СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГЕНОТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА ПРИ ОГНЕСТРЕЛЬНЫХ РАНЕНИЯХ Российский патент 2000 года по МПК A61B5/117 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии.

Известно, что стандартными цитогенетическими методами обнаружены хромосомные повреждения на уровне сестринских хроматидных обменов при действии на организм радиационной энергии и энергии химических реакций (Ю. Лазутка "Сестринские хроматидные обмены: теоретические и практические аспекты", Вильнюс 1989 г, 173 стр).

В настоящее время общепризнанными для огнестрельной раны являются следующие характерные признаки: 1) первичный раневой канал; 2) зона первичного некроза; 3) зона молекулярного сотрясения или вторичного некроза, в основе формирования которой лежит свободнорадикальный процесс (Н.М. Эмануэль с соавт. 1985 г., открытие N 005), как следствие трансформации энергии ранящего снаряда.

С целью изучения возможности энергии ранящего снаряда трансформироваться в энергию радикалов поражения (по терминологии Н.М. Эмануэля с соавт., 1985, - "свободные радикалы") и вызывать мутагенное последствие изучали хромосомные аберрации типа хроматидных мостов(ХМ) у животных с огнестрельными ранениями.

Эксперимент проводился на нелинейных крысах-самцах(680 крыс) массой около 250 г. Опытную группу составили 480 животных, которым наносилось мягкотканое огнестрельное ранение в область средней трети правого бедра без повреждения сосудисто-нервного пучка. Эти животные были разделены на четыре группы по 120 крыс в каждой в зависимости от баллистических характеристик ранящего снаряда:
1 г - калибр 5,6 мм со скоростью 190 м/с(ТОЗ)
2 г - калибр 5,6 мм со скоростью 235 м/с(ТОЗ)
3 г - калибр 5,45 мм со скоростью 935 м/к(АК-74)
4 г - калибр 5,56 мм со скоростью 977 м/с(М-16 А)
Огнестрельное ранение наносили с расстояния 7 м из оружия, которое устанавливали в специальных фиксаторах, расположенных на трассе в четком соответствии с лазерным прицелом на мишени.

Контрольную группу составили 200 животных, из которых 120-и наносили колото-рваное ранение в области средней трети правого бедра. Этой группе крыс сквозное ранение производили наконечником пули калибра 5,6 мм в целях исключения скоростного фактора, сопутствующего огнестрельным поражениям. 80 крыс контрольной группы оставлены интактными.

Всем животным опытной и контрольной групп за 30 мин до нанесения ранения проводили внутримышечный калипсоловый наркоз с последующей фиксацией животных на специальных столиках. Следует отметить, что интактным животным в те же сроки давали аналогичный наркоз также с последующей фиксацией, т.е., кроме ранения, ведение этих животных было идентичным с другими группами.

Животным как опытной, так и контрольной групп, производили частичную гепатэктомию с целью побудить к митотическому делению неделящиеся в норме клетки печени. В ходе деления изучали хроматидные перестройки в ана-телофазе в виде ХМ. В основу положен метод, разработанный Н.П.Дубининым с соавторами (Исследование мутагенного последствия на синхронной популяции соматических клеток. Генетика, т. IV, N6, 1968). Забор материала проводили через 28 час после гепатэктомии с учетом суточного ритма. Фиксацию препарата производили по Карнуа и окрашивали ацетоуксусным орсеином.

Хромосомные перестройки типа хроматидных мостов(ХМ) наблюдали при огнестрельных ранениях животных (См. таблицу ).

Не останавливаясь на различиях в частоте хромосомных аберраций по времени, прошедшему с момента ранения, обратим внимание на характерные отличия между значениями частот ХМ в контроле и в эксперименте: разница достигает 5-7 кратных величин и не оставляет сомнений в том, что огнестрельная рана индуцирует хромосомные аберрации. То, что таким фактором является именно огнестрельная рана, видно из сравнения с частотой ХМ при колото-рваных ранах. В последних частота ХМ, хотя и систематически, но слабо отличается от контрольной величины. Таким образом, не рана вообще, а именно огнестрельная рана вызывает столь сильные повреждения генома соматических клеток, которые проявляются в 30-40-процентном подъеме уровня ХМ в сравнении с контролем.

Для проверки данных, полученных в эксперименте на животных, было изучено влияние огнестрельных ранений на сестринские хроматидные обмены (СХО) у людей. Для этого исследовали культуру крови лейкоцитов у больных с огнестрельными ранениями различной локализации.

Наблюдения как ХМ, так и СХО, относятся к способам прямого определения генетических изменений в соматических клетках (Ю. Лазутка 1989).

Подсчитывали процент СХО в клетках культуры крови больных с огнестрельными ранениями (88 человек), из них мужчин 65 человек, женщин 23. Возраст пострадавших от 19 до 45 лет. Из 88 больных у 68 были пулевые ранения, у 22 минно-взрывные, у 4 отрывы сегментов конечностей.

По локализации ранения больные распределялись следующим образом: ранения верхних конечностей - у 24 больных, нижних конечностей - у 45 больных и проникающие ранения брюшной или грудной полости - у 19 больных. У 32 пострадавших имели место огнестрельные переломы.

Исследование культуры крови лейкоцитов больных, не зависимо от локализации повреждения, проводили по общепринятой методике Форда с использованием БУДР. При этом было выявлено, что СХО больных с огнестрельными ранениями, равная 12,29±0,67, статистически достоверно отличается от контрольной, равной 5,7±0,2 (p=0,009).

Таким образом, нами впервые расширен диапазон применявшихся ранее способов диагностики огнестрельных ранений - нарушение хромосомного аппарата соматических клеток у больных с огнестрельными повреждениями. Эти способы применены к новому объекту (пострадавшие от огнестрельных ранений) с результатом неизвестным ранее у пострадавших от огнестрельных повреждений - с новым способом воздействия энергии ранящего снаряда в виде повреждения хромосомных структур в соматических клетках всего организма независимо от локализации ранений.

Способ может быть использован в области медицины, а именно в травматологии и судебно-медицинской экспертизе. Определяют сестринские хроматидные обмены (СХО) в культуре лейкоцитов крови человека стандартными цитогенетическими методами. При СХО, равной 12,29 + 0,67, в сравнении с контрольным, равным 5,7 + 0,2, диагностируют огнестрельные ранения. Способ обеспечивает повышение точности диагностики. 1 табл.

Способ диагностики огнестрельных ранений, отличающийся тем, что определяют сестринские хроматидные обмены (СХО) в культуре лейкоцитов крови человека стандартными цитогенетическими методами и при СХО, равной 12,29±0,67, в сравнении с контрольным, равным 5,7±0,2, диагностируют огнестрельные ранения.