ВАКЦИНА АССОЦИИРОВАННАЯ ПРОТИВ КОЛИБАКТЕРИОЗА, САЛЬМОНЕЛЛЕЗА И СТРЕПТОКОККОЗА НУТРИЙ Российский патент 2007 года по МПК A61K39/116 A61K39/112 A61K39/108 A61K39/09 A61P1/00 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.

Известна ассоциированная вакцина против диареи телят, содержащая бактериальные клетки эшерихий, штаммы: 0138 К88,09К99, 200; сальмонелл, штаммы: ГИСК №195, ГИСК №196, ГИСК №197; протеи, штаммы: ГИСК №198, ГИСК №199; клебсиелл, штаммы: ГИСК №201, ГИСК №202 (патент на изобретение РФ №2035916 от 17.06.93, МКИ А61K 39/125, 39/135). Данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у телят, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами, протеями и клебсиеллами, для нутрий не применяется.

Известна вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий (патент РФ на изобретение №2099084 от 30.09.94, МКИ А61K 39/125, 39/135). Данная вакцина содержит в качестве антигена суспензию штамма Streptococcus zooepidemicus ВГНКИ №К-ДЕП с титром 2,5-3,0 млрд. микробных клеток в 1 мл в культуральной среде, суспензию клеток штаммов Pasteurella multosida ВГНКИ №6011, Pasteurella multosida ВГНКИ №2394 и Pasteurella multocida ВГНКИ №1015 в равных соотношениях общим содержанием 2,5-3,0 млрд. микробных клеток в 1 мл питательной среды глюкозу, формалин, гидроокись алюминия и сапонин. Данная вакцина применяется для профилактики стрептококкоза и пастереллеза нутрий. Сырье получают путем культивирования штаммов возбудителей стрептококкоза и пастереллеза нутрий в питательной среде с низкой активностью. Использование сапонина в вакцине может вызывать у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.), длительность иммунитета только 6 месяцев. Эта вакцина не обеспечивает защиту против колибактериоза, сальмонеллеза.

Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение специфичности, эффективности вакцины для профилактики колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза у нутрий, путем введения новых чистых культур возбудителей, компонентов, исключая отрицательное и побочное влияния.

Решение задачи достигается тем, что вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, включающая инактивированные антигены, адъювант, в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, выращивание проводят раздельно в мясопептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см³, смешивают в равных соотношениях, вносят формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Escherichia coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³24,0-29,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³24,0-29,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³24,0-29,0глюкоза2,0-1,0формалин2,0-1,5гидроокись алюминияостальное

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно в мясопептонном бульоне, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.

При раздельном культивировании чистых культур возбудителей и добавлении в питательную среду глюкозы до 0,2%-ной концентрации получают концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд. в 1 мл в течение 12-14 часов инкубирования. Инактивирование баксырья формалином в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae в равных соотношениях, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание не вызывает у привитых нутрий поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после однократного введения продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). Использование чистых культур возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших нутрий позволяет значительно повысить специфичность вакцины, после однократной вакцинации обеспечивает защиту животных сразу от трех опасных инфекционных болезней колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий.

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: формолквасцовая вакцина против паратифа (сальмонеллеза) телят ТУ 46-21-166-75, утверждено 10.05.75 инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 28.03.80; вакцина против паратифа (сальмонеллеза) поросят ТУ 46-21-952-74, утверждено 15.07.74, инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 23.10.96; ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90, инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90 представлены все необходимые сведения о микроорганизмах рода Salmonella и рода Streptococcus. Однако для нутрий эти вакцины не применяются.

Методы выделения чистой культуры возбудителя колибактериоза и характеристика описаны в «Методических указаниях по бактериологической диагностике колибактериоза (эшерихиоза) животных», утвержденных 27.07.2000 №13-7-2/2117, Департаментом ветеринарии МСХ РФ, описана характеристика эшерихий в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., М.:Колос, 1995, стр.196-201, а также в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии», авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И. М.: Колос, 2001, стр.219-222.

Методы выделения и характеристика сальмонелл описаны в методических указаниях «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды». М.: ВО «Агропромиздат», 1990, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А. М.: Колос, 1995, стр.201-204. В «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И. М.: «Колос», 2001, стр.222-231.

Методы выделения и характеристика стрептококков представлены в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990, Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам, а также в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А. М.: Колос, 1995, стр.90-95.

Предложенная вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.

Вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий содержит инактивированные формалином чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний нутрий против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий. Она вызывает образование специфического иммунитета против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у нутрий, привитых вакциной против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, формируется через 12-15 суток после вакцинации и сохраняется не менее 9 месяцев. Вакцину применяют в благополучных, неблагополучных и угрожаемых по колибактериозу, сальмонеллезу и стрептококкозу нутрий хозяйствах. В благополучных и угрожаемых по колибактериозу, сальмонеллезу и стрептококкозу нутрий хозяйствах вакцину вводят однократно, внутримышечно в область бедра, молодняку с 45-дневного возраста по 1,0 см³, а взрослым животным по 1,5 см³. В неблагополучных хозяйствах вакцину вводят внутримышечно в область бедра с двухмесячного возраста двукратно с интервалом 7-10 дней: первая вакцинация в дозе 1,0 см³, вторая - в дозе 1,5 см³. Продукты убоя вакцинированных нутрий используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.

К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.

Приведено пять примеров, содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 мл вакцины.

Пример 1.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 66,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 0,5, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Escherichia coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³22,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³22,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³22,0глюкоза0,5формалин1,0гидроокись алюминияостальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий обладает слабой иммуногенной активностью.

Пример 2.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 72,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,0 инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Escherichia coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³24,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³24,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³24,0глюкоза1,0формалин1,5гидроокись алюминияостальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий обладает достаточной иммуногенной активностью.

Пример 3.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 84,0 с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,7, инактивируют внесением формалина 1,3, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Escherichia coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³28,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³28,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³28,0глюкоза1,7формалин1,3гидроокись алюминияостальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий обладает незначительной иммуногенной эффективностью.

Пример 4.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 87,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Escherichia coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³29,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³29,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³29,0глюкоза1,0формалин1,5гидроокись алюминияостальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий обладает высокой иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (таблица).

Пример 5.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 90,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Escherichia coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³30,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³30,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³30,0глюкоза2,0формалин1,5гидроокись алюминияостальное

При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий обладает иммуногенной активностью, у отдельных животных на месте введение препарата вызывает слабое раздражение и воспаление.

Таблица
Сравнительная оценка эффективности вакциныВакцинаДоза вакцины, см³Метод введенияИммунобиологические свойстваКол-во нутрий в опыте (гол.)Наличие поствакцинальных осложненийДлительность иммунитета (мес.)Защита (%)По прототипудвукратно 1-ая доза 1,0 см³
2-ая доза 2,0 см³Внутримышечно1500Угнетение, хромота, отказ от корма в течение 2-3 суток660-70По предлагаемому способу1,0 см³Внутримышечно1500нет990-100

Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий имеет значительные преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.

Изобретение относится к области биотехнологии. В качестве антигенов вакцина содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды. Выделенные чистые культуры выращивают раздельно в мясопептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см, а затем смешивают в равных соотношениях. Вакцина содержит формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Escherichia coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 24,0-29,0, суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 24,0-29,0, суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³ 24,0-29,0, глюкоза 2,0-1,0, формалин 2,0-1,5, гидроокись алюминия остальное. Вакцина высокоиммуногенна, высокоспецифична, безвредна. 1 табл.

Вакцина ассоциированная против колибактериоза, сальмонеллеза и стрептококкоза нутрий, включающая инактивированные формалином антигены и гидроокись алюминия, отличающаяся тем, что в качестве антигенов вакцина содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей колибактериоза Escherichia coli, сальмонеллеза Salmonella typhimurium и стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, полученных путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, выращивание которых проводят раздельно в мясопептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд. в 1 см³ и смешивают в равных соотношениях, при этом вакцина содержит компоненты при следующем соотношении, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя колибактериоза Escherichia coli, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³24,0-29,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя сальмонеллеза Salmonella typhimurium, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³24,0-29,0суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus pneumoniae, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см³24,0-29,0глюкоза2,0-1,0формалин2,0-1,5гидроокись алюминияостальное