СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НЕОНАТАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИОННО-ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/577 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования локальной инфекционно-воспалительной патологии у доношенных новорожденных на первом месяце жизни.

Актуальность разработки способа определяется высокой частотой инфекционно-воспалительной патологии в структуре заболеваемости (удельный вес локальных форм гнойно-воспалительных заболеваний составляет 70-80%) новорожденных [7, 8]. Отмечаемый повсеместно рост числа неонатальных инфекций диктует необходимость поиска новых методов их прогнозирования.

Известен способ прогнозирования инфекционных заболеваний у новорожденных [2] путем определения в пуповинной крови активности сывороточного лизоцима, при его значении менее 40% прогнозируют риск неспецифических инфекционных заболеваний в первые 7 дней жизни ребенка.

Недостатки способа
1. Данный метод не позволяет определить точное содержание лизоцима, так как оценивает лишь его относительную активность.

2. Использование живой культуры бактерии в реакции определения сывороточного лизоцима приводит к большому количеству ложноотрицательных результатов, так как она нестабильна и со временем теряет свою активность.

3. При использовании данного метода возможны ложноположительные результаты, так как выброс лизоцима может быть вызван родовым стрессом.

4. Отсутствие данных о точности способа.

Известен способ диагностики локальных форм инфекционно-воспалительных заболеваний у доношенных новорожденных путем исследования показателей содержания в сыворотке периферической крови интерлейкина 6 (IL-6) методом иммуноферментного анализа и иммуноглобулина М (Ig М) методом радиальной иммунодиффузии [4], при инфекционно-воспалительной патологии выявлено снижение показателей IL-6 и повышение уровня Ig М.

Недостатки способа
1. Исследование IL-6 и IgM выполняется для диагностики уже развившихся неонатальных инфекций, т.к. интерлейкин является регулятором остро-фазного воспалительного ответа, а IgM вырабатывается в результате первичного иммунного ответа [1].

2. Отсутствие прогноза не дает возможности предотвратить инфекционно-воспалительную патологию.

3. Невозможно говорить о низких показателях интерлейкина IL-6, т.к. нормальными показателями являются от 0 до 50 ед/мл [1].

4. Дороговизна используемого метода (стоимость обследования 1 ребенка свыше 5 долларов).

5. Субъективность оценки содержания IgM с помощью радиальной иммунодиффузии.

Наиболее близким по техническому решению является способ прогнозирования инфекционно-воспалительной патологии у недоношенных новорожденных путем определения содержания IgE в периферической крови новорожденных на 3 сутки жизни и при уровне IgE выше 3,5 МЕ/мл прогнозируют возникновение инфекционно-воспалительной патологии [3].

Недостатки способа
1. Прогнозируются неонатальные инфекции только у недоношенных новорожденных, у которых всегда присутствуют иммунологические нарушения [6].

2. Повышение уровня IgE в крови отмечается при паразитарных инфекциях, мало характерных для новорожденных.

3. Повышение уровня IgE отмечается при ряде иммунодефицитных состояний генетического генеза (дисгаммаглобулинемии, синдроме Вискотта-Олдрича и миеломной болезни), что снижает точность способа.

4. Возможность большого процента ложноотрицательных результатов, так как IgE может связываться с поверхностью реагирующих клеток и уровень его в крови при этом не повышается.

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Техническим решением заявленного способа является прогнозирование локальной инфекционно-воспалительной патологии неонатального периода у доношенных новорожденных путем определения в периферической крови на 5-7 день жизни относительного содержания CD4+CD95+ лимфоцитов и при их значении 4,5% и более прогнозируют возникновение локальных неонатальных инфекций на первом месяце жизни с точностью 90,0%.

Определение CD95 молекул на поверхности С04+лимфоцитов расценивается как показатель активированных Т-хелперов, готовых воспринимать сигнал от FasL молекул и перейти в апоптоз. Ранее повышение содержания CD4+CD95+ отмечено в крови женщин с внутренним эндометриозом [5]. Вероятно, высокий уровень CD95 позитивных клеток у детей с развивающейся в неонатальном периоде инфекционной патологией может быть обусловлен гиперактивацией иммунной системы плода при внутриутробном развитии.

Новизна способа
Взаимосвязь содержания CD4+CD95+ лимфоцитов в крови новорожденных на 5-7 день с развитием у них неонатальных инфекций прослежена впервые.

Отличительные признаки способа
Определение в периферической крови доношенного новорожденного в возрасте 5-7 дней жизни относительного содержания CD4+CD95+ лимфоцитов и установление прогностического параметра 4,5% и более, при котором развивается локальная инфекционно-воспалительная патология у детей в неонатальном периоде.

Способ осуществляется стандартно следующим образом [9].

1) Выделение лимфоцитов из периферической венозной крови осуществляется по стандартной методике.

2) 100 мкл лимфоцитов в концентрации 1•10⁶ кл/мл инкубируют с 20 мкл моноклональных анти-СD4, меченных FITC, и с 20 мкл моноклональных анти-CD95, меченных РЕ, в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего клетки отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя процентное содержание CD4+CD95+ клеток в лимфоцитарном гейте. Результат вычисляется прибором автоматически.

Существо способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Ребенок А. родился от I беременности, протекавшей на фоне хронического пиелонефрита, осложнившейся угрозой невынашивания. Роды в 40 недель. Оценка по шкале Апгар 8-9 баллов. Состояние при рождении удовлетворительное. На 5 сутки в периферической крови определялось содержание CD4+CD95+ клеток, которое составило 18,2%, что выше заявляемого (4,5%) уровня. Дан прогноз развития неонатальной инфекционно-воспалительной патологии. Клинически ребенок здоров. На 15 сутки жизни состояние ребенка ухудшилось, появилась одышка, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, при аускультации мелкопузырчатые хрипы над поверхностью легких. При рентгенологическом обследовании выявлены инфильтративные тени. Поставлен диагноз: пневмония новорожденного. Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 2. Ребенок В. родился от II беременности, протекавшей на фоне анемии, осложнившейся поздним гестозом, многоводием. Роды в 39 недель. Оценка по шкале Апгар 8-9 баллов. Состояние при рождении удовлетворительное. На 5 сутки в периферической крови определялось содержание CD4+CD95+ клеток, которое составило 4,5%, что соответствует заявляемому параметру. Дан прогноз развития неонатальной инфекционно-воспалительной патологии. На 10 сутки у ребенка пальпируется пупочная вена, выявлены гиперемия и отечность пупочного кольца. Поставлен диагноз: Флебит пупочной вены. Омфалит. Прогноз по заявляемому способу подтвердился.

Пример 3. Ребенок К. родился от I беременности, протекавшей на фоне вегето-сосудистой дистонии по гипотоническому типу, осложнившейся угрозой невынашивания. Роды в 39 недель. Оценка по шкале Апгар 8-9 баллов. Состояние при рождении удовлетворительное. На 5 сутки в периферической крови определялось содержание CD4+CD95+ клеток, которое составило 1,9%, что ниже заявляемого параметра. Прогнозировалось отсутствие неонатальной инфекционно-воспалительной патологии. На 5 сутки ребенок был выписан домой. При дальнейшем наблюдении на первом месяце жизни инфекционно-воспалительной патологии не выявлено. Прогноз по заявленному способу подтвердился.

Преимущества способа
1. Возможность прогнозирования локальной неонатальной нфекционно-воспалительной патологии до появления клинических признаков заболевания.

2. Позволяет своевременно провести профилактические мероприятия и предотвратить возникновение или тяжелое течение неонатальной инфекции.

3. Заявляемый способ не требует больших временных затрат и осуществляется 1 ч 40 мин.

4. Предлагаемый способ имеет высокую точность 90%.

Указанным способом было обследовано 50 доношенных новорожденных.

Результаты исследования приведены в таблице.

ЛИТЕРАТУРА
1. Кетлинский С.А., Калинина Н.М. Иммунология для врачей // С-Пб. 1998 г. - С.110.

2. Мальцева О.А. Способ прогнозирования инфекционных заболеваний у новорожденных. Патент 2051386. - О.Б. "Изобретения". - 1995. - 36, II ч. - С. 265.

3. Петрова А. М., Емельянов Г.А., Жерносек Н.А. Способ прогнозирования инфекционно-воспалительной патологии у недоношенных новорожденных. Автор. свидетельство 1778706. - О.Б. "Изобретения". - 1992. - 44. - С.148.

4. Пинаева А. Р. Состояние цитокиновой системы и клеточного иммунитета при инфекционно-воспалительных заболеваниях у новорожденных детей Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. - М., 2002, - 23 с.

5. Сотникова Н. Ю. , Соловьева Г.А., Анциферова Ю.С., Букина Е.А. Особенности активации лимфоцитов на системном и локальном уровнях у женщин с внутренним эндометриозом // Мед. иммунология. - 1999. - т.1. - 3-4. - С. 42-43.

6. Торубарова Н.А., Кошель И.В., Яцык Г.В. Кроветворение плода и новорожденного // М.: Медицина, - 1993. С.95-117.

7. Шабалов Н.П. Неонатология // С-Пб.: Специальная литература, - 1 т., 1995, 494 с.

8. Яцык Г.В. Руководство по неонатологии. М., 1998. 400 с.

9. Boyum A. Isolation of mononuclear cell and granulocytes from human blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Lab. Invest. - 1968. - v.21. - 97. - p.77.

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования локальной инфекционно-воспалительной патологии у доношенных новорожденных на первом месяце жизни. Сущность способа состоит в том, что в возрасте 5-7 дней жизни определяют содержание CD4+CD95+ лимфоцитов и при его значении, равном 4,5% и более, прогнозируют возникновение инфекционно-воспалительных заболеваний в неонатальном периоде. Техническим результатом является возможность прогнозирования с высокой точностью локальной неонатальной инфекционно-воспалительной патологии до появления клинических признаков заболевания. 1 табл.

Способ прогнозирования локальных форм инфекционно-воспалительной патологии у доношенных нововрожденных путем исследования периферической крови, отличающийся тем, что в возрасте 5-7 дней жизни определяют содержание CD4+CD95+ лимфоцитов и при его значении, равном 4,5% и более, прогнозируют возникновение инфекционно-воспалительных заболеваний в неонатальном периоде.