ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ВИРУСНЫХ ПНЕВМОГАСТРОЭНТЕРИТОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И ТЕЛЯТ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНЫХ ПНЕВМОГАСТРОЭНТЕРИТОВ Российский патент 2005 года по МПК A61K39/295 

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарии и касается получения и применения вакцины для профилактики пневмогастроэнтеритов крупного рогатого скота (КРС) и особенно новорожденных телят.

Массовые желудочно-кишечные и респираторные заболевания КРС и телят широко распространены во всем мире и наносят огромный экономический ущерб странам с высокоразвитым скотоводством.

Полиэтиологическая природа этих заболеваний, широкое распространение вызывающих их возбудителей, затруднительная лабораторная диагностика и отсутствие универсальных и высокоэффективных средств специфической профилактики делают борьбу с ними бесперспективной.

Наиболее часто причиной желудочно-кишечных заболеваний КРС и телят являются рота- и коронавирусы крупного рогатого скота, а заболевания с респираторным синдромом чаще всего обусловлены вирусами инфекционного ринотрахеита, парагриппа типа 3 и респираторно-синцитиальным вирусом. Вирус диареи КРС может вызывать патологию как желудочно-кишечного, так и респираторного трактов.

В возникновении заболеваний телят в разных ситуациях ведущую роль играют то одни, то другие из вышеназванных возбудителей, которые циркулируют в стаде чаще всего в виде различных ассоциаций. Потери телят от этих болезней могут достигать 15-30%, а заболевание молодняка и взрослых животных проявляется снижением продуктивности. Кроме этого, заболевания часто осложняются бактериальными инфекциями.

Для специфической профилактики некоторых вирусных заболеваний предложен ряд живых и инактивированных вакцин, главным образом моно- и бивалентных. Применение таких вакцин в ряде случаев на взрослых животных дает положительные результаты и то только тогда, когда вирусный компонент, входящий в состав вакцины, и этиологический агент, вызвавший заболевание, соответствуют друг другу.

Известна вакцина "ТРИВАК (ВИЭВ)" для профилактики инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и вирусной диареи - болезни слизистых крупного рогатого скота. Вакцина содержит антигены из аттенуированных штаммов вирусов инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3 и диареи - болезни слизистых. В качестве штаммов вирусов она содержит штамм Herpes virus bovis "ТК-А(ВИЭВ)В-2" с активностью 10^4,5-10^6,5 ТЦД_50/мл, штамм Virus diarrhea - mucosal disease bovinum "BK-1(B-1)N 28" с активностью 10^4,0-10^6,0 ТЦД_50/мл, штамм Paramyxovirus "ПТК-45/86" с активностью 10^5,0-10^7,0 ТЦД_50/мл (патент RU 2111011, А 61 К 39/295, опубликованный 20.05.1998).

Недостатком данной вакцины является низкая защита поголовья КРС от пневмогастроэнтеритов, а также недостаточная специфичность и иммуногенность.

Известна ассоциированная вакцина против рота-, корона-, герпесвирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят. Вакцина содержит в качестве вирусных антигенов инактивированные культуральные суспензии штаммов Bovine rotavirus "III-1", Bovine coronavirus "CM-1" и Bovine Herpesvirus "ТКА-ВИЭВ-В-2", а в качестве антигена эшерихий инактивированную суспензию клеток штаммов E.coli, содержащие адгезины К99 и А20 (патент RU 2145236, А 61 K 39/295, опубликованный 10.02.2000).

Недостатком данной вакцины является неполная защита поголовья КРС от пневмогастроэнтеритов, а также недостаточная специфичность и иммуногенность.

В ряде случаев в состав известных вакцин, особенно предназначенных для защиты телят, входят антигены возбудителей, вызывающих вторичные инфекции.

Общим недостатком всех известных вакцин, предназначенных для использования против массовых инфекционных респираторных и желудочно-кишечных заболеваний КРС и телят, является их низкая эффективность в результате прежде всего узкого антигенного спектра действия и, возможно, недостаточно высокой специфической активности входящих в состав компонентов. Кроме того, применение многих из них имеет ряд ограничений. Это, прежде всего, относится к применению живых вакцин против инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи для стельных коров и новорожденных телят.

Наиболее близким аналогом является инактивированная комбинированная вакцина против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота-, короновирусной болезни телят "КОМБОВАК", содержащая производственные инактивированные штаммы 6 вирусов: инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота- и короновирусной болезней крупного рогатого скота (Наставление по применению вакцины инактивированной комбинированной против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота-, короновирусной болезни телят КОМБОВАК, №13-3-04/0703 от 20.03.2003, утвержденное Департаментом ветеринарии 20.03.2003).

Недостатком данной вакцины является ее недостаточная специфическая активность и иммуногенность.

Технический результат изобретения заключается в повышении специфической активности, эффективности и иммуногенности.

Сущность изобретения касается инактивированной вакцины против вирусных пневмогастроэнтеритов крупного рогатого скота и телят, содержащей смесь инактивированных вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, корона-, респираторно-синцитиальной инфекции и парагриппа-3 крупного рогатого скота и адъювант, отличающейся тем, что инактивированные суспензии вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, ротавирусной и короновирусной инфекции она содержит в титре 10^7,5-10^8,5 ТЦД_50/мл для каждого вируса, вирусов парагриппа-3 и респираторно-синцитиальной инфекции - в титре 10^6,510^7,5 ТЦД_50/мл, при этом инактивированные суспензии вирусов в смеси взяты в соотношении по объему 1:1:1:1:0,5:0,5 соответственно, при следующем соотношении компонентов вакцины, об.%:

Смесь инактивированных суспензий вирусов70-90Адъювант10-30

а также способа профилактики массовых пневмогастроэнтеритов крупного рогатого скота и телят, включающего подкожное введение такой инактивированной вакцины.

Предложенная вакцина представляет собой розовую или бесцветную жидкость с рыхлым осадком серовато-белого цвета, легко разбивающимся в равномерную взвесь при встряхивании. Вакцина при 2-6°С сохраняет исходную активность не менее 12 месяцев. Вакцину вводят подкожно двукратно с интервалом 21-30 дней взрослым животным в дозе 2 мл, телятам - в дозе 1 мл. Сухостойных коров начинают вакцинировать за 2-3 недели до осеменения. Стельных коров вакцинируют за 2-2,5 месяца до отела, телят - через 3-4 недели после рождения. Такой способ применения вакцины оказался наиболее эффективным. Он сочетает в себе активный и пассивный (материнский) иммунитет.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Для приготовления вакцины используют штаммы 6 вирусов, являющихся типичными представителями 5 семейств вирусов, патогенных для КРС в естественных условиях. Указанные вирусы размножают раздельно в культуре клеток, где они накапливаются в титре 7,0-8,5 lg ТЦД_50/мл. Производственные расплодки каждого вируса объединяют между собой, инактивируют до полной потери инфекционности вирусной смеси, добавляют адъювант, разливают во флаконы, которые закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.

Исследования различных режимов инактивации вирусов выявили различную устойчивость вирусов к действию формалина при 37°С (табл.1). Достаточно надежными и в то же время щадящими условиями инактивации выбраны: для вируса ИРТ - 0,3% формалина 72 часа, для остальных вирусов 0,2% формалина - 48 часов.

Таблица 1
Режимы инактивации вирусов формалином при 37°СВирусыКонцентрация формалина0,1%0,2%0,3%Продолжительность инактивации (часы)244872244872244872ИРТ-------++ВД-----++++ПГ-3-----++++Рота---++++++Корона--+++++++PC--+--++++- вирус не инактивирован+ вирус инактивирован

Пример 2. При оптимальных условиях культивирования (происхождение и возраст культуры клеток, способ выращивания клеток и вируса, множественность заражения, продолжительность инкубирования, обработка инфицированной культуры, хранение вирусного сырья) накопление вирусов достигает значительного уровня: вирус ИРТ, рота- и коронавирусы ≥8,0 lg ТЦД_50/мл, вирусы ПГ-3, ВД и Р-С≥7,0 lg ТЦД_50/мл. Установлено, что используемые штаммы вирусов не играют существенной роли ни в накоплении, ни в антигенности вирусов (табл.2).

Пример 3. При оптимизации условий изготовления вакцины изучали значение содержания и соотношения вирусных антигенов и количество адъюванта. Оценку вели по сероконверсии у привитых серонегативных телят. Лучшие результаты получены, если антигены вирусов ИРТ, ВД, рота-, корона-, ПГ-3 и Р-С с установленной активностью брали в следующих соотношениях: 1:1:1:1:0,5 и 0,5 (табл.3). Содержание адъюванта в смеси вирусных антигенов (объем/ объем) должно составлять 20% (табл.4).

При 2-6°С вакцина сохраняет активность в течение 12 месяцев.

Таблица 2
Накопление и антигенные свойства различных штаммов 6 вирусов, размноженных в клеточных культурахВирусШтаммыНакопление вируса (lg ТЦД_50/мл) в культуре клеток МДВКПродолжительность выдерживания (дни)Титр вируснейтрализующих антител (ВНА) у морских свинок, иммунизированных инактивированными антигенамиИРТВ-257,0-8,52-332-128ТК-А7,0-8,52-332-64ВДBD-N7,0-8,5232-256BD-R7,0-8,5216-256ПГ-3В-196,5-7,52-416-32ПТК-45/866,5-7,52-416-32РотаК-887,0-8,5232-512РП-827,0-8,5232-256КоронаКВ-907,0-8,53-432-512К-227,0-8,53-432-512PCPC-896,5-7,52-316-64PC-716,5-7,52-316-64

Авторские вирусные штаммы депонированы в установленном порядке в музей штаммов Института вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН.

Таблица 3
Антигенность вирусных компонентов при различном соотношении в вакцинеВирусыСодержание и антигенность вирусных компонентовВирус (%)Титр ВНАВирус (%)Титр ВНАВирус (%)Титр ВНАИРТ1532-642032-1282564-128ВД1564-1282064-25625128-256ПГ-31516-1282032-1281016-64Рота1532-2562064-2561016-128Корона2064-2561032-1281532-64PC2064-2561032-641532-128

Таблица 4
Соде ржание гидрата окиси алюминия (ГОА) и антигенность вакциныВирусыСодержание антигена (%)Антигенность ВНА на морских свинкахГОА 10%ГОА 20%ИРТ2032-6432-128ВД2032-25664-256ПГ-32032-6432-128Рота2032-12864-256Корона1016-12832-256PC1032-12864-128

Пример 4. Эпизоотическую эффективность вакцины испытывали в 1998-2003 гг. в хозяйствах РФ и Беларуси, где наблюдали патологию органов дыхания и пищеварения. Заболеваемость и гибель телят в первые 1-2 месяца после рождения достигала 10-30%. Лабораторные исследования подтвердили наличие в этих хозяйствах всех заболеваний (в различных сочетаниях), возбудители которых входят в состав вакцины. По этиологической природе заболеваний эти хозяйства различались между собой также как и отдельные фермы одного и того же хозяйства. После применения вакцины частота заболеваний и гибель животных сократились в 2-3 раза.

Таким образом, было установлено, что в хозяйствах по выращиванию и откорму крупного рогатого скота вирусные агенты (ИРТ, ВД, ПГ-3, рота-, корона- и Р-С вирусы) являются первопричиной массовых заболеваний с поражением респираторных и пищеварительных органов. Эти заболевания, нарушающие репродуктивную функцию и снижающие продуктивность взрослого скота, особенно тяжело протекают у молодых животных, вызывая гибель 15-30% телят вскоре после рождения. Защита таких хозяйств от значительных экономических потерь является актуальной задачей. Данная цель может быть достигнута применением предложенной инактивированной вакцины.

Изобретение относится к области вирусологии. Предложена инактивированная вакцина против вирусных пневмогастроэнтеритов крупного рогатого скота и телят. Вакцина содержит смесь инактивированных вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, корона-, респираторно-синцитиальной инфекции и парагриппа-3 крупного рогатого скота и адъювант. Суспензии вирусов в смеси взяты в соотношении по объему 1:1:1:1:0,5:0,5. Титр вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, ротавирусной и короновирусной инфекции 10^7,0-10^8,5 ТЦД_50/мл, а вирусов парагриппа-3 и респираторно-синцитиальной инфекции 10^6,5-10^7,5 ТЦД_50/мл. Предложен также способ профилактики массовых пневмогастроэнтеритов крупного рогатого скота и телят, предусматривающий введения такой вакцины. Предложенная вакцина является более эффективной и иммуногенной, что позволяет повысить профилактический эффект ее применения. Изобретение может быть использовано в животноводстве. 2 н.п. ф-лы, 4 табл.

1. Инактивированная вакцина против вирусных пневмогастроэнтеритов крупного рогатого скота и телят, содержащая смесь инактивированных вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, корона-, респираторно-синцитиальной инфекции и парагриппа-3 крупного рогатого скота и адъювант, отличающаяся тем, что инактивированные суспензии вирусов инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, ротавирусной и короновирусной инфекции она содержит в титре 10^7,0-10^8,5 ТЦД_50/мл для каждого вируса, вирусов парагриппа-3 и респираторно-синцитиальной инфекции - в титре 10^6,5-10^7,5 ТЦД_50/мл, при этом инактивированные суспензии вирусов в смеси взяты в соотношении по объему 1:1:1:1:0,5:0,5 соответственно при следующем соотношении компонентов вакцины, об.%:

Смесь инактивированных суспензий вирусов70-90Адъювант 10-30