СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПРИВЫЧНОГО НЕВЫНАШИВАНИЯ Российский патент 2002 года по МПК G01N33/53 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования привычного невынашивания у женщин группы высокого риска по перинатальной патологии, что позволит формировать группы риска на прегравидарном этапе, с проведением у женщины при беременности иммуноцитотерапии аллогенными лимфоцитами отца будущего ребенка.

Актуальность
В последние годы иммунологическая концепция привычного прерывания беременности не вызывает ни у кого сомнения. В ее основе лежит представление о прерывании беременности как иммунологической реакции отторжения материнским организмом фетоплацентарного комплекса (реакция "хозяин против трансплантата") за счет слабого распознавания лимфоцитами женщины антигенных детерминант мужа и отсутствия достаточного стимула к формированию общих и локальных факторов иммуносупрессии в супружеских парах, где есть общие пары-антигены по системе HLA. Привычное невынашивание ассоциируется с реакциями лейкоцитарной сенсибилизации и развитием иммунологического конфликта, который проявляется усилением иммунного ответа матери на фетоплацентарный комплекс, несущий HLA-антигены отца, что подтверждается повышенной концентрацией антиплацентарных, лимфоцитотоксических антител, циркулирующих иммунных комплексов [1,2,8,9,10,11,12].

Аналог
Аналогом предлагаемого метода является описанный в литературе метод прогнозирования привычного невынашивания путем определения кариотипа супругов.

Частота транслокаций у супругов с нарушением репродуктивной функции составляет 2-10%, т. е. значительно выше, чем в общей популяции (0,2%) [Кулаженко В.П и др., 1977 г.]. А по данным Н.А. Каретниковой (1980 г.) показано, что у супругов с привычным невынашиванием частота хромосомных вариантов в среднем составляет 21,7%, т.е. значительно выше, чем в популяции.

Прототип
Прототипом предлагаемого изобретения является метод прогнозирования у женщины самопроизвольных абортов с помощью предварительного типирования HLA-антигенов лимфоцитов супругов [4]. Так, по данным Ю.М. Зарецкой, достоверно чаще при привычном невынашивании встречались HLA-антигены А9, В5 [4], тогда как в работе И.А. Гусевой (1995 г.) не были выявлены антигенные маркеры привычного невынашивания.

Иммуногенетический подход к роли HLA-антигенов не ограничивается только поиском антигенных маркеров патологии [1,2]. Актуальным остается наличие общих пар антигенов системы HLA, особенно DR-локуса в качестве одной из причин, приводящих к невынашиванию [1,2].

Таким образом, вопрос о роли HLA-антигенов является актуальным и требует дальнейшего углубленного изучения.

Прогноз невынашивания только на основе обнаружения возможных антигенов маркеров невынашивания (А9, В5) и наличия у супругов общих пар антигенов не может быть высоко достоверным, так как их частота достаточно высока как в норме, так и при патологии, к тому же описанные методы не позволяют дифференцировать привычное невынашивание неясной этиологии от других осложнений беременности.

Сущность изобретения
Цель изобретения заключается в разработке способа прогнозирования привычного невынашивания беременности на прегравидарном этапе.

Данный способ позволяет выявить группу риска, а значит, и предпринять соответствующие этиопатогенетические мероприятия.

Способ основан на иммуногенетическом исследовании супружеской пары.

Способ осуществляют следующим образом. Проводят забор 5 мл венозной крови натощак утром у каждого из супругов. Однократный забор крови позволяет одномоментно у супругов определить от 140 до 210 антигенов лейкоцитов по системе HLA в зависимости от панели сывороток [7].

Лимфоциты выделяют в градиенте плотности фиколл-верографина. Для типирования HLA-антигенов I класса используют мононуклеары, полученные из периферической крови с помощью градиентного центрифугирования на фиколл-градиенте. Для определения HLA-антигенов II класса исследуют лимфоциты, обогащенные В-клетками, т.к. этот класс антигенов лучше представлен на антигенпрезентирующих клетках, включая и В-лимфоциты. Лимфоциты, используемые в реакциях серологического типирования, должны быть жизнеспособны. После выделения лимфоцитов на фиколл-верографиновом градиенте проводят стандартный NIH-микролимфоцитотоксический тест для определения HLA-антигенов локусов А, В, Cw, DR.

Реакция учитывается под микроскопом по проценту лизиса клеток: негативная реакция (лизировано менее 10% клеток), сомнительная (лизировано от 11 до 20% клеток), слабо позитивная (лизировано от 21 до 50% клеток), позитивная (лизировано от 51 до 80% клеток), сильно позитивная (лизировано 81 % и более клеток). В нашем случае одномоментно из 5 мл периферической крови каждого из супругов определяют 102 антигена по системе HLA.

В итоге после проведения реакции определяют фенотип человека, состоящий из 8 антигенов, по два аллеля на каждом локусе: А, В, Cw, DR. Из всей панели определяемых генов в качестве наиболее информативных выделены 26 генов: А1, А9, А11, А28, А29, В21, В39, В57 и др. На основании математической обработки полученных данных (фенотип супругов с привычным невынашиванием) методом дискриминантного анализа выведено решающее правило прогноза, по которому определяют дискриминантную функцию F по формуле:
F(x) = R1•A1 + R2•A9 + R3•A11 + R4•A28 + R5•A29 + R6•B21 + R7•B39 + R8•B57 + R9•B65 + R10•Dr5 + R11•Dr7 + R12•MA9 + R13•MA10 + R14•MA28 + R15•MA29 + R16•MB5 + R17•MB7 + R18•MB8 + R19•MB12 + R20•MB14 + R21•MB27 + R22•MB53 + R23•MDr2 + R24•MDr3 + R25•MDr5 + R26•MDr7 + const;
где A1, A9, A11, A28, A29 - гены А локуса жены;
МА9, МА10, МА28, МА29 - гены А локуса мужа;
В21, В39, В57, В65 - гены В локуса жены;
МВ5, МВ7, МВ8, MB 12, MB 14, МВ27, МВ53 - гены В локуса мужа;
Dr5, Dr7 - гены Dr локуса жены;
MDr2, MDr3, MDr5, MDr7 - гены Dr локуса мужа;
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17, R18, R19, R20, R21, R22, R23, R24, R26 - коэффициенты, равные соответственно: 0,78; 0,74; 0,77; 1,71; - 0,94; - 0,95; 5,04; - 1,53; - 1,87; - 0,22; 1,39; -0,83; 0,56; 1,12; 1,73; -0,74; 0,56; 0,71; 1,11; 1,62; - 0,65; - 0,61; - 0,83; -1,60; -0,51; 0,67;
const = - 0,46;
и при F менее 0 делают заключение об отсутствии риска невынашивания беременности, а при значении F более 0 прогнозируют возможное невынашивание беременности у данной пары.

Чувствительность метода прогнозирования составляет 79,4%, специфичность 81%, эффективность 80,7%.

Пример 1. Сильверстова О. Е. , 30 лет, наблюдалась в ГКБ 35 с 1996 г. после самопроизвольного выкидыша в 7-8 недель, последующего бесплодия II в течение 2 лет. При обследовании хромосомной патологии не выявлено, из инфекций - хламидии, гормоны крови в норме, экстрагенитальной патологии не выявлено, у жены HLA- А1, А24; В 15, В 18; Cw4, у мужа HLA-А3, А25; В7, В 18; Cw3, Cw5. Согласно правилу прогноза, F = 1,59 - женщина из группы "патология". После исключения антифосфолипидного синдрома (коагулологическими методами) и санации хламидиоза (неовир, ровамицин), на прегравидарном этапе и при беременности 5-6, 8 недель была проведена иммуноцитотерапия аллогенными лимфоцитами отца будущего ребенка в составе комплексной сохраняющей терапии. Беременность завершилась срочными родами в 38-39 недель рождением ребенка без признаков внутриутробной инфекции.

Пример 2. Пастухова Т.Л., 26 лет, наблюдалась в ГКБ 35 с привычным невынашиванием с 1997 г. При обследовании хромосомной патологии не выявлено, гормоны крови в норме, по тестам функциональной диагностики - цикл овуляторный, из инфекций выявлен хламидиоз, персистирующая герпетическая инфекция (проведена санация неовиром, ровамицином), ВА не обнаружен в коагулологических тестах, у жены HLA- А1,А2; В35,В41; Cw2,Cw4, у мужа HLA- A3,A11; B35, B41; Cw2, Cw3. Согласно правилу прогноза, F = 0,32, а значит, женщина - из группы "патология". При беременности иммуноцитотерапия проводилась в сроках 5, 7-8, 11-12 недель, а так же в 18 недель после выявления снижения уровня ТБГ, плацентарного лактогена с целью профилактического лечения формирующейся плацентарной недостаточности. Беременность завершилась самостоятельными самопроизвольными родами в 39 недель беременности, ребенком без признаков внутриутробной инфекции и признаков перинатального повреждения ЦНС.

Пример 3. Семенова В.Ю., 27 лет, обследовалась в ГКБ 35 после антенатальной гибели плода в 25 недель в 1997 г. При обследовании: хромосомный набор 46хх, 46ху; хламидиоз санирован в 1996 году; гиперандрогения яичникового генеза; из экстрагенитальной патологии отмечался хронический компенсированный тонзиллит. HLA-антигены: жена - HLA-A2, А24; В7, В 12; Cw4, Cw6; Dr1, Dr2; муж: HLA-A1,A3; B51, B27; Cw3, Cw5; Dr1, Dr-. Согласно правилу прогноза, F = -1,1, что соответствует группе "норма". В дальнейшем при обследовании у женщины был выявлен антифосфолипидный синдром. Во время беременности женщина получала глюкокортикоиды для коррекции гиперандрогении и в качестве этиотропной терапии антифосфолипидного синдрома. Беременность закончилась срочными родами живым плодом в сроке 38-39 недель.

Источники информации:
1. Алексеев Л.П., Болдырева М.Н., Трофимов Д.Ю.// Иммунология. -1997.- 5.-С.21-23.

2. Алексеев Л. П. , Хаитов P.M., Яздовский В.В. // Вестн. АМН СССР. - 1988. - 5. - С.30-38.

3. Асанов М.О., Мазуров Вл. Д., Шилко В.И. (редакторы) //Медицинская и биологическая кибернетика. - Екатеринбург, 1998 - УрГУ -С.70.

4. Зарецкая Ю.М. Клиническая иммуногенетика. - М. Мед., 1986.-С.207.

5. Кошелева Н.Г. Современная тактика лечения и профилактики невынашивания беременности с учетом этиопатогенеза // Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов. - 1996. - 3. - С.45-49.

6. Мазуров Вл. Д., Смирнов А.И. (редакторы) // Математическое моделирование медицинских и биологических систем. -Екатеринбург, 1988 - УрО АН СССР -С. 104.

7. Шабалин В.Н., Серова Л.Д. Современные представления об антигенах крови человека. // Рос. вест. перинатол. и педиатр. - 1996. - 6. -С 35-43.

8. Bjerck-S // Acta. Obstet. Gynecol. Scand. - 1995. - may. Vol 73, 5. -P.373-376.

9. Christiansen-OB; Mathiesen-O; Husth-M; Lauristsen-JG; Grunnet-N. // Hum - Reprod. Scand. - 1997. - nov. - Vol.8, 11.- P1943-1947.

10. Dava-S // Curr - Opin - Obstet - Gynecol. Canada. -1996.- Vol.6, 2. -P153-159.

11. Kilpatrick-DC; Liston - WA. // Hum - Reprod. Gr.Br.- 1998. - Vol.8, 10.-P. 1645-1649.

12. Ober-C; Stect-T; van-der-Ven-K; Billstrand-C; Messer-L; Kwak-J; Beaman-K; Beer-A. // J - Reprod - Immunol. Amer. - 1993.-Vol.l6, 3. P. 195-207.

13. Van-Iddekinge- В; Hofmeyr-GJ; Bezwoda-WR; Wadee-AA; Van-Rooy-P. // Reprod. Immunol. Amer.- 1997.- Vol.30, 1.- P.37-44.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству. Способ обеспечивает повышение точности прогноза привычного невынашивания на прегравидарном этапе. Проводят исследование иммуногенетического профиля лейкоцитов периферической крови в супружеской паре, при этом на основе показателей HLA-антигенов I, II классов определяют дискриминантную функцию F по формуле: F (x) = 0,78•A1 + 0,74•A9 + 0,77•A11 + 1,71•A28 - 0,94•A29 - 0,95•B21 + 5,04•B39 - 1,54•B57 - 1,87•B65 - 0,22•Dr5 + 1,39•Dr7 - 0,83•MA9 + 0,56•MA10 - 1,12•MA28 + 1,73•MA29 - 0,74•MB5 + 0,56•MB7 + 0,71•MB8 +1,11•MB12 + 1,62•MB14 - 0,65•MB27 - 0,61•MB53 - 0,83•MDr2 - 1,60•MDr3 - 0,51•MDr5 - 0,67•MDr7 - 0,46, где А1, А9, А11, А28, А29 - гены А локуса жены, МА9, МА10, МА28, МА29 - гены А локуса мужа, В21, В39, В57, В65 - гены В локуса жены, МВ5, МВ7, МВ8, МВ12, МВ14, МВ27, МВ53 - гены В локуса мужа, Dr5, Dr7 - гены Dr локуса жены, MDr2, MDr3, MDr5, MDr7 - гены Dr локуса мужа, N - норма, если F (x) > 0, P - патология, если F (x) < 0. Полученная функция обеспечивает чувствительность решающего правила прогноза 79,4%, специфичность 81%, эффективность 80,7%.

Способ прогнозирования привычного невынашивания беременности путем исследования иммуногенетического профиля лейкоцитов периферической крови в супружеской паре, отличающийся тем, что на основе показателей HLA-антигенов I, II классов определяют дискриминантную функцию F по формуле
F (x) = 0,78•A1 + 0,74•A9 + 0,77•A11 + 1,71•A28 - 0,94•A29 - 0,95•B21 + 5,04•B39 - 1,54•B57 - 1,87•B65 - 0,22•Dr5 + 1,39•Dr7 - 0,83•MA9 + 0,56•MA10 - 1,12•MA28 + 1,73•MA29 - 0,74•MB5 + 0,56•MB7 + 0,71•MB8 + 1,11•MB12 + 1,62•MB14 - 0,65•MB27 - 0,61•MB53 - 0,83•MDr2 - 1,60•MDr3 - 0,51•MDr5 - 0,67•MDr7 - 0,46,
где А1, А9, А11, А28, А29 - гены А локуса жены,
МА9, МА10, МА28, МА29 - гены А локуса мужа,
В21, В39, В57, В65 - гены В локуса жены,
МВ5, МВ7, МВ8, МВ12, МВ14, МВ27, МВ53 - гены В локуса мужа,
Dr5, Dr7 - гены Dr локуса жены,
MDr2, MDr3, MDr5, MDr7 - гены Dr локуса мужа,
и при значении F > 0 прогнозируют привычное невынашивание беременности, а при F < 0 делают заключение об отсутствии угрозы невынашивания беременности.