СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ ПАРОДОНТИТА Российский патент 2006 года по МПК G01N33/88 G01N33/92 

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии, и может быть использовано для диагностики степени тяжести пародонтита.

При диагностике и лечении пародонтита очень важной является объективная оценка стадии заболевания. Не менее актуальной проблемой на сегодняшний день является возможность точного биохимического контроля эффективности лечения и индивидуального прогноза течения заболевания.

Известен способ диагностики воспалительных заболеваний пародонта (ВЗП) путем биохимического исследования перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты слюны [Безрукова И.В. Быстропрогрессирующий пародонтит. Этиология. Клиника. Лечение. // Автореф. Дисс.... докт. мед. наук, М., 2001].

Эффективность такого метода дигностики обусловлена тем, что он позволяет определить избыточное накопление перекисных продуктов, являющихся патогенетическим признаком развития и дальнейшего прогрессирования острого воспаления, прямой предпосылкой к обострению хронических процессов и их осложненному течению.

Однако недостатком этого метода является то, что он недостаточно точен для постановки диагноза на ранних стадиях и при хроническом протекании воспалительного процесса без обострения, а также для определения степени тяжести пародонтита, так как перекисное окисление непрерывно протекает в норме во всех тканях живых организмов. Это требует дополнительного, более дифференцированного подхода в дальнейшей диагностике ВЗП.

Наиболее близким к предложенному является способ диагностики пародонтита, который предусматривает проведение биохимического исследования крови из десны пациента на наличие в ней R белка [Патент РФ №2061961, G 01 N 33/68, 1996].

Данный способ позволяет определить наличие воспалительного процесса пародонта. Однако он также не является достаточно точным для постановки диагноза на ранних стадиях и при хроническом протекании воспалительного процесса без обострения, для определения степени тяжести пародонтита.

Техническим результатом данного изобретения является повышение точности диагностики пародонтита на различных стадиях.

Технический результат достигается тем, что в способе диагностики степени тяжести пародонтита путем биохимического исследования крови из десны отличительной особенностью является то, что при биохимическом исследовании крови из десны определяют содержание простагландина Е2 (ПГЕ2) и арахидоновой кислоты (АК) и фосфатидилинозитов (ФИ) и диагностируют:

- тяжелую степень пародонтита при концентрации ПГЕ2>1650 пг/мг;

- среднюю степень пародонтита при концентрации ПГЕ2≤1650 пг/мг, арахидоновой кислоты >7,5 мас.%;

- легкую степень пародонтита при концентрации арахидоновой кислоты ≤7,5 мас.%, фосфатидилинозитов >7 н.моль на 1 мг белка.

При показании содержания ФИ соответственно 7 н·моль на 1 мг белка и меньше у пациента не обнаруживают нарушений ткани пародонта.

Кровь для исследования из десны обычно берут не менее чем через два часа после приема пищи.

Исследование крови из десны для количественного определения ФИ и их метаболитов - АК, ПГЕ2 можно проводить любым известным способом, в зависимости от оборудования, имеющегося в лаборатории. Однако для выделения фосфолипидов при определении ФИ предпочтительно исследование проводят с использованием метода проточной горизонтальной хроматографии.

Исследование крови из десны для количественного определения содержания арахидоновой кислоты можно проводить газожидкостной хроматографией.

Исследование крови из десны для количественного определения содержания ПГЕ2 можно проводить радиоиммунологическим методом с помощью сцинтилляционного счетчика.

Экспериментально установлено, что именно приведенные выше интервалы содержания указанных показателей ФИ, АК и ПГЕ2 в крови из десны пациента наиболее точно и достоверно отражают состояние ткани пародонта. При отступлении от указанных значений содержания ФИ, АК и ПГЕ2 для определения степени заболевания, а также при использовании иных показателей для определения граничных значений достоверность диагностики пародонтита будет нарушена.

Экспериментальные исследования показали, что для установления нижней границы тяжелой степени пародонтита (и соответственно верхней границы средней степени) необходимо использовать именно показатель ПГЕ2 в крови из десны пациента, значение которого 1650 пг/мл наиболее точно, по сравнению с другими показателями, определяет указанную границу. Именно количественные значения показателей ПГЕ2 и АК характеризуют степень деструкции костной ткани. Для установления нижней границы средней степени пародонтита используют значение показателя АК>7,5 мас.%. Для наиболее точной диагностики легкой стадии пародонтита необходимо использовать для определения верхней границы показатель АК≤7,5 мас.%, границы ФИ>7 н·моль на 1 мг белка. Только при ФИ, равном 7 н·моль на 1 мг белка, диагностируют отсутствие патологии пародонта.

Методика проведения анализа.

Для определения содержания фосфатидилинозитов в крови выделяют фракцию фосфолипидов. С этой целью к пробам крови добавляют смесь растворителей хлороформ-метанол 1:1 в объеме 3 мл. Затем фильтруют в мерные пробирки с притертой пробкой объемом 20 мл. Осадок на фильтре промывают смесью хлороформ-метанола 2:1, содержащей 1% концентрированной соляной кислоты по объему.

К фильтрату добавляют 0,4 мл 0,02% раствора хлорида кальция, затем в течение 4-5 минут перемешивают. После четкого расслоения верхнюю фазу отсасывают и четырехкратно промывают смесью хлороформ-метанол-0,02%-хлорид кальция в соотношении 3:48:47.

Исследуемый липидный экстракт наносят на хроматографическую пластинку на расстоянии 2 см от края пластинки. Затем пластинку помещют в плоскую стеклянную камеру для проточной горизонтальной хроматографии. Выделение фосфолипидов проводят в системе хлороформ-метанол-7н-аммиак (13,0:7,0:1,0).

Идентификацию фракции фосфатидилинозитов (ФИ) проводят с помощью цветных тестов фирмы «Sigma» (США). Количественное содержание ФИ определяют денситометрическим методом на денситометре «БИАН» (Россия).

Содержание АК определяют с помощью газожидкостной хроматографии, ПГЕ2 выделяют радиоиммунологическим методом с помощью сцинтилляционного счетчика «Mark-3» («Nuclear Chicago», США) с применением наборов реагентов («Clinical Assays», США).

Известно, что выделенные из крови пациентов при различного вида заболеваниях ФИ могут быть использованы для объективной оценки и выявления различных заболеваний, например таких как инфаркт миокарда, опухолей различного происхождения и др. [Патент РФ №2151397, G 01 N 33/53, 2000].

Однако до настоящего времени комплексное изучение роли ФИ и продуктов их метаболизма в развитии пародонтита и возможности использования данных содержания ФИ и показателей их метаболизма в качестве диагностических оценочных и прогностических критериев именно для тканей пародонта не проводилось.

Пример.

Больная Н., 1959 г.р., обратилась в центр пародонтологии ЦНИИС с жалобами на кровоточивость десен при чистке зубов, периодически появляющееся гноетечение из десен, подвижность зубов.

При зондировании десны резко болезненны, легко кровоточат. Индекс кровоточивости Мюллемана - 2.0. В области 36, 37, 35, 34 из пародонтальных карманов выделяется гной. Подвижность зубов 1-2 степени; 36 - 3 степени. Пародонтальные карманы 4-8 мм.

При рентгенологическом обследовании выявлены очаги активной деструкции альвеолярной кости с разрушением межальвеолярных гребней на 1/2-3/4 длины корней зубов.

Анализ крови из десны на содержание ФИ, АК и ПГЕ2 показал содержание ПГЕ2 1710 пг/мл, АК - 9,1 мас.%, ФИ более 15 н·моль на 1 мг белка.

На основании клинических и лабораторных данных был поставлен диагноз: хронический генерализованный пародонтит тяжелой степени.

После комплекса предварительного лечения, который заключался в проведении профессиональной гигиены полости рта, назначении антимикробных и противоспалительных средств как местного, так и парентерального назначения, в области 37, 36, 35, 34 была проведена остеогингивопластика. В результате лечения индекс Мюллемана уменьшился до 1,0 уже через месяц после операции. Показатели ФИ через 3 месяца снизились до 12 н·моль на 1 мг белка, АК до 8,4 мас.%, ПГЕ до 1620 пг/мл. Через год после лечения значения ФИ, АК и ПГЕ составили, соответственно, 8 н·моль на 1 мг белка, 8,2 мас.%, 1550 пг/мл.

Биохимическое исследование проведено у 42 пациентов в возрасте от 35 до 55 лет с пародонтитом легкой, средней и тяжелой степени тяжести. Анализ результатов проводили на основании клинических и лабораторных показателей.

Исходное клиническое состояние пародонта определялось формой и степенью поражения, характеризовалось воспалением и деструкцией кости и сопутствующими явлениями экссудации из пародонтальных карманов, кровоточивостью десен при чистке зубов и приеме пищи.

Увеличение содержания ФИ в десневой крови сопровождалось значительным повышением количества арахидоновой кислоты. Так, в среднем концентрация АК составляла 8,9 мас.% у больных с пародонтитом тяжелой степени и 8,3 мас.% - средней степени, при легкой степени поражения концентрация АК равнялась 7,5 мас.%. Количество ПГЕ2 также было выше 1795 пг/мл у пациентов с тяжелой степенью заболевания, 1640 пг/мл - со средней степенью, 1470 пг/мл - с легкой степенью.

Поскольку изменения содержания ФИ и их метаболитов в крови у пациентов с пародонтитом могли быть обусловлены не только наличием воспалительного процесса в пародонте, но и другими причинами, например возрастом пациентов и наличием у них сопутствующих заболеваний, было проведено изучение взаимосвязей биохимических показателей с этими факторами.

Анализ показал, что содержание ФИ, АК и ПГЕ2 именно в крови из десны пациента практически не зависело от возраста и от наличия у пациента сопутствующих заболеваний (хронических форм). Только при наличии у пациента острых форм воспалительных заболеваний это могло незначительно скорректировать показания.

Поскольку установлена сильная зависимость биохимического показателя - содержания ФИ - от степени тяжести пародонтита, то можно говорить о том, что выявленные у больных пародонтитом нарушения метаболизма ФИ обусловлены именно наличием активного воспалительно-деструктивного процесса в пародонте нежели другими факторами.

Было проведено динамическое наблюдение за содержанием ФИ и их метаболитов в крови у больных пародонтитом до операций и в контрольные сроки 3 и 12 месяцев.

При диагностике состояния больных проводили анализ крови из десны и определяли количественные значения содержания ПГЕ2, АК и ФИ.

Так, например для больного с показателями ПГЕ2 - 1710 пг/мл, АК - 8,9 мас.%, ФИ - 15,5 н·моль на 1 мг белка определяли тяжелую степень пародонтита. Для больного с показателями ПГЕ2 - 1630 пг/мл, АК - 8,0 мас.%, ФИ - 10 н·моль на 1 мг белка определяли среднюю степень пародонтита. Для больного с показателями ПГЕ2 - 1560 пг/мл, АК - 7,3 мас.%, ФИ - 7,5 н·моль на 1 мг белка определяли легкую степень пародонтита. Характерной особенностью диагностики пародонтита по представленным интервалам значений ПГЕ2, АК и ФИ, полученным при анализе десневой крови пациента, является не только высокая точность определения степени заболевания пародонтита, но и высокая воспроизводимость определяемых показателей. При повторно проводимых анализах показатели ПГЕ2, АК и ФИ совпадали.

Ключом к решению проблемы своевременного лечения и профилактики заболеваний пародонта может стать более раннее выявление и своевременное лечение начинающейся патологии пародонта, и в этом может существенно помочь исследование биохимических показателей метаболизма ФИ. Предпочтение в данной ситуации должно быть отдано исключительно исследованию крови из десны, что делает более достоверной и воспроизводимой процедуру анализа и исключает влияние различных факторов на результаты анализа.

Комплексное исследование этих показателей позволяет составить индивидуальный биохимический профиль для каждого пациента, с помощью которого можно точно диагностировать стадию заболевания, определить нуждаемость пациента в тех или иных лечебных мероприятиях, оценить объем предстоящих вмешательств и прогноз течения заболевания.

Изучение биохимических показателей метаболизма ФИ в динамике позволяет осуществлять объективный контроль эффективности проведенного лечения. Наблюдаются следующие тенденции: нормализация уровня ФИ в крови из десны пациента отражает прекращение повреждающего воздействия агрессивных факторов на ткани пародонта. Восстановление до нормального уровня АК свидетельствует об уменьшении воспалительного процесса. Нормализация показателя ПГЕ2 отражает устранение деструкции костной ткани. Таким образом, только комплексный подход к исследованию крови из десны больного позволит точно, с высокой степенью воспроизводимости и достоверности, без влияния побочных факторов оценить степень тяжести заболевания и определить динамику состояния пародонта в процессе лечения.

Таким образом, предложенный способ диагностики степени тяжести пародонтита позволяет:

- с высокой точностью и воспроизводимостью объективно определить стадию заболевания пародонтита как на ранних стадиях заболевания, так и при хроническом протекании воспалительного процесса без обострения, а кроме того, исследуется в процессе лечения для объективной оценки течения болезни,

- получить данные, обусловленные именно наличием активного воспалительно-деструктивного процесса в пародонте нежели другими факторами, т.е. вне зависимости от других побочных факторов, таких как сопутствующие заболевания, а также вне зависимости от возраста пациента.

Предложенный способ достаточно прост и может быть осуществлен практически в любой лаборатории, не требует специальной дорогостоящей аппаратуры и при этом дает высоковоспроизводимые результаты.

Изобретение относится к медицине, в частности к стоматологии. Способ включает определение в крови из десны пациента простагландина Е2, арахидоновой кислоты и фосфатидилинозитов, и по уровню указанных веществ диагностируют тяжелую, среднюю и легкую стадии. Изобретение обеспечивает повышение точности диагностики. 1 з.п. ф-лы.

1. Способ диагностики степени тяжести пародонтита, включающий исследование крови, отличающийся тем, что в крови из десны пациента определяют содержание простагландина Е2(ПГЕ2), арахидоновой кислоты (АК), фосфатидилинозитов (ФИ) и при значении ПГЕ2 более 1650 пг/мг, АК 8,9 мас.% и более, ФИ 15,5 н.моль/мг белка и более диагностируют тяжелую степень, при значении ПГЕ2 более 1560 пг/мг до 1650 пг/мг, АК от 8,0 до 8,9 мас.% ФИ от 10 до 15 н.моль/мг белка - среднюю, а при значении ПГЕ2 от 1470 до 1560 пг/мг, АК - 7,3-7,9 мас.%, ФИ - более 7,0 до 10 н.моль/мг белка - легкую степень.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что кровь для исследования из десны берут не менее через 2 ч после приема пищи.