СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИ РЕЗИСТЕНТНЫХ РЕАКТИВНЫХ ДЕПРЕССИЙ Российский патент 2005 года по МПК G01N33/92 

Изобретение относится к области медицины, а именно к психиатрии и неврологии. Депрессия - одно из наиболее распространенных расстройств, встречающихся как в психиатрической, так и в соматической практике. Около 30% больных депрессиями остаются рефракторными к адекватной тимоаналептической терапии, чем обусловлена необходимость выявления способов эффективной предикции и терапии резистентных депрессий.

Способ позволяет повысить точность диагностики резистентности при реактивной депрессии путем определения биохимических и иммунологических маркеров, являющихся предикторами рефрактерности к антидепрессантной терапии. В ходе тестирования выявляются лица, имеющие патобиохимические и иммунологические признаки нарушений деятельности нервной системы, которые в дальнейшем будут проявляться или уже проявляются на момент обследования депрессивной симптоматикой, резистентной к современным антидепрессантным психофармакологическим средствам. Способ обеспечивает высокую точность определения лиц с указанной симптоматикой для уточнения динамики состояния в клинике.

Аналогом предлагаемого изобретения авторы предлагают способ, описанный в монографии “Неврозы и перекисное окисление липидов” // Александровский Ю.А., Поюровский М.В., Незнамов Г.Г., - М.: Наука, 1991, 140 с.

Выявлено, что в условиях хронического эмоционального стресса, лежащего в основе депрессивного страдания, в центральной нервной системе имеется достаточно условий для возникновения активации перекисного окисления липидов (ПОЛ) по нескомпенсированному варианту. Авторами установлено, что активация ПОЛ, проявляющаяся в повышении содержания в крови гидроперекисей липидов и малонового диальдегида, наиболее выражена у больных с небольшой (до 6 мес) длительностью невротических расстройств. С увеличением давности заболевания наблюдалось постепенное уменьшение концентрации в крови больных продуктов ПОЛ, что соответствует “истощению” функциональных возможностей стресс-реализующих систем и формированию затяжных невротических состояний. При этом выявленные биохимические нарушения имеют широкую индивидуальную вариабельность, существенно снижающие их диагностическую ценность.

В качестве прототипа предлагаемого изобретения заявители предлагают “Способ диагностики невроза” // Патент № 1720000, бюлл. №10, 15.03.92. Кровь больного в объеме 0,1 мл экстрагируют смесью хлороформ : метанол 1:2 (по объему), фильтруют, трижды промывают осадок на фильтре смесью хлороформ : метанол 2:1. Фильтрат отмывают 0,02% CaCl₂, а затем трижды смесью хлороформметанол 0,02% CaCl₂ (3:48), упаривают и растворяют в 5-10 мкл смеси хлороформ : метанол 2:1. После этого исследуемый образец наносят на хроматографическую пластинку. Выделение фракции сфингомиелинов осуществляют методом проточной горизонтальной хроматографии в системе хлороформ : метанол : 7 н. аммиак 13:7:1. Идентификацию сфингомиелинов проводят по Rf=0,31, количественное содержание сфингомиелинов определяют по фосфору после проявления хроматограммы серной кислотой и рассчитывают в мкмоль фосфора на литр. При значениях 2000 мкмоль фосфора и выше диагностируют невроз.

Недостатки прототипа, на взгляд авторов, следующие:

1. Позволяет регистрировать патологическое увеличение содержания лишь одной фракции фосфолипидов (СФМ).

2. Не учитывает вовлеченность в генез депрессивного состояния иммунных механизмов.

3. Неприменим для диагностики реактивных резистентных депрессий.

В отличие от рассмотренного выше способа-прототипа, предлагаемый новый способ выявляет среднестатистические результаты для когорты терапевтически резистентных больных реактивными депрессиями. Значимы показатели иммунитета в виде моноцитоза >5% и лимфоцитоза >25% в лейкоцитарной формуле общего анализа крови в сочетании с показателями фосфатидилэтаноламинов (ФЭА) - 32,6±1,6%, сфингомиелинов (СФМ) - 27,6±1,1%, и фосфатидилхолинов (ФХ) - 27,4±2,7%, (р<0,001).

Способ осуществляют следующим образом. Для оценки обмена фосфолипидов исследуют цельную кровь в объеме 0,1 мл методом проточной тонкослойной хроматографии, описанном в прототипе. Известно, что фосфолипиды, являясь основным структурно-функциональным компонентом биологических мембран, принимают непосредственное участие в процессах трансмембранного переноса всех метаболитов, участвуют в процессах возбудимости клетки, энергетическом их обмене, биосинтезе белка, а также выполняют роль вторичных мессенджеров. Доказана интенсификация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) при различных по генезу психических заболеваниях. При этом установлено, что хронический эмоциональный стресс, лежащий в основе депрессивного страдания, приводит к состоянию метаболической внутриклеточной гипоксии вследствие преобладания процессов гликолиза над окислительным фосфорилированием, то есть анаэробизма над тканевым дыханием. В этих условиях нарушается утилизация глюкозы (гликогена), что в свою очередь приводит к блокированию образования из аминоспирта сфингозида - церамида. При этом за счет активации специфических трансфераз образуется повышенное количество СФМ (часть которого расходуется на увеличение синтеза ФЭА), что может служить гиперлипогенетическим источником энергетического депо в условиях интрацеллюлярной гипоксии. Также следует принять во внимание возможные взаимопревращения ФЭА и ФХ, входящих в состав многочисленных белково-липидных комплексов. Эти реакции протекают преимущественно в митохондриальных мембранах и подтверждают данные об исключительно важном значении аминосодержащих фосфолипидов в процессах окислительного фосфорилирования. Таким образом, обнаруживаемые с помощью тонкослойной хроматографии повышение содержания СФМ, ФЭА и снижение содержания ФХ в крови больных с терапевтически резистентными реактивными депрессиями может быть обусловлено характерными для депрессивных состояний гипоксическими процессами, и как следствие, выраженными изменениями биомембран (табл.1).

Таблица 1.Изменения содержания фосфолипидов крови (в % М±м), и показателей иммунитета у больных реактивными терапевтически резистентными депрессиями.ФракцииНорма (контрольная группа)Терапевтически резистентная реактивная депрессияПоказатели иммунитета при терапевтически резистентной реактивной депрессииФЭА25,4±1,232,6±1,6*Содержание лимфоцитов более 25% *Содержание моноцитов более 5%*СФМ17,75±1,127,6±1,1*  ФХ46,87±2,227,4±2,7*  Примечание: различия между нормой и терапевтически резистентной депрессией: * - р<0,001

В современных исследованиях показано, что иммунная система посредством органоспецифических иммунных реакций гуморального и клеточного типа принимает непосредственное участие в регуляции деятельности нервной систем, в частности выявлены особенности взаимосвязей иммунологических и клинических параметров при депрессивных расстройствах. Отмечено при этом, что с увеличением давности психического заболевания возрастает роль иммунной системы в патогенезе депрессии, в связи с чем повышается риск иммунодефицитных состояний.

Способ включает изучение лейкоцитарной формулы общего клинического анализа крови с целью выявления иммунологических маркеров резистентности депрессии к терапии. Материалом для общего клинического анализа крови является цельная капиллярная кровь. Приготовленный мазок фиксируют метиловым спиртом 5 мин, после чего окрашивают по Романовскому - Гимзе. Краска стандартная имеет в своем составе азур II, водорастворимый желтый эозин, метиловый спирт и глицерин. Рабочий раствор краски готовят путем разведения 3 капель готовой краски 1,0 мл дистиллированной воды. Продолжительность окраски 40 минут. Окрашенные мазки изучают под микроскопом с иммерсионной системой (окуляр 10, объектив 90). Для подсчета лейкоцитарной формулы пользуются 11-клавишным счетчиком, фиксирующим количества каждого вида лейкоцитов в процентах.

Выявленные у когорты терапевтически резистентных больных реактивными депрессиями среднестатистические показатели моноцитоза свидетельствуют о напряженности фагоцитарного звена иммунитета, лимфоцитоз показывает дефект клеточного звена иммунной системы, что подтверждает неоднородность и многоуровневость нейробиохимических механизмов формирования резистентности депрессии к тимоаналептической терапии.

Обследовано 85 больных с реактивными депрессиями, 50 женщин и 35 мужчин от 20 до 50 лет, средний возраст 34±3,2 года. По результатам тимоаналептической терапии пациенты разделились на респондеров (40 пациентов), обнаруживших положительную динамику, и нонреспондеров (45 пациентов), у которых значимых позитивных сдвигов в процессе терапии не отмечено. Клинические исследования соответствовали критериям МКБ-10, дополнены шкалой депрессии М. Гамильтона (21 вопрос). Контроль составила группа из 50 практически здоровых лиц, сопоставимая по полу и возрасту. В обследование не включались лица, перенесшие болезнь Боткина, имеющих признаки хронического гепатита или цирроза печени. Параклинические исследования включали оценку лейкоцитарной формулы клинического анализа крови и изучение фосфолипидного спектра цельной крови методом проточной тонкослойной хроматографии.

Преимущества данного способа диагностики терапевтически резистентной реактивной депрессии:

1. При использовании в клинике позволяет обнаружить патобиохимические и иммунологические маркеры терапевтической резистентности при реактивной депрессии.

2. Применение заявленного метода позволяет контролировать на биохимическом и иммунологическом уровнях состояние пациента, объективизируя клиническую оценку состояния при мониторинге эффективности лечения.

3. Способ диагностики прост в применении, пригоден для использования в клинических условиях.

КЛИНИЧЕСКИЙ ПРИМЕР. Больная Н, 45 лет. История болезни №916. Диагноз: Дистимия. Заболевания связывается с длительной объективно неразрешимой психотравмирующей ситуацией. Клинически обнаруживает признаки депрессивного эпизода средней степени выраженности. По шкале депрессии М. Гамильтона 20,5 баллов. Проведен клинический анализ крови, выявлено лимфоцитов - 27% и моноцитов - 6%. Проба крови исследовалась методом тонкослойной хроматографии, содержание ФЭА составило - 34,2%, СФМ - 29,5% и ФХ - 25,3%, что позволяет выявить терапевтически резистентную реактивную депрессию.

Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии и неврологии. Способ включает определение сфингомиелинов методом проточной тонкослойной хроматографии, при этом по шкале Гамильтона определяют степень выраженности депрессии, определяют количественное содержание фосфатидилэтаноламинов, сфингомиелинов и фосфатидилэтаноламинов, подсчитывают лейкоцитарную формулу и при наличии лимфоцитов более 25% и моноцитов более 5% и значении фосфатидилэтаноламинов 32,6±1,6, сфингомиелинов 27,6±1,1 и фосфатидилэтаноламинов 27,4±2,7 диагностируют терапевтически резистентную реактивную депрессию. Технический результат: способ прост в применении, позволяет обнаружить патобиохимические и иммунологические маркеры терапевтической резистентности при реактивной депрессии и контролировать на биохимическом и иммунологическом уровнях состояние пациента, объективизируя клиническую оценку состояния при мониторинге эффективности лечения. 1 табл.

Способ диагностики терапевтически резистентных реактивных депрессий, включающий определение сфингомиелинов методом проточной тонкослойной хроматографии, отличающийся тем, что по шкале Гамильтона определяют степень выраженности депрессии, определяют количественное содержание фосфатидилэтаноламинов, сфингомиелинов и фосфатидилэтаноламинов, подсчитывают лейкоцитарную формулу и при наличии лимфоцитов более 25% и моноцитов более 5% и значении фосфатидилэтаноламинов 32,6±1,6, сфингомиелинов 27,6±1,1 и фосфатидилэтаноламинов 27,4±2,7 диагностируют терапевтически резистентную реактивную депрессию.