СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 2002 года по МПК A61K9/08 A61K31/415 A61K31/95 A61K33/04 A61P35/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к лекарственным средствам, обладающим противоопухолевым действием.

В настоящее время ведется изучение селеносодержащих соединений в плане использования для лечения злокачественных новообразований. Так, установлено, что селен, связанный с пептидами, нуклеиновыми кислотами, рекомбинантными нуклеиновыми кислотами, т.н. "селенпротеин", обладает способностью подавлять рак молочной железы и простаты (патент WO 9951637, С 07 К 14/47, А 61 К 38/16).

Селен является незаменимым микроэлементом. Основной биологической ролью селена является его участие в синтезе и активности глутатионпероксидаз I, II, III, IV, селензависимой пероксидазы нейтрофилов, белков семейств селенопротеинов Р и W, 5-йодотирониндейодиназ, I, II и III, тиоредоксинредуктазы, а также, возможно, функция простетической группы в т.н. селенсвязывающих белках. Обеспечение максимальной степени активности этих факторов происходит при приеме селена на уровне нижней границы физиологического оптиума потребления, что состовляет около 70-100 мкг в день для взрослого человека. Механизм действия селена на уровне верхнего предела физиологической нормы потребления, а также в фармокологическом диапазоне дозировок в настоящее время детально не изучен и рядом авторов связывается, в первую очередь со стимулирующим действием избытка селена на активность тиоредоксинредуктазы. Предлагается, что 17 кД белок связан с жизнеспособностью сперматоизоидов, а 56 кД белок печени способствует предотвращению бластомогенеза.

Известны соединения селена, обладающие противоопухолевым действием, используемые в онкологической практике. Так, известно средство, обладающее противоопухолевым действием, представляющее собой смесь производных селена с цитостатиками, тормозящими митоз клеток, при этом в качестве соединений селена используют двуокись селена, селенметионин, селенцистеин, селеннуклеиновые кислоты. Средство проявляет активность при злокачественных новообразованиях поджелудочной железы, простаты, желудка, почек (патент WO 9964018, А 61 К 33/04).

Однако известные средства либо обладают высокой токсичностью, например, неорганические соединения селена, либо дороги, что лимитирует их использование в лечебной практике.

Задача настоящего изобретения - создание отечественного нетоксичного селеносодержащего средства, обладающего протовоопухолевым действием.

Поставленная задача решается тем, что предложено средство на основе селена, обладающее противоопухолевым действием, характеризующееся выполнением в виде 1,0-2,5% водно-спиртового раствора, содержащего в качестве активного вещества ди-3-метилпиразолил-4 селенид в количестве 0,04-0,08%.

Известен способ получения ди(пиразолил)селенидов (Konek F., Schliefer О. Uber neu selen - naltige Derivate des Antipyrins, Berichte, 51, 842-855, 1918).

В качестве примера из алкильных производных дипиразолил-4-селенид представлен ли (3-метилпиразолил-4)селенид. При этом было показано, что оно обладает противоопухолевым действием. Указанное вещество очень плохо растворимо в воде, в связи с чем заявленное средство выполнено в виде 1,0-2,5% водно-спиртового раствора, содержащего в качестве активного вещества ди(3-метилпиразолил-4)селенид в количестве 0,04-0,08%.

Заявленное средство получают следующим образом. Сначала ди(3-метилпиразолил-4)селенид растворяют в 96% этаноле при соотношении вещество:растворитель 1:15. Затем добавляют очищенную воду до конечной концентрации действующего вещества 0,04-0,08% в 1,0-2,5% водно-спиртовом растворе.

Заявленное средство относится к малотоксичным соединениям (IV класс токсичности) DL₅₀ мг/кг = 8100 (мыши, крысы), для сравнения дрожжевой биоселен имеет III класс токсичности DL₅₀=1000 мг/кг (мыши, крысы).

Изобретение поясняется следующими примерами.

Пример 1.

Заявляемое средство содержит ди(3-метилпиразолил-4)селенид в количестве 0,04% в 1,0%-ном водно-спиртовом растворе.

Пример 2.

Заявляемое средство содержит ди(3-метилпиразолил-4)селенид в количестве 0,06% в 1,5%-ном водно-спиртовом растворе.

Пример 3.

Заявляемое средство содержит ди(3-метилпиразолил-4)селенид в количестве 0,08% в 2,5%-ном водно-спиртовом растворе.

Исследование противоопухолевой активности в отношении саркомы.

Исследования проведены на беспородных лабораторных крысах-самцах массой 150-200 г. Антибластомогенную активность препарата изучали в отношении двух перевивных штаммов опухолей - карциносаркомы Уокера (КСУ) и саркомы 45 (С-45).

Перевивку саркомы 45 подопытным животным осуществляли подкожной инокуляцией 0,5 мл гомогената опухолевой ткани, приготовленной на растворе Рингера в соотношении 1:2.

Заявленное средство вводили в виде 2,5%-ного водно-спиртового раствора при концентрации действующего вещества 0,08%.

В первой части эксперимента исследовали слияние предварительной инкубации опухолевых клеток с препаратом in vitro на такие показатели перевиваемости, как длительность латентного периода развития опухоли после инокуляции клеток животным и процент возникновения опухолей от общего количества привитых животных. Инкубацию суспензий опухолевых клеток с препаратом (100 мг/0,5 мл) проводили при комнатной температуре в течение 1 ч при постоянном перемешивании. Контролем служили показатели перевиваемости опухолевых клеток, выдержанных в аналогичных условиях без добавления препарата.

Испытанию противоопухолевого действия препарата in vivo предшествовало определение его токсичности. Определение проводили после однократного энтерального введения испытуемого соединения экспресс-методом В.Б. Прозоровского и соавт. Метод позволяет с минимальными затратами времени и животных установить величину DL₅₀ с точностью ±15%. Наблюдение за животными вели в течение суток, фиксируя число павших особей. Удлинение периода наблюдения более чем на сутки было нецелесообразным, так как в ходе предварительной работы с испытуемым соединением установлено, что в случаях, когда доза вещества оказывалась смертельной, гибель животных наступала спустя 10-12 часов. Величина DL₅₀, заявленного средства, установленная данным методом, составляет 8100 мг/кг веса. При проведении противоопухолевой терапии использовали несколько схем введения препарата, различающихся разовыми и курсовыми дозами и продолжительностью воздействия: 1-я группа животных получала препарат в разовой дозе, равной 1/60 DL₅₀, в течение 35 дней 5-дневными курсами с 2-дневными перерывами; животным 2-й группы вводили препарат в разовой дозе, равной 1/12 DL₅₀, шестикратно, чередуя 2-дневные введения с 2-дневными перерывами; животным 3-й группы - в разовой дозе, равной 1/6 DL₅₀, четырехкратно, с такими же интервалами; животным 4-й группы в разовой дозе, равной 1/4 DL₅₀, двухкратно, один раз в неделю. Введение препарата начинали с "момента, когда размер опухоли достигал приблизительно 1 см³ (8-9-е сутки после перевивки опухоли). Контролем служили животные-опухоленосители, не получившие препарат. Число животных в группах от 9 до 10 голов.

Результаты представлены в таблице 1.

Из данных таблицы 1 следует, что заявленное средство обладает противоопухолевым действием, выразившимся в полной регрессии опухолей у части подопытных животных. При этом выявлено, что степень противоопухолевой эффективности препарата зависит не только от общей курсовой дозы, но и от схемы его введения (см. таблицу). Наиболее выраженное противоопухолевое действие - рассасывание опухоли у 50% опухоленосителей - отмечено во 2-й группе, в которой животные получили общекурсовую дозу препарата, соответствующую 1/2 DL₅₀ при шестикратном введении. Введение такой же общекурсовой дозы в 2 приема за счет увеличения разовых доз препарата (4-я группа) сокращает число животных с регрессирующими опухолями до 9%. Подобный эффект отмечается и при 4-кратном введении более высокой курсовой дозы (2/3 DL₅₀) животным 3-й группы. При увеличении длительности лечения с одновременным значительным снижением разовых доз препарата число животных с рассосавшимися опухолями возрастает до 33% (1-я группа), несмотря на то, что в данном случае и разовые, и курсовая дозы препарата были наименьшими по сравнению с другими группами.

Противоопухолевую активность заявленного средства исследовали также при индуцированном раке молочной железы (РМЖ).

В эксперименте использованы нелинейные белые крысы-самки весом 130-179 г. Заявленное средство вводили перорально через зонд в виде 2,5%-ного водно-спиртового раствора при концентрации действующего вещества 0,08%. Животные контрольной группы получали равный объем воды без препарата.

РМЖ у крыс-самок индуцировали 7,12-диметилбензантраценом (ДМБА). Лечение опухоленосителей начинали, когда средний объем опухолей в группе составлял 19 см³. Заявленное средство вводили в разовой дозе 335 мг/кг веса 5-дневными циклами с 2-дневными перерывами. Введение средства не прекращали до гибели животных. Противоопухолевый эффект оценивали по влиянию препарата на продолжительность жизни животных и регрессию опухолей.

Индуцированный РМЖ был получен у 18 особей, 8 из них подвергались лечению, 10 составили контрольную группу. Под действием препарата у 37% животных произошла полная регрессия первичного опухолевого очага (табл. 2), который не рецидивировал в течение последующего 15-дневного наблюдения. У остальных 63% животных рост опухолей продолжался, несмотря на проводимое лечение, однако введение заявленного средства более чем в 2 раза увеличивало среднюю продолжительность жизни леченных животных по сравнению с контролем (р<0,05).

При оценке полученных результатов следует особо остановиться на сроке начала лечения. РМЖ, индуцированный ДМБА, приобретает необратимый злокачественный рост при объеме опухоли около 4 см³. С этого момента возможно начало лечения препаратом для выявления его противоопухолевых свойств. В указанной серии исследований введение средства начинали, когда объем опухоли достигал в среднем 18,8 см³. Этот период является поздней стадией развития РМЖ (гибель животных контрольной группы наступает при среднем объеме опухоли около 25 см³). На основании изложенного можно заключить, что заявленное средство обладает высокой противоопухолевой активностью в отношении индуцированного РМЖ на поздней стадии роста опухоли.

Заявленное средство может быть использовано как наружно, в виде аппликаций, так и энтерально, из расчета суточной дозы для человека от 14 до 43 мг в зависимости от состояния больного.

Имеются следующие наблюдения:
- Базально-клеточный рак кожи - 2 пациента - наружное применение средства, ремиссия, больные живут более 10 лет;
- рак губы - 3 пациента - наружное применение средства, ремиссия, больные живут более 10 лет;
- рак желудка - 9 пациентов - энтеральный прием средства, больные живут более 5 лет.

Изучение препарата было проведено также в г. Воскресенске Московской области. Больные с запущенными формами злокачественных новообразований (рак, саркома, меланома в IV стадии с множественными метастазами) принимали энтерально заявленное средство на протяжении 1 года. Из 16 больных улучшилось состояние 8 человек, у 4 пациентов - объективно состояние полной ремиссии.

Полученные данные позволяют сделать вывод, что предложенное средство обладает противоопухолевым действием при низкой токсичности, что позволит использовать его в онкологической практике.

Изобретение относится к медицине, а именно к лекарственным средствам, обладающим противоопухолевым действием. Изобретение заключается в том, что предложенное средство на основе селена выполнено в виде 1,0-2,5%-ного водно-спиртового раствора, содержащего в качестве активного вещества ди(3-метилпиразолил-4)селенид в количестве 0,04-0,08%. Изобретение обеспечивает повышение терапевтического эффекта и снижение токсичности. 2 табл.

Средство, обладающее противоопухолевым действием, характеризующееся тем, что оно выполнено в виде 1,0-2,5%-ного водно-спиртового раствора, содержащего в качестве активного вещества ди(3-метилпиразолил-4)селенид в количестве 0,04-0,08%.