СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЯЗВ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА Российский патент 2005 года по МПК A61K38/07 A61K38/08 A61P1/04 

Изобретение относится к медицине, к профилактике и лечению язв желудочно-кишечного тракта.

Известно вещество пептидной природы – гептапептид, получивший наименование “селанк”, формулы Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, обладающий противотревожным действием (Середенин С.Б., Козловская М.М., Бледнов Ю.А. и др. Изучение противотревожного действия аналога эндогенного пептида тафтсина на инбредных мышах с различным фенотипом эмоционально-стрессовой реакции. Журнал высшей нервной деятельности. 1998, т.48. вып.1, c.153-160) [1]. Однако противоязвенная активность селанка и способ профилактики и лечения язв желудочно-кишечного тракта с его использованием не описаны.

Известено вещество пептидной природы - трипептид Pro-Gly-Pro, обладающий противоязвенной активностью (Самонина Е.Г. и др.Коррекция кровотока желудка как один из возможных механизмов противоязвенных эффектов коротких пролинсодержащих пептидов. Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова, 2001, 87, №11, с.1488-1492) [2]. Однако приемы способа профилактики и лечения язв желудочно-кишечного тракта с использованием данного известного пептида не описаны.

Известны пептиды общей формулы:

Х-Pro-Gly-Pro, где Х-Lys-Pro-Arg-, Pro-Arg-, Arg- в качестве психостимуляторов (Козловская М.М. и др. Сравнительное изучение влияния фрагментов тафтсина на показатели условной реакции пассивного избегания. Химико-фармацевтический журнал, 2001, 35(3), с.3-5) [3].

Однако противоязвенная активность данных известных пептидов и способ профилактики и лечения язв желудочно-кишечного тракта с их использованием не описаны. Известен способ профилактики и лечения язв кишечно-желудочного тракта путем введения лекарственного средства пептидной природы. (Патент RU №2191593, кл. А 61 К 38/08, А 61 P 1/04, опубл. 27.10.02 [4] - прототип. В качестве лекарственного средства пептидной природы в данном известном способе используют гептапептид, получивший наименование “семакс”, формулы Met-Glu-His-Phe-Pro-Gly-Pro.

Однако современный российский рынок диктует необходимость расширения средств, применяемых для профилактики и лечения язв желудочно-кишечного тракта. Кроме того, эффективность лекарственного средства, используемого в известном способе [4], недостаточно высокая, а диапозон доз, к которых оно используется, недостаточно широк.

Техническим результатом, достигаемым настоящим изобретением, является расширение ассортимента противоязвенных средств, обладающих повышенной эффективностью в широком диапазоне доз, повышение эффективности лечения язв желудочно-кишечного тракта с использованием этих средств.

Указанный технический результат достигается также тем, что в способе профилактики и лечения язв желудочно-кишечного тракта путем введения лекарственного средства пептидной природы отличительной способностью является то, что в качестве лекарственно средства используют пептид общей формулы:

X-Pro-Gly-Pro, где X=Thr-Lys-Pro-Arg-; Lys-Pro-Arg-; Pro-Arg-; Arg-, который вводят внутрибрюшинно в дозе 0,58-3,30 мкмоль/кг массы тела.

На фиг.1 представлена диаграмма, описывающая влияние пептидов Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg-Pro-Gly-Pro на этаноловые повреждения слизистой оболочки желудка.

На фиг.2 представлена диаграмма, описывающая влияние пептидов Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg- Pro-Gly-Pro, Pro-Arg- Pro-Gly-Pro, Arg- Pro-Gly-Pro на стрессорное язвообразование.

На фиг.3 представлена диаграмма, описывающая влияние пептидов Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg- Pro-Gly-Pro на развитие ацетатной язвы.

На фиг.4 представлена диаграмма, описывающая влияние пептидов Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg-Pro-Gly-Pro на регенерацию ацетатной язвы.

Ниже приведены примеры реализации изобретения:

Пример 1.

Пептиды вводят белым беспородным крысам или крысам линии Вистар внутрибрюшинно в дозе 0,58-3,30 мкмоль/кг веса в физиологическом растворе (0,5 мл на 200 г массы животного) за 1 ч до перорального этанола или индукции язвообразования путем погружения животных в воду. Для вызова язвенных поражений слизистой оболочки желудка перорально вводят 1мл 96° этанола или обездвиженных в положении лежа на спине животных в вертикальном положении помещают в воду с температурой 16°С. При многоразовом введении препараты вводят после действия ульцерогенного фактора - аппликации на серозную оболочку желудка ледяной уксусной кислоты. С этой целью у наркотизированных эфиром животных вскрывают брюшную полость, обнажают желудок и на серозную поверхность дна желудка (ближе к большой кривизне) на 15 с накладывают ватный тампон (площадью 0,5 мм²), смоченный ледяной уксусной кислотой. Поверхность серозной оболочки подсушивают, разрез зашивают и в течение 1-7 сут животные получают пищу и воду без ограничения. Раз в сутки в течение 1-3-сут сразу же после воздействия фактора, вызывающего язву, т.е. на фоне развития язвы, или в течение 4-6 сут на фоне уже развившейся язвы животные, животные получают внутрибрюшинное введение одного из препаратов. Контрольным животным внутрибрюшинно в те же сроки вводят такие же объемы физиологического раствора. Через 1-2 ч после введения этанола или через 3 ч нахождения крыс в воде, или на 4 или 7 сутки - после аппликации уксусной кислоты животных забивают и под бинокулярной лупой определяют площадь поражения слизистой желудка. Противоязвенный эффект препарата рассчитывают как % уменьшения площади повреждения опытных животных к площади повреждения у контрольных животных.

Следующие материалы иллюстрируют достижение цели. Так, на фиг.1 видно, что площадь язвенных поражений через 1 ч после перорального введения этанола на фоне введения большинства препаратов значительно достоверно уменьшается по сравнению с контрольными крысами. У контрольных животных составляет 72,4 мм², что значительно больше площади повреждений у крыс, которые за 1 ч до введения этанола получали 0,60 мкмоль/кг - Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg-Pro-Gly-Pro. Площадь повреждений составила 48, 25, 47, 36, 59 и 46% соответственно. Таким образом, все эти препараты проявляют четко выраженный противоязвенный протекторный эффект, равный 52% для Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, 75% для - Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, 53% для - Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, 64% для - Arg-Pro-Gly-Pro.

Трехчасовое погружение в воду сопровождается повреждениями слизистой оболочки желудка, рассматриваемые в литературе как стрессорные язвы, площадь которых в контроле в среднем составляет 0,834 мм². Погружение в воду, осуществляемое через 1 ч после внутрибрюшинного введения 0,58 мкмоль/кг пептидов приводило к гораздо меньшей площади повреждений. Площадь повреждений была равна 11, 14, 45, 85, 50, 98 и 30% (по сравнению с контролем) при предварительном введении Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg-Pro-Gly-Рго соответственно (фиг.2). Таким образом, все препараты проявляют четко выраженный достоверный противоязвенный протекторный эффект, равный 89% для Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, 86% Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, 55% для - Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, 15% для - Arg-Pro-Gly-Рго.

Площадь язвы на 4 сутки после аппликации ледяной уксусной кислоты на серозную оболочку желудка у контрольных животных составляла в среднем 44,9 мм². Площадь язв у животных, которым в течение трех дней внутрибрюшинно вводили один из исследуемых препаратов Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg-Pro-Gly-Рго в дозе 0,62 мкмоль/кг, рассчитывали в % к площади язвы в контроле. Оказалось, что площадь язвы уменьшились до 53,44; 22,64; 55,79; 48,98 при введении соответственно Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg-Pro-Gly-Pro (фиг.3). Таким образом Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg-Pro-Gly-Pro проявляют достоверный протекторный противоязвенный эффект на ацетатной модели язвообразования, равный 46,56; 77,36; 44;21; 51,02; соответственно для Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg-Pro-Gly-Pro.

Введение пептидов Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg-Pro-Gly-Pro в дозе 0,58 мкмоль/кг в течение 4-6 сут после аппликации кислоты, т.е. на фоне уже развившейся язвы также сопровождается значительным уменьшением площади язвы по сравнению с контролем, что представлено на фиг 4. Площадь язвы на 7 день уменьшилась до 51,59; 41,03; 43,94; 42,85% при введении соответственно Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, (фиг.4). Arg-Pro-Gly-Pro уменьшил площадь язв до 84.61%. Таким образом, Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, кроме Arg-Pro-Gly-Pro проявляют достоверный лечебный противоязвенный эффект на ацетатной модели язвообразования, равный 48,41; 58,97; 56,06% соответственно для Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro. Только Arg-Рrо-Сlу-Рго проявлял тенденцию к уменьшению развития ацетатной язвы. Результаты этой серии экспериментов свидетельствуют о лечебном противоязвенном эффекте Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg-Pro-Gly-Pro.

Таким образом, полученные данные наглядно демонстрируют что Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, Arg-Pro-Gly-Pro проявляют как протекторные (этаноловая, стрессорная и ацетатная модели), так и лечебные (ацетатная модель) противоязвенные свойства в эксперименте на животных.

Пример 2

Берут препарат Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro, 1,0 мг, растворяют в 5 мл физиологическою раствора NaCl и вводят внутрибрюшинно 5 лабораторным крысам, которые в течение 24 ч не получали ни пищи, ни воды и содержались в клетках с ячеистым дном во избежании капрофагии, по 0,5 мл на 200 г массы тела (500 мкг/кг – 0,6 мкмоль/кг). Контрольным животным тем же способом вводят 0,85% раствор NaCl в дозе 0,5 мл на 200 г массы тела. Через 1 ч пероралыю вводят 1 мл 96° этанола. Через 1 ч после введения этанола животных забивают эфиром, вскрывают брюшную полость, вырезают желудок, разрезают по малой кривизне и промывают под проточной водой. Затем внутреннюю поверхность желудка рассматривают под бинокулярной лупой с окуляр-микрометром и рассчитывают площадь повреждений в каждом желудке и затем среднюю площадь повреждений в контрольной и опытной группах. Площадь повреждений в желудках крыс контрольной группы: 14,4; 44,75; 30,75; 38,5; 64,8 мм². В среднем – 38,58 мм². Площадь повреждений у крыс, получивших Thr-Lys-Pro-Arg-Pro-Gly-Pro: 21,0; 13,6; 12,5; 1,5; 5,0 мм²; средняя площадь повреждений 10,72 мм². Протекторный противоязвенный эффект равен 72%.

Пример 3

Берут препарат Lys-Pro-Arg-Pro-Cly-Pro –1,167 мг, растворяют в 7,5 мл физиологического раствора. Крысам линии Вистар, которые в течение 24 ч не получали ни пищи, ни воды и содержались в клетках с ячеистым дном во избежании капрофагии, внутрибрюшинно вводят по 0,5 мл на 200 г массы тела (389 мкг/кг -0.6 мкмоль/кг). Контрольным крысам линии Вистар тем же способом вводят 0,85% раствор NaCI в дозе 0,5 мл на 200 г массы тела. Через 1 ч крыс обездвиживают в положении лежа на спине и в вертикальном положении помещают в воду с температурой 16°С. Через 3 часа крыс забивают эфиром. Далее поступают так, как описано в примере 2.

В результате просчета площади всех точечных повреждений в слизистой оболочке крыс, известных в литературе как стрессорные язвы, оказалось, что у опытных крыс площадь язв значительно меньше, чем у контрольных. Площадь повреждений в желудках крыс контрольной группы: 1,36; 1,34; 1,13; 0,95; 0,33 мм². В среднем – 1,02 мм². Площадь повреждений у крыс, получивших Lys-Pro-Arg-Pro-Cly-Рrо: 0,01; 0,01;.0,76; 0,24, 0,2 мм²; средняя площадь повреждений – 0,24% мм². Протекторный противоязвенный эффект равен 76,47%.

Пример 4

Берут 10 крыс массой 180-200 г, которые в течение 24 ч не получали ни пищи ни воды и содержались в клетках с ячеистым дном во избежание капрофагии. Под эфирным наркозом вскрывают брюшную полость, обнажают желудок и на серозную поверхность дна желудка (ближе к большой кривизне) на 15 с накладывают ватный тампон (площадью 0,5 мм²), смоченный ледяной уксусной кислотой. Поверхность серозной оболочки подсушивают, разрез зашивают. Берут препарат Arg-Pro-Cly-Рrо – 1,104 мг. Каждый день 368 мкг растворяют в 3,33 мл физиологического раствора NaCl и ежедневно в течение 1, 2 и 3 суток через 24 ч вводят внутрибрюшинно 5 опытным крысам по 0,53 мл на 200 г массы тела (292,85 мкг/кг - 0,64 мкмоль/кг). Контрольным животным тем же способом вводят 0,85% раствор NaCI в дозе 0,5 мл на 200 г массы тела. На 4 сутки крыс забивают эфиром. Далее поступают так как описано в примере 2. Площадь язвы у контрольных животных на 4 сутки после аппликации уксусной кислоты 48,0; 48,0; 32,0; 35,78; 67,5 мм². Средняя площадь язвы – 46,26 мм². У крыс, получавших в течение трех суток Arg-Pro-Cly-Pro, площадь повреждения составила 10.8:0:22.75; 41.5:0. В среднем площадь язвы равна 15,01 мм². Протекторный противоязвенный эффект равен 67,55%.

Пример 5

Берут 10 крыс массой 180-200 г, которые в течение 24 ч не получали ни пищи. ни воды и содержались в клетках с ячеистым дном во избежание капрофагии. Под эфирным наркозом вскрывают брюшную полость, обнажают желудок и на серозную поверхность дна желудка (ближе к большой кривизне) на 15 с накладывают ватный тампон (площадью 0.5 мм²), смоченный ледяной уксусной кислотой. Поверхность серозной оболочки подсушивают, разрез зашивают. Берут препарат Рrо-Arg-Pro-Clу-Рrо - 1,248 мг. Каждый день 416 мкг растворяют в 3,33 мл физиологического раствора NaCl и ежедневно в течение 4, 5 и 6 сут (на фоне уже сформировавшейся язвы) через 24 ч вводят внутрибрюшинно 5 опытным крысам по 0,48 мл на 200 г массы тела (299,5 мкг/кг - 0,58 мкмоль/кг). Контрольным животным тем же способом вводят 0,85% раствор NaCI в дозе 0,5 мл на 200 г массы тела. На 7 сутки крыс забивают эфиром. Далее поступают так как описано в примере 2. Площадь язвы у контрольных животных на 7 сутки после аппликации уксусной кислоты 18,04; 40,0; 45,6; 42,0; 20,0 мм². Средняя площадь язвы в этом эксперименте у контрольных крыс – 33,13 мм². У крыс, получавших в течение трех суток Pro-Arg-Pro-Gly-Рго, площадь повреждения составила 24,0; 8,75; 0; 9,0; 40,0 мм². В среднем площадь язвы равна 16,35 мм². Протекторный противоязвенный эффект равен 53,67%.

Таким образом, пептиды формулы

Х-Pro-Gly-Pro, где Х=Thr-Lys-Pro-Arg-; Lys-Pro-Arg-; Pro-Arg-; Arg-, используемые способом согласно изобретению, обладают повышенной противоязвенной активностью в широком диапазоне доз. Способ согласно изобретению, предусматривающий использование в качестве лекарственного средства любого из данных веществ пептидной природы в широком диапозоне доз, обеспечивает высокую эффективность профилактики и лечения язв желудочно-кишечного тракта.

Изобретение относится к медицине, а именно к приемам и средствам профилактики и лечения язв желудочно-кишечного тракта. Сущность изобретения: пептиды формулы: X-Pro-Gly-Pro, где Х = Thr-Lys-Pro-Arg-; Lys-Pro-Arg-; Pro-Arg-; Arg-, обладают противоязвенной активностью. Их используют при внутрибрюшинном введении в дозе 0,58-3,20 мкмоль г/кг для профилактики и лечения язв желудочно-кишечного тракта. 4 ил.

Способ профилактики и лечения язв желудочно-кишечного тракта путем введения лекарственного средства пептидной природы, отличающийся тем, что в качестве лекарственного средства используют пептид общей формулы:

X-Pro-Gly-Pro, где

Х=Thr-Lys-Pro-Arg-;

Lys-Pro-Arg-;

Pro-Arg-;

Arg-, который вводят внутрибрюшинно в дозе 0,58-3,30 мкмоль/кг массы тела.