АНТИГЕЛЬМИНТНОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2003 года по МПК A61K31/00 A61K31/425 A61K31/495 

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к ветеринарной гельминтологии, и может быть использовано для лечения нематодозов животных.

Из известных средств для лечения нематодозов животных широко применяют пиперазин, нафтамон, тиабендазол, тетрамизол, фенбендазол, мебендазол, албендазол (I).

Недостатками указанных препаратов являются высокие терапевтические дозы и узкий спектр антигельминтного действия, высокая токсичность, наличие эмбриотропных свойств, их дефицит.

Наиболее близкими к заявляемому техническому решению являются левамизол и оксфендазол, которые применяют при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта и диктиокаулез легких овец в дозах соответственно 7,5 и 4,5 мг/кг.

К недостаткам препаратов следует отнести высокую общую токсичность у левамизола (2) и специфическую токсичность (наличие эмбриотропных свойств) у оксфендазола (3). Кроме того, оксфендазол не растворяется в воде, не смачивается водой и не образует взвеси.

Предлагаемое антигельминтное средство включает в себя действующие вещества - левамизол и оксфендазол - в уменьшенных дозах и вспомогательное поверхностно-активное вещество - поливинилпирролидон (ПВП) с молекулярной массой 10-15 тыс. - при соотношении компонентов 2,5:1,5:0,25.

По механизму антигельминтного действия левамизол и оксфендазол являются синергистами, воздействующими на энергетические процессы у гельминтов: левамизол подавляет гликолиз, а оксфендазол влияет на ферментативные процессы. В конечном итоге наступает паралич мускулатуры гельминтов и их гибель.

Поливинилпирролидон является поверхностно-активным веществом, дезинтоксикатором и обладает пролонгирующим действием (4).

Сопоставительное сравнение заявляемого технического решения с прототипом показывает, что заявляемое средство отличается тем, что действующие вещества левамизол и оксфендазол взяты в меньших дозах, составляющих одну треть от терапевтической дозы веществ, и дополнительно содержит вспомогательное поверхностно-активное вещество -поливинилпирролидон низкомолекулярный.

Антигельминтное средство в терапевтической дозе (4,25 мг/кг) и в 3 раза увеличенной (12,75 мг/кг) не обладает эмбриотропным действием. ЛД₅₀ для белых мышей 450 мг/кг. У овец и собак препарат в 3- и 5-кратных терапевтических дозах (13,5-22,5 мг/кг) не вызывает токсикозов.

Антигельминтное средство представляет собой белый порошок, хорошо смачивающийся водой и образующий с ней раствор-суспензию.

Препарат применяют для терапии стронгилятозов жвачных и токсокарозе собак в дозе 4,25 мг/кг, т.е. по ДВ 4 мг/кг.

В лабораторных и производственных условиях антигельминтное средство получают путем механического смешивания 2,5 части левамизола, 1,5 части оксфендазола и 0,25 части ПВП.

Для этих целей можно использовать смесители различных типов, обеспечивающие равномерное смешение компонентов.

Препарат применяют жвачным животным в дозе 4,25 мг/кг (по ДВ 4 мг/кг) в смеси с концентрированным кормом или в форме 4%-ной водной суспензии (0,1 мл/кг), которою готовят накануне дегельминтизации.

Препарат можно применять животным также в форме 3 и 2%-ных суспензий (соответственно 0,15 и 0,2 мл/кг).

Примеры конкретного исполнения
Пример 1. Разработка вариантов соотношений действующих веществ - левамизола и оксфендазола - и определение синергизма их антигельминтного действия при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта мелкого рогатого скота.

Разработано несколько комбинаций соотношений действующих веществ - левамизола и оксфендазола:
1) 4:2,5=6,5,
2) 3:1,875=4,875,
3) 2:1,25=3,25,
4) 3:2=5,
5) 2,5:1,5=4,
которые были испытаны на антигельминтную активность при стронгилятозах пищеварительного тракта овец и коз.

Опыт 1. В опыте использовано 25 ягнят, естественно инвазированных стронгилятами желудочно-кишечного тракта (нематодирусы и др. стронгиляты).

Каждая доза комбинированного препарата (всего испытано три дозы: 6,5; 4,875 и 3,25 мг/кг по ДВ) была испытана на 5 животных. Кроме того, для сравнения каждый препарат в отдельности был введен 5 ягнятам в рекомендуемой инструкцией дозе: левамизол в дозе 7,5 мг/кг, оксфендазол 4,5 мг/кг. Эффективность антигельминтных средств в испытуемых дозах определяли путем гельминтоовоскопических исследований фекалий по методу Фюллеборна до лечения и через 7-10 суток после обработки. Учитывали число яиц в 1 г фекалий.

Результаты опыта отражены в таблице 1.

В результате установлено, что от применения 1-ой и 2-ой комбинаций левамизола и оксфендазола (6,5 и 4,875 мг/кг) получен 100%-ный терапевтический эффект при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта овец. При применении 3-ей комбинации препаратов (3,25 мг/кг) из пяти ягнят излечено полностью от стронгилят 4 животных и одно - частично; ИЭ=99,9%.

От применения оксфендазола в терапевтической дозе 4,5 мг/кг излечены все животные от стронгилят (эффективность равна 100%), однако при применении левамизола в терапевтической дозе 7,5 мг/кг (перорально) из пяти ягнят полностью излечено четверо и один - частично; ИЭ=98,9%.

Опыт 2. Опыт проведен на 22 овцах и козах, естественно инвазированных стронгилятами желудочно-кишечного тракта (нематодироз и др.).

Животным первой подопытной группы (н=5) была введена 4-я комбинация левамизола и оксфендазола (5 мг/кг), второй группы (н=5) - пятая комбинация (2,5+1,5= 4 мг/кг), третьей группы (н=6) - левамизол в дозе 2,5 мг/кг, четвертой (= 6) - оксфендазол в дозе 1,5 мг/кг. Результаты опыта приведены в таблице 1.

Вследствие гельминтоовоскопических обследований овец и коз через 10 суток после лечения установлено, что 4 и 5 комбинации в суммарных дозах соответственно 5 и 4 мг/кг массы тела показали 100%-ную эффективность. Левамизол и оксфендазол в уменьшенных дозах соответственно 2,5 и 1,5 мг/кг оказались малоэффективными.

Таким образом, терапевтической дозой комбинации действующих веществ признано 4 мг/кг массы тела животного, т.е. на 2,5 части левамизола берется 1,5 части оксфендазола.

Пример 2. Разработка рецепта комплексного препарата.

С целью разработки оптимального варианта суспензии антигельминтного средства было изготовлено II вариантов взвеси, включающей установленное соотношение действующих веществ - левамизола и оксфендазола - и различные количества вспомогательного поверхностно-активного вещества ПВП.

Оптимальным вариантом признан рецепт суспензии антигельминтного средства, включащий
левамизола - 2,5 г
оксфендазола - 1,5 мг
ПВП - 0,25
воду - до 100 мл
т.е. 4,25 порошка препарата суспендируется в воде объемом до 100 мл.

Данная суспензия характеризуется следующими показателями в цилиндре емкостью 50 мл с делениями: через 1 час отстаивания суспензия просветляется на 1 деление, т.е. на 1 мл; через 3 часа на 1,2 деления; через 1 сутки на 3 деления; через 3 суток на 6 делений. Осадок на дне цилиндра после 3-суточного отстаивания суспензии полностью ресуспендируется после 10-12 нерезких встряхиваний-переливаний суспензии к пробке и обратно.

Таким образом, в результате разработки оптимального варианта суспензии установлено, что рецепт сухого порошка препарата включает
левамизола - 2,5 части
оксфендазола - 1,5 части
ПВП - 0,25 части
Все компоненты необходимо смешать в смесителе, чтобы получился однородный порошок.

Пример 3. Испытания антигельминтного средства при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта мелкого рогатого скота.

Опыт 1. С целью уточнения терапевтической дозы при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта мелкого рогатого скота препарат был испытан в дозе 4,25 мг/кг (по ДВ 4 мг/кг). Опыт был проведен на 23 подопытных животных при 7 контрольных. Антигельминтик задавали овцам и козам перорально после ночного голодания в форме 4%-ной суспензии (0,1 мл/кг).

Эффективность препарата определили по методу "критического теста", учитывая число яиц в 1 г фекалий до лечения и через 7-14 дней после обработки.

Результаты опыта представлены в таблице 2. Как видно из таблицы, препарат в дозе 4,25 мг/кг при нематодирозе проявил ЭЭ=94,4%, ИЭ=98,6%, при других стронгилятозах (гемонхоз, остертагиоз, буностомоз) его эффективность составила 100%.

Опыт 2. Проведено производственное испытание антигельминтного средства в терапевтической дозе 4,25 мг/кг (по ДВ 4 мг/кг) на 43 овцах и козах, спонтанно зараженных стронгилятами желудочно-кишечного тракта (таблица 2). Препарат введен животным в форме 2%-ной суспензии (0,2 мл/кг) перорально натощак, после ночного голодания. После введения препарата каких-либо отклонений в физиологическом состоянии животных не наблюдалось.

Обследование животных на зараженность стронгилятами после лечения было проведено через 7, 14 дней.

В результате установлено, что из 43 леченых животных единичные яйца нематодирусов и других стронгилят были обнаружены только в 2 разных пробах фекалий, все остальные животные были полностью излечены от стронгилят пищеварительного тракта.

Таким образом, антигельминтное средство в дозе 4,25 мг/кг (по ДВ 4 мг/кг) в форме 2%-ной суспензии-раствора (0,2 мл/кг) при индивидуальном пероральном применении показало высокую эффективность при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта мелкого рогатого скота: при нематодирозе ЭЭ= 92,9%, ИЭ= 99,5%; при других стронгилятозах (буностомоз, гемонхоз, остертагиоз) ЭЭ=97,7%, ИЭ=99,93%.

Пример 4. Испытание антигельминтного средства при диктиокаулезе овец.

Проведено 2 опыта по испытанию препарата при диктиокаулезе овец (таблица 3). Инвазированных животных, предназначенных для опыта, выявляли из отар при помощи гельминтоларвоскопических исследований фекалий по методу Бормана-Орлова в модификации Шильникова. При этом учитывали число личинок гельминтов в 1 г фекалий.

Первый опыт проведен на 9 овцах, разделенных на три равноценные группы по 3 животных в каждой. Овцам двух подопытных групп был задан индивидуально через рот антигельминтик в форме суспензии в дозах 4,25 и 5,31, т.е. по ДВ 4 и 5 мг/кг, а 3 овцы оставлены в качестве контроля (препарат не вводили).

Эффективность препарата определяли методом "критического теста", обследуя животных на наличие личинок паразитов и их количество до лечения и через 10 дней после применения препарата. В результате установлено, что все овцы, которым применяли препарат в дозах по ДВ 4 и 5 мг/кг, были свободными от гельминтов (эффективность равна 100%), в то время как у трех контрольных овец обнаружили в среднем в 1 г фекалий 19,3±3,5 личинок диктиокаул.

Второй опыт проведен на 20 овцах, спонтанно зараженных диктиокаулюсами. Животным первой подопытной группы (н=10) препарат был задан аналогичным способом в дозе 4,25 мг/кг (по ДВ 4 мг/кг), второй группы (н=5) в дозе 5,3 мг/кг (по ДВ 5 мг/кг), овцам третьей группы (н=5; контроль) препарат не назначали. Через 12 дней после дегельминтизации провели обследование всех овец на диктиокаулез.

В результате установлено: из 10 животных первой подопытной группы только у одной овцы обнаружили единичные личинки диктиокаулюсов в пробе фекалий (в среднем 0,2 экз. ); у 5 животных второй подопытной группы в пробах фекалий личинок не обнаружено; у 5 овец контрольной группы интенсивность инвазии составила 11,6±2,3 экз. личинок в среднем на животное.

Таким образом, препарат в дозе 4,25 мг/кг (по ДВ 4 мг/кг) при диктиокаулезе овец показал ЭЭ=90%, ИЭ=97,88%; в дозе 5,31 (по ДВ 5 мг/кг) его эффективность составила 100%.

Дозу антигельминтного средства 4,25 мг/кг (по ДВ 4 мг/кг) мы приняли за терапевтическую при диктиокаулезе овец, обеспечивающую высокий терапевтический эффект (ИЭ=97,88-100%).

Пример 5. Комиссионное испытание эффективности препарата при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта и диктиокаулезе овец.

Комиссионное испытание антигельминтика проведено в ОПХ "Ставрополец" Ставропольского края. Под опыт взяли 20 овцематок, спонтанно инвазированных нематодами желудочно-кишечного тракта и легких.

Сформировали 4 группы, пронумеровали и взвесили животных. Овцам 1-3 групп индивидуально перорально однократно ввели соответственно препараты - антигельминтное средство в дозе 4,25 мг/кг (по ДВ 4 мг/кг); левамизол в дозе 7,5 мг/кг по ДВ (прототип) - и оксфендазол в дозе 4,5 мг/кг по ДВ (прототип). Животным четвертой группы препараты не вводили и они служили контролем.

Фактические результаты опыта представлены в таблице 4.

В результате комиссионной проверки установлено следующее. При гельминтоово- и ларвоскопическом исследовании проб фекалий до введения препаратов установлена 100%-ная зараженность животных нематодами.

Через 13 дней после лечения в пробах фекалий подопытных овец личинок диктиокаул не было обнаружено (ЭЭ=100%). При стронгилятозах желудочно-кишечного тракта снижение интенсивности выделения яиц составило: в группе животных, получавших антигельминтное средство, 99,12%, левамизол 100%, оксфендазол 94,75%. При этом у животных контрольной группы регистрировали в среднем 282,6±88,79% яиц стронгилят.

Таким образом, результаты комиссионного испытания показали высокую антигельминтную активность антигельминтного средства при однократном пероральном применении в дозе 4,25 мг/кг (по ДВ 4 мг/кг) живой массы у овец, спонтанно инвазированных нематодами желудочно-кишечного тракта и диктиокаулюсами.

По эффективности препарат не уступает прототипам - левамизолу и оксфендазолу.

Пример 6. Испытание антигельминтного средства при токсокарозе собак (таблица 5).

Препарат испытали в дозе 4,25 мг/кг (по ДВ 4 мг/кг) на 5 щенках, спонтанно зараженных токсокарами. Параллельно 5 животным был введен базовый препарат тетрамизол в дозе 10 мг/кг двукратно через 24 часа. Оба препарата задавали щенкам аналогичным способом путем вольного скармливания в смеси с мясным фаршем.

Эффективность автгельминтиков определяли путем учета отошедших токсокар в течение трех суток после обработки, а также путем обследования животных на наличие яиц нематод в фекалиях через 7 суток после лечения.

В результате установлено, что антигельминтное средство в дозе 4,25 мг/кг (4 мг/кг по ДВ) однократно показало 100%ную эффективность при токсокарозе собак.

Аналогичная эффективность получена от применения прототипа тетрамизола в дозе 10 мг/кг двукратно.

Пример 7. Определение острой токсичности антигельминтного средства.

Острую токсичность препарата изучали на белых мышах и крысах. Антигельминтик вводили в форме суспензии перорально однократно мышам в дозах от 200 до 600 мг/кг по ДВ, крысам - от 450 до 1500 мг/кг массы тела. На каждую испытуемую дозу брали по 6 животных. После введения препарата за состоянием животных вели наблюдение в течение 7 дней, учитывали время появления симптомов отравления и их характер. Регистрировали сроки гибели животных.

Установлены параметры острой токсичности антигельминтного средства для беспородных белых мышей: ЛД₀=300,0; ЛД₁₆=345,0; ЛД₅₀=450,0; ЛД₈₄= 550,0 и ЛД₁₀₀= 600 мг/кг.

Для белых крыс ЛД₀=450,0; ЛД₅₀=700,0 и ЛД₁₀₀=1500 мг/кг. Расчетные данные по ЛД₅₀ были проверены экспериментально и полностью подтвердились в обоих случаях.

Препарат оказался более токсичным для мышей, чем для крыс.

Согласно классификации опасности веществ антигельминтное средство относится к веществам умеренно опасным.

Пример 8. Испытание препарата на переносимость.

Опыты проведены на взрослых овцах. По принципу аналогов были сформированы 3 группы: по 3 животных в каждой. Препарат задавали в 3, 5 и 10-кратных терапевтических дозах, т.е. антигельминтик был введен овцам перорально в форме суспензии в дозах 12, 20 и 40 мг/кг массы тела.

Установлено, что 3 и 5-кратные терапевтические дозы препарата не вызывают видимых признаков токсикоза, 10-кратные дозы вызывают небольшое кратковременное возбуждение у животных.

Пример 9. Определение хронической токсичности антигельминтного средства.

Опыт поставлен на 20 крысах массой 110-120 г. Препарат вводили животным перорально в дозе 1/10 от ЛД₅₀, т.е. 70 мг/кг в течение 2 месяцев.

На протяжении всего эксперимента вели наблюдение за животными и ежедневно их взвешивали.

В результате было установлено отсутствие кмулятивного эффекта у препарата, что подтверждается отсутствием гибели крыс.

Пример 10. Изучение местного действия антигельминтното средства.

Опыт проведен на 40 крысах, разделенных на 2 равноценные группы. Первая группа получила препарат в терапевтической дозе 4 мг/кг по ДВ, вторая - в трехкратно увеличенной терапевтической дозе 12 мг/кг по ДВ. Через 3, 6, 24 и 72 часа убивали по 5 животных из каждой группы и осматривали состояние слизистых оболочек пищеварительного тракта.

Признаки воспаления отсутствовали во всех случаях, что указывает на отсутствие раздражающего действия у препарата.

Пример 11. Изучение эмбриотропных свойств антигельминтного средства.

Эмбриотоксические и тератогенные свойства препарата изучены в терапевтической (4 мг/кг по ДВ) и трехкратно увеличенной терапевтической дозах (12 мг/кг по ДВ). На каждую дозу средства брали 36 крыс самок, разделенных на 4 равноценные группы по 9 животных в каждой.

I группа получала антигельминтное средство в период с 1 по 7 день эмбриогенеза, II - с 8 по 15 день, III - с 16 по 19 день эмбриогенеза.

Животные IV группы служили контролем и препарата не получали.

На 21 день беременности крыс убивали и полученный эмбриональный материал подвергали исследованию. Подсчитывали количество желтых тел беременности в яичниках, мест имплантанций, живых, мертвых и уродливых плодов, резорбций. Определяли пред-, постплантационную и общую гибель эмбрионов, размеры и массу плодов и плацент.

В результате проведенных исследований эмбриотоксических и тератогенных свойств у антигельминтного средства в терапевтической и трехкратно увеличенной терапевтической дозе не выявлено.

Источники информации принятые во внимание при составлении заявки
1. Инструкция о мероприятиях по предупреждению и ликвидации заболеваний животных гельминтозами. - М.: Информагротех, 1999 - 72 с.

2. Фетисов В.И. Бюл. Всес. ин-та гельминтологии. - М.,1974 - 13-14.

3. Delatour P., Debroye I., Lorgue G., Courtot D. Embryotoxici.te experimentale de l'oxfendasole chez la rat et la mouton // Res. Med. Bet.-1977. - V.153, N 10. - P.639-645.

4. Машковский М. Д. Лекарственные средства: В 2-х томах. Т.2-11-е изд. стер. - М.: Медицина, 1988. - С.103-104.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к ветеринарной гельминтологии, и может быть использовано для лечения нематодозов животных. Антигельминтное средство включает в себя действующие вещества - левамизол и оксфендазол - в уменьшенных дозах и вспомогательное поверхностно-активное вещество - поливинилпирролидон низкомолекулярный (мол.м. 10-15 тыс.) - при соотношении компонентов 2,5: 1,5:0,25. Препарат в терапевтической дозе 4,5 мг/кг (по ДВ 4 мг/кг) обладает высокой (98,6 - 100%) антигельминтной активностью при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта и диктиокаулезе мелкого рогатого скота и токсокарозе собак. Антигельминтик не обладает эмбриотоксическими и тератогенными свойствами. Его ЛД₅₀ для беспородных белых мышей при пероральном применении равна 450 мг/кг, для белых крыс 700 мг/кг. 5 табл.

Антгельминтное средство, содержащее левамизол, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит оксфендазол и поверхностно-активное вещество поливинилпирролидон низкомолекулярный при следующем соотношении компонентов: левамизол: оксфендазол: поливинилпирролидон низкомолекулярный - 2,5:1,5:0,25.