СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ У ДЕТЕЙ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования иммунодефицитного состояния (ИДС) у детей на первом году жизни.

Применение заявляемого способа позволит прогнозировать при рождении иммунодефицитное состояние и осуществить его раннюю коррекцию, предупредить тяжелые формы ИДС.

Актуальность разработки заявляемого способа определяется тем, что состояние здоровья ребенка в значительной мере определяется состоянием иммунной системы. По данным К.А.Лебедева и И.Д.Понякиной (1990) вторичное иммунодефицитное состояние выявляется у 17% детей первого года жизни. Однако диагностика иммунодефицита осуществляется поздно, при развитии клинических признаков инфекционно-воспалительных заболеваний.

Известен способ диагностики иммунодефицитного состояния у детей периода новорожденности с инфекционно-воспалительными заболеваниями по определению состояния гомокоагуляции. Наличие гипокоагуляции позволяет диагностировать иммунодефицитное состояние.

Недостатки способа.

1. Иммунодефицитное состояние констатируется по изменению параметров, не отражающих состояние иммунной системы, а именно по показателям свертываемости крови (хронометрической гипокоагуляции).

2. Способ применим только в диагностике иммунодефицитов в группе детей с инфекционно-воспалительными заболеваниями.

3. Точность способа составляет 55%.

4. Поздний диагноз при уже сформировавшемся заболевании.

5. Инвазивен.

Наиболее близким по техническому решению к заявляемому способу является способ диагностики отклонений в иммунном статусе новорожденных детей путем исследования в пуповинной крови двух иммунологических параметров - фактора угнетающего миграцию лейкоцитов (ФУМЛ) и уровня JgM с точностью 86%.

Недостатками способа - прототипа являются:
1. метод применим для выделения групп риска ИДС,
2. по предлагаемым иммунологическим параметрам можно диагностировать нарушение лишь у детей с внутриутробным инфицированием, у остальных новорожденных изменения этих параметров не отмечается,
3. не оценивается состояние нейтрофильного звена иммунной системы, которое у новорожденных и детей раннего возраста имеет высокую функциональную активность.

Указанные недостатки могут быть устранены в предлагаемом способе.

Цель заявляемого способа - прогноз развития иммунодефицитного состояния у новорожденных путем определения относительного содержания Т-лимфоцитов (Е-РОЛ), нейтрофилов с рецепторами к C₃ компоненту комплемента (ЕАС-РОН) и НСТ-активности нейтрофилов пуповинной крови. Тотчас после рождения определяются перечисленные параметры и при их снижении Е-РОЛ < 19%,ЕАС-РОН < 15%, НТС < 19% прогнозируется иммунодефицитное состояние с точностью 93%.

Эти показатели в настоящее время используются в клинической практике в комплексе с другими иммунологическими тестами первого и второго уровня (которых более двадцати) для характеристики иммунной системы взрослых и детей. Показатели Т-клеточного и нейтрофильного звеньев иммунитета выбраны в качестве маркеров, так как в раннем неонатальном периоде они отражают состояние собственных функциональных возможностей иммунной системы ребенка, в то время как показатели В-звена в большей степени связаны с состоянием организма матери (трансплацентарный переход Jg). Оценка предлагаемых критериев (снижение в пуповинной крови Е-РОЛ < 19%, свидетельствующее о выраженном угнетении Т-звена иммунитета; снижение ЕАС-РОЛ < 15% и НТС < 19%, характеризующее значительное угнетение А-звена иммунной системы) в комплексе достаточна для прогноза развития ИДС у ребенка на первом году жизни.

Новизна способа.

Возможность прогнозирования ИДС по трем параметрам пуповинной крови: Е-РОЛ, ЕАС-РОН и НСТ у детей первого года жизни установлена впервые.

Существенные отличия.

Установление в пуповинной крови уровня Е-РОЛ < 19%, ЕАС-РОН < 15%, НСТ < 19%, при которых прогнозируется ИДС на первом году жизни.

Способ осуществляется следующим образом. В гепаринизированную пробирку забирают 1 мл крови из вены пуповины (из расчета 25 ед. гепарина на 1 мл крови) и добавляют равный объем среды 199. В пробирку подслаивают на дно 1 мл фиколл-верографина с градиентом плотности 1,077. Клетки разделяют методом скоростного центрифугирования при 200 в течение 45 минут. После центрифугирования взвесь лимфоцитов собирают на границе раздела среда 199 - фиколл-верографин. Клеточную суспензию отмывают средой 199 и доводят концентрацию клеток до 2 х 10⁹/мл. Определение относительного содержания Т-лимфоцитов проводится в стандартном тесте Е-розеткообразования, относительного содержания нейтрофилов с рецепторами к C₃ компоненту комплемента - в тесте ЕАС-розеткообразования, гистохимический тест восстановления нитросинего тетразолия гранулоцитами проводится также по стандартной методике.

Для объективизации параллельно с применением заявляемого способа проводилось клиническое наблюдение и обследование детей в течение первого года жизни с повторным иммунологическим контролем. Развитие иммунодефицита проявлялось клинически инфекционно-воспалительными заболеваниями.

Способ может быть использован в условиях перинатальных центров и родильных домов. Сущность способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Ребенок А родился от молодых родителей, от 1 беременности, протекавшей на фоне хронического пиелонефрита, осложнившейся нефропатией 1 степени. Роды своевременные, оценка по шкале Апгар 8 - 9 баллов. В первые сутки жизни общее состояние удовлетворительное, клинических признаков инфекционной патологии нет. Содержание Е-РОЛ в пуповинной крови 20%, ЕАС-РОН - 14%, НСТ - 18%. Прогноз ИДС. В раннем неонатальном периоде диагностирован псевдофурункулез. На первом году жизни перенес дважды ОРВИ, острый бронхит, инфекцию мочевыводящих путей.

Пример 2. Ребенок Б родился от молодых родителей. Беременность вторая, протекала на фоне гипоталямического синдрома, ожирения 2 степени, нефропатии 2-3 степени. Роды в 40 недель, вторые. Оценка по шкале Апгар 7 - 8 баллов. В первые сутки жизни признаков инфекционной патологии нет. Содержание Е-РОЛ в пуповинной крови 12%, ЕАС-РОН - 9%, НСТ - 3%. Прогноз ИДС. На первом месяце жизни развился остеомиелит, затем у него появилась флегмона, на втором месяце жизни развился сепсис. В течение первого года перенес тяжелую бронхопневмонию, дважды болел ОРВИ. Прогноз ИДС подтвержден.

Пример 3. Ребенок В родился от молодых, здоровых родителей. Беременность 1, протекала благоприятно. Роды своевременные. Оценка по Апгар 8 - 9 баллов. Содержание в пуповинной крови Е-РОЛ 54%, ЕАС-РОН 38%, НСТ 29%. Прогнозируется отсутствие ИДС. В периоде новорожденности не болел. На первом году жизни перенес одно острое респираторное заболевание, которое протекало в легкой форме. Прогноз подтвердился.

Преимущества способа:
1. возможность прогнозировать ИДС уже при рождении, что дает возможность провести профилактику развития ИДС,
2. может быть использован у всех новорожденных в качестве селективного скрининга,
3. неинвазивен, нетравматичен,
4. не требует дорогостоящего оборудования и реактивов,
5. высокая точность способа - 93%.

Результаты исследований приведены в таблице.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии. Способ заключается в том, что в пуповинной крови детей определяют относительное содержание Т-лимфоцитов (Е-РОЛ), нейтрофилов с рецепторами к С₃ компоненту комплемента (ЕАС-РОН) и НСТ-активности нейтрофилов и при их значениях соответственно менее 19, 15 и 19% прогнозируют развитие иммунодефицитного состояния на первом году жизни. Изобретение с точностью до 93,0% позволяет уже при рождении прогнозировать ИДС у детей первого года жизни и соответственно провести адекватную профилактику. 1 табл.

Способ прогнозирования иммунодефицитного состоянии (ИДС) у детей на первом году жизни по исследованию пуповинной крови, отличающийся тем, что определяют относительное содержание Т-лимфоцитов, (Е-РОЛ), нейтрофилов с рецепторами к С₃ компоненту комплемента (ЕАС - РОН) и спонтанную НСТ-активность и при их значениях Е-РОЛ менее 19%, ЕАС - РОН менее 15%, НСТ менее 19% прогнозируется развитие ИДС.