СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОБОГАЩЕННОЙ ЦИНКОМ БИОМАССЫ СПИРУЛИНЫ (SPIRULINA PLATENSIS) Российский патент 2006 года по МПК C12N1/12 C12R1/89 

Описание патента на изобретение RU2277124C1

Изобретение относится к способам получения биологически активных соединений (БАС), обогащенных цинком, на основе биомассы цианобактерии Spirulina platensis и может быть использовано в фитобиотехнологии, микробиологии, медицине, альгологии, пищевой промышленности и в сельском хозяйстве.

Недостаток цинка вызывает функциональные и морфологические изменения в деятельности органов и систем (Hambidge K.M., Casey C.E., Krebs N.F. Trace elements in human and animal nutrition. Ed. Mertz W. Orlando; San Diego; New York: Acad. Press, 1, 1986).

Известен способ получения обогащенной биомассы спирулины, обогащенной амфотерным элементом селеном (Патент РФ 2096037, МКИ А 61 К 33/04, опубликованный 20.11.97, БИ №32). Этот способ заключается в том, что неорганические соли селена вводятся в питательную среду в начале и в первой половине логарифмической фазы роста культуры спирулины на 5-10 сутки после начала инкубации.

Известен другой способ получения обогащенной селеном биомассы спирулины, заключающийся в предварительной подготовке инокулята путем культивирования цианобактерии в течение 7-10 пассажей на агаризованных средах с содержанием серы 15-30 мг/л (5-10% от нормы) в присутствии 15-30 мг/л селенита натрия и использовании полученного таким образом инокулята для ведения производства в питательной среде с таким же содержанием селена и серы как и при подготовке инокулята (Патент РФ 2199582, МКИ А 61 К 33/04, опубликованный 27.02.2003, БИ №6).

Однако известно, что внутриклеточные транспортные системы жизненно необходимых (эссенциальных) элементов цинка и селена различаются (Blencowe D.K., Morby А.Р. Zn (II) metabolism in prokaryotes. FEMS Microbiology Reviews, 27, 2003, 291-311). Значит, процесс накопления цинка клетками спирулины отличается от процесса внутриклеточной аккумуляции селена.

Задачей настоящего изобретения является разработка нового способа получения обогащенной цинком биомассы спирулины при отсутствии ингибирования роста этой цианобактерии.

Задача решена тем, что разработан новый способ получения биомассы спирулины с высоким содержанием цинка, причем биомассу получают при одновременном введении в культуральную среду нитрата или сульфата цинка 10-30 мг/л и посевного инокулята 0,1-0,3 мг сух. массы/л.

Из научно-технической и патентной литературы авторам не известны технические решения, которые могли бы в предлагаемой совокупности существенных признаков позволить получить биомассу микроводорослей с высоким содержанием цинка в биологически активных соединениях и без ингибирования скорости роста при внесении соли цинка в среду культивирования.

Сущность изобретения заключается в том, что при внесении цинка в среду вместе с инокулятом максимальное его накопление в клетках достигается в середине линейной стадии (4-6 сутки), после чего наблюдается достаточно быстрый вынос металла обратно в среду культивирования и к 8 суткам, при выходе ростовой кривой на стационарную фазу, внутриклеточное содержание цинка практически равно его содержанию в клетке в начале эксперимента до внесения цинка в питательную среду.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1

Инокулят засевают до конечной плотности 0,2±0,1 мг/л в питательную среду Заррука (табл.1) с содержанием цинка 2,2 мг/л (10 мг/л нитрата цинка). Выращивание культуры проводят при температуре 33±2°С, освещенности 90±10 Вт/м2 и непрерывном барботировании газовоздушной смесью, содержащей 1,7-2,0% CO2.

При приготовлении среды ее компоненты последовательно растворяют в воде, затем вносят микроэлементы, раствор железа с натриевой солью этилендиаминтетрауксусной кислоты (Fe + EDTA) и нитрат цинка, предварительно растворенный в воде. Время культивирования составляет 4-6 суток, что определяется максимальным накоплением цинка в клетках спирулины, и соответствует середине линейной стадии роста культуры. Плотность суспензии на данном этапе культивирования составляет 3,6 г сухой массы в л суспензии. Биомассу спирулины сливают и полученную суспензию отделяют от среды фильтрованием, промывают от способного сорбироваться клеточными мембранами внеклеточного цинка физиологическим раствором объемом, равным объему суспензии, и высушивают. Получают биомассу, внутриклеточный цинк которой полностью включается в состав БАС и содержание которого по примерам 1-6 представлено в табл.4, гр. 5.

Таблица 1
Состав среды Заррука:
Наименование компонентовКонцентрация, г/лNaHCO316,8NaNO32,5NaCl1,0K2HPO41,0K2SO41,0MgSO4*7H2O0,2FeSO4+EDTA*1 млРаствор микроэлементов №11 млРаствор микроэлементов №21 мл*Приготовление раствора натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (Fe + EDTA) проводят следующим образом: в 134 мл 1N КОН растворяли 32,2 г EDTA. Раствор разбавляют водой, после чего вносят 24,9 г FeSO4×7H2O и доводят объем раствора до 1 л. После разведения раствор продувают воздушной смесью, не содержащей CO2 в темноте в течение 12 часов.

Таблица 2
Состав раствора микроэлементов №1 для среды Заррука:
Наименование компонентовКонцентрация, г/лН3ВО32,86MnCl2*4H2O1,81ZnSO4*7H2O0,22CuSO4*5H2O0,08МоО30,015

Таблица 3
Состав раствора микроэлементов №2 для среды Заррука
КомпонентКонцентрация, г/лNH4VO30,023К2Cr2(SO4)4*24Н2O0,096NiSO4*7H2O0,048Na2WO4*2H2O0,018Ti2(SO4)30,04Со(NO3)2*6Н2O0,044

Пример 2

Для засева фотореактора используют суспензию как описано в примере 1. Инокулят засевают в питательную среду, содержащую 4,4 мг/л цинка (20 мг/л нитрата цинка). Водоросли выращивают в тех же условиях, как в примере 1, в течение 4-6 суток, т.е. до середины линейной стадии роста. Сбор, отмывку и высушивание биомассы проводят согласно примеру 1.

Пример 3

Используют суспензию как описано в примере 1. Инокулят засевают в питательную среду, содержащую 6,6 мг/л цинка (30 мг/л нитрата цинка). Водоросли выращивают в условиях как описано в примере 1. Сбор, отмывку и высушивание биомассы проводят согласно примеру 1.

Пример 4

Используют суспензию как описано в примере 1. Инокулят засевают в питательную среду, содержащую 2,3 мг/л цинка (10 мг/л сульфата цинка). Водоросли выращивают в условиях как описано в примере 1. Сбор, отмывку и высушивание биомассы проводят согласно примеру 1.

Пример 5

Для засева реактора используют суспензию как описано в примере 1. Инокулят засевают в питательную среду, содержащую 4,6 мг/л цинка (20 мг/л сульфата цинка). Водоросли выращивают в тех же условиях, как в примере 1. Сбор, отмывку и высушивание биомассы проводят согласно примеру 1.

Пример 6

Для засева реактора используют суспензию как описано в примере 1. Инокулят засевают в питательную среду, содержащую 6,8 мг/л цинка (30 мг/л сульфата цинка). Водоросли выращивают в тех же условиях, как в примере 1. Сбор, отмывку и высушивание биомассы проводят согласно примеру 1.

Таблица 4
Зависимость содержания цинка в биологически активных соединениях и скорости роста Spirulina platensis от модификации среды при получении обогащенной цинком биомассы
ПримерыНакопление биомассы на момент сбора культуры,
г/л
Прирост, г сух. массы/на литр суспензии в суткиСодержание цинка в среде, мг/лСодержание цинка в биомассе, мг/г сух. массы
1234513,60,752,23,5023,20,754,44,3032,80,756,64,2043,60,752,33,3053,20,754,64,1062,50,756,84,20

Как следует из результатов табл.4, настоящее изобретение, а именно внесение в среду культивирования нитрата или сульфата цинка в количестве 10-30 мг/л (2,2-6,8 мг/л цинка) и введение посевного инокулята 0,1-0,3 мг сух. массы/л, позволило получить биомассу спирулины с разным обогащением цинком в концентрациях 3,30-4,30 мг/г сухой массы, который полностью включался в БАС. При этом за короткие сроки (4-5 дней культивирования) был достигнут средний выход биомассы 2,5-3,6 г/л без ингибирования скорости роста культуры солями цинка.

Для понимания технической сущности изобретения представлены графические характеристики роста Spirulina platensis в присутствии различных концентраций и солей цинка (Фиг.1). Учет роста культуры осуществляли спектрофотометрически по оптической плотности (D750) при длине волны λ=750 нм, и, так как показатель D750 достоверно коррелирует со значением сухого веса культуры, пересчитывали на значение сухой биомассы (к=0.876) (Фиг.1, Табл.1, графа 2). Представлена динамика накопления цинка клетками Spirulina platensis (Фиг.2). Из представленных данных видно, что максимальное накопление цинка в клетках культуры достигается к середине линейной стадии (4-6 сутки), после чего наблюдается достаточно быстрый вынос металла обратно в среду культивирования, и к 8 суткам, при выходе ростовой кривой на стационарную фазу, внутриклеточное содержание цинка практически равно его содержанию в клетке в начале эксперимента, до внесения цинка в питательную среду. В связи с этим выбор биомассы осуществляют на середине линейной стадии роста культуры Spirulina platensis.

Похожие патенты RU2277124C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОБОГАЩЕННОЙ СЕЛЕНОМ БИОМАССЫ СПИРУЛИНЫ (SPIRULINA PLATENSIS) 2000
  • Пронина Н.А.
  • Ковшова Ю.И.
  • Попова В.В.
  • Цоглин Л.Н.
  • Габель Б.В.
RU2199582C2
ЗОЛОТИСТЫЕ ВОДОРОСЛИ И СПОСОБ ИХ ПРОИЗВОДСТВА 2008
  • Нагназ Бабурао Камбл
RU2478700C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ СПИРУЛИНЫ С ВЫСОКИМ СОДЕРЖАНИЕМ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ 2022
  • Геворгиз Руслан Георгиевич
  • Железнова Светлана Николаевна
  • Нехорошев Михаил Валентинович
RU2790921C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПИРУЛИНЫ, ОБОГАЩЕННОЙ ВАНАДИЕМ 2000
  • Нечаева С.В.
  • Мазо В.К.
  • Голубев М.А.
  • Булгаков Ш.Х.
RU2198215C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЕЛЕНСОДЕРЖАЩЕГО ПРЕПАРАТА БИОМАССЫ СПИРУЛИНЫ 1996
  • Тамбиев А.Х.
  • Кирикова Н.Н.
  • Мазо В.К.
  • Скальный А.В.
RU2096037C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА СПИРУЛИНЫ, СОДЕРЖАЩЕЙ ХРОМ 2002
  • Мосулишвили Лигури Михайлович
  • Белокобыльский Алим Иванович
  • Киркесали Елена Ивановна
  • Фронтасьева М.В.
  • Павлов С.С.
RU2230560C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СИНЕ-ЗЕЛЕНОЙ МИКРОВОДОРОСЛИ SPIRULINA, ОБОГАЩЕННОЙ МИКРОЭЛЕМЕНТАМИ 1998
  • Нечаева С.В.
  • Мазо В.К.
  • Жаворонков В.А.
  • Булгаков Ш.Х.
RU2144078C1
Способ получения биомассы диатомовой водоросли Cylindrotheca closterium, обогащенной железом, используемой в качестве сырья для получения биологически активных добавок к пище 2017
  • Геворгиз Руслан Георгиевич
  • Зозуля Юрий Викторович
  • Уваров Иван Павлович
RU2644682C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЕЛЕНСОДЕРЖАЩЕГО ПРЕПАРАТА БИОМАССЫ СПИРУЛИНЫ 2001
  • Мосулишвили Лигури Михайлович
  • Белокобыльский Алим Иванович
  • Хизанишвили Анна Ивановна
  • Киркесали Елена Ивановна
  • Фронтасьева М.В.
  • Павлов С.С.
RU2209077C2
ШТАММ СИНЕ-ЗЕЛЕНЫХ ВОДОРОСЛЕЙ SPIRULINA PLATENSIS (NORDST) GEITL КАК ИСТОЧНИК БЕЛКА И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ 1992
  • Нечаева София Вячеславовна
  • Горонкова Ольга Ивановна
  • Шаповалов Дмитрий Святославович
RU2096463C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 277 124 C1

Реферат патента 2006 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОБОГАЩЕННОЙ ЦИНКОМ БИОМАССЫ СПИРУЛИНЫ (SPIRULINA PLATENSIS)

Изобретение относится к фитобиотехнологии, микробиологии, медицине, пищевой промышленности. Согласно способу обогащенную цинком биомассу спирулины (Spirulina platensis) получают при одновременном введении в культуральную среду нитрата или сульфата цинка 10-30 мг/л и посевного инокулята 0,1-0,3 мг сух. массы/л. Это позволило получить биомассу спирулины в концентрациях 3,30-4,30 мг/г сухой массы. За короткие сроки (4-5 дней культивирования) достигается выход биомассы 2,5-3,6 г/л. 2 ил., 4 табл.

Формула изобретения RU 2 277 124 C1

Способ получения обогащенной цинком биомассы спирулины (Spirulina platensis), характеризующийся тем, что культуру спирулины выращивают в присутствии нитрата или сульфата цинка при одновременном введении его в культуральную среду в количестве 10-30 мг/л вместе с посевным инокулятом в количестве 0,1-0,3 мг сух. массы/л.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2006 года RU2277124C1

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЕЛЕНСОДЕРЖАЩЕГО ПРЕПАРАТА БИОМАССЫ СПИРУЛИНЫ 1996
  • Тамбиев А.Х.
  • Кирикова Н.Н.
  • Мазо В.К.
  • Скальный А.В.
RU2096037C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СИНЕ-ЗЕЛЕНОЙ МИКРОВОДОРОСЛИ SPIRULINA, ОБОГАЩЕННОЙ МИКРОЭЛЕМЕНТАМИ 1998
  • Нечаева С.В.
  • Мазо В.К.
  • Жаворонков В.А.
  • Булгаков Ш.Х.
RU2144078C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЕЛЕНСОДЕРЖАЩЕЙ СПИРУЛИНЫ 1999
  • Нечаева С.В.
  • Булгаков Ш.Х.
  • Колодяжная Е.Ю.
  • Горонкова О.И.
RU2146287C1

RU 2 277 124 C1

Авторы

Попова Виктория Викторовна

Пронина Наталья Александровна

Налимова Анна Александровна

Цоглин Лев Наумович

Бедбенов Владимир Степанович

Даты

2006-05-27Публикация

2004-12-10Подача