РАНОЗАЖИВЛЯЮЩАЯ ПЛАСТИНА Российский патент 2001 года по МПК A61K35/66 

Изобретение относится к медицине и биотехнологии и может применяться в хирургии в качестве ранозаживляющего материала при лечении инфицированных и обычных ран, ожогов, гнойно-трофических язв, абсцессов в стоматологии.

Известно, что наиболее перспективными средствами для лечения ран, ожогов и язв являются рассасывающие адсорбирующие покрытия, имеющие в своем составе лекарственные средства, позволяющие направленно влиять на течение раневого процесса. В качестве основы раневого покрытия часто используют такой природный полимер, как коллаген [1, 2]. Коллаген выполняет формообразующую основу покрытия раны, он не оказывает раздражающего действия и абсолютно безвреден для организма. Лекарственное средство на его основе удобно для наружного употребления и применяется путем наложения на раневую поверхность. Медленное рассасывание пластины из коллагена обеспечивает пролонгирование действия лекарственного вещества, иммобилизованного на коллагене.

В качестве лекарственных антибактериальных средств для лечения ран используют антибиотики (патент РФ N 2034572, кл. A 61 L 15/31, опубл. 10.05.95), ферменты (патент РФ N 2085217, кл. A 61 L 15/00, опубл. 27.07.97; патент РФ N 2074709, кл. A 61 K 9/06) или противовоспалительные фармакологические субстанции, например облепиховое масло, люцерон (а.с. РФ N 602185, кл. A 61 L 15/01, патент РФ N 2143925, A 61 415/32).

Многочисленность факторов патогенеза ран, язв и абсцессов (особенно инфицированных с вялотекущим процессом заживления), особенности их анатомии предопределяют необходимость применения широкого арсенала лекарственных средств и многоэтапность их лечения. Поэтому обосновано применение комплексных лекарственных средств, включающих лекарственные субстанции, действующие на разные звенья патогенетического процесса. Однако применение многих лекарственных средств, содержащих комбинации лекарственных препаратов, до настоящего времени не всегда дает положительный эффект из-за их несовместимости в одном препарате, что сопровождается побочными реакциями в виде жжения, гиперемии или аллергических проявлений. Все это ограничивает использование известных средств.

Наиболее близким аналогом является средство для лечения ран, содержащее природный краситель-шиконин, обладающий антимикробным действием [3].

Недостатком предложенного средства является ограниченность лечебного воздействия на раневой процесс, обусловленный только его антисептическими свойствами.

Задачей настоящего изобретения является создание средства для лечения ран, ожогов и язв на основе коллагена с биологически активным веществом, обладающим комплексным воздействием на инфицированные раневые поверхности.

Поставленная задача решается тем, что ранозаживляющая пластина содержит коллаген и биологически активное вещество - живую биомассу антагонистически активного штамма Bacillus Subtilis 3Н при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Коллаген - 50-70
Биомасса штамма В. Subtilis 3Н - 30-50
Биомасса штамма В. Subtilis 3Н, входящая в состав ранозаживляющего средства, уже применяется в медицинской практике в качестве основы лечебно-профилактического препарата Бактиспорин (патент РФ N 2067616, кл. С 12 N 1/22). Живые бактериальные клетки штамма В. Subtilis 3Н способны оказывать комплексный лечебно-оздоровительный эффект из-за многочисленных биологически активных метаболитов, которые они продуцируют. К ним относятся: антибиотические субстанции, литические ферменты и протеолитический ферментный комплекс с широкой субстратной специфичностью, в том числе коллагенолитической активностью [4]. Штамм непатогенен, нетоксичен, способен оказать иммуностимулирующее, противовоспалительное, противоаллергическое и антитоксическое действие [5, 6].

Создано принципиально новое средство в виде медленно рассасывающейся пластины, содержащей живые бактериальные клетки, продуцирующие комплекс биологически активных субстанций, способствующих заживлению ран, ожогов и язв. Средство удобно в употреблении как в клинике, так и в быту, его использование не сопровождается побочным эффектом.

Ранозаживляющую пластину по изобретению приготавливают следующим образом.

Пример 1. В реактор с мешалкой загружают 10 л 2%-ного водного раствора уксуснокислого коллагена и при помешивании добавляют 10 л культуральной жидкости, содержащей метаболиты и биомассу штамма В. Subtilis 3Н с концентрацией микробных клеток по ОСО (18±2)±10⁹ кл/мл (соотношение коллаген: биомасса=1:1).

Смесь разливают по кюветам с толщиной слоя раствора 6 мм и переносят в камеру сублимационной сушки. Проводят замораживание и сублимацию растворителя. Замораживание ведут до температуры минус 25^oC, затем подвергают вакуумированию до вакуума 0,1 мм рт.ст. и сублимации растворителя при температуре конденсатора 50^oC. Температура в стадии досушки плюс 35^oC. Общая продолжительность сушки 20-24 ч. Листы раневого покрытия разрезают на пластинки размером 20х10, 20х20 или 40х50 мм и герметично упаковывают в полимерные стерильные пакеты и флаконы.

Пример 2. В реактор с мешалкой загружают 10 л 2%-ного водного раствора уксуснокислого коллагена и при помешивании добавляют 10 л отмытого от метаболитов концентрата биомассы штамма В. Subtilis 3Н с концентрацией микробных клеток по ОСО (70±15)•10⁹ кл/мл (соотношение коллаген: биомасса=1:1). Далее все делают, как в примере 1.

Получаемое по предлагаемому изобретению ранозаживляющее покрытие использовалось в эксперименте для лечения условно чистых и инфицированных ран. В качестве тест-культуры для инфицированных ран использовали штамм Sthaphylococcus aureus Б 243. Условно-чистую рану создавали у 21 белой крысы (по 7 крыс в группе) и инфицированную рану у 21 белой крысы (по 7 крыс в группе). В эксперимент брали самцов массой 160-180 г и рассаживали их по 1 в клетки. На предварительно депилированном участке кожи спины (25х25) мм² под легким эфирным наркозом вырезали по трафарету кожный лоскут прямоугольной формы (15х15) мм, получали условно-чистую рану. Для получения инфицированной раны втирали в рану по 0,3 мл инфицирующего материала (1 мл взвеси в изотоническом растворе 40 млрд. микробных тел суточной бактериальной культуры и 1 мл голодного агара). Лечение начинали через 72 ч после заражения и проводили путем накладывания пластин (через два дня на третий) на гнойную рану. В качестве контроля - заживление без лечения.

Результаты фиксировали по срокам заживления раны (в сутках) Результаты заживления экспериментальных ран представлены в табл. 1.

Как видно из табл. 1, пластинки в качестве раневого покрытия, приготовленные по примеру 1 и 2, обладают выраженным ранозаживляющим действием как на условно чистых, так и на инфицированных ранах. Пластины обладают антагонистической активностью против тест-штаммов стафилококка. Они могут применяться при лечении инфицированных ран, ожогов, язв, абсцессов в хирургии, травматологии.

Источники информации
1. Хилькин А.М., Шехтер А.Б. Коллаген и его применение в медицине. - М.: Медицина, 1979.

2. Адамян А.А., Добыш С.В., Поликахина Г.В. и др. Средство для лечения ран // Патент РФ N 2071788, кл. A 61 L 15/32, опубл. 20.01.97, бюл. N 2.

3. Адамян А.А., Добыш С.В., Поликахина Г.В. и др. Средство для лечения ран // Патент РФ N 2071788, кл. A 61 L 15/32, 15/44, опубл. 20.01.97, бюл. N 2.

4. Холодная Ж.В., Михайлова Н.А., Кузнецова Т.Н., Зобова Т.И. Новый протеолитический фермент Бактилин и его свойства / // Материалы конференции биохимиков Урала и Западной Сибири: Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии. - Уфа, 1998. - С. 254-256.

5. Михайлова Н.А., Кузнецова Т.Н., Кунягина О.В. Штамм бактерий Bacillus Subtilis, несущий свойство антибиотикорезистентности, используемый для получения препарата Бактиспорин / Патент РФ N 2067616, кл. C 12 N 1/22.

Изобретение может быть использовано в медицине, а именно в хирургии в качестве ранозаживляющего средства. Ранозаживляющая пластина на основе коллагена, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит биологически активное вещество - живую антагонистически активную биомассу штамма В. Subtilis 3H при следующем соотношении компонентов, мас. %: биомасса штамма В. Subtilis 3H 30-50, коллаген 50-70. Пластина позволяет хорошо и быстро лечить раны, ожоги и язвы. 2 табл.

Ранозаживляющая пластина на основе коллагена, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит биологически активное вещество - живую антагонистически активную биомассу штамма В. Subtilis 3H при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Биомасса штамма В. Subtilis 3H - 30-50
Коллаген - 50-70о