СПОСОБ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПЕЧЕНИ Российский патент 2003 года по МПК A61K35/48 A61N5/67 A61P1/16 

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии, и может найти широкое применение для лечения цирротических изменеий и других хронических заболеваний печени.

Известен способ лечения хронических диффузных заболеваний печени, предусматривающий инъекционное введение суспензии фетальных клеток тканей человека, причем введение осуществляют подкожно в 4-5 точках передней брюшной стенки, а курс содержит 2-4 инъекции (см. Сб. статей под редакцией Г.Т. Сухих "Трансплантация фетальных тканей и клеток человека". - M., Международный институт биологической медицины, 1996 г., стр. 84-86).

При введении фетальных тканей вышеописанным способом в силу особенностей крово- и лимфообращения данной зоны происходит их транспортировка, минуя печень, в систему нижней или верхней полых вен, в правые отделы сердца, затем в капилярную сеть легких, в левые отделы сердца и наконец системным кровотоком они попадают в печень.

В связи с этим количество фетальных тканей, достигающих печени, значительно уменьшается по сравнению с количеством этих тканей, исходно введенных подкожно больному, в результате чего их воздействие на печень ослабевает.

Таким образом, вышеописанный способ недостаточно эффективен.

Известен способ патогенетической терапии цирроза печени, выбранный в качестве ближайшего аналога, предусматривающий инъекционное внутрибрюшинное введение взвеси живых фетальных гепатоцитев (см. патент RU 2161036, М.кл. А 61 К 35/407, 35/48, опубл. 27.12.00).

Согласно данному способу инъекционно достигают жировой ткани круглой связки печени, куда и вводят, например, 8•10⁷ взвеси живых эмбриональных гепатоцитов на 5 мл физиологического раствора. Для достижения комплексного общеукрепляющего эффекта и для стимуляции защитных сил организма больного дополнительно в подкожную клетчатку передней брюшной стенки, например левой подвздошной области, инъекционно вводят взвесь других фетальных тканей, в частности селезенки, надпочечников и вилочковой железы (20•10⁷ взвеси фетальных тканей на 5 мл физраствора).

По мнению авторов данного способа, введенные эмбриональные гепатоциты обладают мощным зародышевым потенциалом, они содержат биологически активные вещества, стимулирующие регенерацию клеток пораженной печени. Вступая в контакт с клетками больной печени, имплантируемые клетки стимулируют их полноценное развитие и функционирование.

Улучшение функции печени по объективным и субъективным данным наступает через 3-4 недели после процедуры с последующей стойкой ремиссией патологического процесса.

Однако, как видно, данный способ достаточно сложен, поскольку предусматривает введение фетальных гепатоцитов непосредственно в круглую связку печени, т. е. требует точности выполнения операции. Кроме того, данный способ более трудоемок, поскольку требует введения других фетальных клеток дополнительно не в подкожную клетчатку.

Известный способ также недостаточно эффективен, поскольку при указанном количестве вводимой суспензии улучшение наступает через достаточно длительный промежуток времени.

Техническим результатом, на решение которого направлено данное изобретение, является упрощение способа, снижение его длительности и повышение эффективности способа лечения.

Указанный технический результат достигается тем, что в известном способе патогенетической терапии хронических заболевании печени, предусматривающем введение реципиенту суспензии фетальных клеток, согласно изобретению для введения используют суспензию фетальных клеток, дополнительно подвергнутую по меньшей мере двукратному облучению лазерным излучением. При этом осуществляют введение суспензии фетальных клеток печени и/или селезенки, и/или тимуса. А введение суспензии фетальных клеток осуществляют внутрибрюшинно.

Эксприментально установлено, что дополнительное по меньшей мере двукратное облучение суспензии фетальных клеток лазерным излучением позволяет значительно повысить скорость и качество регенеративных процессов в поврежденных тканях печени за счет увеличения внутриклеточной и клеточной регенерации гепатоцитов, возрастания числа многоядерных и крупноядерных гепатоцитов, содержащих грубодисперсный хроматин, 1-3 ядрышка, а также за счет нарастания пролиферации звездчатых ретикулоцитов.

Экспериментами также выявлено, что именно подвергнутые лазерному облучению фетальные клетки способны быстрее стимулировать регенерацию поврежденных тканей печени за счет более активного действия содержащихся в них биологически активных веществ, противовоспалительных, бактериостатических соединении, пептидов, которые стимулируют рост иммунокомпетентных клеток.

Экспериментально выявлено также, что наилучшие результаты достигаются именно при использовании суспензии фетальных клеток печени и/или селезенки, и/или тимуса.

Кроме того, наилучшие результаты достигаются именно при внутрибрюшинном введении заявленной суспензии.

Совокупность существенных признаков заявляемого объекта "способ" имеет отличия от ближайшего аналога и не следует явным образом из изученного уровня техники, что свидетельствует о его соответствии критериям "новизна" и "изобретательский уровень".

Заявляемое изобретение может применяться в здравоохранении, что свидетельствует о его соответствии критерию "промышленная применимость".

Способ патогенетической терапии хронических заболеваний печени, например цирроза печени, осуществляется следующим образом.

Суспензию в эксперименте готовят следующим образом.

Фетальные ткани печени берутся у 20-дневных плодов после забоя беременных самок - крыс линии Вистар.

Суспензия фетальных клеток печени готовится на основе физиологического раствора в стеклянном гомогенизаторе со специальным люфтом для сохранения целостности клеток.

Клеточное разведение 3•10⁵ в 1 мл и подсчет жизнеспособных клеток суспензии с помощью окраски трипановым синим проводятся в камере Горяева.

Готовая суспензия фетальных гепатоцитов помещается в штатив в стерильные стеклянные пробирки.

Диаметр световода подбирается таким образом, чтобы он плотно входил в данную пробирку.

Световод лазера опускается в пробирку и устанавливается на некотором расстоянии от поверхности суспензии. Обработка ведется расфокусированным лучом. Контакта с поверхностью суспензии нет.

Для облучения использовался в эксперименте гелий-неоновый лазер "Улей".

Облучение осуществлялось по меньшей мере двукратно по 2 минуты с перерывом в 5 минут при плотности мощности излучения 75 мВт/см².

Облученную суспензию инъекционно вводят внутрибрюшинно биологическому объекту с диагнозом цирроз печени в количестве 1 мл с разведением 3•10⁵. Вес биологического объекта 200 г.

Положительные результаты отмечались спустя 5-7 дней.

Аналогичным способом готовились и суспензии фетальных клеток селезенки и тимуса и их смесь.

Эксперименты с использованием заявляемой методики, проведенные на животных, показали, что скорость и качество регенеративных процессов в тканях печени достоверно увеличивались за счет внутриклеточной и клеточной регенерации гепатоцитов, возрастания числа многоядерных и крупноядерных гепатоцитов, содержащих крупнодисперсные хроматин, 1-3 ядрышка, а также нарастания пролиферации звездчатых ретикулоцитов.

Это подтверждено гистологически и гистохимически.

Пример 1. Биологический объект весом 200 г. Диагноз: цирроз печени, стадия ремиссии.

Приготовленную и облученную двукратно по 2 минуты с перерывом 5 минут суспензию фетальных клеток печени разведением 3•10⁵ в 1 мл в количестве 1 мл вводят инъекционно внутрибрюшинно данному биологическому объекту.

Спустя неделю наблюдались положительные результаты. Животное забито через 3 недели. Гистологические и гистохимические методы исследования подтвердили высокую регенерирующую способность трансплантированных фетальных клеток.

Пример 2. Биологический объект весом 250 г. Диагноз: цирроз печени. Стадия ремиссии.

Отличием от примера 1 является использование для введения суспензии фетальных клеток печени, селезенки и тимуса. Суспензия подверглась трехкратному облучению лазерным излучением по 1,5 минуты с перерывом 4 минуты.

Положительные результаты наблюдались спустя пятые сутки. Результаты подтверждены гистологически и гистохимически.

Пример 3. Больной Е., 38 лет. Диагноз: Хронический гепатит. Стадия ремиссии.

Суспензию фетальных клеток печени и селезенки готовили из фетальных тканей человека.

Приготовленную и обработанную заявляемым способом суспензию фетальных клеток печени и селезенки (облучение четырехкратное по 1 минуте с перерывом 1,5 минуты) клеточным разведением 3•10⁵ вводили больному внутрибрюшинно в количестве 5 мл суспензии.

Самочувствие больного улучшилось через 1,5 недели. Результаты анализов также свидетельствовали с положительных сдвигах. Больной выписан из стационара спустя 3 недели.

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии, и может быть использовано для патогенетического лечения хронических заболеваний печени. Используют суспензию фетальных клеток, дополнительно подвергнутую по меньшей мере двукратному облучению лазерным излучением. Суспензию фетальных клеток печени и/или селезенки, и/или тимуса вводят внутрибрюшинно. Способ увеличивает содержание биологически активных веществ в фетальной ткани. Это ускоряет процессы регенерации в печени. 2 з.п. ф-лы.

1. Способ патогенетической терапии хронических заболеваний печени, предусматривающий введение реципиенту суспензии фетальных клеток, отличающийся тем, что для введения используют суспензию фетальных клеток, дополнительно подвергнутую по меньшей мере двукратному облучению лазерным излучением. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что осуществляют введение суспензии фетальных клеток печени и/или селезенки, и/или тимуса. 3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что введение суспензии фетальных клеток осуществляют внутрибрюшинно.