СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ПТИЦ Российский патент 2017 года по МПК A61K9/12 A61K35/57 A61K38/16 A61K38/17 A61P31/12 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к ветеринарной эпизоотологии и иммунологии, и касается средств для специфической пассивной профилактики вирусных инфекций.

Как известно, биологически активную фракцию диализата экстракта лейкоцитов, представляющую собой низкомолекулярный (менее 10000 дальтон) антигенспецифический рибонуклеопептид, способный переносить клеточно-опосредованный иммунитет на несенсибилизированные лимфоциты и получивший название фактора переноса или «трансфер-фактора» (ТФ), применяют для передачи клеточного иммунитета при различных патологиях, сопровождающихся снижением реактивности организма, а также в качестве вспомогательного средства для профилактики и лечения хронических инфекционных болезней, инфекций вирусной и бактериальной этиологии, кандидозов, иммуннодефицитных состояний [1].

Известно применение трансфер-фактора животным для лечения и профилактики различных болезней (эймериозы, сальмонеллезы, клещевой энцефалит и др.), а также для повышения эффективности вакцинации [2].

В гуманной медицине трансфер-фактор применяют при первичных иммунодефицитных состояниях, характеризующихся снижением Т-клеточной активности [5,7,12,14], острой лимфоцитарной лейкемии [13], рака молочной железы [11], аденокарциномы [8], меланомы [6], туберкулезе [1], лейшманиозе [10], герпес-вирусных инфекциях [1], гепатите В [9], хроническом кожно-слизистом кандидозе [5] и др.

Известны способы применения трансфер-фактора больным людям внутрь [7], внутримышечно или подкожно [15,16], и есть сообщения о внутривенном введении [12].

Известны способы применения трансфер-фактора для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят [3] и телят [4], причем препарат им вводят подкожно.

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является способ для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней телят [4].

Биологический препарат для профилактики и лечения желудочно-кишечных и респираторных болезней телят содержит сыворотку реконвалесцентов или поливалентную гипериммунную сыворотку крупного рогатого скота с антителами к возбудителям сальмонеллеза, колибактериоза, пастереллеза в титрах в реакции агглютинации (в РА) не менее 1:1000, а также к вирусам парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота в титрах в реакции нейтрализации (в РН) не менее 1:128, и трансфер-фактор, полученный из лейкоцитарной массы крови реконвалесцентов или гипериммунизированных животных после отделения сыворотки.

Препарат вводят подкожно в дозе: новорожденным телятам с профилактической целью дважды по 0,1-0,2 мл/кг с интервалом 22-26 ч. С лечебной целью препарат вводят по 0,2-0,3 мл/кг в сочетании с антибиотиками, т.е. препарат вводят дважды.

Однако данный способ обладает следующими недостатками при массовом применении, в частности в промышленном птицеводстве:

- при применении с водой на активность препарата может влиять жесткость воды, наличие примесей (ионов железа, хлора и др.). На эффективность применения также влияет система поения (ниппельная или проточная);

- при применении с кормом-россыпью невозможно равномерное смешивание за счет фракционирования корма. Если добавлять трансфер-фактор в премикс при изготовлении гранулированного корма (температура при гранулировании достигает 75-80°С), то трансфер-фактор теряет свои свойства (инактивируется при температуре 56°С за 30 минут [1]);

- применение подкожно, внутримышечно сопряжено с большими трудозатратами, а также сопровождается сильным стрессом;

- внутривенное введение - в промышленном птицеводстве данный метод не применяется.

Задачей заявляемого изобретения является разработка способа профилактики вирусных болезней птиц.

Поставленная задача решена путем создания способа профилактики вирусных болезней птиц, включающего введение им трансфер-фактора, получаемого из лейкоцитов крови вакцинированных против одной или нескольких инфекций или переболевших ими цыплят или кур, причем препарат вводят птице разного возраста аэрозольно мелкодисперсно из расчета одна доза на голову при экспозиции 20-25 минут, а аэрозоль готовят на дистиллированной воде с добавлением 10% глицерина к объему. Цыплятам суточного возраста препарат вводят из расчета 1 доза на голову, эквивалентная не менее 8,5×10⁶ лейкоцитов.

Цыплятам-бройлерам препарат вводят до 20-22-суточного возраста из расчета одна доза на голову, эквивалентная не менее 8,5×10⁶ лейкоцитов.

При вакцинации цыплят суточного возраста вакцинами против инфекционного бронхита кур, ньюкаслской болезни, метапневмовирусной инфекции препарат вводят из расчета 1 доза на голову, эквивалентная не менее 8,5×10⁶ лейкоцитов.

Сравнительный анализ заявляемого решения с прототипом показал, что заявляемый способ профилактики вирусных болезней птиц обладает новизной.

Технический результат изобретения заключается в профилактике вирусных инфекций в следующих случаях:

- в раннем возрасте для профилактики инфекционных болезней при невозможности или нецелесообразности применения вакцин;

- для повышения профилактического действия вакцин за счет синергетического эффекта при сочетании специфических антител, образующихся после введения вакцин и введения трансфер-фактора, полученного из сенсибилизированных соответствующими антигенами лейкоцитов.

Трансфер-фактор, полученный из лейкоцитарной массы крови вакцинированных или переболевших цыплят после отделения сыворотки, обладает повышенным профилактическим действием и позволяет формировать в короткие сроки клеточно-опосредованный иммунитет для защиты птицы от полевого вируса. Применение трансфер-фактора наиболее актуально для цыплят-бройлеров с первых дней жизни, для профилактики инфекций, вакцинация против которых нецелесообразна, например, против инфекционной анемии цыплят. В рекомендуемых дозах препарат не вызывает осложнений и не оказывает побочного действия.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Кровь берут тотально при забое вакцинированных или переболевших цыплят-бройлеров в стерильные 10-20-литровые бутыли с гепарином (на каждые 100 мл крови добавляют 500МЕ гепарина). Трансфер-фактор получают способом, предложенным Г. Фримелем [1].

Пример 2.

Полученный по примеру 1 препарат применяют для профилактики инфекционной бурсальной болезни (ИББ). Эксперимент проводят в условиях птицеводческого хозяйства по выращиванию цыплят-бройлеров в период вспышки ИББ. Цыплят вакцинировали живой вакциной из штамма «Винтерфилд 2512». Низкая эффективность вакцинации была обусловлена циркуляцией высоковирулентного вируса ИББ в хозяйстве. Препарат применяли аэрозольно (мелкодисперсный аэрозоль) из расчета 1 доза на голову, эквивалентная 8,5×10⁶ лейкоцитов, экспозиция 20-25 минут. Перед распылением готовили раствор препарата на дистиллированной воде с добавлением 10% глицерина к объему. Общий объем составил 4,8 л из расчета 1 мл/м³ (кубатура птицеводческого помещения 4800 м³). Эффективность применения препарата оценивали по наличию/отсутствию клинических и патологоанатомических признаков болезни, а также на основе данных по сохранности и продуктивности цыплят. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Из таблицы 1 видно, что применение препарата повысило эффективность вакцинации против инфекционной бурсальной болезни. В опытной группе отсутствовали клинические и патологоанатомические признаки болезни, что позволило получить более высокие показатели сохранности и продуктивности.

Пример 3.

Полученный по примеру 1 трансфер-фактор от цыплят, сенсибилизированных антигеном вируса инфекционной анемии цыплят, применяют для профилактики инфекционной анемии цыплят (ИАЦ). Эксперимент проводят в условиях птицеводческого хозяйства по выращиванию цыплят-бройлеров, неблагополучного по инфекционной анемии цыплят. Вакцинировать цыплят-бройлеров против ИАЦ нецелесообразно из-за трудоемкости (вакцину вводят парентерально) и высокой стоимости биопрепарата. Препарат применяли цыплятам-бройлерам в возрасте 14 суток аэрозольно из расчета 1 доза на голову, эквивалентная 8,5×10⁶ лейкоцитов, экспозиция 20 минут. К 14-22-суточному возрасту исчезают материнские антитела и цыплята становятся восприимчивыми к полевому вирусу. Перед распылением готовили раствор препарата на дистиллированной воде с добавлением 10% глицерина к объему. Общий объем составил 4,8 л из расчета 1 мл/м³ (кубатура птицеводческого помещения 4800 м³). Эффективность препарата оценивали по уровню постинфекционных (после переболевания) антител к вирусу ИАЦ при исследовании сывороток крови в иммуноферментном анализе (ИФА). Сыворотки крови отбирали в конце выращивания в возрасте 38-40 дней. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Из таблицы 2 видно, что при исследовании сывороток крови от цыплят опытной группы отсутствуют положительные пробы. Приведенные данные свидетельствуют, что препарат, введенный аэрозольно, обладает выраженным профилактическим эффектом. Наличие положительных проб при исследовании сывороток крови цыплят контрольных групп в условиях отсутствия вакцинации свидетельствует о переболевании птицы.

Таким образом, из приведенных выше примеров видим, что применение заявленного способа профилактики вирусных болезней птиц весьма актуально:

- для птиц в раннем возрасте для профилактики инфекционных болезней при невозможности или нецелесообразности применения вакцин;

- для повышения профилактического действия вакцин за счет синергетического эффекта при сочетании специфических антител, образующихся после введения вакцин и введения трансфер-фактора, полученного из сенсибилизированных соответствующими антигенами лейкоцитов.

Источники информации

1. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля, пер. с нем. - М.: Медицина, 1987. - 472 с. ил.

2. Кухаркина О.В. Получение и изучение свойств препаратов фактора переноса против некоторых вирусных и бактериальных инфекций животных: дис. канд. биол. наук. - Владимир, 2003. - 140 с.

3. Патент РФ №2180239, А61К 39/395, 10.03.2002.

4. Патент РФ №2180238, А61К 39/395, 10.03.2002.

5. Чередеев, А.Н. Фактор переноса // Итоги науки и техники, т. 9. Медиаторы иммунной системы. - М., 1981. - с. 51-79.

6. Blume, M.R. Dialyzable leukocyte extracts (specific and adjuvant) against disseminated melanoma / M.R. Blum, E.N. Rosendaum // Cancer. - 1981. - V. 47., №5,-P. 11-16.

7. Jeter, W.S. Immune regulators in transfer factor / W.S. Jeter, R. Kibler, T.C. Soli, C.A.L. Stefhens // New York e.a., Acad. Press. - 1979. - P. 451-460.

8. Rosenberg, A. Transfer factor in disseminated adenocarcenoma / A. Rosenberg, M. Lotze, L. Muul // New. Eng. J. Med. - 1987. - P. 1223-1230.

9. Schu, Z. Survey in the specific immune activity of oral antihepatic В placenta transfer factor / Z. Schu, S. Sicai // X Int. Symp.on Transfer Factor: Abstr. Book. - Bologna, 1995. - P. 26.

10. Sharma, M. Preliminary results of transfer factor therapy of persistent coetaneous leishmania infection / M. Sharma, F. Aharaki, F. Ala // Clin. Immunol. And Immunopatol. - 1979. - V. 12. - P. 183-187.

11. Smith, G. Treatment of disseminated mastitis using specific and not specific transfer factor / G. Smith, P. Morse, G. Deraps // Surgery. - 1973. - V. 74. - P. 59-63.

12. South, M.A. Immune regulators in transfer factor / M.A. South, M. Caleb // New York e.a., Acad. Press. - 1979. - P. 443-450.

13. Steele, R. Transfer factor of the prevention of varicella zoster infection in childhood leukemia / R. Steele, M. Myers, M. Vinsent // New. Engl. J. Med. - 1980. - V. 303. - P. 55.

14. Wilson, G. Leukocyte migration inhibition as a method of assaying of transfer activities / G. Wilson, H. Fadenberg // Lymphokines. Eds. Pick E., Landy M. - 1981. - V.4. - P.107.

15. Berkel, A.I. Transfer factor therapy in ataxia-telangiectasia / A.I. Bercel, F. Ersoy, L.B. Epstein, L.E. Spitler // Clin. Exp.Immunol. - 1977. - №29. - P. 376-384.

16. Neidhart, J.A. Skin test conversion following transfer factor A double-blinded study of normal individuals / N. Christakis, E.N. Metz, S.P. Balcerzak, A.F. LoBuglio // J. Allerdgy and Clin. Immunol. - 1978. - 61.- №2. - P. 115-118.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для специфической пассивной профилактики вирусных инфекций бройлеров. Способ включает введение птице трансфер-фактора. Трансфер-фактор получают из лейкоцитов крови вакцинированных против одной или нескольких инфекций или переболевших ими цыплят или кур. Препарат вводят птице разного возраста аэрозольно мелкодисперсно из расчета одна доза на голову при экспозиции 20-25 минут. Аэрозоль готовят на дистиллированной воде с добавлением 10% глицерина к объему. Использование заявленного изобретения высокоэффективно для профилактики инфекционных болезней птиц и для повышения профилактического действия вакцин. 3 з.п. ф-лы, 2 табл., 3 пр.

1. Способ профилактики вирусных болезней птиц, включающий введение им трансфер-фактора, отличающийся тем, что вводят трансфер-фактор, получаемый из лейкоцитов крови вакцинированных против одной или нескольких инфекций или переболевших ими цыплят или кур, причем препарат вводят птице разного возраста аэрозольно мелкодисперсно из расчета одна доза на голову при экспозиции 20-25 минут, а аэрозоль готовят на дистиллированной воде с добавлением 10% глицерина к объему.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что цыплятам суточного возраста препарат вводят из расчета 1 доза на голову, эквивалентная не менее 8,5×10⁶ лейкоцитов.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что цыплятам-бройлерам препарат вводят до 20-22-суточного возраста из расчета 1 доза на голову, эквивалентная не менее 8,5×10⁶ лейкоцитов, и вводят аэрозольно мелкодисперсно.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при вакцинации цыплят суточного возраста вакцинами против инфекционного бронхита кур, ньюкаслской болезни, метапневмовирусной инфекции препарат вводят из расчета 1 доза на голову, эквивалентная не менее 8,5×10⁶ лейкоцитов.