СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ТЯЖЕЛЫХ ФОРМ ИНФЕКЦИОННО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У НОВОРОЖДЕННЫХ Российский патент 2006 года по МПК G01N33/577 

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано для оценки эффективности лечения тяжелых форм инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных.

Актуальность разработки способа определяется ростом частоты тяжелых форм инфекционно-воспалительных заболеваний, высокой летальностью и инвалидизацией при них [1, 2, 3]. Одной из причин высокой смертности и инвалидизации новорожденных с тяжелыми инфекционно-воспалительными заболеваниями является отсутствие быстрых, точных и объективных способов оценки эффективности проводимого лечения. Разработанный способ оценки эффективности лечения новорожденных позволит назначить адекватную терапию и предотвратить тяжелые последствия инфекционно-воспалительной патологии.

Известен способ оценки эффективности лечения больных путем определения соотношения линейных скоростей кровотока в нижней полой вене выше диафрагмы - V1 и ниже диафрагмы - V2 (V1/V2). Соотношение скоростей кровотока определяют дважды - до лечения и на фоне лечения. Если соотношение скоростей кровотока до лечения больше, чем на фоне лечения, лечение расценивают как эффективное, если меньше - как неэффективное [4].

Недостатки способа:

1. Данный способ не используется в неонатологии.

2. Данный способ не может быть использован для оценки эффективности лечения инфекционно-воспалительной патологии.

3. Способ требует наличия дорогостоящей аппаратуры.

4. Способ может осуществляться только врачом функциональной диагностики.

Известен способ оценки эффективности противовирусной и метаболической терапии у детей с цитомегаловирусной (ЦМВ) и смешанной с ней хламидийной инфекцией. Данный способ позволяет оценить эффективность применения реаферона в комбинации с препаратами, коррегирующими метаболические нарушения у детей с ЦМВ и смешанной с ней хламидийной инфекцией. Критериями терапевтической эффективности являются сроки обратного развития основных клинических симптомов и синдромов, а также динамика показателей лабораторных тестов (полный анализ крови, функциональные пробы печени, активность внутриклеточных ферментов клеток крови, снижение титра специфических антител класса IgM) (5).

Недостатки способа:

1. Используется только для оценки эффективности лечения цитомегаловирусной и смешанной с ней хламидийной инфекции;

2. Позволяет оценить терапевтический эффект только определенных препаратов - реаферона в комбинации с препаратами, коррегирующими метаболические нарушения;

3. Многочисленные критерии, необходимые для осуществления оценки эффективности лечения;

4. Ряд используемых клинических критериев оценки эффективности носит субъективный характер.

Наиболее близким по техническому решению является способ оценки эффективности лечения новорожденных при внутриутробной инфекции путем двукратного определения концентрации лактата в периферической крови новорожденных до и после лечения. При снижении содержания лактата относительно исходного уровня, превышающего норму, лечение оценивается как эффективное, а при отсутствии снижения или при увеличении его концентрации - как неэффективное [6].

Недостатки способа:

1. Уровень лактата не имеет прямой связи с развитием тяжелых форм инфекционно-воспалительной патологии, так как данный показатель не является специфичным и его изменения могут происходить при различных патологических состояниях, в т.ч. при гипоксии [7];

2. На фоне лечения тяжелых форм инфекционно-воспалительных заболеваний уровень лактата в большинстве случаев бывает нормальным (за счет ощелачивающего действия проводимой интенсивной терапии), поэтому использовать его для оценки эффективности лечения не представляется возможным;

3. Для осуществления метода требуется двукратный забор крови, что наносит болевую травму новорожденному и может отрицательно сказаться на результатах лечения;

4. Способ используется для оценки эффективности лечения только внутриутробных инфекций, а не всех форм инфекционно-воспалительной патологии.

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Техническим решением заявляемого способа является оценка эффективности лечения тяжелых форм инфекционно-воспалительной патологии у новорожденных путем определения в периферической венозной крови на 5-7 день жизни на фоне проводимого лечения показателя соотношения относительного содержания CD8+ к CD16+ лимфоцитам (CD8+/CD16+). При значениях показателя соотношения, равного 1,3 или более, лечение оценивается как эффективное, а при значениях показателя менее 1,3 - как неэффективное. Точность способа 83,33%.

Новизна способа

Впервые предлагается оценивать эффективность лечения тяжелых форм инфекционно-воспалительной патологии у новорожденных по определению показателя соотношения CD8+/CD16+ лимфоцитов на 5-7 день жизни на фоне проводимого лечения.

Увеличение значений относительного содержания в крови CD8+ и CD16+ лимфоцитов по отдельности относительно нормативных значений соответствующего возраста отмечается при различных инфекционных заболеваниях в основном вирусной этиологии [1, 8, 9, 10, 11]. Показатель соотношения относительного содержания CD8+/CD16+ лимфоцитов ранее не оценивался. Низкие значения соотношения CD8+/CD16+ лимфоцитов обуславливаются чрезмерным ростом популяции естественных киллеров (ЕК) при отсутствии аналогичного ответа со стороны цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ). Вероятно, это обусловлено несостоятельностью пула ЦТЛ, которые не могут ответить адекватно на инфекционный агент.

Отличительные признаки способа

Предлагается оценивать эффективность лечения тяжелых форм инфекционно-воспалительной патологии у новорожденных по определению в периферической венозной крови на 5-7 день жизни на фоне лечения, показателя соотношения относительного содержания CD8+ к CD16+ лимфоцитам и при его значении, равном 1,3 или более, лечение оценивается как эффективное, а при значениях показателя менее 1,3 - как неэффективное.

Способ осуществляется следующим образом.

1. У новорожденных с тяжелыми формами инфекционно-воспалительных заболеваний на фоне лечения на 5-7 день жизни проводится забор венозной крови в количестве 0,5 мл.

2. Выделение лимфоцитов из 0,5 мл периферической венозной крови осуществляется стандартным методом - центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографии [12].

3. В 1 пробирку, содержащую 100 мкл лимфоцитов в концентрации 1×10⁶ кл/мл, добавляют 20 мкл моноклональных анти-CDS AT, меченных FITC или РЕ, в другую пробирку добавляют 20 мкл моноклональных анти-CD16 AT меченных FITC или РЕ. Клетки инкубируют с моноклональными антителами в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки в пробирках ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора [12].

4. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя в лимфоцитарном гейте процентное (относительное) содержание CD8+ и CD16+ клеток.

5. Рассчитывается показатель соотношения относительного содержания CD8+ к CD16+ клеткам (CD8+/CD16+). При значении показателя CD8+/CD16+, равного или больше 1,3, проводимое лечение тяжелой инфекционно-воспалительной патологии новорожденных оценивают как эффективное с точностью 83,33%.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Ребенок А. родился от III беременности (в анамнезе два медицинских аборта), протекавшей на фоне хронического пиелонефрита, осложнившейся гестозом (нефропатия I степени). Роды в 39 недель. Оценка по шкале Апгар 4-6 баллов. Общее состояние оценено как тяжелое с момента рождения. Ребенок угнетен, не реагирует на осмотр, отмечается разлитой цианоз, одышка до 78 в минуту, участие вспомогательной мускулатуры в акте дыхания, при аускультации дыхание в легких ослаблено, выслушиваются мелкопузырчатые влажные хрипы. К концу первых суток повысилась температура тела до фебрильных цифр, появились генирализованные клонико-тонические судороги. В общем анализе крови нейрофилез, сдвиг лейкоцитарной формулы влево, в ликворе цитоз, повышено содержание белка. С учетом клинической картины и данных дополнительного исследования поставлен диагноз: менингоэнцефалит, пневмония. Назначена традиционная интенсивная терапия.

На 7 сутки по заявляемому способу определен показатель соотношения CD8+/CD16+ лимфоцитов, равный 0,8, что ниже заявляемого (1,3) уровня, лечение в данном случае оценено как неэффективное.

По способу-прототипу проведено исследование в периферической крови содержания лактата дважды (на 1 и 7 сутки жизни). В первые сутки уровень лактата составил 2,2 ммоль/л (при норме 1,8±0,2 ммоль/л), на 7 сутки - 1,6 ммоль/л, что позволило дать заключение об эффективном лечении.

Однако состояние ребенка оставалось тяжелым, исходя из результатов обследования по заявляемому способу обоснована коррекция проводимого лечения, была усилена иммунокоррегирующая терапия. Состояние ребенка стабилизировалось на 10 день жизни, он был переведен из детского реанимационного отделения в отделение патологии новорожденных. Выписан домой в возрасте 1 месяца 28 дней.

Таким образом, оценка эффективности лечения по предлагаемому способу подтвердилась, а по способу-прототипу - нет. Правильная оценка эффективности лечения позволила оптимизировать лечение и получить положительный результат.

Пример 2. Ребенок Б. родился от II беременности, протекавшей на фоне хронического тонзиллита, осложнившейся гестозом (нефропатия II степени). Роды в 38 недель. Оценка по шкале Апгар 6-8 баллов. К концу первых суток жизни состояние ребенка ухудшилось до тяжелого, ребенок угнетен, отмечается разлитой цианоз, появилась одышка до 86 в минуту, участие вспомогательной мускулатуры в акте дыхания, при перкуссии: в паравертебральной зоне выявлено укорочение перкуторного тона, над остальной поверхностью легких - звук с коробочным оттенком; при аускультации: дыхание в легких ослаблено, выслушиваются мелкопузырчатые влажные хрипы. Клинико-рентгенологически поставлен диагноз пневмонии. Ребенок переведен в детское реанимационное отделение, назначена общепринятая интенсивная терапия.

На 5 сутки по заявляемому способу определен показатель соотношения CD8+/CD16+ лимфоцитов, равный 1,5, что выше заявляемого (1,3) уровня, лечение в данном случае оценено как эффективное.

По способу-прототипу проведено исследование в периферической крови содержания лактата дважды (на 1 и 7 сутки жизни). В первые сутки уровень лактата составил 2,4 ммоль/л (при норме 1,8±0,2 ммоль/л), на 7 сутки - 2,5 ммоль/л, что позволило дать заключение о неэффективном лечении.

Состояние ребенка стабилизировалось на 6-7 сутки, он был переведен из детского реанимационного отделения в отделение патологии новорожденных. Выписан домой в возрасте 1 месяца.

Таким образом, оценка эффективности лечения по предлагаемому способу подтвердилась, а по способу-прототипу - нет.

Пример 3. Ребенок С. родился от I беременности, осложнившейся гестозом (водянка II степени) и угрозой невынашивания. Роды в 40 недель. Оценка по шкале Апгар 6-7 баллов. В первые сутки жизни состояние ребенка ухудшилось до тяжелого, отмечается выраженный акроцианоз и цианоз носогубного треугольника, одышка до 90 в минуту, участие вспомогательной мускулатуры в акте дыхания, при перкуссии: в паравертебральной зоне выявлено укорочение перкуторного тона, над остальной поверхностью легких - звук с коробочным оттенком; при аускультации: дыхание в легких ослаблено, выслушиваются мелкопузырчатые влажные хрипы. Клинико-рентгенологически поставлен диагноз пневмонии. Ребенок переведен в детское реанимационное отделение, назначена общепринятая интенсивная терапия.

На 6 сутки по заявляемому способу определен показатель соотношения CD8+/CD16+ лимфоцитов, равный 1,3, что соответствует заявляемому параметру, лечение в данном случае оценено как эффективное.

По способу-прототипу проведено исследование в периферической крови содержания лактата дважды (на 1 и 7 сутки жизни). В первые сутки уровень лактата составил 2,5 ммоль/л (при норме 1,8±0,2 ммоль/л), на 7 сутки - 2,5 ммоль/л, что позволило дать заключение о неэффективном лечении.

Состояние ребенка стабилизировалось на 8 сутки, он был переведен из детского реанимационного отделения в отделение патологии новорожденных. Выписан домой в возрасте 28 дней.

Таким образом, оценка эффективности лечения по предлагаемому способу подтвердилась, а по способу-прототипу не подтвердилась.

Преимущества способа:

1. Возможность объективной оценки лечения тяжелых форм инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных.

2. Позволяет своевременно внести коррекцию в лечебные мероприятия и улучшить исходы при тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваниях у новорожденных.

3. Заявляемый способ не требует больших временных затрат и осуществляется 1 час 10 мин.

4. Исследование может быть проведено в любое время суток.

5. Предлагаемый способ имеет высокую точность - 83,33%.

6. Предлагаемый иммунологический параметр является наиболее показательным для оценки эффективности лечения, т.к. течение воспалительного процесса напрямую зависит от состояния иммунной системы. Поэтому своевременная оценка ее состояния позволяет провести адекватную коррекцию лечения и улучшить исход заболевания.

Указанным способом обследовано 36 новорожденных детей с тяжелой инфекционно-воспалительной патологией.

Результаты исследования представлены в таблице 1.

Таблица 1Результаты исследованийКоличество обследованных36Истинно положительные результаты15Истинно отрицательные результаты15Ложноположительные результаты5Ложноотрицательные результаты1Точность способа83,33%Чувствительность способа93,75%Специфичность способа75,00%

ЛИТЕРАТУРА

1. Особенности пневмонии у детей в раннем неонатальном периоде / Н.В.Дмитриева, А.В.Дмитриев, Е.П.Гузюкина, Е.Е.Шатская // Проблемы внутриутробной инфекции плода и новорожденного: Материалы III съезда Российской ассоциации специалистов перинатальной медицины. - М., 2000. - С.216.

2. Формирование отдаленной патологии при внутриутробном инфицировании / Д.Б.Лаврова, Г.А.Самсыгина, А.В.Михайлов, Т.А.Гасанова // Проблемы внутриутробной инфекции плода и новорожденного: Материалы III съезда Российской ассоциации специалистов перинатальной медицины. - М., 2000. - С.279.

3. Бактериальные менингиты у детей в неонатальном периоде / М.Н.Сорокина, А.С.Иова, Т.В.Злотникова // Проблемы внутриутробной инфекции плода и новорожденного: Материалы III съезда Российской ассоциации специалистов перинатальной медицины. - М., 2000. - С.205.

4. Патент №22062070. Способ оценки эффективности проводимой терапии у больных / В.А.Качесов, Л.В.Донова (Россия) // БИПМ. - 2003. - №17, Ч.3, - С.577.

5. Эффективность противовирусной и метаболической терапии у детей с цитомегаловирусной и смешанной с ней хламидийной инфекцией / Ожегов A.M., Мякишева Л.С., Мальцев С.В. // Проблемы внутриутробной инфекции плода и новорожденного: Материалы III съезда Российской ассоциации специалистов перинатальной медицины. - М., 2000. - С.145.

6. Патент №2217762. Способ оценки эффективности лечения новорожденных при внутриутробной инфекции / В.А.Кузнецова, Н.В.Судакова, Г.Ц.Ароян (Россия) // Изобретения. Полезные модели.-2003, - №33, Ч.3. - С.585.

7. Асфиксия новорожденных / Н.П.Шабалов, В.А.Любименко, А.Б.Пальчик, В.К.Ярославский, - М.: МЕДпресс, 1999, С.410.

8. Дегтярева М.В. Комплексные исследования провоспалительных иммуноцитокинов и функционального состояния лимфоцитов у новорожденных детей в норме и при патологии. Дисс.... канд. мед. наук. - М., 1995.

9. Ярилин А.А. Основы иммунологии. - М.: Медицина, 1999. - 608 с.

10. Ohta G., Fujiwara K., Nishi Т., Oka H. Normal values of peripheral lymphocyte populatuon and Т cell subsets at a fixed time of day: A flow cytometric analysis with monoclonal antibodies in 210 healthy adults // Clin. Exp. Immunol. - 1986. - V.64. - P.146-149.

11. Клиническая иммунология и аллергология: Учебное пособие / Под ред. А.В.Караулова. - М.: Медицинское информационное агентство, 2002. - 651. С.7.

12. Boum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood and bone marrow // Scand. J. Clin. Invest, - 1968. - V.21. - N97. - P.77.

Изобретение относится к клинической лабораторной диагностике и может быть использовано для оценки эффективности лечения тяжелых форм инфекционно-воспалительных заболеваний новорожденных. Сущность изобретения состоит в том, что в периферической крови ребенка в возрасте 5-7 дней жизни на фоне лечения определяют показатель соотношения относительного содержания CD8+ к CD16+ лимфоцитам и при его значении, равном 1,3 и более, лечение оценивают как эффективное, а при значении менее 1,3 - как неэффективное. Техническим результатом является возможность объективной оценки эффективности лечения, проведение своевременной коррекции лечебных мероприятий, что позволяет улучшить исход заболевания. 1 табл.

Способ оценки эффективности лечения тяжелых форм инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных путем исследования периферической крови ребенка, отличающийся тем, что в возрасте 5-7 дней жизни на фоне лечения определяют показатель соотношения относительного содержания CD8+ к CD16+ лимфоцитам и при его значении, равном 1,3 и более, лечение оценивают как эффективное, а при значении менее 1,3 как неэффективное.