СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ЛИПИДКОРРИГИРУЩИМИ И АНТИОКСИДАНТНЫМИ СВОЙСТВАМИ Российский патент 2007 года по МПК A61K36/03 A61P9/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической фармакологии и восстановительной терапии.

Как известно, в этиологии и патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний важное место принадлежит нарушениям липидного обмена. Отягчающим фактором ряда заболеваний сердечно-сосудистой системы, в частности атеросклероза, является окислительный стресс, развивающийся на фоне снижения уровня природных низко- и высокомолекулярных антиоксидантов в тканях. Терапия основных сердечно-сосудистых заболеваний (ишемическая болезнь сердца, атеросклероз и др.) состоит из медикаментозных и немедикаментозных методов, обеспечивающих преимущественно гиполипидемическое действие. Доказана эффективность включения в профилактические и лечебные комплексы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы препаратов-антиоксидантов [4]. Действующее начало синтетических препаратов направлено на конкретное патогенетическое звено. В отличие от синтетических, природные препараты могут сочетать в себе суммарные биологические эффекты, опосредованные разнообразным составом их компонентов. В связи с чем, для фармакотерапии, направленной на профилактику рецидивов заболеваний сердца и их прогрессирование, актуальным является поиск природных препаратов и биологически активных добавок (БАД) к пище, обладающих наряду с липидкорригирующими эффектами и антиоксидантными свойствами.

Перспективными в этом отношении являются БАД к пище, полученные из сырья морского происхождения. К ним относятся в первую очередь жиры морских гидробионтов, содержащие ω3 полиненасыщенные жирные кислоты (ПНЖК). Известно, что ω3 ПНЖК включаются в клеточные структуры организма и оказывают модифицирующее влияние на структурно-функциональную организацию клеточных мембран, активность мембраносвязанных ферментов и биосинтез эйкозаноидов [7, 8, 10, 14, 16]. Эти свойства позволяют использовать источники ω3 ПНЖК для профилактики и лечения ишемической болезни сердца, гипертензии, диабета 2-го типа, артрита, других воспалительных и аутоиммунных нарушений, рака [6, 10, 14, 19, 20]. При разработке препаратов и БАД, содержащих ПНЖК, в качестве основы используется жиры морских животных (БАД «Тюленол»); жиры рыб холодноводных морей (как нативный рыбий жир, выпускаемый в капсулах - «Карди-омега-3», «Холестерекс», так и вторичный продукт - концентрат этиловых эфиров ω3 ПНЖК - «Макс-ЭПА», «Омега-3 ЭПА супер», «Супер ЭПА», БАД «Сардиноль»).

Из дальневосточных видов морских гидробионтов высоким содержанием ω3 ПНЖК отличается липиды печени командорского кальмара, камчатского краба. Известно средство, выделенное из печени командорского кальмара, обладающее липидкорригирующими и иммуномодулирующими свойствами (Заявка № 2003132574/15, получившая положительное решение о выдаче патента от 24.02.2005 «Средство, обладающее липидкорригирующими и иммуномодулирующими свойствами» / Бочаров Л.Н., Касьянов С.П., Блинов Ю.Г. и др.). Эффективность его основана на содержании в составе липидной фракции 10% ПНЖК, 50% алкилдиацилглицеридов, а также каротиноидов. Высоким содержанием ω3 ПНЖК отличается жир рыб семейства сельдевых (иваси). К сожалению, заход иваси в дальневосточные воды, доступные для российских судов, характеризуется цикличностью. Что же касается других источников морских ПНЖК, в том числе моллюсков и членистоногих, то в мировом океане наблюдается истощение запасов большинства объектов традиционного промысла, что стимулирует исследования, направленные на изучение новых источников биологически активных веществ, переработку вторичного сырья в продукты промышленной ценности, в том числе лекарственные препараты и биологически активные добавки.

В качестве альтернативы для поиска новых источников ω3 ПНЖК могут быть морские водоросли, в частности бурые водоросли, имеющие уникальный биохимический состав. Помимо ПНЖК, содержание которых достигает в некоторых видах до 80% (среди них ω3 - до 20% и выше), они содержат огромное количество биологически активных компонентов (соли альгиновой кислоты, йодаминовые кислоты, фукоиданы, хлорофилл), растительные волокна, витамины, микро- и макроэлементы. В настоящее время разработано достаточно много препаратов и БАД к пище из бурых водорослей, медицинское применение которых основано на наличии в них трех важных комплексов: органических соединений йода, микро- и макроэлементов, полисахаридов. Терапевтические свойства большинства таких препаратов определяется:

- компенсацией хронической недостаточности в организме человека йода и его соединений;

- связыванием и выведением из организма тяжелых металлов, токсинов и радиоизотопов;

- препятствием накопления и снижением избыточного веса;

- снижением уровня холестерина в крови;

- улучшением баланса солей;

- обеспечением организма витаминами и сбалансированным набором микро- и макроэлементов, повышением иммунитета;

- улучшением деятельности желудочно-кишечного тракта;

- нормализацией обмена веществ и т.д.

Использованию липидных экстрактов из водорослей для разработки препаратов, изучению их биологических и терапевтических эффектов в настоящее время уделяется недостаточно внимания. Известны экспериментальные исследования Ю.С.Назарчук и соавт., в которых проверялись гепатопротекторные свойства суммарных липидных экстрактов из бурых водорослей Черного моря Ceramium rubrus (Huds.) Ag., Enteromorpha intestinalis (L.) Link. и Cystoseira barbata Good. Et Wood [5]. Установлено, что введение экстрактов липидов из черноморских водорослей не приводило к развитию воспалительных и некротических нарушений и нормализовало функциональное состояние печени, что свидетельствовало о целесообразности их дальнейшего исследования в качестве гепатопротекторов.

Известно средство «Ламивит», повышающее адаптационные реакции организма и содержащее медный комплекс хлорофилла или экстракт ламинарии в пересчете на содержание медных производных хлорофилла, витамин А, ароматическую добавку и 95% этилового спирта. Однако содержание в этом средстве остальных активных компонентов, таких как ПНЖК не нормируется и не является достаточным для нормализации липидного обмена.

Известно средство, содержащее жирорастворимые БАВ из ламинарии для профилактики злокачественных образований «Кламин» (пат. РФ № 2034560, А61К 35/80). Для получения «Кламина» жирорастворимую часть ламинарии, выделенную путем спиртовой экстракции, подвергают щелочному гидролизу, в результате которого натуральный жирорастворимый комплекс претерпевает ряд химических превращений, снижающих его биологическую ценность.

Наиболее близким к предложенному можно считать средство для профилактики рака - концентрат «Ламинария», полученное путем экстракции 80% этанолом с последующей отгонкой растворителя. В состав жирных кислот концентрата входит около 30% эфиров ω3 полиненасыщенных жирных кислот. Концентрат содержит до 50% веществ нелипидной природы: полисахаридов, аминокислот, белков, минеральных веществ, до 30% воды. Комплекс этих веществ показывает высокую антиканцерогенную активность. При этом жирорастворимая часть концентрата «Ламинария» составляет менее 50%, что является недостаточным для использования его в качестве источника ПНЖК и липидкорригирующего средства.

Задача, решаемая изобретением, - расширение арсенала биологически активных добавок к пище природного происхождения липидкорригирущего действия с выраженным антиоксидантным эффектом.

Сущность изобретения заключается в том, что получено средство, обладающее липидкорригрующими и антиоксидантными свойствами, характеризующееся тем, что оно представляет собой комплекс биологически активных веществ, полученный путем экстрагирования ламинарии японской 65-75% раствором этанола в течение 1,5-2,5 часов при температуре 50-60°С и выделением липидной фракции, которая содержит 80-90% липидов, в том числе 26,7-38,7% ПНЖК от суммы жирных кислот, 3-6% маннита, 1-2% азотсодержащих веществ, 5-12% биогенных микро- и макроэлементов, включая К, Са, Mg, Mn, Со, Cu, Se, Ag, I в минеральном и органически связанном виде.

Средство, обладающее вышеуказанными биологическими свойствами, получают методом спиртовой экстракции измельченных сухих водорослей, которую проводят 65-75% раствором этанола при температуре 56-60°С в течение 1,5-2,5 ч. Экстракт отделяют от водорослей фильтрованием или центрифугированием и после отгонки спирта разделяют на водную и липидную фракции. Для исследований была использована липидная фракция, в дальнейшем называемая «липидным комплексом» (ЛК). Количественное содержание ингредиентов в «липидном комплексе» обеспечивается за счет технологии его получения при обработке сырья из ламинарии японской 65-75% раствором этанола в течение 1.5-2.5 часов при температуре 50-60°. При этом в растворе этанола концентрируются только спирторастворимые вещества, главным образом, липиды, в результате чего содержание липидов в конечном продукте получается в 200-300 раз больше (80-90%), чем в составе сырой водоросли (0,3%). Основным действующим началом «комплекса» являются ПНЖК семейства ω3. Содержание ПНЖК достигает 40% от общей суммы жирных кислот (ЖК) липидного комплекса. В состав комплекса входят также пигменты (хлорофиллы, каротиноиды), маннит, азотсодержащие вещества, биогенные микро- и макроэлементы (К, Са, Mg, Mn, Со, Cu, Se, Ag, I в минеральном и органически связанном виде, и др.). Средство представляет собой густую маслянистую жидкость зеленого цвета с характерным для бурых водорослей запахом.

Использование полученного средства в эксперименте на крысах с гиперлипидемией дало результат, превосходящий ожидаемые от его назначения прогнозы и заключающийся в липидкорригирующем и антиоксидантном действии.

ПРИМЕР 1. Лечение липидным комплексом из бурой водоросли ламинарии японской (Laminaria japonica) алиментарной гиперлипидемии (ГЛП), сопровождающейся дисбалансом в системе перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита (ПОЛ-АОЗ).

В эксперименте на крысах изучен ЛК, полученный из бурой водоросли семейства ламинариевых, представляющий собой сконцентрированный комплекс биологически активных веществ водоросли: липидов (80-90%), биологически активными компонентами которых являются ω3 ПНЖК, хлорофилла, маннита, азотсодержащих веществ, биогенных микро- и макроэлементов (К, Са, Mg, Mn, Co, Cu, Se, Ag, I в минеральном и органически связанном виде, и др.) (табл.1, 2, 3).

Опыты проведены на белых половозрелых крысах-самцах линии Вистар, выведенных в питомнике лабораторных животных РАМН «Столбовая» (г.Чехов, Московская обл.), ветеринарное свидетельство №32-361061, 2002 г. Животные содержались в виварии в соответствии с санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник, в пластмассовых клетках по 4-5 голов в каждой, на подстилке из лиственных пород дерева при естественном освещении и температуре 19±2°С. Карантирование крыс осуществлялось 14 дней и более. Исследования проводились в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (1977).

Эвтаназию животных осуществляли путем декапитации под эфирным наркозом.

Для исследования выделялось 3 группы крыс:

Контрольная группа - интактные крысы-самцы, содержащиеся на стандартном рационе вивария (10 голов);

Опытная группа 1 - крысы-самцы, содержащиеся на экспериментальном рационе для развития алиментарной ГЛП (10 голов);

Опытная группа 2 - крысы-самцы, содержащиеся на экспериментальном рационе для развития алиментарной ГЛП и одновременно получавшие ЛК (10 голов).

Модель алиментарной ГЛП вызывали разбалансированным по составу жиров рационом с включением высококалорийных продуктов и холестерина. Критерием развития модели служил уровень ХС в сыворотке крови и печени крыс, превысивший исходный более чем на 1/3. Срок развития модели составил 46 суток. Опытным животным группы 2 ежедневно per os вводили изучаемое средство. Суточная доза ЛК рассчитывалась исходя из средневзвешенных норм физиологической потребности в йоде для человека средней массой 60 кг (Методические указания МУК 2.3.2.721-98), которая составляет 150 мкг (2,5 мкг/кг массы тела/сут). В перерасчете на крысу средней массой 250 г вводимая доза была 0,178 мкл ЛК ежедневно на курс 46 дней.

Животные ежедневно осматривались, учитывалась поедаемость корма. За время опыта не было случаев падежа и заболеваний животных. Оценивались интегральные показатели состояния животных, метаболиты липидного обмена в сыворотке и эритроцитах, показатели системы ПОЛ-АОЗ в крови крыс. Липидный спектр сыворотки крови исследовали на автоанализаторе, определяли уровень общего холестерина (ХС), триглицеридов (ТГ), ХС липопротеидов высокой плотности (ХС ЛПВП), результаты выражали в ммоль/л. Холестерин липопротеидов низкой (ЛПНП) и очень низкой плотности (ЛГЮНП) определяли расчетным методом по формулам Фридвальда. Индекс атерогенности (ИА) рассчитывали по формуле ОХС-ХС ЛПВП/ХС ЛПВП [2]. В эритроцитах крови определяли состав фосфолипидов (ФЛ) и ЖК. Эритроциты выделяли из венозной крови, стабилизированной гепарином, отмывали изотоническим раствором хлористого натрия. Экстракцию липидов из эритроцитов проводили модифицированным методом Блайя и Дайера [9]. Для разделения полярных липидов использовали метод двумерной микро-тонкослойной хроматографии (ТСХ) на стеклянных пластинках 6×6 с суспензией силикагеля и гипса [22]. Количественный анализ отдельных классов ФЛ после ТСХ проводили по методу Васьковского с соавт. [23]. Содержание каждого компонента представляли в процентах от общей суммы ФЛ эритроцитов. Газожидкостную хроматографию метиловых эфиров ЖК выполняли на хроматографе "Shimadzu - 9А" (Япония) с пламенно-ионизационным детектором. Метиловые эфиры ЖК липидов эритроцитов получали по методу Карро и Дюбак [11], очищали с помощью ТСХ. Анализировали метиловые эфиры ЖК на капиллярных колонках. В качестве носителя использовали Chromaton N-AW-DMCS 0,100-0,125, в качестве жидкой фазы - 5% Силар - 5 СР, ФФАП. Температура разделения - 210°С, температура испарителя - 245°С. Газ - носитель - гелий, линейная скорость - 20 см/с. Идентификацию проводили с использованием стандартных смесей ЖК и по значениям эквивалентной длины цепи [15, 21]. Количественные расчеты выполняли с помощью стандартного математического обеспечения системы обработки данных Chromatopak - CR 3 А. Результаты выражали в относительных % от общей суммы ЖК.

Для оценки уровня антирадикальной защиты определяли интегральный показатель антиоксидантной активности (АОА) в плазме крови, используя модельную систему желточных липопротеинов [3]. Общую АОА выражали в процентах. Количество восстановленного глутатиона (ГЛ) определяли по методу Ellman [12], расчет производили по калибровочной кривой. Активность глутатионредуктазы (ГР) (НАФН: окисленный глутатион оксидоредуктаза, КФ 1.6.4.2.) определяли по скорости окисления НАДФН в присутствии окисленного глутатиона [13, 17]. Результаты выражали в мкМ НАДФН на 1 г Нв в 1 мин. Активность глутатионпероксидазы (ГПО) (глутатион: H₂О₂ оксидоредуктаза, КФ 1.11.1.7.) определяли по изменению поглощения восстановленного ГЛ после инкубации в присутствии перекиси водорода [18]. Результаты выражали в мкМ ГЛ/час. Интенсификацию перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по нарастанию вторичного продукта пероксидации - малоновому диальдегиду (МДА) в эритроцитах крови [1]. Концентрацию МДА выражали в мкМ на 1 г Нв.

Результаты исследования представлены в таблицах 4-7. Как видно из таблиц, развитие модели ГЛП у крыс 1-й опытной группы сопровождалось выраженным (р<0,001) увеличением ТГ на 81,5%, общего ХС в сыворотке крови на 31,6% (р<0,05). Содержание ХС ЛПНП и индекс атерогенности увеличивались в 2,7 (р<0,01) и 2,5 раз (р<0,05) соответственно. Наблюдалась тенденция к снижению ХС ЛПВП (табл.4). В эритроцитах выявлено достоверное снижение фосфатидилсерина (ФС) (р<0,01), увеличение фосфатидилэтаноламина (ФЭ) и сфингомиелина (СМ) (р<0,05 в обоих случаях), что характеризует изменение вязкоэластических свойств эритроцитов, увеличение жесткости их мембран, приводящее к нарушению функционирования транспортных и ферментных систем клетки (табл.5). В составе жирных кислот липидов эритроцитов преобладали повышенные уровни насыщенных 14:0, 18:0, моноеновой 18:1ω9, пониженные - для 16:1ω7 (р<0,001) и 18:1ω7 (р<0,01) (табл.6). Среди полиненасыщенных об ЖК увеличенной была доля линолевой, 18:2 ЖК. Относительное содержание арахидоновой, 20:4 и докозатетраеновой, 22:4ω6 было низким. Наблюдалось снижение ω3 ЖК в сравнении с контрольными животными: достоверное (р<0,001) для эйкозапентаеновой (20:5, ЭПК) и тенденция к снижению для докозагексаеновой (22:6, ДГК) жирных кислот. Индекс ненасыщенности (ИН), характеризующий суммарные изменения в составе ЖК липидов эритроцитов, у крыс с ГЛП был низким (р<0,05) (табл.6). Состояние системы ПОЛ-АОЗ характеризовалось накоплением в крови крыс вторичного продукта пероксидации липидов - МДА, снижением активности глутатионзависимых ферментов - ГП и ГР на фоне уменьшения содержания восстановленного глутатиона, что свидетельствовало о срыве адаптационных процессов у крыс с экспериментально моделированной ГЛП (табл.7).

Введение ЛК крысам на фоне развития модели препятствовало развитию выраженной гиперхолестеринемии, гипертриглицеридемии: показатели ХС в опытной группе 2 были ниже на 25%, чем у крыс с ГЛП (опытная 1). Такая же тенденция отмечена и для уровня ТГ. Индекс атерогенности был в 2 раза ниже, чем у крыс с ГЛП (р<0,05). Сохранялось на уровне значений контрольной группы содержание отдельных фракций ФЛ: относительное количество ФХ, ФЭ и ФС достоверно отличалось от установленного для крыс с ГЛП. Позитивной была динамика отдельных представителей ЖК: во 2-й опытной группе у крыс содержание насыщенных 15:0, 17:0 было ниже, чем в 1-й, количество 18:0, напротив, значительно выше (р<0,05). Уровень моноеновых (18:1 семейств ω9 и ω7) в сравнении с крысами опытной 1 группы также было снижено (р<0,01 и р<0,001 соответственно). Наиболее выраженное позитивное профилактическое действие ЛК проявлялось в увеличении содержания как отдельных представителей ω3 ПНЖК (22:5, 22:6), так и их суммарных показателей, снижении относительного количества кислот ω6 семейства, увеличении общего показателя ИН (табл.6).

Полученный результат по исследованию состояния липидного обмена у крыс по показателям сыворотки и мембранных липидов эритроцитов крови свидетельствует о выраженном липидкорригирующем действии ЛК, заключающимся в предупреждении развития гиперхолестеринемии и гипертриглицеридемии, стабилизации фосфолипидного бислоя эритроцитов, перераспределении их жирнокислотного состава в сторону накопления высоконенасыщенных ЖК семейства ω3.

Состояние системы ПОЛ-АОЗ у экспериментальных животных также характеризовалось позитивной динамикой. Введение ЛК на фоне развития модели (опытная 2) препятствовало явлению липопероксидации (табл.7). Так, об ингибирующем влиянии на пероксидацию липидов свидетельствовал показатель МДА, содержание которого оставалось на уровне интактных крыс (контрольная группа). Низкий уровень МДА в опытной 2 группе объясняется активацией под влиянием ЛК ферментативного глутатионзависимого звена антиоксидантной защиты, действие которого направленно на восстановление первичных продуктов - гидроперекисей в присутствии восстановленного глутатиона. Глутатионпероксидаза катализирует этот процесс, предотвращая превращение первичных продуктов ПОЛ в МДА, что подтверждается достоверным снижением ГЛ в 2,6 раз и достоверным повышением активности ГП в 3 раза по сравнению с контролем. ГР катализирует реакцию восстановления глутатиона с использованием водорода никотинамидных коферментов, поэтому достоверное понижение уровня ГР в 6 раз является закономерным. Полученный результат свидетельствует о том, что антиоксидантное действие липидного комплекса обусловлено активацией глутатионзависимого звена АОЗ, предотвращающего разветвление цепей свободнорадикального окисления липидов за счет удаления гидроперекисей жирных кислот и тем самым резко тормозящего процесс пероксидации липидов.

Таким образом, предлагаемое средство, выделенное из бурых водорослей семейства ламинариевых (Laminariales), представляющее собой комплекс биологически активных веществ водоросли, включая липиды, хлорофилл, маннит, азотсодержащие вещества, биогенные микро- и макроэлементы (К, Са, Mg, Mn, Со, Cu, Se, Ag, I в минеральном и органически связанном виде, и др.) обладает выраженными липидкорригирующим и антиоксидантным эффектами, проявляющимися в:

- гипохолестеринемическом и гипотриглицеридемическом действии;

- стабилизации фосфолипидного бислоя эритроцитов, перераспределении их жирнокислотного состава в сторону накопления высоконенасыщенных ЖК;

- активации ферментативного звена системы антиоксидантной защиты.

Впервые выявленная совокупность позитивных эффектов средства природного происхождения позволяет его использовать в качестве эффективного инструмента профилактики как сердечно-сосудистых заболеваний, так и других патологий, при которых нарушения в обмене липидов сопровождаются интенсификацией процесса липопероксидации.

Таблица 1
Химический состав липидного комплекса из Ламинарии японскойНаименование образцаСодержание, в %Минеральных веществАзотсодержащих веществХлорофиллаМаннитаИодаЛипидный комплекс11,11,90,085,40,317

Таблица 2
Макро- и микроэлементный состав Липидного комплекса из Ламинарии японскойЭлементный составСаNaКMgMoСоNiMnFeZnPbCrSnCdCun×10^-3Содержание, %0,3756,8755,630,375<25<0,5<0,52,5212113<1,2533,7<25<0,1251,25

Таблица 3
Состав основных жирных кислот липидов ЛК (в % от общей суммы)НаименованиеСодержание16:0 (пальмитиновая)20,4-28,518:1w9 (олеиновая)19,7-25,318:2w6 (линолевая)8,3-10,020:4w6 (арахидоновая)5,9-8,120:5w3 (эйкозапентаеновая)4,8-6,414:0 (миристиновая)4,0-7,516:1w73,618:3w3 (линоленовая)3,3-5,218:4w33,1-7,1Сумма ненасыщенных жирных кислот33,7-40,7Сумма моноеновых жирных кислот25,5-30,1Сумма полиненасыщенных жирных кислот26,8-38,7Сумма ω3 ПНЖК11,5-19,5

Таблица 4
Содержание липидов в сыворотке крови крыс под влиянием курсового введения ЛК, М±mПоказатели, ммоль/лКонтроль
n=10Опыт 1
n=8Опыт 2
n=10ХС1,90±0,06*2,50±0,212,00±0,23ТГ0,65±0,03***1,18+0,120,86±0,11ЛПВН1,15±0,060,91±0,121,03±0,26ЛПНП0,4010,12**1,06+0,120,58±0,09ЛПОНП0,30±0,06*0,53±0,060,39±0,05ИА0,65±0,08**1,74±0,320,94±0,14Примечание: здесь и далее звездочкой слева обозначена достоверность значений относительно контрольной группы, справа - относительно 1-й опытной группы; * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001

Таблица 5
Содержание фосфолипидов в эритроцитах крыс под влиянием курсового введения ЛК, М±mФЛ, %контроль n=10Опыт 1
n=10Опыт 2
n=10Фосфатидилсерин (ФС)10,65±0,99**5,15±1,1611,12±0,82***Фосфатидилинозитол (ФИ)2,82±0,402,80±0,00*4,26±0,47**Сфингомиелин (СМ)12,58±0,41*14,00±0,46**14,92±0,51Фосфатидилхолин (ФХ)47,52±1,1450,85±1,8246,46±1,09*Фосфатидилэтаноламин(ФЭ)26,40±0,75*29,47±0,91*23,18±0,79***

Таблица 6
Состав основных жирных кислот липидов эритроцитов крыс под влиянием курсового введения ЛК, М±mЖК, %Контроль n=10Опыт 1
n=10Опыт 2
n=1014:00,68±0,04**1,07±0,110,87±0,1215:00,95±0,190,82±0,050,58±0,049**15:10,10±0,000,13±0,030,3±0,0116:029,60±0,6729,23±0,6727,94±0,8016:1w73,07±0,17***1,95±0,171,36±0,1817:00,82±0,130,88±0,06***0,78±0,02*17:10,47±0,080,34±0,020,3±0,0118:010,63±0,3611,05±1,75***14,9±0,52*18:1w99,33±0,4311,92±1,118,48±0,372*18:1w73,82±0,05**3,37±0,12***2,82±0,10**18:2w67,68±0,20***11,03±0,27*9,42±0,66*18:3w60,33±0,130,22±0,020,2020:2w60,40±0,100,38±0,100,2820:3w90,20+0,000,42±0,16*0,15±0,0520:3w60,62±0,020,72±0,05**0,82±0,0420:4w623,03±0,35**17,98±1,5122,64±0,95*20:5w30,42±0,03***0,15±0,030,56±0,09**22:4w61,87±0,061,57±0,13***1,18±0,11*22:5w60,82±0,08***0,32±0,06***0,36±0,0322:5w31,38±0,091,32±0,15**2,06±0,1822:6w32,68±0,18**2,32±0,29**4,18±0,29**Σw634,42±0,4632,00±1,5334,54±1,37Σw34,95±0,284,10±0,49**6,8±0,40**Σw3/Σw60,15±0,010,13±0,01***0,2±0,001**ИН164,28±2,51*144,30±7,88169,46±5,58*

Таблица 7
Показатели системы ПОЛ-АОЗ в крови крыс при действии липидного комплексаПоказателиКонтрольная группаОпытная 1Опытная 2АОА, %32,92±6,76***84,11±4,8415,44±6,60***МДА, мкмоль/гНв7,14±0,87*10,87±0,856,52±0,20***МДА/АОА0,29±0,090,17±0,040,62±0,16*ГЛ, мкмоль/ гНв18,18±2,03**9,29±0,77***6,98±0,88ГП, мкмольГЛ/гНв/час38,94±4,83*20,02±5,13**119,98±22,11**ГР, мкмольНАДФН/гНв/мин316,86±79,31258,85±84,49**52,02±5,79*

Литература

1. Гончаренко М.С., Латинова A.M. Метод оценки перекисного окисления липидов // Лаб. дело. - 1985. - № 1. - С.60-61.

2. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. - СПб: Питер Ком, 1999. - 512 с.

3. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О. и др. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов // Лаб. дело. - 1988. - № 5. - С.59-62.

4. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Антиоксиданты в комплексной терапии атеросклероза: pro et contra // Кардиология. 2004. № 2. С.72-81.

5. Назарчук Ю.С., Ткаченко Ф.П., Шевченко И.М., Тихонова О.В. Сравнительное исследование гепатопротекторных свойств экстрактов липидов из черноморских водорослей / V Мiжнародна науково-практична конференщя студентiв, аспiрантiв та молодих вчених "Екологiя. Людина. Суспiльство." (13-15 травня 2002 р.м. Кiев).

6. Эндакова Э.А., Новгородцева Т.П., Козычева Е.В. Прогнозирование эффективности диетотерапии с использованием полиненасыщенных жирных кислот семейства ω-3 у больных ишемической болезнью сердца // Вопр. питания. - 2000. - Т.69, № 1/2. - С.37-40.

7. Эндакова Э.А., Новгородцева Т.П., Светашев В.И. Модификация состава жирных кислот крови при сердечно-сосудистых заболеваниях. Владивосток: Дальнаука, 2002. - 296 с.

8. Aguilera AA, Diaz GH, Barcelata ML, Guerrero OA, Ros RM. Effects of fish oil on hypertension, plasma lipids, and tumor necrosis factor-alpha in rats with sucrose-induced metabolic syndrome // J Nutr. Biochem. 2004. V.15, N6. P.350-357

9. Bligh E.G., Dyer W.J. A rapid method of total lipid extraction and purification // Can. J. Biochem. Physiol. - 1959. - Vol.37. - P.911-917.

10. Calder PC. N-3 polyunsaturated fatty acids and inflammation: from molecular biology to the clinic // Lipids. 2003. V.38, N 4. P.343-352.

11. Carreau J.P., Duback J.P. Adaptation of a macro-scale method to the microscale for fatty acid methyl transesterification of biological lipid extract // J.Chromatogr. - 1978. - Vol.151, № 3. - P. 384-390.

12. Ellman G.L. Arch. Biochem and Biophys. 1959. Цит. по: «Методы и нормативы для оценки окислительной резистентности эритроцитов жителей среднегорья»: Метод, рекомендации. - Алма-Ата, 1985. С.25.

13. Habig W.H., Pabst M.J., Jacoby W.B. Hlutathione S-transferases. The first ensymatik step in mucapturic acid formation // Biol. Chem. - 1974. - 240, N22. - P.7130-7139.

14. Hulbert AJ, Turner N, Storlien LH, Else PL. Dietary fats and membrane function: implications for metabolism and disease // Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. - 2005. - Vol.80, N.1. - P.155-169.

15. Jamieson G.R. GLC identification techniques for long-chain unsaturated fatty acids // J. Chromatogr. Sci. - 1975. - Vol.13. - P.491-497.

16. Kinsella J.E., Lokesh В., Stone R.A. Dietary N-3 polyunsaturated fatty acids and amelioration of cardiovascular disease-possible mechanism // Am. J. Clin. Nutr. - 1990. - Vol.52 (1). - P.1-28.

17. Martines Y.J., Tores A.M. Glutathione Reductase of mautle tissue from sea Mussel M edulis 1 puritication and characterization two seasonal enzymatic forms // Сотр. Biochem. Phisiol. - 1985. - V.80, N28. - P.355-360.

18. Mills T.C. Цит. по: «Методы и нормативы для оценки окислительной резистентности эритроцитов жителей среднегорья»: Метод. рекомендации. - Алма-Ата, 1985. - С.25.

19. Okita M. Chronic hepatic disease and dietary instruction // Hepatol Res. - 2004. - N.30S. - P.92-95.

20. Prescott SL, Calder PC. N-3 polyunsaturated fatty acids and allergic disease // Curr. Opin. Clin. Nutr. Metab. Care. - 2004. - Vol.7, N.2. - P.123-129.

21. Stransky K., Jursik Т., Vitek A., Skorepa J. An improved method of characterizing fatty acids by equivalent chain length values // J. High. Res. Chromatogr. - 1992. - Vol.15. - P.730-740.

22. Svetashev V.I., Vaskovsky V.E. A simplified technique for thmlayer chromatography of lipids // J.Chromatogr. - 1972. - Vol.67. - P.376-378.

23. Vaskovsky V.E., Kostetsky E.Y., Vasendin J.M. A universal reagent for phospholipids analisis // J.Chromatogr. - 1975. - Vol.111. - P.129-141.

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической фармакологии и восстановительной терапии. Средство с выраженными липидкорригирующими и антиоксидантными свойствами, представляющее собой сконцентрированный комплекс биологически активных веществ из бурых водорослей, содержащий 80-90% липидов, в том числе 26,7-38,7% ПНЖК от суммы жирных кислот, 3-6% маннита, 1-2% азотсодержащих веществ, 5-12% биогенных микро- и макроэлементов, включая К, Са, Mg, Mn, Со, Cu, Se, Ag, I в минеральном и органически связанном виде. Средство позволяет расширить арсенал гиполипидемических средств природного происхождения с выраженными антиоксидантным эффектом. Впервые выявленная совокупность позитивных эффектов средства природного происхождения позволяет его использовать в качестве эффективного инструмента профилактики как сердечно-сосудистых заболеваний, так и других патологий, при которых нарушения в обмене липидов сопровождаются интенсификацией процесса липопероксидации. 7 табл.

Средство, обладающее липидкорригирующими и антиоксидантными свойствами, характеризующееся тем, что оно представляет собой комплекс биологически активных веществ, полученный путем экстрагирования ламинарии японской 65-75%-ным раствором этанола в течение 1,5-2,5 ч при температуре 50-60°С и выделением липидной фракции, которая содержит 80-90% липидов, в том числе 26,7-38,7% ПНЖК от суммы жирных кислот, 3-6% маннита, 1-2% азотсодержащих веществ, 5-12% биогенных микро- и макроэлементов, включая К, Са, Mg, Mn, Со, Cu, Se, Ag, I в минеральном и органически связанном виде.