СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЭНДОМЕТРИТОВ У КОРОВ Российский патент 2008 года по МПК A61K35/50 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, точнее к технологиям получения и применения препаратов-биостимуляторов из сырья, взятого от здоровых животных.

Известен "Способ получения биостимулятора "Пом" из плаценты коров" (См. а.с. №1730762, А61К 35/12. Опубл. 20.07.96. Бюл. №20). По этому способу после охлаждения и выдержки плаценту, взятую после рождения теленка, измельчают на мясорубке и гомогенизируют, после гомогенизации фарш из ткани плаценты смешивают с мочевиной в соотношении 0,4-0,5:1,0 и добавляют формалин, а экстракцию осуществляют путем нагревания полученной смеси до 100°С, а затем добавляют дистиллированную воду, отстаивают, контролируют и фасуют.

Биостимулятор "ПОМ" из плаценты коров применяют для профилактики задержаний последов, субинволюции матки и лечения эндометритов у коров. Однократная доза биостимулятора «ПОМ» - 20 мл, препарат инъецируют 3-5 раз через 48 часов.

Недостатками такого способа получения биостимулятора из плаценты и способа лечения является то, что в препарате "ПОМ" содержатся нежелательные для организма животных компоненты - как метиллол-мочевина до 18% и мочевина до 12%, которые могут вызвать осложнения у животных. Кроме этого, препарат получают в виде расслаивающейся суспензии, которую перед введением животным требуется подогревать и встряхивать, что усложняет процесс применения такого препарата.

Известен также способ получения и применения биостимульгина, который готовят из последов, взятых от здоровых коров после рождения теленка. Послед помещают в холодильник на 6-7 дней, затем пропускают через мясорубку и заливают физиологическим раствором из расчета 5 литров на 1 кг фарша. Полученную массу перемешивают и помещают в холодильник для экстрагирования. Через сутки массу прицеживают, фильтрат кипятят 9-10 минут. Остывшую взвесь центрифугируют в течение 30 минут. Надосадочную жидкость отделяют, расфасовывают и стерилизуют (см. Справочник. Ветеринарные препараты. - М.: Колос, 1981. - С.404).

Биостимульгин, полученный по такому способу, применяют при эндометритах, вагинитах, сальпингитах, при задержании последа, для стимулирования стадии возбуждения полового цикла у коров, телок и свиноматок, не приходящих в охоту. Однократная доза применения препарата 30 мл.

Недостатками этого способа получения биостимульгина является длительность процесса и то, что ткань последа с плацентой при переработке подвергается механическому измельчению на мясорубке, при этом сырье контактирует с металлом и может окисляться, вследствие чего возможно снижение активности препарата. Кроме того, технология приготовления включает много операций и связана с большим отходом сырья, а при применении такого биостимульгина рекомендуется использовать высокие дозы препарата (30 мл.).

Известен также «Способ получения биостимулятора из плаценты коров» (см. Патент РФ №2138273, А61К 35/50. Опубл. 27.09.99. Бюл. №27), при котором отделение жидкой составляющей из плаценты производят путем обработки микроволновым излучением с частотой (2450±50) МГц при нагреве сырья не выше 60°С циклами по 15-20 мин. Жидкая составляющая отделяется самотеком, выделяющуюся за цикл жидкую составляющую сливают, объединяют и используют все слитые фракции. В качестве разбавляющей среды для отделенной жидкой фазы из плаценты используют 0,9%-ный раствор натрия хлорида при соотношении с жидкой фазой 1:4-1:5 по массе. Препарат, названный «Биостимульгин-СВЧ», используют для профилактики задержания последа и лечения послеродовой патологии у коров в дозе 20 мл за 10-15 дней до отела и вторично в течение 12 часов после отела (см. Патент РФ №2178705, А61К 35/50. Опубл. 27.01.2002. Бюл. №3).

При высоком качестве получаемого по СВЧ технологии «Биостимульгина-СВЧ» и хороших результатах при его применении ограничением производства биостимуляторов из плаценты коров является некоторая дефицитность сырья и сложность сбора последов при отелах коров, проходящих часто в ночное время. Послед считают вторичным продуктом отела и в процессе его подбора возможно загрязнение в условиях родильного отделения фермы, что затрудняет дальнейшую переработку и может снижать качество сырья и выход препарата. Кроме того, первичная обработка в условиях фермы и доставка последа для переработки должна производиться оперативно, что в условиях сельской местности не всегда возможно, а это сдерживает производство ценных и нужных в животноводстве биостимулирующих препаратов из плаценты коров.

Задачей изобретения является расширение ассортимента и упрощение сбора животного сырья для получения биостимулирующих препаратов из плаценты и разработка способов лечения животных с использованием биостимуляторов из такого сырья. Это позволит расширить номенклатуру биостимулирующих препаратов, удобных в производстве и применении, с высокой эффективностью в действии, при упрощении организации процесса сбора и первичной обработки сырья с гарантированным качеством и стабильным составом.

Задача решается тем, что в качестве сырья для получения биостимулирующего препарата используют плаценту, взятую в процессе убоя и разделки на мясокомбинате коров со сроком беременности 4-5 месяцев. Плаценту и околоплодные оболочки охлаждают и направляют на переработку по СВЧ технологии, используя в качестве разбавляющей среды 0,9% раствор натрия хлорида. Применяют полученный биостимулирующий препарат, в частности, для эффективного лечения эндометритов у коров.

Новизной предложенного изобретения является то, что в качестве сырья берется не самопроизвольно отделившийся во время родов послед, а плацента с околоплодными оболочками, взятая от убитых на мясокомбинате коров со сроком беременности 4-5 месяцев. В это время плацента полностью развита и сформирована как орган, синтезирующий биологически активные вещества. Плаценту берут от прошедших ветеринарный контроль животных в условиях промышленного предприятия (мясокомбината) в стабильных условиях по отработанной технологии, что обеспечивает качество отбора сырья и первичную его обработку, увеличивает выход биостимулирующего препарата, используемого в животноводстве при высоком его качестве и эффективности.

По технологии получения нового биостимулятора, условно названного «Пребиостим», препарат готовили в лабораторных условиях на базе производственного отдела Свердловской областной ветеринарной лаборатории. За основу приготовления препарата «Пребиостим» взята технология изготовления «Биостимульгина-СВЧ» (патент на изобретение РФ №2138273 «Способ получения биостимулятора из плаценты коров»).

Новым оригинальным сырьем для изготовления биостимулятора «Пребиостим» служат плодные оболочки 4-5-месячных плодов крупного рогатого скота, не имеющие патологических изменений тканей, полученные от здоровых, прошедших ветеринарный контроль животных на Екатеринбургском мясокомбинате.

В процессе убоя и переработки коров со сроком беременности 4-5 месяцев оболочки отделяли от матки, удаляли плод, погружали в чистые стеклянные банки, плотно закрывали и транспортировали в лабораторию для переработки. После выдержки при температуре 2-4°С в течение 2 суток оболочки разрезали на части массой 20-50 г и подвергали обработке микроволновым излучением. Для переработки использовали бытовую СВЧ-печь (LG). Активная мощность в рабочей камере 850 Вт. Печь работает на частоте 2450+50 МГц. Микроволновую обработку (прогрев) производили циклами по 15-20 мин, выделившуюся за цикл жидкую фракцию сливали, объединяли и использовали все слитые фракции. Жидкая составляющая отделялась самотеком, для сбора использовали емкость пароварки с перфорированным дном, которая изготовлена из материала, пропускающего микроволновое излучение. Объем загружаемых тканей плаценты для максимального отделения жидкости установлен опытным путем - 1,0-1,5 кг.

Объединенные слитые фракции, представляющие суспензию светло-желто-коричневого цвета, разбавляли 0,9%-ным раствором хлорида натрия в соотношении 1:4-1:5 и перемешивали. Полученный раствор доводили 30%-ным раствором гидроокиси натрия до рН 7,75-8,4 и кипятили в течение 10 минут (с момента закипания). После кипячения раствор отфильтровывали через ватно-марлевый фильтр. Фильтрат подлежал расфасовке.

Расфасовывали биостимулирующий препарат «Пребиостим» по 200 мл в стеклянные флаконы, закрывали резиновыми пробками и закатывали алюминиевыми колпачками. Флаконы с биостимулятором автоклавировали при 1,5 атм в течение одного часа.

Выход опытных партий биостимулятора приведен в таблице 1.

Таблица 1Технологический выход опытных партий биостимулятора «Пребиостим»ПоказательЗначение показателей серии123Масса исходного сырья, г1,81,13,2Выход жидкой фазы, %61,063,359,4Выход препарата, кг6,04,210,4

Всего по трем экспериментальным сериям выход жидкой фазы составил 61,2% от исходного сырья, это в 1,23 раза выше, чем в технологическом цикле получения препарата «Биостимульгин-СВЧ», где выход жидкой фракции в среднем равен 49,6%. Общее количество опытных партий биостимулятора «Пребиостим», наработанного для лабораторных исследований и клинического изучения, составило 20,6 л.

От каждой серии препарата отбирали 10 флаконов, из которых пять использовали для контрольной проверки, а пять хранили в течение срока годности препарата плюс два месяца.

Полученные результаты по качеству биостимулятора представлены в таблице 2. По всем изученным параметрам новый биостимулирующий препарат соответствует требованиям и полностью сохранял свои свойства при контроле через 6 месяцев. При визуальной оценке по сравнению с препаратом «Биостимульгин-СВЧ», который представляет собой опалесцирующую жидкость светло-коричневого цвета, «Пребиостим» имеет соломенно-желтый цвет и более легкую опалесценцию.

Таблица 2Характеристика экспериментальных серий препарата «Пребиостим»ПоказательТребования проекта ТУЗначение показателей серии123Внешний видЖидкость соломенно-желтого цветасоответствуетсоответствуетсоответствуетСтерильностьСтерильныйсоответствуетсоответствуетсоответствуетрН, ед. рН7,5-8,48,07,98,1БезвредностьБезвредныйсоответствуетсоответствуетсоответствуетАктивность, %Более 2038,8346,4648,36

Результаты изучения биологической активности экспериментальных серий биостимулятора «Пребиостим» приведены в таблице 3.

Таблица 3Масса репродуктивных органов мышейСерия препаратаКонтрольная группа n=7Опытная группа n=7% к контролюСерия 10,479±0,0370,665±0,061^**138,83Серия 20,579±0,0550,848±0,081^**146,46Серия 30,426±0,0420,632±0,067^**148,36^** - разность с контролем достоверна, Р<0,01

Полученные результаты показывают, что во всех группах мышей отмечено достоверное по сравнению с контрольными группами повышение массы половых органов. Увеличение массы половых органов мышей обусловлено содержанием стероидных гормонов в биостимуляторе. Для биостимулятора «Пребиостим» нормативным показателем принято повышение массы половых органов мышей не менее чем на 20% по сравнению с контрольной группой, при таких показателях серию препарата «Пребиостим» считали активной. В экспериментальных сериях препарата биологическая активность составляла 38,83-48,36%, что в целом соответствует активности препарата «Биостимульгин-СВЧ».

На следующем этапе исследований было изучено влияние биостимулятора «Пребиостим» на антителообразование, повышенную чувствительность замедленного типа и ряд показателей состояния полисегментарных лейкоцитов.

При изучении влияния «Пребиостима» на формирование первичного гуморального иммунного ответа у мышей-самцов к эритроцитам барана (ЭБ) предварительно было установлено, что подкожное введение 0,3 мл на 20 г массы мышей вызывает стойкую, выраженную индукцию монооксигеназной системы (МОС), статистически значимую уже через 18 часов после первого введения. Индукция МОС, вызываемая биостимулятором «Пребиостим», сохраняется в течение 8 суток (с максимальной активацией ферментов МОС на 24 часа). Эта схема введения индуктора и была использована для изучения его влияния на первичный гуморальный иммунный ответ к ЭБ, который оценивали по числу антителообразующих клеток (АОК) в селезенке.

Полученные результаты показывают, что введение «Пребиостима» приводило к статистически достоверному снижению количества антителообразующих клеток в пересчете на 10 ядросодержащих клеток селезенки.

Общее количество АОК во всей селезенке несущественно уменьшалось. Препарат не влияет на число спленоцитов в селезенке, что свидетельствует об отсутствии у него цитотоксического действия (табл.4).

Таблица 4Влияние «Пребиостима» на количество спленоцитов и АОК в селезенке мышейПоказательКонтрольная группа n=7 M±mОпытная группа n=8 M±mpСпленоциты, 10⁸1,51±0,161,64±0,21<0,1Антителообразующие клетки87306±930163392±9215<0,1

Таким образом, изучаемый биостимулятор умеренно супрессирует индукцию первичного гуморального иммунного ответа у мышей на эритроциты барана.

В качестве объекта фагоцитоза выбрали полистироловые частицы, поглощение которых не зависит от сывороточных опсонинов. Они же были использованы (наряду с БЦЖ) для индукции НОТ-теста, что позволило проанализировать в условиях эксперимента, сопровождаются ли изменения поглотительной активности синхронными сдвигами наработки антиоксидантов в индуцированном НСТ-тесте, отражающем в отличие от спонтанного в основном функциональные резервы клеток.

«Пребиостим» вводили подкожно, двукратно (0; +1 день) в дозе 15 мл/кг массы мышей, которая вызывает выраженную индукцию МОС. Через 24 часа после последнего введения оценивали функциональное состояние фагоцитов по способности поглощать стандартные микросферы латекса и интенсивности кислородозависимого метаболизма по тесту восстановления нитротетразолиевого синего (НСТ-тест).

Полученные результаты показывают, что влияние «Пребиостима» на нейтрофилы оказалось сложным. Суммарная поглотительная активность нейтрофильных гранулоцитов (фагоцитарный индекс), как и количество фагоцитирующих клеток (фагоцитарное число), существенно увеличивались, показатель же интенсивности фагоцитоза оставался на уровне контрольных значений (табл.5).

Таблица 5Влияние «Пребиостима» на показатели поглотительной активности нейтрофилов периферической кровиПоказательКонтрольная группа n=7 M±mОпытная группа n=8 M±mРФагоцитарное число5,14±0,688,88±1,47<0,05Показатель интенсивности фагоцитоза1,87±0,192,05±0,14<0,1

Параллельно повышению показателей фагоцитоза росла и напряженность оксидантного метаболизма как в условиях индукции микросферами латекса, так и при использовании в качестве стимулятора «респираторного взрыва» БЦЖ.

Полученные данные свидетельствуют, что введение «Пребиостима» достоверно снижало показатели спонтанного НСТ-теста.

Таким образом, установлено также, что биостимулятор «Пребиостим» вызывает отчетливую активацию поглотительной функции нейтрофильных гранулоцитов и стимуляцию их индуцированного оксидантного метаболизма и может рассматриваться как новый высокоэффективный биостимулятор для животных.

Для изучения сравнительной эффективности биостимулятора из плаценты коров с беременностью 4-5 месяцев «Пребиостим» относительно «Биостимульгина-СВЧ» в комплексных схемах лечения коров с послеродовыми эндометритами были выполнены научно-производственные опыты в агрофирме «Уральская».

Животные в опыт включались по мере поступления на лечение, преимущественно на 7-10-й день послеродового периода. Были сформированы две опытные и контрольная группы по 18 коров-аналогов с острым гнойно-катаральным эндометритом. Базисная комплексная терапия включала введение в полость матки противомикробного препарата «Эндометрол», внутримышечное введение тетрамага, инъекции окситоцина после предварительного создания эстрогенного фона. Дополнительно коровам первой опытной группы в качестве иммуномодулирующего-биостимулирующего средства вводили «Пребиостим»; животным второй опытной группы - «Биостимульгин-СВЧ»; контрольным - 7%-ный раствор ихтиола на 20%-ном растворе глюкозы.

Установлено, что при применении биостимулятора «Пребиостим» срок лечения животных сокращается на 6,81 дня, а «Биостимульгина-СВЧ» на 6,41 дня. Эффективность лечения, под которой понималось выздоровление с полном восстановлением воспроизводительной способности, в опытных группах была выше на 5,5%.

Это подтверждалось и при изучении динамики клинических признаков: к 11-12 дню лечения у коров опытных групп прекращалось выделение экссудата, при ректальном исследовании выявлялось, что матка находится в тазовой полости, хорошо сокращается при пальпации, имеет упругоэластичную консистенцию. В то же время у коров контрольной группы динамика указанных клинических признаков была замедлена, в 44,4% случаев контрольным животным назначался повторный курс лечения.

Установлено, что применение для лечения коров с послеродовыми эндометритами биостимулятора из плаценты «Пребиостим» положительно отражается в последующем на показателях их репродуктивной функции, при этом достоверно сокращается главный показатель регулярности воспроизводства - период от родов до оплодотворения.

Применение иммунокорригирующей терапии с введением биостимулятора «Пребиостим» позволяет сократить срок лечения коров с послеродовыми гнойно-катаральными эндометритами на 1,9-6,8 дня, повысить эффективность лечения на 5.6-8.0% по сравнению с контрольными животными и положительно влияет на показатели репродуктивной функции.

Для подтверждения эффективности лечения в опыте проводили исследование эстральной слизи с использованием модифицированной пробы Уайтсайда. Полученные данные показывают, что в опытных группах на 6,7-13,7% было меньше животных с положительной пробой на скрытый эндометрит.

Анализ показателей репродуктивной функции показывает, что у коров первой опытной группы, которым дополнительно к базисной схеме применяли биостимулятор «Пребиостим», период от родов до оплодотворения был короче на 12, 24 дня, а у животных второй опытной группы, в комплексную схему терапии которых наряду с «Пребиостимом» входил «Ветримокеин», этот показатель был короче на 18, 32 дня по сравнению с контролем.

Дополнительно была проведена клиническая оценка использования препаратов биостимуляторов из плаценты для лечения гинекологических заболеваний у коров. Для этого была изучена сравнительная эффективность препаратов «Пребиостим» и «Биостимульгин-СВЧ» в комплексных схемах лечения коров с хроническими эндометритами.

Базисная комплексная терапия включала внутриматочное введение противомикробного препарата «Эндометрол», внутримышечное двукратное введение раствора синэстрола и четырехкратное - окситоцина, две инъекции тетрамага, кроме этого коровам первой опытной группы подкожно вводили «Пребиостим» в дозе 4 мл на 100 кг массы, первые две инъекции с интервалом 24 часа, последующие две - через 72, животным второй опытной группы - «Биостимульгин-СВЧ» по схеме; контрольным - 7%-ный раствор ихтиола на 20%-ном растворе глюкозы.

Установлено, что срок лечения коров в опытных группах был короче на 4,2-7,0 дней по сравнению с контрольными животными. Эффективность лечения была выше в первой опытной группе на 11, 11%, во второй опытной группе - на 5,57% по сравнению с контрольной. Лучшие показатели воспроизводительной функции отмечены также у коров, дополнительно получавших «Пребиостим».

На основании проведенных исследований сделано заключение, что дополнительное введение препаратов-биостимуляторов из плаценты коров в комплексные схемы лечения хронических эндометритов высокоэффективно. Сравнительный анализ показывает, что при данной нозологической форме эффективнее всего применение биостимулятора «Пребиостим» по указанной схеме.

Анализ результатов иммунологического исследования крови коров показывает, что при использовании неспецифической стимулирующей терапии с использованием биостимулятора «Пребиостим» происходит активизация защитно-приспособительных реакций организма: повышается абсолютное количество лимфоцитов, усиливаются фагоцитоз и напряженность оксидантного метаболизма фагоцитов.

Главными показателями эффективности лечения коров в этом опыте являются восстановление тонуса, размеров и топографии матки, половой цикличности. К концу курса лечения улучшения клинических параметров отмечено у всех животных опытных групп.

Изучение динамики восстановления функции яичников у коров опытных и контрольной групп показало, что к сороковому дню после начала лечения в опытных группах возобновились половые циклы у всех животных, в контрольной группе - только у 38,9%.

При оценке показателей воспроизводительной функции коров установлено, что период от начала лечения до первого осеменения в первой и второй опытных группах был ниже, чем в контрольной на 11,8 и 18,9 дня соответственно.

Производственная оценка разработанной технологии получения биостимулятора «Пребиостим» из плодных оболочек 4-5-месячных плодов крупного рогатого скота и эффективности его применения свидетельствуют о хорошей воспроизводимости технологических процессов и параметров получения препарата по физико-химическим и биологическим показателям.

В результате экспериментального исследования иммунотропных свойств биостимулятора «Пребиостим» установлено, что он не обладает цитотоксическим действием, умеренно супрессирует индукцию первичного гуморального ответа, не влияет на экспрессию повышенной чувствительности замедленного типа, вызывает отчетливую активацию фагоцитарной функции нейтрофилов и стимуляцию их индуцированного оксидантного метаболизма.

Включение биостимулятора «Пребиостим» в комплексные схемы лечения острых заболеваний матки повышает их эффективность. Применение иммунокорригирующей терапии позволяет сократить срок лечения коров с послеродовыми гнойно-катаральными эндометритами на 1,9-6,8 дня, повысить эффективность лечения на 5,6-8,0% по сравнению с контрольными животными и положительно влияет на показатели репродуктивной функции.

Использование биостимулятора «Пребиостим» в комплексной терапии гинекологических заболеваний коров является эффективным, об этом свидетельствует сокращение срока лечения коров с хроническими эндометритами и сочетанными функциональными расстройствами половых органов на 4,2-7,0 дней, повышение эффективности лечения на 5,6-8,0% по сравнению с контрольными животными, что положительно сказывается на их воспроизводительной функции.

Применение биостимулятора из плаценты коров со сроком беременности 4-5 месяцев в системе профилактики послеродовых заболеваний у коров обеспечивает снижение уровня акушерской патологии: задержания последа - на 6,25-12,50%, субинволюции матки - на 6,50-18,75%. При этом сроки завершения инволюции половых органов сокращаются на 3,3-7,1 дня, период от родов до оплодотворения на 4,6-17,8 дня.

Предлагается использовать биостимулятор «Пребиостим» в комплексных схемах лечения акушерских и гинекологических заболеваний в дозе 4 мл на 100 кг массы животного (первые две инъекции с интервалом 24 часа, последующие до выздоровления - через 72 часа).

Изобретение относится к ветеринарной медицине. Способ включает подкожное введение биостимулятора. При этом используют биостимулятор, полученный из плаценты забитых коров со сроком беременности 4-5 месяцев. Биостимулятор вводят в дозе 4 мл на 100 кг живой массы коровы. Курс лечения включает 4-6 инъекций. Две инъекции осуществляют с начала лечения с интервалом 24 часа. Последующие - через 72 часа. Биостимулятор вводят в комплексных базовых схемах лечения гинекологических заболеваний коров. Способ позволяет повысить эффективность лечения заболеваний матки коров. 5 табл.

Способ лечения эндометритов у коров, включающий подкожное введение биостимулятора, отличающийся тем, что используют биостимулятор, полученный из плаценты забитых коров со сроком беременности 4-5 месяцев, при этом биостимулятор вводят в дозе 4 мл на 100 кг живой массы коровы, причем курс лечения включает 4-6 инъекций, две из которых осуществляют с начала лечения с интервалом 24 ч, а последующие через 72 ч, дополнительно в комплексных базовых схемах лечения гинекологических заболеваний коров.