СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ С ПЕРИНАТАЛЬНЫМИ ПОРАЖЕНИЯМИ ЦНС Российский патент 2004 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и позволяет оценить эффективность лечения перинатальных поражений ЦНС, а именно внутрижелудочковых кровоизлияний I ст, у доношенных новорожденных детей в течение неонатального периода.

Перинатальные поражения ЦНС в структуре неврологических заболеваний у доношенных новорожденных составляют 60-80% и являются одной из основных причин инвалидизации детей [2]. Актуальность предлагаемого способа определяется отсутствием достаточно точных способов оценки эффективности проводимого лечения.

Известен способ оценки эффективности лечения детей с перинатальными поражениями ЦНС. Эффективность проводимого лечения оценивали по положительной эмоциональной реакции ребенка во время процедуры, окраске и температуре кожных покровов, улучшению сна и аппетита, по увеличению массы тела за процедуру [4].

Недостатки способа:

1. Использование способа оценки эффективности лечения у детей в возрасте от 1 до 9 месяцев жизни.

2. Не учитывается исходно различная масса тела ребенка, что существенно влияет на темпы соматического развития.

3. Точность способа неизвестна.

Известен способ оценки эффективности лечения неврологических заболеваний у детей путем исследования в сыворотке крови активности нейроспецифической энолазы. При значении показателя активности нейроспецифической энолазы ниже 30 нг/мл лечение оценивают как эффективное [1].

Недостатки способа:

1. Не указан возраст обследуемых детей.

2. Не уточнена неврологическая патология.

3. Способ исследования требует специального оборудования и дорогостоящих реактивов.

4. Высокая активность нейроспецифической энолазы выявляется только при глубоких структурно-функциональных и деструктивных нарушениях в мембранах нервных клеток.

5. Точность способа отсутствует.

Наиболее близким по техническому решению является способ оценки эффективности лечения перинатальных поражений ЦНС у новорожденных путем исследования в крови нейроспецифической лейцинаминопептидазы (ЛАП). При снижении активности лейцинаминопептидазы с 7,2±0,3 до 4,9±0,6 Ед/л лечение оценивают как эффективное с точностью 74% [5].

Недостатки способа:

1. Активность данного фермента позволяет выявить структурные нарушения (демиелинизацию) в нервных клетках.

2. Высокая активность печеночной лейцинаминопептидазы при наличии сопутствующей патологии печени у ребенка может привести к увеличению показателя нейроспецифической лейцинаминопептидазы.

3. Требует дорогостоящих реактивов.

4. Точность способа составляет 74%.

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Техническим результатом данного изобретения является повышение точности способа оценки эффективности лечения новорожденных детей с перинатальными поражениями ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст., путем определения концентрации лактата в цельной крови на 1-е, 7-е (7-е сутки жизни являются окончанием раннего неонатального периода и характеризуются завершением транзиторных состояний новорожденных [7]) и 14-е (14-е сутки жизни - в этот срок происходит трансформация субэпендимальной гематомы в кисту [6], что свидетельствует об эффективном лечении на данном этапе) сутки жизни. При снижении исходной концентрации лактата (1-е сутки) с 2,2-5,0 ммоль/л (исходный уровень лактата (2,2-5,0 ммоль/л) при перинатальных поражениях ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст. у доношенных новорожденных установлен заявителями в лаборатории клинической биохимии на основании обследования 100 детей в детском реанимационном отделении и детском обсервационном отделении ГУ “Ивановский НИИ материнства и детства им. В. П. Городкова МЗ РФ”) до 0,4-2,0 ммоль/л (уровень лактата от 0,4 - 2,0 ммоль/л после лечения перинатальных поражений ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст. у доношенных новорожденных оценивается нами как показатель нормы и установлен заявителями в лаборатории клинической биохимии на основании обследования 100 детей в детском реанимационном отделении и детском обсервационном отделении ГУ “Ивановский НИИ материнства и детства им. В.Н. Городкова МЗ РФ”) на 7-е или 14-е сутки жизни лечение оценивается как эффективное с точностью 92%. При отсутствии снижения или при увеличении концентрации лактата лечение оценивается как неэффективное.

Способ осуществляется следующим образом.

Концентрацию лактата у новорожденных до и после лечения определяют в цельной периферической крови. Забор крови производится натощак в любое время суток.

Определение лактата проводят по стандартному методу [8]:

0,5 мл крови вносят в пробирку, содержащую 1,0 мл 0,6 М холодной перхлорной кислоты. Тщательно перемешивают стеклянной палочкой и оставляют при комнатной температуре на 10 мин. Центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Для определения содержания лактата используют супернатант (он может хранится в течение 24 часов при температуре +5°С).

Ферментативную реакцию проводят следующим образом. В химическую пробирку вносят 2 мл буфера (гидразин-глициновый буфер, рН 9,0-9,5. В 100 мл буфера содержится 7,5 г глицина, 5,2 г гидрозин-сульфата и 0,2 г ЭДТА; все это растворяется в 45 мл 2 н. NaOH, объем смеси доводят бидистиллированной водой до 100 мл). К буферу добавляют 0,2 мл супернатанта, 0,2 мл НАД и 0,02 мл ЛДГ. В контрольную пробирку вносят 2,0 мл буфера, 0,1 мл Н₂O, 0,1 мл 0,6 М перхлорной кислоты, 0,2 мл НАД и 0,02 мл ЛДГ. Содержимое пробирок перемешивают стеклянной палочкой и инкубируют 1 час при температуре 25°С.

Измерение экстинкций проводят на спектрофотометре при длине волны 365 нм в кювете 1 см против воздуха.

Расчет содержания лактата производят по формуле

C_лактат=(E₂-E₁)x 10,1,

где Е₁ - оптическая плотность контроля;

Е₂ - оптическая плотность пробы;

10,1 - коэффициент пересчета, включающий конечный объем пробы, коэффициент разведения по отношению к 1 литру крови и коэффициент микромолярной экстинкций НАДН₂ при длине волны 365 нм и кювете шириной 1 см.

Концентрация лактата выражена в ммоль/л.

С целью сокращения времени проведения методики и использования минимального объема крови (1 капля) определение лактата проводят прибором "Accusport", "Boehringer mannheim", Германия: тест-полоску "ВМ-Lactate" "Boehringer mannheim", Германия, вводят в желоб измерительного поля прибора, одну каплю крови наносят на желтую подушечку тест-полоски (тест-полоски стандартизированы фирмой-изготовителем), закрывают крышку измерительного отделения прибора. Через 60 с результаты измерения появляются на дисплее.

Концентрация лактата выражается в ммоль/л. Длительность проведения теста 60 секунд.

Отличительные признаки способа. Предлагается оценивать эффективность любого лечения перинатальных поражений ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст. у доношенных новорожденных путем определения концентрации лактата в крови на 1-е, 7-е и 14-е сутки жизни. При снижении исходной концентрации лактата (1-е сутки) с 2,2-5,0 до 0,4-2,0 ммоль/л на 7-е или 14-е сутки жизни лечение оценивается как эффективное, при отсутствии снижения или при увеличении концентрации лактата - как неэффективное.

Новизна способа заключается в том, что впервые предлагается показатель “лактат крови” для оценки эффективности лечения перинатальных поражений ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст. у доношенных новорожденных.

По изменению концентрации лактата в крови на 7-е и 14-е сутки жизни оценивают эффективность лечения перинатальных поражений ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст. у доношенных новорожденных.

Впервые установлены исходные концентрации лактата у доношенных новорожденных с внутрижелудочковыми кровоизлияниями I ст. - 2,2-5,0 ммоль/л.

Лактат - конечный продукт анаэробного гликолиза, образующийся в результате восстановления пировиноградной кислоты [3]. Для оценки эффективности лечения перинатальных поражений ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст. у доношенных новорожденных данный показатель используется впервые.

Ранее показатель лактата использовался для диагностики гипоксии [3].

Диагноз перинатальных поражений ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст. у доношенных новорожденных верифицирован данными клинического обследования и нейросонографии.

Существо способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Новорожденная П., родилась в срок гестации 38 недель, с оценкой по шкале Апгар 7-8 баллов, массой тела 2600 г, в состоянии средней тяжести. При обследовании установлено: бледность кожных покровов, мышечная дистония, тремор конечностей и подбородка при беспокойстве. По данным нейросонографии выявлено: умеренное снижение структурности паренхимы, умеренный перивентрикулярный отек. Неоднородное расширение сосудистого сплетения слева с гиперэхогенным образованием с неровными контурами. На основании клинических данных и данных нейросонографии поставлен диагноз: внутрижелудочковое кровоизлияние I ст. слева.

Согласно предлагаемому способу в крови ребенка в первые сутки жизни проведено исследование содержания лактата, которое составило 2,2 ммоль/л, что соответствовало уровню лактата при внутрижелудочковом кровоизлиянии I ст.

По способу-прототипу содержание лейцинаминопептидазы (ЛАП) в крови ребенка соответствовало 5,0 Ед/л, что свидетельствовало о перинатальном поражении ЦНС без уточнения формы заболевания.

На 7-е сутки жизни, после проведенной стандартной медикаментозной терапии, состояние ребенка оценивалось как удовлетворительное, движения стали активные, мышечный тонус восстановился. Согласно предлагаемому способу в крови новорожденного проведено определение содержания лактата, которое составило 1,8 ммоль/л (при норме 0,4-2,0 ммоль/л), что свидетельствовало об эффективности лечения.

По способу-прототипу содержание лейцинаминопептидазы (ЛАП) в крови ребенка соответствовало 5,3 Ед/л, что свидетельствовало о перинатальном поражении ЦНС без уточнения формы заболевания.

На 14-е сутки жизни на фоне проведенной стандартной медикаментозной терапии состояние ребенка удовлетворительное, физиологические рефлексы вызываются, мышечный тонус удовлетворительный. Согласно предлагаемому способу в крови новорожденного проведено определение содержания лактата, которое составило 1,2 ммоль/л (при норме 0,4-2,0 ммоль/л), что свидетельствовало об эффективности проводимого лечения.

По способу-прототипу - содержание лейцинаминопептидазы (ЛАП) 5,3 Ед/л (при норме 4,9±0,6 Ед/л).

Заключение: лечение оценено как эффективное, что подтвердилось клиническими данными и положительной динамикой выявленных изменений при нейросонографии: сосудистое сплетение слева с ровными контурами однородной структуры.

Таким образом, согласно предлагаемому способу лечение оценено как эффективное, согласно способу-прототипу отклонений от нормы не выявлено.

Пример 2. Новорожденная А., родилась в срок гестации 39 недель с оценкой по шкале Апгар 6-7 баллов, массой 2150 г в состоянии средней тяжести. При обследовании установлено: сниженная двигательная активность, бледность кожных покровов, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, мышечная гипотония, гипорефлексия. По данным нейросонографии выявлено снижение структурности паренхимы мозга, в субэпендимальной зоне справа гиперэхогенное образование, усилена пульсация сосудов. На основании клинических данных и данных нейросонографии поставлен диагноз: внутрижелудочковое кровоизлияние I ст. справа.

Согласно предлагаемому способу, в крови новорожденного проведено исследование содержания лактата, которое составило 3,6 ммоль/л, что соответствовало уровню лактата при внутрижелудочковом кровоизлиянии I ст.

По способу-прототипу - содержание лейцинаминопептидазы (ЛАП) составило 5,8 Ед/л, что свидетельствовало о перинатальном поражении ЦНС без уточнения формы заболевания.

На 7-е сутки жизни, несмотря на проводимую стандартную медикаментозную терапию, состояние ребенка ухудшилось, появились частые апноэ, “мраморность” кожных покровов, тонические судороги, брадиаритмия, что свидетельствовало о прогрессировании процесса и переходе внутрижелудочкового кровоизлияния I ст. в более тяжелую стадию.

При повторном нейросонографическом исследовании выявлено снижение структурности паренхимы мозга, расширение правого желудочка. В полости правого желудочка гиперэхогенные тени, усилена пульсация сосудов мозга, что свидетельствовало о трансформации внутрижелудочкового кровоизлияния I ст. во внутрижелудочковое кровоизлияние II ст.

На 7-е сутки согласно предлагаемому способу в крови новорожденного проведено повторное исследование содержания лактата, которое составило 5,2 ммоль/л (при норме 0,4-2,0 ммоль/л), что соответствовало уровню лактата при внутрижелудочковом кровоизлиянии II ст.

По способу-прототипу активность лейцинаминопептидазы (ЛАП) 6,0 Ед/л (при норме 4,9±0,6 Ед/л), что свидетельствовало о перинатальном поражении ЦНС без уточнения формы заболевания.

На 14-е сутки состояние ребенка средней тяжести, двигательная активность снижена, бледность кожных покровов, акроцианоз, сниженный мышечный тонус, физиологические рефлексы снижены. Согласно предлагаемому способу в крови новорожденного проведено исследование содержания лактата, которое составило 5,1 ммоль/л (при норме 0,4-2,0 ммоль/л).

По способу-прототипу содержание лейцинаминопептидазы (ЛАП) в крови ребенка соответствовало 6,0 Ед/л, что свидетельствовало о перинатальном поражении ЦНС без уточнения формы заболевания.

Заключение: лечение оценено как неэффективное, что подтвердилось клиническими данными и результатом повторной нейросонографии: увеличением правого желудочка, сохранием гиперэхогенных теней.

Таким образом, согласно предлагаемому способу лечение оценено как неэффективное, по способу-прототипу лечение оценено также как неэффективное.

Пример 3. Новорожденный К., родился в сроке гестации 38 недель путем операции кесарева сечения с оценкой по Апгар 5-6 баллов, массой при рождении 2250 г в состоянии средней тяжести. При обследовании установлено: низкая двигательная активность, цианоз носогубного треугольника, акроцианоз, мышечная гипотония, угнетение физиологических рефлексов, увеличение размеров печени. По данным нейросонографии выявлено снижение структурности паренхимы мозга, в субэпендимальной зоне слева гиперэхогенное образование, усилена пульсация сосудов. На основании клинических данных и данных нейросонографии поставлен диагноз: внутрижелудочковое кровоизлияние I ст. справа. При биохимическом исследовании крови выявлено повышенное содержание непрямого билирубина.

Согласно предлагаемому способу в крови новорожденного проведено исследование содержания лактата, которое составило 3,3 ммоль/л, что соответствовало уровню лактата при внутрижелудочковом кровоизлиянии I ст.

По способу-прототипу - содержание лейцинаминопептидазы (ЛАП) составило 6,2 Ед/л, что свидетельствовало о перинатальном поражении ЦНС без уточнения формы заболевания.

На 7-е сутки жизни на фоне проводимой стандартной медикаментозной терапии состояние ребенка улучшилось: движения стали активными, мышечный тонус восстановился. Согласно предлагаемому способу в крови новорожденного проведено определение содержания лактата, которое составило 1,8 ммоль/л (при норме 0,4-2,0 ммоль/л).

По способу-прототипу содержание лейцинаминопептидазы (ЛАП) в крови ребенка соответствовало 7,9 Ед/л, что свидетельствовало о перинатальном поражении ЦНС без уточнения формы заболевания.

На 14-е сутки жизни состояние ребенка оценивалось как удовлетворительное, движения активные, мышечный тонус удовлетворительный, физиологические рефлексы живые. Согласно предлагаемому способу в крови новорожденного проведено определение содержания лактата, которое составило 1,5 ммоль/л (при норме 0,4-2,0 ммоль/л), что свидетельствовало об эффективности проводимого лечения.

По способу-прототипу содержание лейцинаминопептидазы (ЛАП) в крови ребенка соответствовало 5,7 Ед/л, что свидетельствовало о перинатальном поражении ЦНС без уточнения формы заболевания.

Заключение: лечение оценено как эффективное, что подтвердилось клиническими данными и положительной динамикой выявленных изменений при нейросонографии: в субэпендимальной зоне слева гипоэхогенное образование (киста), что свидетельствует об эффективности лечения на данном этапе.

Таким образом, согласно предложенному способу лечение оценено как эффективное, согласно способу-прототипу - как неэффективное.

Указанным способом проведена оценка эффективности лечения 100 доношенных новорожденных с перинатальными поражениями ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст. (таблица).

Точность способа оценки эффективности лечения перинатальных поражений ЦНС новорожденных по заявляемому способу

Точность способа оценки эффективности лечения перинатальных поражений ЦНС новорожденных по прототипу

Преимущества способа:

1. Точность предлагаемого способа 92%.

2. Для проведения данного способа не требуется дорогостоящего оборудования и специальной подготовки персонала.

3. Длительность проведения метода определения лактата при использовании прибора 60 с.

4. Исследование содержания лактата может быть проведено средним лаборантом в лечебно-профилактических учреждениях всех уровней.

5. Исследование может быть проведено независимо от времени суток, биоритмов, пола новорожденного.

6. Исследуется малый объем крови (одна капля).

7. Предлагаемый показатель “лактат крови” может служить как скрининг для контроля за эффективностью лечения перинатальных поражений ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст. у доношенных новорожденных.

Источники информации

1. Афонин А.А., Длужевская Т.С., Погорелова Т.Н. и соавт. Способ определения эффективности лечения неврологических заболеваний у детей.// Официальный патентный бюллетень изобретений. - 1992. - №35. - С.21.

2. Барашнев Ю.И. Гипоксически-ишемическая энцефалопатия новорожденных: вклад перинатальных факторов, патогенетическая характеристика и прогноз. //Российский вестник перинатологии и педиатрии, 1996. - Т.41. - №2. - С.29-35.

3. Бышевский А.Ш., Терсенов О.А. Биохимия для врача. - Екатеринбург. -1994. - 384 с.

4. Гореликова Е.А., Корнюшин М.А. Оценка эффективности немедикаментозной реабилитации детей с перинатальным поражением ЦНС.// Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 2002. - №1. - С. 40-44.

5. Дегтярев Д.Н., Хачатрян А.В., Навасардянц Д.Г. и соавт. Оценка эффективности использования аминокислотного композита “Provit” в комплексе ранней медицинской реабилитации детей с перинатальными поражениями ЦНС.// Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 2000. - №2. - С. 9-13.

6. Классификация перинатальных поражений нервной системы у новорожденных. //Методические рекомендации. - М.: ВУНМЦ МЗ РФ, 2000.- 40с.

7. Шабалов Н.П. Неонатология. Санкт-Петербург. - 1997. - т.1. - c. 106.

8. Gutmann J., Wahlefeld A.W. // Metoden der enzymatishen Analyse / H.U. Bergmeyer - Verlag chemic, Weinhein, 1974, - Bd II. - S.1510.

Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии, и позволяет оценить эффективность лечения перинатальных поражений ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст. у доношенных новорожденных. Проводят исследование периферической крови ребенка. Определяют концентрацию лактата в 1-е сутки жизни. При снижении его содержания с 2,2-5,0 до 0,4-2,0 ммоль/л на 7-е или 14-е сутки жизни лечение оценивается как эффективное, при отсутствии снижения или при увеличении уровня лактата - как неэффективное. Техническим результатом данного изобретения является повышение точности оценки эффективности лечения новорожденных детей. 1 табл.

Способ оценки эффективности лечения перинатальных поражений ЦНС в виде внутрижелудочковых кровоизлияний I ст. у доношенных новорожденных по исследованию периферической крови ребенка, отличающийся тем, что в 1-е сутки жизни определяют концентрацию лактата и при снижении его содержания с 2,2-5,0 ммоль/л до 0,4-2,0 ммоль/л на 7-е или 14-е сутки жизни лечение оценивается как эффективное, при отсутствии снижения или при увеличении уровня лактата - как неэффективное.