СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ДИСПЕПСИИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ Российский патент 2008 года по МПК A61K31/708 

Изобретение относится к ветеринарии, к области гематологии, а именно к гемостазу, и может быть использовано для выбора дозы «Биопага-Д» для коррекции тромбоцитопатии у новорожденных телят при диспепсии.

Аналогов предлагаемому способу выбора дозы «Биопага-Д» для лечения тромбоцитопатии у новорожденных телят с диспепсией не существует.

В литературе имеются рекомендации по применению «Биопага-Д»: дезинфекции помещений, орошении корнеплодов с целью их сохранения при хранении, обработки кожных покровов с целью профилактики и лечения кожных инфекций у животных (Ефимов К. Борьба за хлеб насущный: ПАГи на службе у сельского хозяйства.// Журнал «Барьер безопасности», 2005. - №1. - с.77-81). Однако никогда ранее не предлагалась схема дозирования препарата в зависимости от степени выраженности тромбоцитопатии.

Известно, что на фоне стандартного лечения диспепсии потери телят остаются весьма ощутимыми (до 60-70% от общего количества падежа). Одной из ведущих причин падежа животных можно считать развивающуюся тромбоцитопатию с гиперагрегацией, наклонностью к тромбообразованию и ухудшением реологии крови. Это ухудшает трофику тканей на фоне нарушения пищеварения и интоксикации при диспепсии, делая гибель животного неизбежной.

Целью изобретения является повышение адекватности выбора дозы «Биопага-Д» для коррекции тромбоцитопатии у новорожденных телят с диспепсией.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для оценки тромбе цитарного гемостаза у новорожденных телят с диспепсией берется кровь в две пробирки для исследования агрегации тромбоцитов (AT) на стекле с АДФ, коллагеном, тромбином, ристомицином, перекисью водорода, адреналином и различными их сочетаниями и определением внутрисосудистой активности тромбоцитов (ВАТ) с последующей обработкой полученных данных системным многофакторным анализом.

По полученным значениям общего агрегационного потенциала каждому конкретному теленку возможно индивидуальное назначение необходимой дозы «Биопага-Д» для лечения тромбоцитопатии.

Способ отличается тем, что с применением нескольких технически простых и не требующих дорогостоящих реактивов, оборудования, затрат сил и времени методов, возможна постановка диагноза тромбоцитопатии телятам с диспепсией с последующим вычислением общего агрегационного потенциала, по значению которого назначается соответствующая доза «Биопага-Д», достаточная для купирования тромбоцитопатии в каждом конкретном случае. При повторных обследованиях возможно вновь определять общий агрегационный потенциал с целью контроля адекватности проводимого лечения.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом. Кровь берут из вены через толстую иглу самотеком в две пробирки. В первую 2 мл крови в 8 мл забуференного 0,125% раствора глутаральдегида с последующим исследованием ВАТ. Во вторую пробирку с цитратом натрия в соотношении 9:1 берут 5 мл крови для оценки агрегации тромбоцитов.

Оценка ВАТ осуществляется следующим способом (Шитикова А.С. и соавт. Метод определения внутрисосудистой активности тромбоцитов и его значение в клинической практике. // Клиническая лабораторная диагностика, 1997, №2. - С.23-35). Из иглы, введенной в локтевую вену, сливают 2-3 мл крови на вату и следующие 2 мл наливают в силиконированную центрифужную пробирку с 8 мл раствора 0,125% глутаральдегида. Эту пробирку заполняют в первую очередь до всех других проб, набираемых для исследования системы гемостаза. Полученную кровь сразу же центрифугируют 6 мин при 1000 об/мин. В случае неполного осаждения эритроцитов (супернатант розового цвета) отбирают 2 мл надосадочной жидкости в другую пробирку и центрифугируют в том же режиме в течение 1 минуты. Супернатант разводят раствором глутаральдегида в четыре раза (0,1 мл+0,3 мл раствора), перемешивают пипеткой и заполняют камеру Горяева, которую помещают на 20 мин в увлажненную чашку Петри.

С целью определения абсолютного содержания тромбоцитов в 10⁹/л крови в заполненной камере Горяева в пяти больших квадратах подсчитывают число всех единичных кровяных пластинок вне зависимости от их формы. Полученную величину для вычисления содержания тромбоцитов в 10⁹/л крови нужно умножить на 5×4×10×5×10⁶=1×10⁹, где первые две цифры - поправки на произведенные в ходе исследования разведения крови, вторые две цифры - поправки, связанные с высотой камеры Горяева (0,1 мм) и с площадью, на которой подсчитывались кровяные пластинки (5 больших квадратов =1/5 мм²), 10 - коэффициент пересчета 1 мм³ в 1 л. Определив абсолютное содержание тромбоцитов в исследуемой крови, переводят относительные величины отдельных форм тромбоцитов (в %) в абсолютное их содержание в 10⁹/л крови. Абсолютные величины при патологии могут более адекватно отражать изменения в определяемом распределении форм.

В этом же препарате подсчитывают число агрегатов разного размера (т.е. содержащих по 2, 3, 4, 5 и т.д. кровяных пластинок), приходящихся на 500 свободных тромбоцитов. Результат оценивают по распределению агрегатов разного размера, приходящихся на 100 свободных тромбоцитов. Для облегчения анализа распределительной агрегатограммы полученные результаты могут быть суммированы в виде двух величин: 1) числа агрегатов малого размера, содержащих по 2-3 тромбоцита, и 2) числа агрегатов среднего и большого размера, содержащих по 4 и более тромбоцитов. Изменение этих величин в патологических условиях более наглядно выявляет повышение процесса внутрисосудистой активации кровяных пластинок.

Оценка степени агрегации осуществляется также и по относительному числу всех тромбоцитов, вовлеченных в агрегационную реакцию. Последнее может быть выявлено по процентному отношению числа агрегировавших тромбоцитов к общему их числу в препарате (т.е. к сумме свободно лежащих клеток и вовлеченных в агрегацию) по формуле

где х, у, z и т.д. - число агрегатов соответствующего размера, приходящееся на 500 свободных тромбоцитов. Эта формула не может быть применена в том случае, когда в препарате имеются необратимые, оптически гомогенные агрегаты или настолько большие, что в них невозможно подсчитать число клеток. В этом случае ограничиваются данными распределения агрегатов разного размера.

Оценка AT осуществляется следующим способом (Шитикова А.С. В кн. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний. Под ред. Н.Н.Петрищева, Л.П.Папаян. СПб.: 1999. С.49-52).

Кровь забирают с цитратом натрия 3,8% в соотношении 9:1, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, для получения богатую тромбоцитами плазму (БТП). Часть плазмы отбирают, а оставшуюся центрифугируют при 3000 об/мин, в течение 20 мин, получая бедную тромбоцитами плазму (БеТП). БТП стандартизируют по числу тромбоцитов путем разбавления исходной БТП аутологичным образцом БеТП (до 200·10⁹/л). Концентрация кровяных пластинок в исходной БТП подсчитывается в камере Горяева (в 50 больших квадратах). Объемы смешиваемых БТП и БеТП определяют по формуле

V_БеТП=V_БТП·[(N/200000)-1],

V_БеТП - объем бедной тромбоцитами плазмы,

V_БТП - объем богатой тромбоцитами плазмы,

N - счетная концентрация тромбоцитов в исходной БТП (клеток/мкл).

Из отобранного объема стандартизированной плазмы на предметное стекло наносят 0,02 мл плазмы и разными пипетками по 0,02 мл р-ра индуктора. В качестве агонистов возможно применение АДФ, коллагена, тромбина, адреналина, ристомицина, перекиси водорода в общепринятых концентрациях, а также сочетание индукторов (АДФ+коллаген, АДФ+тромбин, коллаген+тромбин, АДФ+адреналин, АДФ+коллаген+адреналин и т.д.) в концентрациях ниже общепринятых (АДФ - 10^-6 М, коллаген - разведение основной суспензией 1:4, тромбин - 0,09 ед/мл, адреналин 2,5×10^-7 М), но достаточных для возникновения агрегации тромбоцитов при взаимопотенциирующем влиянии индукторов. Стеклянной палочкой смешивают плазму с индукторами и включают секундомер. Смесь перемешивают так, чтобы жидкость занимала окружность диаметром около 2 см.

Покачивая стекло круговыми движениями в проходящем свете осветителя, на черном фоне следят через лупу за возникновением агрегатов. При появлении отчетливых агрегатов, просветлении раствора и прилипании части агрегатов к стеклу секундомер отключают, фиксируя время агрегации тромбоцитов.

Реакцию повторяют 2-3 раза с каждым индуктором, находя среднее арифметическое значение.

Для определения весомости всех полученных параметров и вычисления общего агрегационного потенциала обследованных применяется системные многофакторный анализ, позволяющий перевести исследуемые многомерные количественные характеристики с несопоставимыми абсолютными значениями в сопоставимые относительные величины (Углова М.В., Углов Б.А., Архипов В.В., Горшкова Т.В., Петунина Н.А., Оль Т.Л., Прохуровская М.А., Шубин С.И. Применение методов морфометрии и статистического анализа в морфологических исследованиях. Куйбышев, 1982. - 47 с.). Метод дает возможность выразить весь агрегационный процесс единым интегральным показателем. Расчет производился по формулам

- исследуемый параметр, - нормативный параметр, - относительная разность.

Pi - весовой коэффициент (коэффициент влияния), а - постоянный множитель (в наших исследованиях а=0,1), σ_j - среднеквадратическое отклонение значения в относительных единицах.

S_i ² - дисперсия исследуемого параметра X_i, n_i - количество наблюдений при определении X_i, S₀ ² - дисперсия нормативного параметра Х₀, n₀ - количество наблюдений при определении Х₀.

- величина, интегрально характеризующая исследуемый процесс в заданный срок (в относительных единицах).

Сочетанное применение описанных методов с последующей обработкой полученных результатов системным многофакторным анализом с определением общего агрегационного потенциала позволяет адекватно продлить подбор дозы «Биопага-Д» для коррекции тромбоцитопатии у новорожденных телят с диспепсией. Клинические проявления тромбоцитопатии у новорожденных телят начинаются со значения общего агрегационного потенциала и с этого значения необходимо начало проведения лечения «Биопагом-Д». Так, при значении от 0,030 до 0,100 коррекция возможна при включении в схему выпаивания 0,01% 100,0 мл «Биопага-Д» в сутки, при значении от 0,101 до 0,150 лечение должно проводиться при включении в схему выпаивания 0,01% 200,0 мл «Биопага-Д» в сутки, при уровне от 0,151 до 0,250 необходимо включать в схему выпаивания 0,01% 300,0 мл «Биопага-Д» в сутки, в случае если более 0,250, коррекция тромбоцитопатии может быть осуществлена при включении в схему выпаивания 0,01% 400,0 мл «Биопага-Д» в сутки. Во всех случаях «Биопаг-Д» назначается на 7 дней.

Внедрение данного способа подбора дозы «Биопага-Д» для лечения у новорожденных телят в практику ветеринарии позволит решить ряд насущных сельскохозяйственных проблем современности. Своевременное и адекватное назначение эффективной в каждом конкретном случае дозы «Биопага-Д» для лечения тромбоцитопатии у новорожденных телят позволит своевременно коррегировать тромбофилию, сократить у них сроки астении, нормализовать привесы, обеспечив адекватность трофики тканей при нормализации микроциркуляции.

Пример 1. Новорожденный теленок №14, 6 сутки жизни с диспепсией 1 день обследован в условиях телятника. У теленка была взята и исследована кровь. У животного была выявлена немного повышенная агрегационная активность тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 31,0 с, коллаген 29,0 с, тромбин 44,4 с, Н₂О₂ 38,7 с, адреналин 86,1 с, АДФ+адреналин 32,5 с, АДФ+коллаген 26,0 с, адреналин+коллаген 25,2 с) и несколько усиленная внутрисосудистая активность тромбоцитов (ВАТ) (дискоциты 75,4%, диско-эхиноциты 14,6%, сфероциты 6,0%, сферо-эхиноциты 3,0%, биополярные формы 1,0%), что подтверждало наличие у животного тромбоцитопатии. Общий агрегационный потенциал составлял =0,035. Теленку назначен «Биопаг-Д» 0,01% 100,0 мл внутрь в сутки, что позволило через 1,5 суток нормализовать агрегационную активность тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 36,0 с, коллаген 35,0 с, тромбин 56,0 с, Н₂О₂ 48,2 с, адреналин 102,6 с, АДФ+адреналин 38,8 с, АДФ+коллаген 30,2 с, адреналин+коллаген 32,1 с) и оптимизировать ВАТ (дискоциты 80,0%, диско-эхиноциты 10,0%, сфероциты 4,0%, сферо-эхиноциты 4,0%, биополярные формы 2,0%), полностью купировав диспепсию. Общий агрегационный потенциал составлял

В дальнейшем выпаивать данного теленка было продолжено с добавлением «Биопага-Д» 0,01% по 100,0 в сутки в течение 5 дней для профилактики рецидива диспепсии и риска возникновения тромбоцитарных нарушений.

Пример 2. Новорожденный теленок №74, 8 сутки жизни, с диспепсией в течение 2 суток обследован в условиях телятника. У больного теленка была взята на исследование кровь. Зарегистрирована ускоренная агрегационная активность тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 29,6с., коллаген 27,1 с, тромбин 40,0 с, Н₂О₂ 33,6 с, адреналин 80,4 с, АДФ+адреналин 29,1 с, АДФ+коллаген 24,0 с, адреналин+коллаген 23,6 с) и усиленная ВАТ (дискоциты 68%, диско-эхиноциты 16%, сфероциты 10%, сферо-эхиноциты 4%, биополярные формы 2%), что позволило диагносцировать у животного тромбоцитопатию с наклонностью к гиперагрегации. Общий агрегационный потенциал составлял

Теленку назначен «Биопаг-Д» 0,01% по 200,0 мл в сутки. Это позволило купировать у него диспепсию в течение 2 суток, нормализовав исследованные параметры тромбоцитарного гемостаза на 2-й день лечения - агрегацию тромбоцитов соответствовала уровню здоровых животных (АДФ 35,0 с, коллаген 37,3 с, тромбин 58,4 с, Н₂О₂ 46,0 с, адреналин 90,6 с, АДФ+адреналин 39,0 с, АДФ+коллаген 31,0 с, адреналин+коллаген 30,3 с), состояние ВАТ также нормализовалось (дискоциты 88,0%, диско-эхиноциты 8,0%, сфероциты 2,0%, сферо-эхиноциты 2,0%, биополярные формы 0,0%). Общий агрегационный потенциал составлял

Дальнейшее выпаивание теленка «Биопогом-Д» 0,01% по 200,0 мл в день в течение 5 дней закрепило полученный эффект, исключив рецедивирование тромбоцитопатии.

Пример 3. Новорожденный теленок №18, 4 сутки жизни, с диспепсией 3 сутки, обследован в условиях телятника. У теленка была взята на исследование кровь. У животного была выявлена повышенная агрегационная активность тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 26,0 с, коллаген 24,0 с, тромбин 38,4 с, Н₂О₂ 29,6 с, адреналин 69,2 с, АДФ+адреналин 25,6 с, АДФ+коллаген 22,0 с, адреналин+коллаген 21,2 с) и усиленная внутрисосудистая активность тромбоцитов (ВАТ) (дискоциты 62,4%, диско-эхиноциты 19,6%, сфероциты 11,0%, сферо-эхиноциты 5,0%, биополярные формы 2,0%), что подтверждало наличие у животного тромбоцитопатии. Общий агрегационный потенциал составлял - Теленку назначен «Биопаг-Д» 0,01% 300,0 мл внутрь в сутки, что позволило через 1,5 суток нормализовать агрегационную активность тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 38,0 с, коллаген 36,0 с, тромбин 56,0 с, Н₂О₂ 49,6 с, адреналин 104,8 с, АДФ+адреналин 37,6 с, АДФ+коллаген 34,6 с, адреналин+коллаген 31,8 с) и оптимизировать ВАТ (дискоциты 84,0%, диско-эхиноциты 8,0%, сфероциты 4,0%, сферо-эхиноциты 2,0%, биополярные формы 2,0%), полностью купировав диспепсию. Общий агрегационный потенциал составлял

В дальнейшем выпаивать данного теленка было рекомендовано с добавлением «Биопага-Д» 0,01% по 300,0 в сутки в течение 5 дней для профилактики рецидива диспепсии и риска возникновения тромбоцитарных нарушений.

Пример 4. Новорожденный теленок №68, 7 сутки жизни, с диспепсией в течение 4 суток обследован в условиях телятника. У больного теленка была взята на исследование кровь. Зарегистрирована ускоренная агрегационная активность тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 24,5 с, коллаген 22,3 с, тромбин 35,4 с, Н₂О₂ 26,7 с, адреналин 64,8 с, АДФ+адреналин 23,8 с, АДФ+коллаген 17,0 с, адреналин+коллаген 17,4 с) и усиленная ВАТ (дискоциты 59,0%, диско-эхиноциты 28,0%, сфероциты 11,0%, сферо-эхиноциты 2,0%, биополярные формы 0,0%), что позволило диагностировать у животного тромбоцитопатию с наклонностью к гиперагрегации. Общий агрегационный потенциал составлял

Теленку назначен «Биопаг-Д» 0,01% по 400,0 мл в сутки. Это позволило купировать у него диспепсию в течение 2 суток, нормализовав исследованные параметры тромбоцитарного гемостаза на 2-й день лечения - агрегация тромбоцитов соответствовала уровню здоровых животных (АДФ 35,0 с, коллаген 34,6 с, тромбин 53,8 с, Н₂О₂ 50,6 с, адреналин 96,1 с, АДФ+адреналин 32,4 с, АДФ+коллаген 32,0 с, адреналин+коллаген 29,2 с), состояние ВАТ также нормализовалось (дискоциты 84,0%, диско-эхиноциты 10,0%, сфероциты 4,0%, сферо-эхиноциты 2,0%, биополярные формы 0,0%). Общий агрегационный потенциал составлял

Дальнейшее выпаивание теленка «Биопагом-Д» 0,01% по 400,0 мл в день в течение 5 дней закрепило полученный эффект, исключив рецедивирование тромбоцитопатии.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ заключается в том, что у телят берут пробу крови и рассчитывают значение общего агрегационного потенциала. При его значении 0,030-0,100 телятам выпаивают 0,01% раствор «Биопага-Д» в дозе 100,0 мл в сутки в течение 7 дней. При значении общего агрегационного потенциала 0,101-0,150 телятам выпаивают 0,01% раствор «Биопага-Д» в дозе 200,0 мл в сутки в течение 7 дней. При значении общего агрегационного потенциала в интервале 0,151-0,250 телятам выпаивают 0,01% раствор «Биопага-Д» в дозе 300,0 мл в сутки в течение 7 дней, а при значении общего агрегационного потенциала свыше 0,250 телятам выпаивают 0,01% раствор «Биопага-Д» в дозе 400,0 мл в сутки в течение 7 дней. Способ позволяет контролировать адекватность проводимого лечения.

Способ лечения диспепсии у новорожденных телят, заключающийся в том, что у телят берут пробу крови, рассчитывают значение общего агрегационного потенциала и при его значении 0,030-0,100 телятам выпаивают 0,01%-ный раствор «Биопага-Д» в дозе 100,0 мл в сутки в течение 7 дней; при значении общего агрегационного потенциала 0,101-0,150 телятам выпаивают 0,01%-ный раствор «Биопага-Д» в дозе 200,0 мл в сутки в течение 7 дней, при значении общего агрегационного потенциала в интервале 0,151-0,250 телятам выпаивают 0,01%-ный раствор «Биопага-Д» в дозе 300,0 мл в сутки в течение 7 дней, а при значении общего агрегационного потенциала свыше 0,250 телятам выпаивают 0,01%-ный раствор «Биопага-Д» в дозе 400,0 мл в сутки в течение 7 дней.