ГИПЕРИММУННЫЙ ТКАНЕВОЙ ПРЕПАРАТ Российский патент 2005 года по МПК A61K35/14 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к средствам профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят.

Известно одновременное применение сыворотки крови реконвалесцентов и препарата тетрасульфин 2 раза в день до полного выздоровления в способе лечения острых респираторных болезней телят (RU № 2041711, 20.08.95).

Недостатком известного способа является его низкая эффективность в связи с несоответствием содержащихся в сыворотке антител к местным штаммам микроорганизмов.

Известно также применение сыворотки крови реконвалесцентов (в качестве доноров используют животных того же хозяйства, ранее переболевших респираторными заболеваниями) и антибиотика путем внутримышечного введения через 24 часа, а затем с интервалом 12 часов 0,3% раствора зоолана в дозе 1,8-2,0 мл для лечения острых респираторных болезней телят (RU № 2150281, 10.06.2000).

Лечение телят предлагаемым способом также не всегда эффективно, в частности в хозяйствах, неблагополучных по болезням телят, вследствие того, что содержание антител в крови у переболевших животных, используемых в качестве доноров, недостаточно для достижения необходимой ответной иммунной реакции. Телята не излечиваются полностью, болезни принимают затяжной характер. Способ трудоемок и затратен.

Наиболее близким к заявляемому изобретению является биологический препарат для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней телят, содержащий сыворотку реконвалесцентов или поливалентную гиперимунную сыворотку крупного рогатого скота с антителами к возбудителям сальмонеллеза, колибактериоза, пастереллеза в титрах не менее 1:1000 (в PA) и к вирусам парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в титрах не менее 1:128 (в РН), и трансфер-фактор, полученный из лейкоцитарной массы крови реконвалесцентов или гипериммунизированных животных после отделения сыворотки (RU 2180238 С1, 10.03.2002).

К недостаткам данного препарата можно отнести следующее:

- данный препарат не всегда достаточно эффективен вследствие того, что набор антител в случае получения биопрепарата путем гипериммунизации волов-продуцентов производственными (биофабричными) вакцинами с ограниченным набором вакцинных антигенов не всегда соответствует полному антигенному спектру основных возбудителей этих инфекций, циркулирующих в конкретном хозяйстве; в случае же использования сыворотки, полученной из крови реконвалесцентов, содержание антител недостаточно для выработки соответствующей ответной реакции, что затягивает процесс выздоровления;

- многоэтапность и сложность технологического процесса получения препарата: сепарирование стабилизированной крови, в результата чего разрушается значительная часть форменных элементов крови и плазма вместо соломенно-желтого приобретает красный цвет вследствие содержания в ней разрушенных эритроцитов, являющихся балластом; дефибринизация; разделение красных и белых клеток крови; отмывание в дистилированной воде полученных лейкоцитов; этап получения из отмытых лейкоцитов трансфер-фактора, являющийся, в свою очередь, также многоэтапным, сложным и длительным процессом;

- отсутствие фагоцитарной способности вследствие разрушения лейкоцитов.

Задача изобретения - повышение эффективности гипериммунного тканевого препарата, для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят, снижение затрат на профилактику и лечение.

Технический результат изобретения заключается в усилении профилактических и лечебных свойств гипериммунного тканевого препарата за счет синергического эффекта при сочетании специфических для конкретного животноводческого хозяйства антител с фагоцитами, активизированными при их сенсибилизации соответствующими антигенами, простоте получения и снижении затрат на изготовление препарата.

Сущность изобретения состоит в том, что гипериммунный тканевой препарат, представляющий собой препарат крови гипериммунизированных животных с антителами к возбудителям желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят, содержит плазму крови, полученную от гипериммунизации животных комплексным антигеном, составленным из штаммов микроорганизмов, выделенных из местного эпизоотического очага, с лейкоцитарной массой, фагоциты которой активизированы в отношении патогенных микроорганизмов местного эпизоотического очага.

Причем препарат содержит плазму крови с антителами к возбудителям инфекций местного эпизоотического очага с титром не менее 1:1200 (в РА), а концентрация фагоцитов в лейкоцитарной массе составляет не менее 3,5 тыс/мкл, имеющих фагоцитарный индекс не менее 95% и опсонический индекс 4,5. Препарат обладает микробной емкостью не менее 25000 м.т./мкл.

Отличительными от прототипа признаками являются:

- содержание в предлагаемом гипериммунном тканевом препарате плазмы крови, полученной от гипериммунизации животных комплексным антигеном, составленным из штаммов микроорганизмов, выделенных из местного эпизоотического очага, и поэтому обладающей полным набором соответствующих антигенному спектру антител к возбудителям болезней конкретного животноводческого хозяйства;

- наличие в плазме фагоцитов, которые активизированы в отношении патогенных микроорганизмов местного эпизоотического очага, что обеспечивает повышенную функцию фагоцитоза микробных клеток, против которых активизированы фагоциты (гипериммунные фагоциты поглощают и уничтожают до 100 и более микроорганизмов, тогда как обычные фагоциты - 10-15 микробов и в дальнейшем сами погибают), на фоне увеличенной агглютинации микроорганизмов и, таким образом, быструю ликвидацию очага воспаления, что говорит о высокой терапевтической эффективности препарата.

Плазма крови с антителами к возбудителям инфекций местного эпизоотического очага с титром не менее 1:1200 (в РА) обеспечивает высокую инактивацию микробных клеток, а концентрация фагоцитов в лейкоцитарной массе не менее 3,5 тыс/мкл, имеющих фагоцитарный индекс не менее 95% и опсонический индекс 4,5, - необходимую фагоцитарную активность препарата. Микробная емкость не менее 25000 м.т./мкл показывает, что специфическая иммунологическая активность крови достигла своего наивысшего предела.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами получения и использования препарата.

Пример 1

Из патологического материала, взятого от вынужденно убитых или из нативного материала от больных телят конкретного хозяйства в условиях лаборатории получают изоляты микроорганизмов. Проводят их микроскопирование, выделяют чистые культуры микроорганизмов, определяют патогенность микробов и проводят их серологическую идентификацию. Из выделенных микроорганизмов составляют комплексный антиген и проводят гипериммунизацию доноров. Вводимый ассоциированный антиген представляет собой взвесь живых неослабленных микробов в физиологическом растворе с общей концентрацией микробов 5 млрд.м.т./мл и соответствием соотношения количества микробных тел каждого вида уровню их патогенности. Отбор крови у доноров осуществляют при достижении наивысшего предела специфической иммунологической активности крови, что характеризуется следующими иммунологическими показателями: концентрация антител на вводимые антигены составляет не менее 1:1200 в реакции агглютинации, уровень фагоцитарной активности (ФИ) моноцитов и нейтрофилов по отношению к циркулирующим в телятнике микроорганизмам достигает не менее 95%, опсонический индекс (ОИ) по отношению к микроорганизмам в сравнении с кровью от негипериммунизированного бычка - 4,5, микробная емкость плазмы крови (ME) - не менее 25000 м.т./мкл. Кровь берут в стерильные бутылки с содержанием в качестве антикоагулянта 10% раствора Трилона-Б из расчета 1 мл на 1 л крови. Из взятой крови получают плазму путем центрифугирования стабилизированной крови при 1000 об/мин в течение 15 минут. Полученный таким способом гипериммунный тканевой препарат представляет собой плазму крови, содержащую специфические антитела, с лейкоцитарной массой, фагоциты которой активизированны в отношении патогенных микроорганизмов местного эпизоотического очага.

Пример 2.

Полученный по примеру 1 гипериммунный тканевой препарат применяют для профилактики желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят в неблагополучном по данным болезням животноводческих хозяйствах. Для этих целей по мере отела коров формируют 4 группы телят по 10 голов в каждой. Телятам первой группы вводят гипериммунный тканевой препарат подкожно в дозе 0,1 мл/кг живой массы двукратно с интервалом 24 часа. Телятам 2-ой группы вводят биологический препарат, представляющий собой гипериммунную сыворотку и трансфер-фактор по 0,25 мл/кг внутримышечно двукратно с интервалом 24 часа. Телятам 3-ей группы вводят сыворотку реконвалесцентов, внутримышечно, в дозе 1 мл/кг живой массы двукратно с интервалом 24 ч. Четвертая группа животных служит контролем и не подвергается профилактическим мероприятиям. Условия содержания и кормления телят одинаковые. Телятам проводят плановые вакцинации, принятые в данном хозяйстве в зависимости от эпизоотической обстановки. За животными ведут наблюдение в течение 3-х месяцев. Результаты данной серии опытов представлены в таблице 1.

Из таблицы 1 видно, что лучшие результаты профилактики получены с применением заявляемого гипериммунного тканевого препарата - гипериммунной плазмы с лейкоцитарной массой, фагоциты которой активизированы в отношении патогенных микроорганизмов местного эпизоотического очага.

Пример 3.

Полученный по примеру 1 гипериммунный тканевой препарат применяют для лечения неспецифической бронхопневмонии у телят 2-месячного возраста с клиническими признаками катарально-гнойной пневмонии. Формируют 4 группы телят по 10 голов в каждой группе. Во всех группах телят применяли гентамицин, как антибиотик, обладающий высокой чувствительностью к микрофлоре, выделенной от больных телят. Телятам 1-ой группы дополнительно вводили заявляемый гипериммунный тканевой препарат в дозе 0,05 мл/кг живой массы. Телятам 2-ой группы - гипериммунную сыворотку, содержащую трансфер-фактор в дозе 2 мл/кг живой массы. Телятам 3-ей группы сыворотку реконвалесцентов в дозе 2 мл/кг живой массы. У телят 4-ой группы в качестве лечебного средства применяли только гентамицин.

Результаты исследований приведены в таблице 2.

Из таблицы 2 видно, что в группе телят с применением гипериммунного тканевого препарата в сочетании с гентамицином значительно сокращены сроки выздоровления телят, не наблюдалось падежа животных.

Пример 4.

Полученный по примеру 1 гипериммунный тканевой препарат применяют для лечения желудочно-кишечных заболеваний телят. Формируют 4 группы телят (3 опытных группы, одну контрольную) по 10 голов в каждой группе. Телят в группы подбирают по принципу аналогов с расстройствами деятельности желудочно-кишечного тракта, характеризующимися пониженным аппетитом, повышением температуры в начале заболевания, жидким калом, переходящим в дальнейший понос, обезвоживанием организма, общей слабостью. Во всех группах телят применяли 5% раствор глюкозы в объеме 200 мл с введенным в него тетраолеаном в дозе 10,0 мг/кг живой массы. В опытных группах в смесь глюкозы и тетраолеана вводят испытуемые препараты.

Телятам первой группы гипериммунный тканевой препарат из расчета 0,5 мл на 1 кг массы тела. Телятам второй группы - гипериммунную сыворотку, содержащую трансфер-фактор из расчета 0,5 мл препарата на 1 кг массы тела. Для лечения телят 3-ей группы в раствор вводят сыворотку реконвалесцентов из расчета 1 мл/кг. В 4-ой, контрольной, группе в качестве лечебного препарата применяют глюкозу с тетраолеаном. Лечебные растворы телятам всех групп вводят внутривенно, 2 раза в день, в течение 3-х дней. Результаты данных исследований, приведенные в таблице 3, свидетельствуют о высокой эффективности гипериммунного тканевого препарата в отношении желудочно-кишечных заболеваний телят.

Проведенные серии опытов показали, что заявляемый гипериммунный тканевой препарат обладает высокой профилактической и терапевтической эффективностью. Низкие затраты на изготовление препарата, простота его получения и применения позволят использовать данный препарат для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят.

Таблица 1№ гр.ПрепаратКол-во телят в группеЗаболело (голов)Пало (голов)БронхопневмониейДиспепсией1Гипериммунный тканевой препарат101102Гипериммунная сыворотка с трансфер-фактором104623Сыворотка реконвалесцентов105734Контроль10698Таблица 2№ гр.ПрепаратКол-во больных телятДоза препарата на 1 кг живой массы, млСроки выздоровления, днейПало51015201Гипериммунный тканевой препарат + гентамицин100,0582--02Гипериммунная сыворотка с трансфер-фактором + гентамицин102,0342-13Сыворотка реконвалесцентов + гентамицин102,0152114Гентамицин10 12313

Таблица 3№ гр.ПрепаратКол-во больных телятДоза препарата мл/кг массыВыздоровело телят, дни12345678910Пало1Гипериммунный тканевой препарат + тетраолеан100,5-3421-----02Гипериммунная сыворотка с трансфер-фактором + тетраолеан100,5-2212-1---23Сыворотка реконвалесцентов 4 + тетраолеан101,0-121111---34Контроль: глюкоза + тетраолеан1010,--1221----4

Изобретение относится к области ветеринарии и касается средства для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят. Сущностью изобретения является гипериммунный тканевой препарат, содержащий плазму крови, полученную от гипериммунизации животных комплексным антигеном, составленным из штаммов микроорганизмов, выделенных из местного эпизоотического очага с титром не менее 1:1200 (в РА), с лейкоцитарной массой, фагоциты которой активизированы в отношении патогенных микроорганизмов местного эпизоотического очага с концентрацией не менее 3,5 тыс/мкл, фагоцитарным индексом не менее 95% и опсоническим индексом 4,5, и обладающий микробной емкостью не менее 25000 м.т./мкл. Техническим результатом является создание более эффективного препарата для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

1. Гипериммунный тканевой препарат, представляющий собой препарат крови гипериммунизированных животных с антителами к возбудителям желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят, отличающийся тем, что содержит плазму крови, полученную от гипериммунизации животных комплексным антигеном, составленным из штаммов микроорганизмов, выделенных из местного эпизоотического очага с титром не менее 1:1200 (в РА), с лейкоцитарной массой, фагоциты которой активизированы в отношении патогенных микроорганизмов местного эпизоотического очага с концентрацией не менее 3,5 тыс/мкл, фагоцитарным индексом не менее 95% и опсоническим индексом 4,5.2. Гипериммунный тканевой препарат по п.1, отличающийся тем, что обладает микробной емкостью не менее 25000 м.т./мкл.