ВИРУСВАКЦИНА ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА ПТИЦ Российский патент 2003 года по МПК A61K39/245 C12N7/00 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и производстве средств специфической профилактики инфекционного ларинготрахеита (ИЛТ) птиц.

ИЛТ - острое контагиозное заболевание птиц - является причиной высокого процента смертности (обычная смертность составляет 10-20%, известны случаи высокой смертности, которая составляет 50-70%), у переболевших особей снижается суточный привес и яйценоскость. ИЛТ вызывается герпесвирусом. В комплексе мер борьбы с ИЛТ одним из основных средств является вакцинация с помощью живых и инактивированных вакцин.

Преимущества вирусвакцин состоят в том, что они пригодны для массового применения путем выпаивания, аэрозольного распыления и т.д., для иммунизации птиц требуется относительно малое количество иммунизирующего препарата, так как живой антиген продолжает размножаться в организме иммунизированной птицы, они являются более дешевыми в производстве и для их хранения требуется относительно мало места в холодильных установках.

Известна вирусвакцина против ИЛТ птиц, содержащая вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "Г" гомологичного вируса, репродуцированного в чувствительной биологической системе, и защитную среду в эффективном соотношении [1].

Известна вирусвакцина против ИЛТ птиц, содержащая вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "ЦНИИПП" гомологичного вируса, репродуцированного в чувствительной биологической системе и защитную среду в эффективном соотношении [2].

Известна вирусвакцина против ИЛТ птиц, содержащая вируссодержащий материал из клона "НТ" аттенуированного штамма "ЦНИИПП" гомологичного вируса, репродуцированного в чувствительной биологической системе, и защитную среду в эффективном соотношении [3].

Недостатки известных вирусвакцин состоят в их низкой иммуногенной активности. Эти вакцины формируют иммунитет, который не способен защитить 100% птицепоголовья от заражения эпизоотическим вирусом ИЛТ.

Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вирусвакцина против ИЛТ птиц, содержащая вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "ВНИИБП" гомологичного вируса, репродуцированного в чувствительной биологической системе, и защитную среду в эффективном соотношении [4].

Недостаток вирусвакцины-прототипа состоит в ее низкой иммуногенной активности и повышенной реактогенности.

В связи с этим актуальной остается проблема создания вирусвакцины, обладающей одновременно высокой иммуногенной активностью, безвредностью и ареактогенностью при окулярном и оральном способах иммунизации.

В задачу создания настоящего изобретения входило расширение арсенала высокоиммуногенных и безвредных вирусвакцин против ИЛТ птиц.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала вирусвакцин против ИЛТ птиц, обладающих высокой иммуногенной активностью, безвредностью и ареактогенностью при окулярном и оральном способах иммунизации.

Указанный технический результат достигнут созданием вирусвакцины против ИЛТ птиц, охарактеризованной следующей совокупностью признаков:
1. Вирусвакцина против ИЛТ птиц.

2. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц.

3. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³.

4. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³, в эффективном количестве.

5. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О", репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 5,2 Ig ЭИД_50/см ³, в количестве 85,0-95,0 мас.%.

6. Защитная среда, содержащая (отдельно или в комбинации) лактозу, желатозу, сахарозу и др., в количестве 5,0-15,0 мас.%.

7. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³, и защитная среда взяты в соотношении, мас.%:
Вируссодержащий материал - 85,0-95,0
Защитная среда - До 100,0
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:
1. Вирусвакцина против ИЛТ птиц.

2. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в чувствительной биологической системе.

3. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в чувствительной биологической системе, в эффективном количестве.

4. Защитная среда.

5. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в чувствительной биологической системе, и защитная среда в эффективном соотношении.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:
1. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³.

2. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³, в количестве 85,0-95,0 мас.%.

3. Защитная среда в количестве 5,0-15,0 мас.%.

4. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³, и защитная среда взяты в соотношении, мас.%:
Вируссодержащий материал - 85,0-95,0
Защитная среда - До 100,0
Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:
1. Вирусвакцина против ИЛТ птиц.

2. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в чувствительной биологической системе.

3. Защитная среда.

По сравнению с вирусвакциной-прототипом существенными отличительными признаками предлагаемого изобретения являются:
1. Из аттенуированных штаммов вирусвакцина содержит аттенуированный штамм "О" вируса ИЛТ птиц.

2. Штамм "О" вируса ИЛТ птиц в эффективном количестве.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:
1. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³.

2. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³, в количестве 85,0-95,0 мас.%.

3. Защитная среда в количестве 5,0-15,0 мас.%.

4. Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³, и защитная среда взяты в соотношении, мас.%:
Вируссодержащий материал - 85,0-95,0
Защитная среда - До 100,0
Предлагаемая вирусвакцина обладает высокой иммуногенной активностью, безвредностью и ареактогенностью при окулярном и оральном способах иммунизации.

Достижение технического результата от использования предлагаемой вирусвакцины объясняется тем, что она содержит антигенный материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации.

Исходный вирус для получения штамма "О" выделен из гортани и трахеи курицы с признаками латентной формы заболевания в Казахстане в 1992 году.

Производственный штамм "О" получен путем многократных последовательных пассажей на 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур.

Штамм "О" депонирован во Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) 05.06.2000 г. под регистрационным наименованием "О 112-ДЕП".

Штамм "О" обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации.

Экспериментально подтверждена возможность его использования для изготовления вирусвакцины, обладающей высокой иммуногенной активностью и безвредностью при окулярном и оральном способах иммунизации.

Штамм "О" вируса ИЛТ птиц характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические свойства
Штамм "О" вируса ИЛТ относится к семейству Herpesviridae. При электронной микроскопии (инструментальное увеличение 4,5•10⁵ и 5•10⁵) в поле зрения микроскоп наблюдают хорошо различимые вирусные частицы ИЛТ со свойственной им морфологией. Вирионы имеют сферическую форму, их размеры варьируют от 200 до 250 нм (у некоторых до 330 нм). Вирионы ИЛТ состоят из сферического нуклеотида, окруженного суперкапсидной оболочкой сложной формы. Вирион обладает икосаэдрическим типом симметрии. Икосаэдрический капсид покрыт липопротеидной оболочкой, имеющей на своей поверхности единицы-пепломеры. Димер нуклеокапсида равен 113+2 нм, усредненный диаметр нуклеокапсида оболочки около 350 нм.

Нуклеокапсиды размером 100-110 нм располагаются в вирусной частице, как правило, эксцентрично, реже - в центре частиц. Геном вируса ИЛТ имеет длину 155000 полинуклеотидов и состоит из длинной уникальной последовательности И1 (120000 полинуклеотидов) и короткой уникальной последовательности Иs (17000 полинуклеотидов). Вирус содержит гликопротеины (205, 160, 115, 90, 85, 74, 60 и 50 кД). Гликопротеин В(gВ) является первым структурным белком вируса ИЛТ.

Антигенные свойства
Штамм "О" вируса ИЛТ стабильно нейтрализуется гомологичной сывороткой, идентифицируется в сыворотках крови кур, содержащих антитела к данному вирусу, в РДП, РН и ИФА. В РДП идентифицируется гомологичными гипериммунными сыворотками в титре 1:8. В РН индекс нейтрализации гомологичными гипериммунными сыворотками в разведениях 1:10 и 1:20 в среднем составляет 3,8 Ig ЭИД₅₀/см³ соответственно. В ИФА идентифицируется полевыми и лабораторными гипериммунными сыворотками в титре до 1:24579. Антигенные различия штамма "О" по отношению к другим штаммам вируса ИЛТ не установлены. Гемагглютинирующими свойствами штамм не обладает.

Биотехнологические характеристики
Штамм "О" проявляет высокую биологическую, иммуногенную и антигенную активность как в нативном виде, так и после инактивации. Штамм "О" используют для изготовления живой и инактивированной вакцины против ИЛТ птиц и диагностических препаратов. Вирус имеет выраженный тропизм к эпителиальным клеткам слизистой оболочки гортани, трахеи и клоаки птиц. Штамм культивируют в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур. Репродукция вируса происходит в ткани хорио-аллантоисной оболочки (ХАО). Инфекционный титр вируса в 10-20% суспензии ХАО на 5 сутки культивирования при условии генерализованного распространения по всей оболочке составляет не менее 6,0 Ig ЭИД₅₀/см³.

Хемо- и генотаксономическая характеристика
Штамм "О" является ДНК-содержащим вирусом.

Устойчивость к внешним факторам
Вирус чувствителен к липолитическим агентам, теплу и различным дезинфектантам. Температура 55^oС разрушает вирус в течение 10-15 мин, а 38^oС - за 48 часов. В замороженных тушках больных и вынужденно убитых кур, хранившихся при температуре минус 10, 18 и 28^oС, вирус оставался активным более 19 месяцев, на поверхности скорлупы в условиях термостата инактивируется 12 ч, в зараженных птичниках сохраняется не более 9 дней. Полностью инактивируется в 1%-ном растворе креолина в течение 30 секунд. Он длительно сохраняет свою активность в лиофилизованном состоянии или при минус 20-60^oС. В лиофилизированном гомогенате ХАО вирус сохраняет инфекционность не менее 1,5. В замороженной ткани ХАО инфекционность вирус сохраняет не менее 4 лет.

Иммуногенность штамма
При вакцинации кур старше 15-дневного возраста окулярным способом в дозе 1000 ЭИД50 и оральным способом (выпойкой) в дозе 4000 ЭИД₅₀ индуцирует выработку специфических антител и создает иммунитет против ИЛТ у 100% вакцинированных кур. В лиофилизованном гомогенате ХАО вирус сохраняет иммуногенность не менее 1,5 лет.

Эпизоотичность штамма
При совместном содержании вакцинированных и интактных птиц передача вакцинного вируса штамма "О" по контакту не установлена.

Условие поддержания штамма
Лиофилизованный материал из штамма "О" хранят при температуре 4^oС, вируссодержащие ХАО - при температуре не выше минус 40^oС. Для ресуспендирования лиофилизованного вируса используют изотонический фосфатно-буферный раствор рН 7,4-7,6.

Генетическая чистота
После 20 пассажей на ХАО 9-11-суточных эмбриона SPF-кур каких-либо изменений иммунобиологических свойств штамма "О" не установлено.

Дополнительные признаки и свойства
Реактогенность отсутствует.

Патогенность отсутствует.

Вирулентность отсутствует.

Онкогенность отсутствует.

Контагиозность отсутствует.

Стабильность аттенуации отмечена при проведении 4 пассажей на чувствительных цыплятах.

На основании полученных данных можно утверждать, что штамм "О" вируса ИЛТ по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ИЛТ.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источники, характеризующиеся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам предлагаемого изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа как наиболее близкого по совокупности признаков аналога, позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вирусвакцины, изложенных в независимом пункте формулы изобретения.

Следовательно, заявляемое решение соответствует условию патентоспособности "новизна".

Для проверки соответствия предлагаемого решения условию патентоспособности "изобретательский уровень" проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную часть независимого пункта формулы изобретения. Результаты поиска показали, что предлагаемое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого изобретения), а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемого изобретения преобразований для достижения технического результата.

Следовательно, предлагаемая вирусвакцина соответствует условию патентоспособности "изобретательский уровень".

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исполнения, которые не ограничивают объем изобретения.

Пример 1.

Для изготовления вирусвакцины используют авирулентный для цыплят и безвредный для людей производственный штамм "О" вируса ИЛТ птиц с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД₅₀/см³, которые хранят в лиофилизированном состоянии. Для репродукции вируса используют 9-11-суточные эмбрионы SPF-кур. Яйца для куриных эмбрионов получают из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням, в том числе по ИЛТ, или от SPF-кур-несушек, невакцинированных против ИЛТ. Для получения матровой расплодки содержимое трех ампул производственного штамма "О" разводят в отношении 1:5 стерильным физиологическим раствором рН 7,2-7,4 с добавлением антибиотиков и полученным вирусом заражают хорошо развитые 9-11-суточные эмбрионы в аллантоисную полость в объеме 0,2 см³. Зараженные эмбрионы инкубируют при температуре 37,0±0,5^oС и относительной влажности воздуха 60-70% в течение 5 суток.

На 6 сутки определяют характерные для вируса ИЛТ поражения ХАО. Из пораженных ХАО готовят 15-30% суспензию, которую промораживают и освобождают от крупнодисперсных частиц низкоскоростным центрифугированием. Полученный вируссодержащий материал с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД50/см³ используют в качестве матровой расплодки для массового заражения 9-11-суточных эмбрионов SPF-кур. Эмбрионы заражают матровым вирусом в объеме 0,2 см³. Зараженные эмбрионы выдерживают в термостате при 37,5±0,5^oС и относительной влажности воздуха 60-70% в течение 5 суток. Все погибшие после 72 часов инкубирования эмбрионы и оставшиеся в живых помещают в холодильные камеры при 2-6^oС на 16-18 часов. После охлаждения зараженные эмбрионы вскрывают, извлекают ХАО с характерными изменениями (специфические узелки-бляшки). Пораженные ХАО помещают в холодильник при температуре не выше минус 40^oС. ХАО используют для приготовления вируссодержащего материала. Для этого пораженные ХАО размораживают и из них готовят однородную гомогенную массу. Полученный вируссодержащий материал смешивают с защитной средой в соотношении 17: 3-19: 1, необходимом для получения вакцины с заданной иммуногенной активностью. В качестве ингредиентов защитной среды используют широко применяемые для этих целей вещества (отдельно или в комбинации): сахарозу, желатозу, лактозу, обезжиренное молоко и т.д. Смесь вируссодержащего материала и защитной среды тщательно перемешивают. Полученную смесь контролируют на стерильность, гемагглютинирующую активность (ГА-активность) в капельной РГА и для определения титра вируса до его лиофилизации. Биологическая активность полуфабриката вакцины, идущего на приготовление вакцины, при титровании на РКЭ должна быть не ниже 6,0 Ig ЭИД₅₀/см³. После получения положительных результатов контроля полуфабрикат вакцины охлаждают до 2-8^oС и расфасовывают в стерильные ампулы или пенициллиновые флаконы так, чтобы толщина слоя разлитого жидкого полуфабриката была не более 1/2 высоты ампулы или флакона. Ампулы и флаконы с полуфабрикатом помещают в специальные металлические кассеты, которые затем устанавливают в холодильную камеру с температурой -(60±5^oC) на 8-24 ч в зависимости от объема суспензии в ампулах и флаконах. Замороженный полуфабрикат подвергают лиофилизации. Продолжительность высушивания полуфабриката составляет 56-72 часа в зависимости от конструкции сублимационной установки и уровня материала во флаконе или ампуле. По окончании сушки флаконы с сухой вакциной укупоривают и закатывают алюминиевыми колпачками. Ампулы с сухой вакциной запаивают. Сухая вирусвакцина против ИЛТ птиц из штамма "О" представляет собой однородную пористую в виде таблетки или аморфную массу светло-коричневого цвета. Массовая доля влаги - не более 3%. Биологическая активность вируса в вакцине должна быть не меньше 5,2 Ig ЭИД₅₀/см³.

Полученная вирусвакцина против ИЛТ птиц имеет оптимальный компонентный состав (рецептуру), приведенный в таблице 1.

Содержание вируссодержащего материала в диапазоне 85,0-95,0 мас. % представляет собой эффективное количество антигена в предлагаемой вакцине.

Перед применением вирусвакцину разводят разбавителем, который представляет собой 5% раствор глицерина в фосфатно-буферном растворе, помеченный нейтральным пищевым красителем типа индигокармина, и предназначен для приготовления рабочего разведения вакцины при окулярном методе иммунизации птиц и доведения значения рН воды, близкого к нейтральному или слабощелочному, при применении вакцины методом выпаивания.

Предлагаемой вирусвакциной иммунизируют клинически здоровую птицу старше 15-суточного возраста. Птицу до 60-суточного возраста вакцинируют дважды с интервалом 14 суток. Иммунитет формируется через 21 сутки после прививки. Повторную вакцинацию проводят через каждые 6 месяцев.

Пример 2.

Проведены испытания вирусвакцины против ИЛТ птиц, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД₅₀/см³ - 85,0;
Защитная среда - до 100,0.

Определение иммуногенной активности вакцин проводили на цыплятах. Для этого предварительно приготовили разведение вакцин на разбавителе: для окулярного метода иммунизации так, чтобы 0,05 см³ (объем одной капли) содержал 1000 ЭИД₅₀, для орального - чтобы в 1 см³ содержалось 4000 ЭИД₅₀. В опыт взяли 50 цыплят и из них 20 иммунизировали окулярно (по 1 капле в глаз), 20 - орально (выпаивали по 1 см³), а 10 цыплят оставили для контроля. Через 18 суток после вакцинации подопытных и контрольных цыплят заражали вирулентным штаммом "Богатищевский" вируса ИЛТ птиц. Вирус вводили интратрахеально в дозе 500 ЭИД₅₀ в объеме 0,5 см³. За цыплятами наблюдали в течение 10 суток. Вакцина считается иммуногенной, если она предохраняет от заболевания ИЛТ по 16 цыплят из 20 вакцинированных. В контрольной группе должно заболеть с признаками ИЛТ не менее 8 цыплят из 10 зараженных. Результаты испытаний приведены в таблице 2, которые свидетельствуют о том, что все три серии вирусвакцины против ИЛТ птиц из штамма "О", изготовленные согласно вышеприведенной рецептуре, по всем параметрам соответствуют требованиям, заложенным в технические условия на препарат, и практически одинаково эффективны при окулярном и оральном применении на птице. В контрольных группах цыплят заболеваемость ИЛТ была 100%, при этом летальность составила 48,6%.

Пример 3.

Проведены испытания иммуногенной активности вирусвакцины против ИЛТ птиц, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД₅₀/см³ - 90,0;
Защитная среда - до 100,0.

Данную рецептуру предлагаемой вирусвакцины испытывали так, как описано в примере 2. Опыты проводили трехкратно. Результаты испытаний приведены в таблице 3, которые свидетельствуют о том, что все три серии вирусвакцины, изготовленные согласно вышеприведенной рецептуре против ИЛТ птиц из штамма "О", по всем параметрам соответствует требованиям, заложенным в технические условия на препарат, и практически одинаково эффективны при окулярном и пероральном применении на птице. У цыплят контрольных групп заболеваемость ИЛТ при этом была 100%, летальность по 3 опытам составила 45,8%.

Пример 4.

Проведены испытания иммуногенной активности вирусвакцины против ИЛТ птиц, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³ - 95,0;
Защитная среда - до 100,0.

Данную рецептуру предлагаемой вирусвакцины испытывали так, как описано в примере 2. Опыты проводили трехкратно. Результаты испытаний приведены в таблице 4, которые свидетельствуют о том, что все три серии вирусвакцины против ИЛТ птиц из штамма "О", изготовленные согласно вышеуказанной рецептуре, по всем параметрам соответствуют требованиям, заложенным в технические условия на препарат и практически одинаково эффективны при окулярном и оральном применении на птице. В контрольных группах цыплят заболеваемость ИЛТ была 100%, при этом летальность по 3 опытам составила 50,2%.

Пример 5.

Проведены сравнительные испытания иммуногенной активности вирусвакцины против ИЛТ птиц, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью 6,0 Ig ЭИД₅₀/см³ - 85,0;
Защитная среда - до 100,0,
и вирусвакцин против ИЛТ птиц, изготовленных на основе известных отечественных и зарубежных штаммов гомологичного вируса: вирусвакцины "Laryngo-vac" (Голландия), вирусвакцины из клона "НТ" штамма "ЦНИИПП" и вирусвакцины из штамма "ВНИИБП" (прототип). Изучение иммуногенной активности указанных вакцин проводили на SPF-цыплятах 25-суточного возраста. Всем цыплятам вводили орально и окулярно по одной дозе указанных выше вакцин. Оценку эффективности вакцин проводили по результатам контрольного заражения вирулентным штаммом "Богатищевский" вируса ИЛТ. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 5.

Данные таблицы 5 свидетельствуют о том, что при контрольном заражении вакцинированных цыплят вирулентным штаммом "Богатищевский" вируса ИЛТ только вирусвакцина из штамма "О" данной рецептуры индуцировала формирование иммунитета к ИЛТ у 100% вакцинированных цыплят.

Пример 6.

Проведены сравнительные испытания иммуногенной активности вирусвакцины против ИЛТ птиц, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³ - 90,0;
Защитная среда - до 100,0,
и вирусвакцин против ИЛТ птиц, изготовленных на основе известных отечественных и зарубежных штаммов гомологичного вируса: вирусвакцины "Laryngo-vac" (Голландия), вирусвакцины из клона "НТ" штамма "ЦНИИПП" и вирусвакцины из штамма "ВНИИБП" (прототип). Исследования проводили так, как описано в примере 5. Результаты исследований представлены в таблице 6.

Данные таблицы 6 свидетельствуют о том, что при контрольном заражении вакцинированных цыплят вирулентным штаммом "Богатищевский" вируса ИЛТ только вирусвакцина из штамма "О" данной рецептуры индуцировала формирование иммунитета к ИЛТ у 100% вакцинированных цыплят.

Пример 7.

Проведены сравнительные испытания иммуногенной активности вирусвакцины против ИЛТ птиц, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью 6,2 Ig ЭИД₅₀/см³ - 95,0;
Защитная среда - до 100,0,
и вирусвакцин против ИЛТ птиц, изготовленных на основе известных отечественных штаммов гомологичного вируса: вирусвакцины "Laryngo-vac" (Голландия), вирусвакцины из клона "НТ" штамма "ЦНИИПП" и вирусвакцины из штамма "ВНИИБП" (прототип). Исследования проводили так, как описано в примере 5. Результаты исследований представлены в таблице 7.

Данные таблицы 7 свидетельствуют о том, что при контрольном заражении вакцинированных цыплят вирулентным штаммом "Богатищевский" вируса ИЛТ только вирусвакцина из штамма "О" данной рецептуры индуцировала формирование иммунитета к ИЛТ 100% вакцинированных цыплят.

Пример 8.

Проведены испытания иммуногенной активности вирусвакцины против ИЛТ птиц, изготовленной так, как описано в примере 1, и содержащей, мас.%:
Вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса ИЛТ птиц, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД_50/см ³ - 90,0;
Защитная среда - до 100,0.

Испытания проведены в неблагополучном по ИЛТ птиц ГУП-АПК "Назарьево" Одинцовского района Московской области. Вирусвакциной против ИЛТ птиц из штамма "О" иммунизировано 240 тыс. голов птицы, из них 80 тыс. бройлеров и 160 тыс. кур-несушек и ремонтного молодняка породы Хайдекс белый. Вакцинацию проводили методом выпаивания согласно наставлению о применении препарата. Наблюдением за привитым поголовьем было установлено, что в неблагополучном птичнике выделение больной птицы продолжалось еще в течение 6 суток, после чего клинические признаки заболевания исчезли и физиологическое состояние цыплят нормализовалось. В птичниках, где признаки ИЛТ отсутствовали, отрицательных реакций на вакцинацию не замечено.

Благополучие по ИЛТ в хозяйстве сохраняется до настоящего времени.

Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:
- вирусвакцина против ИЛТ птиц, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
- при использовании предлагаемой вирусвакцины против ИЛТ птиц на основе штамма "О" достигается технический результат, предусмотренный задачей создания изобретения.

Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности "промышленная применимость".

Источники информации
1. Бабкин В.Ф. и др. Ветеринария. Респ. мiж. вiд. тематич. наук. зб. Киев, 1975, вып. 42, 14-19.

2. Авт. свид. СССР 129791; 30 h, 6; 1960 г.

3. Дутко Ю.С., Шевченко А.А. и др. Иммунологическая эффективность вирусвакцины против инфекционного ларинготрахеита кур. Ветеринария, 1991, 3, 32-34.

4. Малушко В. В., Соколов В.Д. и др. Опыт борьбы с инфекционным ларинготрахеитом. Птицеводство, 1982, 12, 21-23 (прототип).

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Вирусвакцина содержит вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О" вируса инфекционного ларинготрахеита птиц и защитную среду в эффективных соотношениях. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ВГНКИ под регистрационным наименованием "О 112-ДЕП". Вирус репродуцируют в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД₅₀/см³. Для получения защитной среды используют (отдельно или в комбинации) сахарозу, желатозу, лактозу и др. Вирусвакцина обладает высокой иммуногенной активностью, безвредностью и ареактогенностью при окулярном и оральном способах иммунизации. 4 з.п.ф-лы, 7 табл.

1. Вирусвакцина против инфекционного ларинготрахеита птиц, содержащая вируссодержащий материал из аттенуированного штамма гомологичного вируса, репродуцированного в чувствительной биологической системе, и защитную среду, отличающаяся тем, что из аттенуированных штаммов она содержит штамм вируса инфекционного ларинготрахеита птиц, коллекция ВГНКИ "О 112-ДЕП", в эффективном количестве. 2. Вирусвакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О 112-ДЕП" возбудителя инфекции, репродуцированного в 9-11-суточных эмбрионах SPF-кур с биологической активностью не меньше 6,0 Ig ЭИД₅₀/см³. 3. Вирусвакцина по п.2, отличающаяся тем, что она содержит вируссодержащий материал из аттенуированного штамма "О 112-ДЕП" возбудителя инфекции в количестве 85,0-95,0 мас.%. 4. Вирусвакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит защитную среду в количестве 5,0-15,0 мас.%. 5. Вирусвакцина по любому из пп.1-4, отличающаяся тем, что она содержит вируссодержащий материал из штамма "О 112-ДЕП" возбудителя инфекции и защитную среду в соотношении, мас.%:
Вируссодержащий материал - 85,0-95,0
Защитная среда - До 100,0ч