходящих в охоту, Однократная доза биостимулятора "ПОМ" - 20 мл. Для стимуляции охоты: 3-5 раз через 48 часов.

Недостатками такого способа получения биостимулятора является то, что в препарате "ПОМ" содержатся нежелательные для организма животных дополнительные компоненты, как метиллол-мочевина до 18% и мочевина до 12%, что при введении животным может вызывать нежелательные осложнения. Кроме этого, препарат получается в виде расслаивающейся суспензии, которую перед введением животным требуется подогревать и встряхивать, что усложняет процесс применения такого препарата.

Известен также способ получения и применения тканевого препарата биостимульгин, который готовят из последов, взятых от здоровых коров. Послед помещают в холодильник на 6-7 дней. Затем ткань пропускают через мясорубку, взвешивают и заливают физиологическим раствором из расчета 5 литров на 1 кг фарша. Полученную массу тщательно перемешивают и помещают в холодильник для экстрагирования. Через сутки массу процеживают, фильтрат кипятят 9-10 минут. Остывшую взвесь центрифугируют в течение 30 минут. Надосадочную жидкость отделяют, расфасовывают и стерилизуют (см. Справочник. Ветеринарные препараты. - М.: Колос, 1981. - С. 404).

Тканевый препарат биостимульгин, полученный по такому способу, применяют при эндометритах, вагинитах, сальпингитах, при задержании последа, для стимулирования стадии возбуждения полового цикла у коров, телок и свиноматок, не приходящих в охоту. Однократная доза препарата 30 мл.

Недостатками этого способа получения биостимульгина является длительность процесса и то, что ткань последа с плацентой при переработке подвергается механическому измельчению на мясорубке, при котором сырье контактирует с металлом и может окисляться, вследствии чего возможно снижение активности препарата и кроме того, технология приготовления сложная, громоздкая, имеет много операций и связана с большим отходом сырья, а при применении такого биостимульгина рекомендуется использовать высокие дозы препарата (30 мл.).

Задачей изобретения является разработка способа получения тканевого препарата - биостимулятора типа "Биостимульгин" из плаценты коров, при котором бы не использовались дополнительные химические компоненты, нежелательные для организма животных, а препарат получался бы в виде состава, легко вводимого животным, причем технология получения биостимулятора должна исключать механическое измельчение сырья на мясорубке и его контакт с металлами, при этом технология должна иметь минимум операций и осуществляться при минимальных затратах труда и времени, а для осуществления способа использовались бы выпускаемые промышленностью аппараты и техника, причем качество и эффективность действия нового препарата не уступали бы существующим тканевым препаратам - биостимуляторам из плаценты коров.

Задача решается тем, что послед, взятый от коровы после охлаждения и выдержки в холодильнике, помещают в специальную посуду из радиопрозрачного материала и для отделения жидкой составляющей от тканей плаценты без механического травмирования плаценты, обрабатывают микроволновым излучением частотой (2450 ± 50) МГц, применяемой в бытовых СВЧ-печах, при нагреве сырья не выше 60^oC, а жидкость, выделившуюся в процессе СВЧ-обработки сырья, отделяют от тканей плаценты самотеком в количестве от 30 до 60% от исходной массы сырья, смешивают с разбавляющим раствором и используют для приготовления биостимулятора.

Способ осуществляется следующим образом в хозяйствах, благополучных по заболеваниям, от здоровой коровы берут, отделившийся в первые 4-6 часов после отела послед, не имеющий патологических изменений ткани. Послед разделяют на транспортабельные части, погружают в специально подготовленную стеклянную посуду, плотно закрывают и обертывают пергаментной бумагой и помещают в холодильную камеру. Выдерживают от 4 до 7 суток при температуре 2-4^oC, после чего направляют на переработку по предлагаемому способу.

Охлажденную и выдержанную плаценту достают из емкости, проводят визуальный осмотр и помещают в специальную посуду из радиопрозрачного материала с перфорированным дном. Плаценту укладывают ровным слоем, закрывают стеклянной крышкой и емкость ставят на устройство для сбора жидкости. Собранную таким образом посуду помещают в рабочую камеру микроволновой печи, работающей на частоте СВЧ излучения (2450 ± 50) МГц. На пульте управления микроволновой печи набирается программа СВЧ-обработки материала и СВЧ печь включают в работу. Под воздействием микроволнового излучения частотой 2450 ± 50 МГц сырье с плацентой равномерно прогревается и из него выделяется жидкая составляющая, которая самотеком через перфорированное дно посуды стекает в нижнюю емкость для сбора жидкости. После окончания цикла СВЧ-обработки микроволновая печь отключается, посуду вынимают из рабочей камеры и скопившуюся в нижней емкости жидкую составляющую сливают в стерильную мерную посуду. Сырье перемешивают, замеряют температуру обрабатываемой массы, чтобы не перегреть, не допустить коагуляции белков. Посуду снова помещают в рабочую камеру СВЧ-печи и цикл СВЧ-обработки повторяют. Количество циклов СВЧ-обработки сырья с плацентой зависит от величины исходной массы и качества сырья последа. СВЧ-обработку заканчивают, когда после очередного цикла обработки объем слитой жидкой фазу будет менее 50 миллилитров, а общий объем полученной жидкости составит от 30 до 60% от исходной массы сырья. Оставшуюся после СВЧ-обработки обезвоженную массу сырья с плацентой используют отдельно от жидкой фазы. Жидкую фазу, слитую в процессе СВЧ-обработки, охлаждают до комнатной температуры и смешивают с разбавляющей средой в виде физраствора в соотношении от 1:4 до 1:5 и далее обрабатывают центрифугированием, фильтруют и контролируют аналогично технологии приготовления тканевого препарата "Биостимульгин" по общепринятой методике. За счет того, что отделение жидкой фазы от сырья с плацентой производят без механического измельчения тканей и не производят дополнительного экстрагирования смеси в холодильнике, время получения препарата сокращается практически на сутки, а сам препарат получают с меньшим числом операций и более однородного состава, который при хранении не образует плотного осадка, что положительно влияет на физические свойства биостимулятора и облегчает введение препарата животным, а по контрольным показателям эффективности препарат, полученный по предлагаемому способу, не уступает биостимульгину, полученному до общепринятой в настоящее время технологии (см. "Биостимульгин". Технические условия ТУ 10-07-032-88 взамен ТУ 46-12-691-79). Лечебный препарат, изготовленный из плаценты коров по предлагаемому способу с применением СВЧ отделения жидкости, условно назван "Биостимульгин-С", или СВЧ обработанный.

Пример 1. Взятый от здоровой коровы послед общей массой порядка 5 кг, разделили на части и разложили по подготовленным стеклянным банкам емкостью по 3 литра. Банки плотно закрыли и обернули пергаментом и поместили в холодильную камеру с температурой 4^oC. После выдержки в течение 5-ти суток банки с сырьем доставили в лабораторию на переработку.

Часть последа с плацентой массой 2 кг (из одной емкости 3 л) использовали для получения биостимулятора по предлагаемому способу. Оставшаяся часть последа с плацентой в виде контрольного варианта переработана до существующей общепринятой технологии. Послед с плацентой массой 2 кг, после визуального осмотра и контроля, поместили в перфорированную корзину объемом 2,5 литра из термостойкой пищевой пластмассы пароварки французской фирмы "Puroflam". Корзину с сырьем закрыли стеклянной крышкой и установили на фарфоровую кастрюлю объемом 2,5 л для сбора жидкости. Сборную конструкцию с загруженной плацентой поместили в рабочую камеру лабораторной микроволновой печи, работающей на частоте (2450 ± 50) МГц. Объем рабочей камеры СВЧ печи 32 литра. Активная мощность СВЧ излучения 900 ватт. Потребляемая мощность СВЧ печи 1400 ватт. Для осуществления предлагаемого способа получения биостимулятора из плаценты коров в данном примере провели три цикла СВЧ обработки по 20 минут. Общий объем выделившейся жидкой фазы составил 1100 миллилитров или 55% от массы взятого исходного сырья. Температура сырья по циклам поддерживалась в пределах 45-58^oC. К слитой жидкой фазе после охлаждения до комнатной температуры добавили 4200 мл 0,9% раствора натрия хлорида (физраствора) для получения соотношения 1: 4. Так как после объединения слитых фракций и взятия образца для контроля и анализов, осталось 1050 мл жидкости. Довели pH смеси 30% NaOH (4 мл) от 6,85 до 8,45 (норма по ТУ 7,5-9.0) и прокипятили в течение 10 минут. Экстракт охладили до комнатной температуры в проточной воде, отцентрифугировали при 4,5 тыс. об/мин 0,5 часа. Центрифугат с pH 8,55 профильтровали и розлили в флаконы по 200 мл, предварительно подготовленные и простерилизованные. Флаконы укупорили резиновыми пробками и закатали алюминиевыми колпачками.

Полученный препарат автоклавировали при 1,5 атм 1 час.

Выход препарата 4570 мл, pH после автоклавирования 8,05. Препарат стерильный.

Контроль качества полученного по предлагаемому способу препарата и определение его биологической активности параллельно с препаратом, полученным по существующему способу в полном объеме и в соответствии с ТУ 10-07-032-88 "Биостимульгин. Технические условия."
По заключению лаборатории тканевых препаратов НИВС (научно-исследовательской ветеринарной станции) Свердловской области "Биостимульгин-С" соответствует контрольным параметрам по ТУ 10-07-032- 88, а биологическая активность препарата на 15% выше обычного препарата "Биостимульгин".

Опытная партия препарата "Биостимульгин-С" направлена в хозяйства области для производственной проверки на фермах КРС.

Пример 2. Послед общей массой 4,8 кг после выдержки в холодильнике обработали в СВЧ печи аналогично примеру 1. Обработку провели в три приема порциями плаценты в 1,6 кг. Температура прогрева в СВЧ печи составляла 45-50^oC. Общий выход жидкой составляющей составил 2,4 килограмма (50%). Выход препарата "Биостимульгин-С" составил порядка 9,6 кг. Расфасовка в стеклянные флаконы по 200 мл, закрытые резиновыми пробками и закатанные алюминиевыми колпачками. Общий вид препарата - опалесцирущая жидкость светло-коричневого цвета с молочным оттенком. При хранении наблюдается выпадение небольшого осадка, легко разбивающегося при встряхивании. РН-определенная на потенциометре РН-340 составляет после автоклавирования 8,05. Срок годности "Биостимульгина-С" аналогично препарату "Биостимульгин" принят 6 месяцев со дня изготовления при условии хранения в затемненном месте при T = 4-10^oC.

Представленные примеры показывают техническую осуществимость предложенного способа получения биостимулятора из плаценты коров при использовании существующих микроволновых печей и посуды, при этом сокращается количество технологических операций, общее время получения препарата, а качество препарата соответствует техническим условиям.

Таким образом, принимая во внимание вышеизложенные результаты, предложенный способ может рассматриваться как альтернативный существующему способ получения тканевого препарата из плаценты коров "Биостимульгин".

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к получению тканевых препаратов из натурального животного сырья. Жидкую составляющую из плаценты отделяют путем нагрева в микроволновой печи в специальной посуде с перфорированным дном, при этом жидкая составляющая отделяется самотеком, а нагрев производят не выше 60^oС, причем в качестве разбавляющей среды для жидкой фазы используют 0,9%-ный раствор натрия хлорида. Способ позволяет сократить количество технологических операций и общее время получения препарата при сохранении его качества. 2 з.п.ф-лы.

1. Способ получения биостимулятора из плаценты коров, включающий отбор последа от здорового животного, охлаждение и выдержку, отделение жидкой составляющей, смешивание жидкой составляющей с разбавляющей средой, перемешивание, центрифугирование, отделение надосадочной жидкости, расфасовку и стерилизацию, отличающийся тем, что отделение жидкой составляющей из плаценты производят путем обработки микроволновым излучением с частотой (2450 ± 50) МГц при нагреве сырья не выше 60^oC, причем жидкую составляющую отделяют самотеком. 2. Способ получения биостимулятора из плаценты коров по п.1, отличающийся тем, что в процессе микроволнового прогрева сырья жидкую фазу отделяют в количестве 30 - 60% по массе от исходного сырья, причем микроволновый прогрев производят циклами по 15 - 20 мин, а выделившуюся за цикл жидкую составляющую сливают, объединяют и используют все слитые фракции. 3. Способ получения биостимулятора из плаценты коров по пп.1 и 2, отличающийся тем, что в качестве разбавляющей среды для отделенной жидкой фазы из плаценты используют 0,9%-ный раствор натрия хлорида при соотношении с жидкой фазой 1 : 4 - 1 : 5 по массе.